催乳素对绒山羊附睾上皮细胞增殖和凋亡的影响

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作者 刘晓娜 段春辉 +5 位作者 郑庆丰 王会杰 左艳华 李祥龙 刘月琴 张英杰 《中国草食动物科学》 北大核心 2025年第6期41-48,共8页

附睾是精子成熟和贮存的场所,附睾上皮细胞分泌附睾液,促进精子发育成熟。附睾上皮细胞的增殖分化受生殖激素调控,而催乳素(PRL)是否参与了该过程还有待研究。本试验通过对绒山羊附睾上皮细胞的体外培养,研究PRL对附睾上皮细胞增殖、迁... 附睾是精子成熟和贮存的场所,附睾上皮细胞分泌附睾液,促进精子发育成熟。附睾上皮细胞的增殖分化受生殖激素调控,而催乳素(PRL)是否参与了该过程还有待研究。本试验通过对绒山羊附睾上皮细胞的体外培养,研究PRL对附睾上皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响。无菌采集燕山绒山羊附睾组织,利用酶消化法分离附睾上皮细胞,差速贴壁法和二次胰酶消化法纯化细胞,免疫荧光法鉴定细胞。将纯化后的附睾上皮细胞随机分为7组,每组6个重复,分别在培养液中添加0(对照组)、25、50、75、100、200和400 ng/mL PRL,在培养12 h、24 h和48 h时,采用CCK-8法检测细胞的增殖活性。筛选出PRL促进附睾上皮细胞增殖的最佳浓度和时间后,分别利用细胞划痕实验,流式细胞术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞迁移、凋亡及凋亡基因的表达水平。结果表明:培养12 h时,添加25、50、75和100 ng/mL PRL组附睾上皮细胞的增殖活性显著高于对照组(P<0.05),且添加量为50 ng/mL PRL组的细胞增殖活性最高,200和400 ng/mL PRL组细胞的增殖活性与对照组差异不显著(P>0.05);培养24 h和48 h后,添加25、50和75 ng/mL PRL组的细胞增殖活性与对照组差异不显著(P>0.05),而100、200和400 ng/mL PRL组的细胞增殖活性显著低于对照组(P<0.05)。细胞划痕实验结果表明,培养12 h时50 ng/mL PRL组的细胞迁移距离和迁移率显著高于对照组(P<0.05),细胞总凋亡率和凋亡基因Bax、Caspase-3的表达水平均显著低于对照组(P<0.05),抗凋亡基因Bcl-2的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,添加适宜浓度的PRL(50 ng/mL),并处理细胞12 h,可显著促进附睾上皮细胞的增殖和迁移并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 绒山羊 催乳素 附睾上皮细胞 增殖 凋亡

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血清人附睾上皮分泌蛋白4水平检测在卵巢癌的应用价值 被引量：29

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作者 石华 罗蔚 +4 位作者 李文胜 沈川 柳晓琴 甘春玉 刘芳 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期267-270,共4页

目的:研究卵巢癌患者血清人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)水平与卵巢癌病理类型的关系,探讨血清HE4检测在卵巢癌的应用价值。方法:比较卵巢癌组(210例)、卵巢良性疾病组(185例)和健康对照组(260例)血清HE4及癌抗原125(CA125)水平,并检测分析... 目的:研究卵巢癌患者血清人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)水平与卵巢癌病理类型的关系,探讨血清HE4检测在卵巢癌的应用价值。方法:比较卵巢癌组(210例)、卵巢良性疾病组(185例)和健康对照组(260例)血清HE4及癌抗原125(CA125)水平,并检测分析卵巢癌不同病理类型血清HE4水平。结果:卵巢癌组血清HE4水平(42.45 pmol/L)明显高于卵巢良性疾病组(17.35 pmol/L)和健康对照组(28.70 pmol/L),差异均有统计学意义(P<0.01);血清CA125水平在卵巢癌组(11.85 U/L)和卵巢良性疾病组(19.75 U/L)明显高于健康对照组(8.50 U/L),差异均有统计学意义(P<0.01)。卵巢癌组中混合性癌血清HE4水平(82.20 pmol/L)明显高于浆液性癌(53.20 pmol/L)和子宫内膜样癌(50.55 pmol/L),差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:HE4是卵巢癌良好的生物标志物,HE4水平与卵巢癌病理类型有关。 展开更多

