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食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立 被引量：1
1
作者 侯悦 陈瑞鹏 +3 位作者 芦然 高志贤 周焕英 杨仕平 《食品研究与开发》 CAS 2024年第3期181-186,共6页
该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞... 该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫法 黄曲霉毒素M_(1) 快速检测 食品 试剂盒
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间接竞争酶联免疫吸附法检测保健食品中糖皮质激素类药物
2
作者 吴钰瑶 盘焯晖 +5 位作者 林浩标 陈凤燕 刘昀昀 段利瑾 梁岳 刘凤银 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第16期45-54,共10页
目的建立间接竞争酶联免疫吸附(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法用于保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测。方法将可的松、地塞米松分别与丁二酸酐衍生制备免疫半抗原,倍他米松衍生制备包被半抗... 目的建立间接竞争酶联免疫吸附(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法用于保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测。方法将可的松、地塞米松分别与丁二酸酐衍生制备免疫半抗原,倍他米松衍生制备包被半抗原,采用活泼酯法与载体蛋白偶联制备人工抗原,采用紫外(ultraviolet,UV)吸收光谱鉴定及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption-tandem time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。通过动物免疫,制备针对糖皮质激素类药物的兔多克隆抗体,建立保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测ic-ELISA法。结果地塞米松丁二酸酐衍生物为免疫半抗原,倍他米松丁二酸酐衍生物为包被半抗原。通过优化实验条件,确定了最佳的包被原质量浓度为1.25μg/m L,以及最佳的抗体稀释倍数为9000倍。在此条件下,本研究建立的ic-ELISA法对11种糖皮质激素类药物的半抑制质量浓度为0.68~40.17 ng/m L,展现了良好的检测灵敏度。使用甲醇超声提取,样品提取液通过标准稀释液稀释500倍消除基质效应,11种目标分析物在4种剂型保健食品中的添加回收率为81.2%~118.7%,变异系数低于14.00%。结论本研究成功制备糖皮质激素类药物的广谱性多克隆抗体,并建立了保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测ic-ELISA法,可用于保健食品中糖皮质激素类药物的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素类药物 广谱性抗体 间接竞争酶联免疫吸附法 保健食品
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雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立 被引量：7
3
作者 刘珒 雷红涛 +5 位作者 孙远明 李振峰 杨金易 沈玉栋 王弘 曾道平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期146-150,共5页
建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:I... 建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:IC50为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。 展开更多
关键词 雌二醇 抗体 间接竞争酶联免疫检测
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间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化 被引量：11
4
作者 王蓓 胥传来 彭池方 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期273-278,共6页
以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件。采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件。选择与DES结构类似的四种药物进... 以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件。采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件。选择与DES结构类似的四种药物进行交叉反应,计算交叉反应率。结果表明产生的抗血清的稀释度可以达到1:102400。方阵滴定法确定最佳包被浓度和抗血清工作浓度分别为1:200和1:4000。通过间接ELISA方法建立了标准曲线,抑制曲线表明,兔抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系,其IC50为1.89ng/ml,最低检测限为0.08ng/ml。四种DES结构类似物的交叉反应率除双烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%。从而优化了间接酶联免疫检测条件,建立了己烯雌酚实用的检测方法,为最终组装试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 己烯雌酚 间接酶联免疫吸附 优化 抗血清
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法
5
作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-ELISA)
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呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立 被引量：1
6
作者 黄登宇 高文静 +3 位作者 黄种乾 高丽霞 冯敏 杨秀松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期294-299,共6页
建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度... 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075~7.396 ng/m L,半抑制浓度IC_(50)为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。 展开更多
关键词 呋喃唑酮 间接竞争化学发光酶免疫法 动物源性食品 快速检测
