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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：2
1
作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页
以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫分析
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化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究 被引量：11
2
作者 萨仁托雅 张峰 +1 位作者 郑有虎 卢亚楠 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期486-491,共6页
对检测水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）和氯霉素（CAP）药物残留的两种方法——化学发光免疫分析（CLEIA）和酶联免疫分析（ELISA）法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两... 对检测水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）和氯霉素（CAP）药物残留的两种方法——化学发光免疫分析（CLEIA）和酶联免疫分析（ELISA）法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01~2.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025~6.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10~1.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05~4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数（RSD）为5.5%~11.3%,批间RSD为12.3%~20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%~11.1%,批间RSD为15.6%~18.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》的规定。 展开更多
关键词 化学发光免疫分析 酶联免疫分析 氯霉素 呋喃唑酮代谢物
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沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立
3
作者 李思 蒋蔚 +5 位作者 程婷婷 卢春慧 辛思培 曹敬政 王权 孙卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1772-1783,共12页
为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞... 为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫(ic-CLEIA)检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1∶4×106;包被原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释比为1∶750000,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1∶10000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限(LOD)为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫 残留检测
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呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立 被引量：5
4
作者 吕月霞 王瑞 +2 位作者 黄登宇 王云贵 李涛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期71-75,86,共6页
采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 n... 采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 ng/m L,检测限为15.52 pg/m L,线性范围0.038~9.78 ng/m L,变异系数均小于10%;该方法中抗体除了与呋喃它酮原药有一定交叉外,与其他结构类似物无交叉,表现了良好的特异性;鸡肉样品添加回收率为83%~94%,验证了该方法的准确性,为实际动物组织中AMOZ残留提供了便捷、准确、快速筛查的手段。 展开更多
关键词 呋喃它酮代谢物 直接竞争化学发光酶免疫分析法 鸡肉
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白酒中邻苯二甲酸二乙酯的化学发光酶联免疫分析方法 被引量：1
5
作者 黄少文 羿利华 +3 位作者 孙远明 雷红涛 柳春红 沈玉栋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期178-183,共6页
以邻苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）为研究目标，以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原，通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物，制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数，即包被抗原浓度... 以邻苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）为研究目标，以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原，通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物，制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数，即包被抗原浓度为50ng／mL，4℃环境下包被12h；抗体用T液稀释；药物缓冲液选用pH5．4、0．005mol／L的PBS缓冲液；酶标二抗用P液稀释，稀释度为1／3000；反应时间是：一抗：二抗=30min：40min。基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP。该方法对DEP的最低检测限（LOD）为3．09ng／mL，检测范围（IC20～IC80）为5．93—42．03ng／mL，半抑制浓度（IC50）值为16．57ng／mL，与14种结构类似物及功能类似物交叉反应均远低于0．5％，通过对白酒样品添加回收率的测定，证明了该方法的准确性，适用于白酒中DEP的快速检测。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二乙酯 化学发光酶联免疫 间接竞争
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呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立 被引量：1
6
作者 黄登宇 高文静 +3 位作者 黄种乾 高丽霞 冯敏 杨秀松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期294-299,共6页
建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度... 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075~7.396 ng/m L,半抑制浓度IC_(50)为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。 展开更多
关键词 呋喃唑酮 间接竞争化学发光酶免疫法 动物源性食品 快速检测
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化学发光酶联免疫分析法同时检测3种有机磷农药残留 被引量：30
7