关键词 人附睾上皮分泌蛋白4 癌抗原125 卵巢癌 病理类型

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绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性 被引量：8

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作者 范晓梅 张通 +2 位作者 栗瑞兰 边小娜 张家新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1212-1220,共9页

本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪... 本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪和CCK法分别检测细胞纯度和增殖情况,在电镜下观察细胞超微结构。结果表明,两种培养方法所获的细胞均呈岛屿状克隆生长和较好的增殖能力,具有活跃的分泌和代谢功能;上皮细胞特异性的角蛋白18和附睾特异性的谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)的表达以及流式细胞仪结果显示,两种方法所获细胞均为纯度较高的附睾上皮细胞,但改良组织块消化法获得原代细胞需要的时间长,酶消化法获得原代细胞时间短,获得的细胞量大。本研究结果为进一步研究绒山羊附睾上皮功能提供了良好的基础。 展开更多

关键词 细胞培养 附睾上皮细胞 酶消化法 改良组织块消化法

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卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4含量与细胞浸润性生长的相关性研究 被引量：4

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作者 孙洪林 孙树凯 《海南医学院学报》 CAS 2017年第18期2577-2580,共4页

目的:研究卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4含量与细胞浸润性生长的相关性。方法:选择2013年6月~2016年12月期间在青岛大学附属医院西海岸医疗中心接受手术切除治疗的卵巢癌患者作为研究的卵巢癌组,同期在中国石油大学(华东... 目的:研究卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4含量与细胞浸润性生长的相关性。方法:选择2013年6月~2016年12月期间在青岛大学附属医院西海岸医疗中心接受手术切除治疗的卵巢癌患者作为研究的卵巢癌组,同期在中国石油大学(华东)医院体检的健康女性作为研究的对照组。取两组受试者的血清并检测间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量,取卵巢癌组换的卵巢癌病灶、癌旁病灶并检测增殖基因、凋亡基因、侵袭基因的表达量。结果:卵巢癌组患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量均显著高于对照组;卵巢癌病灶中FUNDC1、LSD1、TNFAIP8、CXCR4、β-catenin、CD44、PELP1、Slug、ZEB1、Snail的mRNA表达量显著高于癌旁病灶且与血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量呈正相关,MFN2、PTEN、FN14、E-cadherin的mRNA表达量显著低于癌旁病灶且与血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量呈负相关。结论:卵巢癌患者血清中间皮素、人附睾上皮分泌蛋白4的含量异常升高且与癌细胞的浸润性生长有关。 展开更多

关键词 卵巢癌 间皮素 人附睾上皮分泌蛋白4 增殖 侵袭

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一氧化氮参与附睾上皮细胞感染后的宿主防御

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作者 赵云涛 郭景慧 +2 位作者 陈璇 伍忠銮 周文良 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期84-88,共5页

以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,... 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,采用iNOS的抑制剂L-NMMA和AGE预处理后,NO水平显著降低,与空白处理组相比,抑制剂处理组的S.aureus数量显著增加,这表明NO参与了附睾上皮细胞的宿主防御过程,在附睾上皮细胞的宿主防御中具有重要的作用。 展开更多

关键词 附睾上皮细胞 一氧化氮 宿主防御

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附睾上皮细胞表达功能性的TLR-2和TLR-4

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作者 赵云涛 郭景慧 +1 位作者 伍忠銮 周文良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-127,132,共3页

目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对... 目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对附睾上皮细胞进行功能性检测。结果:TLR2和TLR4在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上在附睾上皮细胞均有表达,TLR2和TLR4的配体LTA和LPS均能激活附睾上皮细胞的天然免疫反应,产生炎症因子TNF-α和IL-1β,差异有统计学意义。结论:附睾上皮细胞表达功能性的TLR2和TLR4。 展开更多

关键词 附睾上皮细胞 TOLL样受体2 Toll样受体4 表达 天然免疫

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大鼠附睾上皮内ACP及NSE与过剩精子处理的关系初探

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作者 李冬民 王龙生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期537-540,共4页