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间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量 被引量：4
7
作者 单文超 冯会宾 +5 位作者 赵琰 曾文浩 贺娜娜 赵妍 孙晔 屈会化 《环球中医药》 CAS 2015年第9期1089-1092,共4页
目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结... 目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果该方法的线性范围为15.6～500ng/m L,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫分析法 葛根素 葛根 含量测定
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间接酶联免疫法检测鲑鳟鱼类传染性造血器官坏死病病毒 被引量：2
8
作者 金爽 金莉莉 +3 位作者 郭欣硕 蔺翠翠 罗靳 王秋雨 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第8期2327-2331,共5页
目的建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接酶联免疫法。方法以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果应... 目的建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接酶联免疫法。方法以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果应用间接ELISA技术,检测到抗血清对IHNV-G和IHNV的效价分别达到1:32000和1:16000,与其他对照病毒无交叉反应。与PCR检测结果符合率达到98%。结论本文建立的间接酶联免疫法方法具有良好的灵敏性和特异性,为IHNV的检测提供了快捷、高效的技术手段。 展开更多
关键词 鲑鳟鱼 传染性造血器官坏死病病毒 病毒糖蛋白 间接酶联免疫法
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基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物 被引量：3
9
作者 黄婧洁 李苗 +4 位作者 陈莹娴 钟雅兰 张婷婷 姜廷超男 李建成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期766-778,共13页
本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠... 本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示:1)在1 mg的磁珠中,沙拉沙星(sarafloxacin,SAR)单克隆抗体最佳偶联量为15μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2)最佳抗原添加量为1 ng·mL^(-1),捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^(-1)PBS,IC50为0.73 ng·mL^(-1),线性范围为1.0~3.2 ng·mL^(-1);3)氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31μg·kg^(-1),回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法(HPLC)结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。 展开更多
关键词 免疫磁珠富集 氟喹诺酮类药物 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附试验(icELISA)
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大型溞胆碱酯酶间接非竞争酶联免疫吸附定量分析法的建立 被引量：2
10
作者 刘洪翠 杨艳霞 李少南 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期347-354,共8页
用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non... 用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non-competitive enzyme-linked immunosorbentassay)。结果表明:此方法检测灵敏度为24ng.mL-1;经免疫交叉反应鉴定,所获抗血清与5、10μg.mL-1标准蛋白质和其他生物如花翅摇蚊、尖额溞、斑马鱼(脑、脑除外的整体)、家蚕、意大利蜜蜂、赤子爱胜蚯蚓、非洲爪蟾(蝌蚪)等来源的ChE交叉反应率分别为:<0.25%、<0.25%、2.13%、10.19%、3.88%、3.56%、2.81%、3.93%、5.00%和2.75%,具较高的特异性。说明用本试验得到的抗血清建立的间接非竞争酶联免疫吸附法可用于大型溞体内ChE含量的测定,以利于在农药暴露环境下大型溞体内ChE活性的精确检测。 展开更多
关键词 大型溞 间接非竞争酶联免疫吸附法 胆碱酯酶免疫含量
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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：2
11
作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页
以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫分析
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集成化酶联免疫微流控平台检测红酒中的赭曲霉毒素A
12
作者 刘军 曾施宇 +3 位作者 朱浩宇 谭港 江卓奥 尹彬沣 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第17期222-231,共10页
目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过... 目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过负压泵驱动这些试剂分别流经包被有OTA的硅膜夹层进行检测。确定抗原和抗体的工作浓度,绘制拟合标准曲线,计算检出限,分析真实样本的加标回收率。结果抗原为鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联的OTA,孵育质量浓度为5.0μg/mL,捕获抗体为鼠抗OTA抗体,工作质量浓度为5.0μg/mL,检测抗体为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗小鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),稀释倍数为1:1000,OTA的线性范围为1~32 ng/mL,检出限为0.632 ng/mL,干红葡萄酒中的回收率为94.48%~105.76%;相对标准偏差为6.54%~11.18%。结论建立的方法检测成本低,灵敏度高,准确性好,可用于红酒中OTA的定量检测,为检测食品中的生物标志物提供参考。 展开更多
关键词 微流控芯片 间接竞争酶联免疫吸附法 赭曲霉毒素A 干红葡萄酒
