大豆DNA提取方法及降落PCR检测转基因成分的研究 被引量：7

1

作者 陈彦 潘见 +2 位作者 王亚 惠爱玲 杨毅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第24期355-358,共4页

采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落PCR(TD-PCR)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA... 采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落PCR(TD-PCR)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA提取方法,能够满足各种分子生物学分析;TD-PCR显著提高了PCR扩增的特异性和效率,可有效检测大豆转基因成分,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 大豆 转基因成分 改良的CTAB法 降落pcr

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利用梯度PCR和降落PCR扩增CIRP基因的比较 被引量：12

2

作者 李玉恒 赵明慧 +7 位作者 赵紫阳 李峥 袁雪 李昌盛 林增 胡婧 李俭 李士泽 《黑龙江八一农垦大学学报》 2011年第5期46-49,75,共5页

提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明:降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也... 提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明:降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也能扩增出产物;梯度PCR法扩增结果不稳定,不但有非特异性条带出现而且不能检测出低浓度模板的存在。结论:降落PCR省略了梯度PCR摸索最适退火温度的过程,并且其灵敏度和特异性均高于梯度PCR。 展开更多

关键词 降落pcr 梯度pcr 退火温度 CIRP基因

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改良的降落PCR扩增中国地鼠目的基因 被引量：2

3

作者 宋国华 庞文彪 +2 位作者 张锐虎 刘田福 岳文斌 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第10期876-878,共3页

目的优化PCR程序,尝试用降落PCR扩增中国地鼠目的基因。方法设计了4对引物,用普通PCR和改良的降落PCR扩增中国地鼠COX1、COX2、NADH5、NADH6部分基因。结果普通PCR只有1对引物扩增出特异性条带,而降落PCR4对引物都扩增出特异性条带,并... 目的优化PCR程序,尝试用降落PCR扩增中国地鼠目的基因。方法设计了4对引物,用普通PCR和改良的降落PCR扩增中国地鼠COX1、COX2、NADH5、NADH6部分基因。结果普通PCR只有1对引物扩增出特异性条带,而降落PCR4对引物都扩增出特异性条带,并与中国地鼠目的基因大小一致。结论降落PCR省略了常规PCR中摸索最适退火温度的过程,对中国地鼠一些Tm值相近的基因可以使用降落PCR温度程序扩增,是一种行之有效的PCR方法。 展开更多

关键词 中国地鼠 降落pcr 退火温度 pcr特异性

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转基因玉米植株幼叶DNA快速提取及降落PCR检测研究

4

作者 尹祥佳 李永生 王汉宁 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期64-68,共5页

用农杆菌介导玉米自交系‘掖478’茎尖遗传转化的转基因玉米植株幼叶为材料,进行快速提取玉米叶片DNA方法的研究.在室温下取2cm2大小的玉米叶片,将叶片剪碎置于2.0mL离心管中,液氮处理后使用组织研磨器研磨,然后加入800μL CTAB提取液,2... 用农杆菌介导玉米自交系‘掖478’茎尖遗传转化的转基因玉米植株幼叶为材料,进行快速提取玉米叶片DNA方法的研究.在室温下取2cm2大小的玉米叶片,将叶片剪碎置于2.0mL离心管中,液氮处理后使用组织研磨器研磨,然后加入800μL CTAB提取液,24∶1的氯仿∶异戊醇溶液800μL,轻摇10min后于10 000r/min离心5min,取上清,最后用0.7倍体积冰异丙醇沉淀DNA.应用降落PCR进行目的基因片段的扩增,并对结果进行测序验证.结果表明,该方法操作简单,省时省力,节约成本,效率高,降落PCR扩增目的基因条带清晰,测序结果与原序列一致. 展开更多

关键词 玉米 转基因植株 幼叶 DNA提取 降落pcr

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高简并引物小温度范围不规则降落PCR在庞大基因家族扩增中的应用

5

作者 华慧颖 王芳 +1 位作者 常重杰 杜启艳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10164-10166,共3页

[目的]探讨高简并性引物扩增庞大基因家族基因的特殊方法。[方法]采用高简并引物对鲤鱼基因组DNA分别进行了常规PCR扩增、常规降落PCR扩增以及优化后的小温度范围不规则跳跃降落PCR扩增。[结果]采用常规PCR仅得1条明显条带,得到的基因较... [目的]探讨高简并性引物扩增庞大基因家族基因的特殊方法。[方法]采用高简并引物对鲤鱼基因组DNA分别进行了常规PCR扩增、常规降落PCR扩增以及优化后的小温度范围不规则跳跃降落PCR扩增。[结果]采用常规PCR仅得1条明显条带,得到的基因较少;采用常规降落PCR仅得到弥散性扩增,无明显条带出现;而采用小温度范围不规则跳跃降落PCR则得到了3条明显条带和多个基因,扩增结果理想。[结论]为庞大基因家族扩增条件的优化与选择提供了理论依据。 展开更多