目的　研究大鼠附睾上皮细胞PAS阳性物质的性质 ,以及与溶酶体的酸性水解酶、附睾腔内过剩精子消化处理之间的关系 ,借以阐明附睾上皮处理过剩精子的机制。方法　用组织化学的方法显示PAS阳性物质、非特异性酯酶 (NSE)和酸性磷酸酶 (ACP... 目的　研究大鼠附睾上皮细胞PAS阳性物质的性质 ,以及与溶酶体的酸性水解酶、附睾腔内过剩精子消化处理之间的关系 ,借以阐明附睾上皮处理过剩精子的机制。方法　用组织化学的方法显示PAS阳性物质、非特异性酯酶 (NSE)和酸性磷酸酶 (ACP)并研究其相互关系。结果　PAS阳性颗粒分布于PAS阳性细胞的核下区、核上区或充满整个胞质 ,也可见于附睾管腔内 ,尤其是附睾上皮近腔面 ,呈条带状 ;NSE、ACP阳性颗粒均位于胞质的核上方及附睾上皮的近腔面。结论　NSE、ACP与PAS的染色结果一致 ,说明附睾上皮除吞噬精子外 ,还可能分泌溶酶体酶进入附睾上皮的近腔面以初步处理精子 。 展开更多

关键词 大鼠 附睾上皮 酸性磷酸酶 非特异性酯酶 过剩精子 免疫组织化学

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人附睾上皮分泌蛋白4联合糖链抗原125检测对卵巢癌诊断价值的初步探讨 被引量：7

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作者 胡晓婷 刘琳娟 +1 位作者 高建笺 张青云 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2411-2413,共3页

目的探讨人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)对卵巢癌的诊断价值,及其与糖链抗原125(CA125)联合检测对其诊断价值的比较。方法用ELISA试剂盒检测58例卵巢癌患者、41例其他妇科肿瘤患者和41例健康女性血清中的HE4和CA125水平。结果卵巢癌患者组的... 目的探讨人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)对卵巢癌的诊断价值,及其与糖链抗原125(CA125)联合检测对其诊断价值的比较。方法用ELISA试剂盒检测58例卵巢癌患者、41例其他妇科肿瘤患者和41例健康女性血清中的HE4和CA125水平。结果卵巢癌患者组的HE4水平明显高于妇科其他肿瘤组和健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);单独检测HE4的ROC曲线下面积为91.4%,灵敏性和特异性分别为75.0%和97.5%;单独检测CA125的ROC曲线下面积为77.3%,灵敏性和特异性分别为71.2%和77.5%;二者联合检测时ROC曲线下面积为92.5%,灵敏性和特异性分别为78.8%和97.5%。结论 HE4的灵敏性和特异性均优于CA125,二者联合检测特异性无明显改变,但提高了检测的灵敏性,HE4对卵巢癌的诊断价值优于单独CA125检测。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 人附睾上皮分泌蛋白4 糖链抗原CA125

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鬼臼毒素对大鼠附睾上皮细胞基因表达差异的影响

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作者 李国停 谢淑武 +3 位作者 钟瑞华 陈平 钱越英 朱焰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1086-1087,共2页

目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片... 目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片段化后与芯片杂交,检测芯片并记录结果。结果鬼臼毒素组细胞与空白对照组相比,差异倍数在5倍以上的有137个基因,其中73个基因上调,64个基因下调;差异倍数在10倍以上的有40个,包括26个上调基因(U2SURP,DANJB7,ARHGAP15,TEMEM47,CCL3,MMP9,CSF3,IL23A,CXCL2,MMP13,CSF2,CXCL3,MMP10,CXCL5,SCIN,LOC500846,OLR540,PLA2G2A,CXC3CLL,IL1B,LOC363060,DCHS2,CCL20,RNASE10,LOC360228,TNF-A)和14个下调基因(RAB44,KRT5,ADAMTSL2,LOC685767,LOC688842,RGD1564513,POP1,KCNJ10,POLR3A,CNTROB,FAM109A,ORL578,COL1LA2,TAS2R71)。两组差异表达基因Pathway富集功能分析显示,显著上调基因主要涉及细胞因子受体间相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)、肿瘤坏死因子信号通路、NF-kappa B信号通路、趋化因子信号通路、凋亡通路及风湿性关节炎通路;显著下调基因主要涉及神经刺激性配体受体通路和嗅觉传到通路等。差异基因最集中的通路是细胞因子间相互作用及细胞凋亡。结论鬼臼毒素主要通过两条途径影响大鼠附睾上皮细胞生长,分别是诱导凋亡和引发炎症反应。 展开更多

关键词 鬼臼毒素 附睾上皮细胞 基因表达 细胞凋亡 炎症反应

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兔附睾上皮的免疫组化及超微结构研究

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作者 殷秀玲 闫静 +3 位作者 王更新 雷建章 赵玉珍 王春林 《电子显微学报》 CAS CSCD 1993年第1期3-3,共1页