作者 邹茹冰 柳颖 +3 位作者 王双节 张亚 郭逸蓉 朱国念 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期37-45,共9页
利用能同时识别对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,建立了同时测定这3种有机磷农药残留的化学发光酶联免疫分析方法 (chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),比较了间接竞争(ic-CLEIA)和直接竞争(dc-CLEIA)2... 利用能同时识别对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,建立了同时测定这3种有机磷农药残留的化学发光酶联免疫分析方法 (chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),比较了间接竞争(ic-CLEIA)和直接竞争(dc-CLEIA)2种反应模式,优化了相关理化参数,确立了最适反应条件。结果表明:间接竞争CLEIA法检测对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的抑制中浓度(IC_(50))分别为5.57、2.30和2.62μg/kg,检测线性范围分别为0.39~100、0.39~25和0.39~25μg/kg;直接竞争CLEIA法检测对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的抑制中浓度(IC_(50))分别为5.43、1.34和1.24μg/kg,检测线性范围分别为0.39~100、0.10~25和0.10~25μg/kg。所建立的CLEIA方法基本能满足对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷在谷物和果蔬中最大残留限量的检测要求,为研制有机磷农药多残留检测试剂盒提供了技术依据。 展开更多
关键词 化学发光酶联免疫分析 有机磷农药 残留 单克隆抗体 宽谱特异性
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增强化学发光酶联免疫分析用于伏马菌素B_1的快速检测 被引量：6
8
作者 刘贝贝 于斐 +2 位作者 玉崧成 刘利娥 吴拥军 《郑州大学学报（理学版）》 CAS 北大核心 2017年第4期76-81,共6页
以抗原-抗体的免疫反应及化学发光为基础,以辣根过氧化物酶(HRP)标记伏马菌素B_1(FB_1)为半抗原、鲁米诺-H_2O_2为发光底物,对羟基联苯为化学发光增强剂,建立了一种新型的FB_1快速检测方法——增强化学发光酶联免疫分析法,相关系数R为0.... 以抗原-抗体的免疫反应及化学发光为基础,以辣根过氧化物酶(HRP)标记伏马菌素B_1(FB_1)为半抗原、鲁米诺-H_2O_2为发光底物,对羟基联苯为化学发光增强剂,建立了一种新型的FB_1快速检测方法——增强化学发光酶联免疫分析法,相关系数R为0.991 6,线性范围为200~1 400μg/L,检测限为91.3μg/L.在不同的加标水平下,回收率为85.9%~115.4%,与之相对应的板内RSD为9.1%~10.2%(n=6),板间RSD为10.6%~12.4%(n=6),与其他真菌毒素交叉反应率较低.与传统的检测方法(酶联免疫吸附测定和高效液相色谱法)进行了比较,结果表明,本研究建立的方法灵敏度高、特异性好、操作简单、检测快速,能够用于大批量实际样品的快速检测. 展开更多
关键词 增强化学发光酶联免疫分析 伏马菌素B1 快速检测
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黄曲霉毒素B1直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立 被引量：2
9
作者 李萍 雷红涛 +4 位作者 王弘 徐振林 沈玉栋 孙远明 杨金易 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期287-290,共4页
以鲁米诺一辣根过氧化物酶一过氧化氢为检测体系，建立一种检测黄曲霉毒素B。的直接竞争化学发光酶免疫法。经优化，该方法的最佳反应条件为抗体包被为0．0625μg／mL；黄曲霉毒素B1酶标抗原（1mg／mL）稀释10000倍；0．01mol／L磷酸盐... 以鲁米诺一辣根过氧化物酶一过氧化氢为检测体系，建立一种检测黄曲霉毒素B。的直接竞争化学发光酶免疫法。经优化，该方法的最佳反应条件为抗体包被为0．0625μg／mL；黄曲霉毒素B1酶标抗原（1mg／mL）稀释10000倍；0．01mol／L磷酸盐缓冲液（pH7．5）。本方法的IC50为0．062ng／mL；检出限为0．01ng／mL；线性范围0．017-0．215ng／mL，批内和批间相对标准偏差均小于15％。食用油样品的添加回收率为88．7％～98％，通过对比实验证实，该方法与ELISA方法相关性良好，可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的大规模快速筛查。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_1 化学发光酶免疫分析 直接竞争 食用油
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猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立 被引量：14
10
作者 马震原 王淑娟 +5 位作者 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王华俊 王东方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期574-583,共10页
为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备... 为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争化学发光酶联免疫 定量
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化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ 被引量：16
11
作者 范艳 孟玮 +4 位作者 朱立鑫 刘仁荣 许龙 裘雪梅 杨帆帆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第12期209-212,共4页
为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m... 为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m L,最低检测限为0.078 9 ng/m L,IC50为0.679 ng/m L。CLEIA回收率为75.08%~112.18%,变异系数为8.89%~15.61%;通过与酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。 展开更多
关键词 苏丹红Ⅰ 化学发光酶联免疫分析 酶联免疫吸附分析
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化学发光酶联免疫法检测鱼虾中氯霉素残留 被引量：15
12
作者 高彬文 张素霞 +2 位作者 沈建忠 王战辉 刘金凤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第5期68-69,共2页
关键词 化学发光分析法 光电检测技术 氯霉素残留 酶联免疫法 鱼虾 放射免疫分析 酶免疫分析 拉曼散射
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直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B_1 被引量：7
13
作者 何庆华 许杨 刘师文 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第22期173-176,共4页
建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系... 建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 化学发光酶免疫分析 直接竞争酶联免疫分析
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直接竞争化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留 被引量：4
14
作者 杨金易 李萍 +4 位作者 雷红涛 王弘 徐振林 孙文佳 孙远明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期198-202,共5页