关键词 高简并性引物 不规则降落pcr 基因家族 扩增

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多重-降落PCR方法在转基因粮食检测中的应用 被引量：3

6

作者 王忻 聂绪恒 +3 位作者 杨瑾 文韵漫 曾繁添 邵志凌 《粮食科技与经济》 2017年第3期36-38,共3页

通过对当前转基因检测方法优缺点的分析,发现相对于其他检测方法,多重-降落PCR方法具有成本低、灵敏度高、特异性强且快速简便等特点,该方法可选作粮食转基因检测方法,为政府相关部门监督、管理和控制转基因粮食及其制品提供技术保障。

关键词 粮食 转基因 多重-降落pcr

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基于不同程序的甜菜CBDP核心引物的筛选

7

作者 宋玥 吴则东 《中国糖料》 2025年第1期23-30,共8页

【目的】旨在选出高多态性、高稳定性、可重复性好的核心引物,并找到更适合筛选甜菜CBDP引物扩增的PCR程序。【方法】利用3种不同的PCR程序,对39条CBDP引物进行筛选,并通过此3种PCR程序的扩增结果进行比较分析。【结果】Touch Down程序... 【目的】旨在选出高多态性、高稳定性、可重复性好的核心引物,并找到更适合筛选甜菜CBDP引物扩增的PCR程序。【方法】利用3种不同的PCR程序,对39条CBDP引物进行筛选,并通过此3种PCR程序的扩增结果进行比较分析。【结果】Touch Down程序扩增结果优于固定退火温度55℃以及低退火温度的程序,基于最优退火温度从39条CBDP引物中筛选出9条多态性好的CBDP引物,这9条引物扩增出的总条带数为76条,多态性条带为72条,多态百分比为94.7%。多态性信息量范围在0.552~0.913,引物的平均PIC值为0.762。【结论】CBDP核心引物的筛选为进一步研究甜菜种质资源的遗传多样性提供了新的思路,为利用分子标记辅助育种等相关研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甜菜 降落pcr CBDP引物 分子标记 核心引物

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不同PCR程序对甜菜DAMD引物扩增效果的影响 被引量：1

8

作者 闫彩燕 吴则东 +1 位作者 兴旺 邳植 《中国糖料》 2019年第2期28-31,共4页

为了开发甜菜品种高效鉴定的DAMD-PCR分子标记技术,优化相应的检测技术流程。利用6种DAMD引物,以8个不同甜菜品种的DNA为模板,分别采用常规PCR扩增程序和touchdown PCR(TD-PCR)扩增程序对模板进行扩增。扩增产物利用8%的非变性聚丙烯酰... 为了开发甜菜品种高效鉴定的DAMD-PCR分子标记技术,优化相应的检测技术流程。利用6种DAMD引物,以8个不同甜菜品种的DNA为模板,分别采用常规PCR扩增程序和touchdown PCR(TD-PCR)扩增程序对模板进行扩增。扩增产物利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,经银染后观察不同PCR程序对甜菜DAMD引物扩增效果的影响。结果表明,TD-PCR扩增程序扩增效果明显好于常规PCR扩增程序,条带明亮、清晰,非特异性条带数量明显减少。推荐在甜菜DAMD引物的扩增中使用TD-PCR扩增程序。 展开更多

关键词 甜菜 DAMD引物 降落pcr 扩增效果

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蓖麻毒蛋白A链基因克隆与重复表达载体构建 被引量：2

9

作者 黄凤兰 李国瑞 +2 位作者 萨日娜 陈永胜 阎秀峰 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期167-172,共6页

利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的... 利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的研究奠定基础。 展开更多

关键词 蓖麻毒蛋白 重复表达载体 降落pcr 一步法 共抑制

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北方黑土土壤细菌16S rDNA扩增体系的优化 被引量：4