附睾特异性蛋白—1(ESP—1)和—2(ESP—2)是从新西兰家兔附睾尾液中分离出的两种蛋白,对附睾精子的功能性成熟起重要作用。有关这两种蛋白的合成部位及分泌方式尚缺乏统一认识。作者应用免疫细胞化学染色(ABC法和IGSS法)对新西兰雄性家... 附睾特异性蛋白—1(ESP—1)和—2(ESP—2)是从新西兰家兔附睾尾液中分离出的两种蛋白,对附睾精子的功能性成熟起重要作用。有关这两种蛋白的合成部位及分泌方式尚缺乏统一认识。作者应用免疫细胞化学染色(ABC法和IGSS法)对新西兰雄性家兔附睾上皮进行了研究。光镜和CAM高速计算机图象分析表明,ESP—1和ESP—2在附睾起始段为阴性,从头段开始主细胞胞质内逐渐出现阳性颗粒,在体段呈色反应强于其它各段。在此基础上,为深入探索上皮的分泌方式,超微结构及与光镜组化关系,又进行了扫描电镜观察。电镜结果显示:体部上皮相邻细胞分别具有不同的分泌时相,处于相对静止的细胞,表面覆盖微绒毛;而呈现分泌活动的细胞,其游离面局部常向腔内隆起(图1)。 展开更多

关键词 附睾上皮 超微结构 免疫组织化学 家兔

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永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析 被引量：3

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作者 宋慧子 栾兆进 +3 位作者 王兆琛 杜炜 赵勇超 张家新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1624-1633,共10页

旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免... 旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免疫荧光法鉴定其角蛋白18(CK18)和人端粒酶逆转录亚基(hTERT)表达情况;RT-PCR检测其hTERT mRNA的表达;采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力;利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况;核型分析检测其倍体情况;从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)和雄激素受体(AR)的表达情况。结果显示,原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态。hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞,传45代后,hTERT-SEECs仍呈铺路石状;hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT,并且拥有正常的二倍体核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs(P<0.05),处于S期细胞比例显著高于SEECs(P<0.05),且其活细胞率显著高于SEECs(P<0.05),凋亡率显著低于SEECs(P<0.05);hTERT-SEECs和SEECs的GPX5和AR蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。本研究所建立的hTERT-SEECs经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态,增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性。 展开更多

关键词 绵羊附睾上皮细胞 永生化 HTERT 基因表达

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EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

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作者 栾兆进 宋慧子 +3 位作者 杜炜 赵勇超 王兆琛 张家新 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第5期9-16,共8页

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——... 【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P<0.01),凋亡指数显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P<0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P<0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P<0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。 展开更多

关键词 表皮生长因子 附睾上皮细胞 绵羊 细胞增殖 叉头盒蛋白O1

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鬼臼毒素诱导离体大鼠附睾上皮细胞凋亡机制研究

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作者 李国停 钟瑞华 +4 位作者 周洁芸 谢淑武 陈平 钱越英 朱焰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1357-1363,共7页

目的探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin,PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Ann... 目的探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin,PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态;RT-PCR技术研究TNF-αmRNA的变化;ELISA法检测鬼臼毒素对细胞培养上清液TNF-α水平的影响;Western blot法检测细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达水平。结果CCK-8结果显示,鬼臼毒素能明显抑制大鼠附睾上皮细胞增殖并诱导凋亡,并呈剂量及时间依赖性(P<0.05),24、48、72 h的半数抑制浓度(95%置信区间)分别为59.36(15.50~227.41)、0.37(0.080~1.70)、0.077(0.017~0.35)μmol·L^(-1);透射电镜下观察发现,鬼臼毒素引起附睾上皮细胞形态变圆,细胞核破碎,线粒体空泡化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,鬼臼毒素能升高TNF-αmRNA水平及细胞培养上清中TNF-α的含量;Western blot结果显示,鬼臼毒素能明显增加细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达。结论鬼臼毒素可通过线粒体调控的内源性通路和TNF受体介导的外源性通路,诱导大鼠附睾上皮细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 鬼臼毒素 生育力 大鼠附睾上皮细胞 细胞凋亡 线粒体 TNF-α caspase活化

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HE4和CA125联合检测在上皮性卵巢癌风险评估中的应用 被引量：12