摘要建立了克伦特罗的直接竞争化学发光酶免疫检测方法，并考察了方法的特异性、灵敏度。最佳反应条件为：包被抗原浓度为25ng／mL；酶标抗体稀释80000倍；0．02mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）（pH7．0），竞争反应时间30min。方法的IC50为0... 摘要建立了克伦特罗的直接竞争化学发光酶免疫检测方法，并考察了方法的特异性、灵敏度。最佳反应条件为：包被抗原浓度为25ng／mL；酶标抗体稀释80000倍；0．02mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）（pH7．0），竞争反应时间30min。方法的IC50为0．09ng/mL；检出限为0．01ng／mL；线性范围0．02～7．59ng/mL；对尿样、猪肉、肝脏以及饲料样品检测的平均回收率分别为94．5％-95．3％、90．7％-94．1％，批内和批间相对标准偏差均小于15％。该方法与HPLC方法的相关性良好，说明其具有较高的灵敏度和特异性，可用于实际样品的检测。 展开更多
关键词 克伦特罗 化学发光酶免疫分析 直接竞争
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法 被引量：1
15
作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-ELISA)
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大型溞胆碱酯酶间接非竞争酶联免疫吸附定量分析法的建立 被引量：2
16
作者 刘洪翠 杨艳霞 李少南 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期347-354,共8页
用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non... 用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non-competitive enzyme-linked immunosorbentassay)。结果表明:此方法检测灵敏度为24ng.mL-1;经免疫交叉反应鉴定,所获抗血清与5、10μg.mL-1标准蛋白质和其他生物如花翅摇蚊、尖额溞、斑马鱼(脑、脑除外的整体)、家蚕、意大利蜜蜂、赤子爱胜蚯蚓、非洲爪蟾(蝌蚪)等来源的ChE交叉反应率分别为:<0.25%、<0.25%、2.13%、10.19%、3.88%、3.56%、2.81%、3.93%、5.00%和2.75%,具较高的特异性。说明用本试验得到的抗血清建立的间接非竞争酶联免疫吸附法可用于大型溞体内ChE含量的测定,以利于在农药暴露环境下大型溞体内ChE活性的精确检测。 展开更多
关键词 大型溞 间接非竞争酶联免疫吸附法 胆碱酯酶免疫含量
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基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立 被引量：2
17
作者 吕丽兰 张娅 +7 位作者 邹承武 甘志勇 吴静娜 李乾坤 吕玉莲 易国强 温绍聪 何丽珊 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1193-1200,共8页
【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(... 【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株。再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性。采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性。【结果】成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应。对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留。 展开更多
关键词 对硫磷 间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA) 单克隆抗体 气相色谱法(GC)
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化学发光酶免疫分析(CLEIA)法测定猪肌肉组织中的氯霉素含量 被引量：5
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作者 姚焱 吴海珍 陈键 《农业灾害研究》 2012年第2期42-44,共3页
[目的]建立高度灵敏的直接竞争化学发光酶免疫分析(CLEIA)方法,用于检测猪肌肉组织中的氯霉素残留。[方法]用卵清蛋白与氯霉素偶联物作为包被抗原,标准品或样品中氯霉素作为竞争抗原建立直接竞争CLEIA方法。[结果]所建立方法的检测限为0... [目的]建立高度灵敏的直接竞争化学发光酶免疫分析(CLEIA)方法,用于检测猪肌肉组织中的氯霉素残留。[方法]用卵清蛋白与氯霉素偶联物作为包被抗原,标准品或样品中氯霉素作为竞争抗原建立直接竞争CLEIA方法。[结果]所建立方法的检测限为0.018ng/ml,而并列的ELISA方法的检测限为0.177ng/ml。猪肌肉组织中氯霉素添加水平为0.1～5.0ng/ml时,CLEIA法的回收率为87%～118%,ELISA法的回收率为81%～107%。CLEIA法的批内和批间变异系数分别为3.22%～5.58%和4.95%～8.86%。[结论]CLEIA方法快速、简单、灵敏度高,适用于极低剂量氯霉素残留的快速检测。 展开更多
关键词 氯霉素 猪肌肉组织 化学发光酶免疫分析 酶联免疫分析 检测
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重金属铜化学发光酶联免疫快速检测方法的建立 被引量：4
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作者 杨浩 程龙球 +3 位作者 黄建芳 朱柳蓉 刘洋 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期584-590,共7页
目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原... 目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原,建立铜间接竞争CLEIA法,并对其准确度、精密度、特异性和稳定性进行评价;采集植物中草药和土壤样品共31份,通过微波消解联合沉淀法进行前处理并制备待测样,由间接竞争CLEIA法进行铜含量测定,以ICP-AES仪器法所测结果为对照评价其可靠性。结果:该方法检测灵敏度为17. 9 ng/ml,检测限为1. 9 ng/ml,线性范围为3. 0～200 ng/ml;准确度试验回收率为98. 8%～105. 5%,精密度试验RSD≤5. 0%;特异性试验仅与Mg^(2+)、Zn^(2+)有13. 3%、3. 3%的交叉反应;酶标板置-20℃避光保存6周内其检测结果准确性未出现明显改变。对植物中草药和土壤样品进行前处理并制样检测,对比ICP-AES法检测结果,相关系数分别为0. 972和0. 989,两种方法具有较好相关性,表明间接竞争CLEIA法可应用于一般环境样品中铜的简便快速定量测定。结论:成功建立铜间接竞争CLEIA检测法,其灵敏度及各参数均符合国家法定相关样品铜离子检测技术指标的要求,可应用于一般环境样品中铜含量的快速测定。 展开更多
关键词 铜离子 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫
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基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素 被引量：1
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作者 蔡永辉 王康 +1 位作者 陈敏 王冰清 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期571-576,共6页
本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆... 本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。 展开更多
关键词 恩拉霉素 单克隆抗体 间接竞争性酶联免疫吸附分析 猪饲料 鸡饲料
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