10

作者 李秋红 吴凤芝 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期341-347,共7页

采用降落PCR方法扩增目的基因，设计两次正交试验对PCR反应体系中的各组分浓度进行筛选，同时对退火时间、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明，适合北方黑钙土土壤细菌16SrDNA扩增体系为：在25μl体系中，10×buffer2．5μl，DN... 采用降落PCR方法扩增目的基因，设计两次正交试验对PCR反应体系中的各组分浓度进行筛选，同时对退火时间、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明，适合北方黑钙土土壤细菌16SrDNA扩增体系为：在25μl体系中，10×buffer2．5μl，DNA模板20ng，Mg^2＋ 2．5mmol L^-1,dNTPs0．25mmol L^-1，引物0．3μmol L^-1，TaqDNA聚合酶1．5U。降落PCR扩增程序为：95℃，5min；95℃，45s；65～56℃，60s；72℃，90s；每两个循环降低1℃。95℃，45s；55℃，60S；72℃，90s；10个循环。最后72℃，10min。 展开更多

关键词 土壤细菌16S RDNA 降落pcr 优化

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基于微卫星标记鉴定湖羊家系 被引量：8

11

作者 赵志达 王欣悦 +3 位作者 石田培 胡文萍 尚明玉 张莉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3573-3583,共11页

试验旨在基于微卫星(simple sequence repeats,SSR)多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA... 试验旨在基于微卫星(simple sequence repeats,SSR)多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA023、ETH152和MCM527。采集30只湖羊种公羊血液,使用试剂盒提取血液基因组DNA,合成筛选出的9个微卫星引物并使用荧光基团标记,利用降落式PCR进行扩增,扩增产物在基因分型后使用CERVUS3.0.7进行基因型分析,使用POPGENE1.32基于Nei氏遗传距离构建树状聚类图,根据图示的亲缘关系远近划分湖羊家系。结果显示,当双亲基因型未知时,9个微卫星位点的单亲累积排除概率为99.2094%;当单亲基因型已知时,9个微卫星位点的累积排除概率为99.9688%;当双亲基因型未知时9个微卫星位点的双亲累积排除概率为99.9999%,排除概率能够满足遗传育种中亲子鉴定和系谱分析的要求。根据Nei氏遗传距离构建UPGMA聚类图,将30只种公羊划分为6个家系,为育种工作提供了一定参考。本方法能够进行湖羊家系的鉴定与划分,对湖羊育种工作具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 湖羊 微卫星标记 降落pcr 家系鉴定

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RACE方法获得番茄蓝光受体基因Phototropin-2全长及其过量表达载体的构建 被引量：1

12

作者 喻堃 牛向丽 汪松虎 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第22期5808-5809,5869,共3页

采用RACE及降落PCR技术从番茄幼苗总RNA中克隆出PHOT-2基因的3’及5’末端片断,并根据测序结果,设计拉基因全长引物获得了PHOT-2基因全长。结果表明,该基因全长3 381 bp,含开放阅读框2 856 bp,编码952个氨基酸;与拟南芥PHOT-2氨基酸序... 采用RACE及降落PCR技术从番茄幼苗总RNA中克隆出PHOT-2基因的3’及5’末端片断,并根据测序结果,设计拉基因全长引物获得了PHOT-2基因全长。结果表明,该基因全长3 381 bp,含开放阅读框2 856 bp,编码952个氨基酸;与拟南芥PHOT-2氨基酸序列相比,同源性高达68%,主要功能区域同源性高达99%。将番茄PHOT-2基因定向插入pHB质粒中构建成过量表达载体,重组质粒转化农杆菌EHA105感受态细胞。 展开更多

关键词 番茄 蓝光受体 RACE pcr技术 降落pcr技术 过量表达载体

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人抵抗素基因全长的体外拼接及真核表达载体的构建

13

作者 乔小芝 王宪锋 +4 位作者 赵冬久 徐哲荣 俞玲娣 陈智 杨云梅 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第6期588-591,609,共5页

目的:利用合成的寡核苷酸片段,在体外拼接人抵抗素(Resistin,Retn)基因的全长,并构建其真核表达载体。方法:根据已知抵抗素基因(GenBank:AF323081),设计并合成10条寡核苷酸片段,采用降落PCR方法进行拼接,获得预期大小的PCR产物后将其克... 目的:利用合成的寡核苷酸片段,在体外拼接人抵抗素(Resistin,Retn)基因的全长,并构建其真核表达载体。方法:根据已知抵抗素基因(GenBank:AF323081),设计并合成10条寡核苷酸片段,采用降落PCR方法进行拼接,获得预期大小的PCR产物后将其克隆入pSecTag2B载体进行测序确认。结果:降落PCR法扩增的特异条带与目的基因的大小一致。克隆载体测序结果与GenBank中已知序列完全符合。结论:降落PCR成功地拼接和扩增了人抵抗素全长基因,并构建了含有该基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 激素类 异位 寡核苷酸类 聚合酶链反应 基因扩增 人Resistin基因 降落pcr 表达载体

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