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作者 雷旦生 喻晶 +1 位作者 王堃 张顺 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期853-855,共3页

目的探讨人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)与CA125联合检测在卵巢癌风险评估中的应用价值。方法用ELISA法检测上皮性卵巢癌、妇科良性病变、其他妇科恶性肿瘤及其他系统恶性肿瘤共84例女性患者血清HE4和CA125水平,计算出卵巢恶性肿瘤风险值(ROM... 目的探讨人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)与CA125联合检测在卵巢癌风险评估中的应用价值。方法用ELISA法检测上皮性卵巢癌、妇科良性病变、其他妇科恶性肿瘤及其他系统恶性肿瘤共84例女性患者血清HE4和CA125水平,计算出卵巢恶性肿瘤风险值(ROMA值),联合绝经状态评估患卵巢癌的风险性。结果由ROMA值结合绝经状态在84例患者中诊断出卵巢癌的敏感度和特异度分别为66.7%和91.7%,均高于单一CA125检测诊断出卵巢癌的敏感度(50.0%)和特异度(75.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论根据HE4和CA125结果结合绝经状态计算卵巢恶性肿瘤风险值(ROMA值),在诊断卵巢癌的敏感度和特异度均高于单一CA125检测,有助于卵巢癌的诊断和疗效监测。 展开更多

关键词 人附睾上皮分泌蛋白4 卵巢恶性肿瘤风险值 卵巢癌

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绵羊附睾GPX5的抗氧化功能研究 被引量：1

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作者 栾兆进 赵勇超 +1 位作者 宋慧子 张家新 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第8期8-14,26,共8页

【目的】利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。【方法】体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重... 【目的】利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。【方法】体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码(scramble)序列(siRNA-NC),采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照(CK),于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果。采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧(ROS)水平,采用TBA法检测其丙二醛(MDA)水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。【结果】分离培养的细胞可与角蛋白18(CK18)特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验。siRNA-N.3(即siRNA-GPX5)对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验。随着过氧化氢(H_(2)O_(2))处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降。与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高,8-OHdG水平明显上升。【结论】GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤。 展开更多

关键词 绵羊 附睾上皮细胞 谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5) 抗氧化能力

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HE4在卵巢癌诊治中的临床应用评价 被引量：39

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作者 卢仁泉 郭林 沈烨红 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期680-685,共6页

背景与目的:人附睾上皮分泌蛋白4(human epididymis protein,HE4)是近年来研究较热门的一种新型肿瘤标志物,并拟在中国临床上推广应用,但目前国内HE4在卵巢癌应用研究中报道的例数还很少,特别是在随访监测中的价值尚待探究。本研究扩大... 背景与目的:人附睾上皮分泌蛋白4(human epididymis protein,HE4)是近年来研究较热门的一种新型肿瘤标志物,并拟在中国临床上推广应用,但目前国内HE4在卵巢癌应用研究中报道的例数还很少,特别是在随访监测中的价值尚待探究。本研究扩大了样本量,进一步探讨HE4在中国人群上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)的早期诊断、疗效监测以及预后判断中的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测116例EOC患者、40例卵巢良性疾病患者、61例其他肿瘤患者及100名健康对照者血清的HE4浓度水平,同时对其中28例EOC患者进行随访测定HE4水平。结果:未绝经组和绝经组中,EOC患者血清的HE4水平均明显高于健康对照和卵巢良性疾病患者(chi-square值分别为32.2和64.4,P均<0.01);根据健康对照组的P95(percent95)值,未绝经者HE4检测卵巢癌的Cut-off值为58.2pmol/L,敏感度为57.5%,特异度为93.9%;绝经者HE4检测卵巢癌的Cut-off值为67.6pmol/L,敏感度为80.3%,特异度为86.4%。卵巢癌患者血清HE4水平随着肿瘤分级、分期的升高而升高,淋巴结转移患者HE4水平显著高于未转移者(U值为665.5,P均<0.01)。此外,随访检测了28例EOC患者的血清样本,HE4浓度的变化能很好地反映疾病发展趋势(chi-square值为26.6,P<0.01);结果分析表明,HE4浓度变化与病情发展间的符合率为82.2%(23/28)。手术治疗后,病情好转者,HE4水平有所下降(21/25)。结论:HE4检测在EOC诊断和疗效监测、预后判断等方面具有较好的应用价值。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 人附睾上皮分泌蛋白4 肿瘤标志物

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