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基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素
13
作者 蔡永辉 王康 +1 位作者 陈敏 王冰清 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期571-576,共6页
本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆... 本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。 展开更多
关键词 恩拉霉素 单克隆抗体 间接竞争性酶联免疫吸附分析 猪饲料 鸡饲料
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猪伪狂犬病病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的研制及其应用 被引量：3
14
作者 祖立闯 郭广军 +1 位作者 吕素芳 沈志强 《养猪》 2013年第2期99-101,共3页
猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起猪的一种急性、热性传染病。该病在世界范围内流行，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，我国自1947年发现此病以来，现全国已有30多个省份发生流行，... 猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起猪的一种急性、热性传染病。该病在世界范围内流行，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，我国自1947年发现此病以来，现全国已有30多个省份发生流行，是严重危害我国养猪业的重要疾病之一。该病的危害在于病毒侵入猪体后， 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 间接酶联免疫吸附试验 抗体检测试剂盒 应用 热性传染病 世界范围 经济损失 发生流行
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基于ORF2蛋白的山羊星状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
15
作者 于皓同 马永杰 +4 位作者 王凯茸 丁雨欣 张淑霞 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期17-22,共6页
为了建立山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的血清抗体检测方法,从经RT-PCR检测星状病毒阳性的腹泻羊粪便中克隆山羊星状病毒ORF2基因并构建表达载体,用原核表达技术制备重组ORF2蛋白,重组蛋白纯化复性后作为包被抗原,建立山羊星状病毒... 为了建立山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的血清抗体检测方法,从经RT-PCR检测星状病毒阳性的腹泻羊粪便中克隆山羊星状病毒ORF2基因并构建表达载体,用原核表达技术制备重组ORF2蛋白,重组蛋白纯化复性后作为包被抗原,建立山羊星状病毒血清抗体间接ELISA检测方法,并对临床收集的山羊血清样本进行检测。结果显示,ORF2重组蛋白大小为42 ku,Western blot证明其具有良好的反应原性;ELISA检测方法最佳工作条件为6μg/mL抗原包被酶标板,一抗血清稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶5000,阴阳临界值为0.327。用该方法对山羊流产衣原体、立克次体、山羊支原体山羊肺炎亚种及伪结核棒状杆菌的阳性血清进行检测,结果均为阴性;当阳性血清稀释至1024倍时检测结果仍为山羊星状病毒抗体阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的288份血清样本进行检测,山羊星状病毒抗体阳性率为59.03%。建立了一种检测山羊星状病毒抗体的间接ELISA检测方法,为山羊星状病毒感染的诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 山羊星状病毒 ORF2蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体间接酶联免疫吸附测定方法的建立与应用 被引量：4
16
作者 谢晓妍 石玉佩 +3 位作者 李潇南 段燕方 张永红 周双海 《北京农学院学报》 2022年第1期66-69,共4页
【目的】建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法。【方法】以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步... 【目的】建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法。【方法】以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步临床应用。【结果】确定检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法的各项最佳反应条件;仅有猪圆环病毒3型阳性血清的检测结果为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数和批间变异系数都小于5%,显示出良好的可重复性。在来源于北京地区与河北地区的318份猪的血清中检出猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体阳性率为32.70%,表明这两个地区存在较多的猪圆环病毒3型感染。【结论】建立了一种具有良好特异性和可重复性的检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,可用于猪圆环病毒3型抗体的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 衣壳蛋白 间接酶联免疫吸附测定方法 抗体检测
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牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立 被引量：9
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作者 韩青 王静 +1 位作者 徐豪 杨娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2625-2630,共6页
本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑... 本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度（IC50）为2.1ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限（LOD）为2μg/L。在5、10和20μg/L添加浓度下,回收率为79.2%-90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫吸附试验 替米考星 牛奶 残留
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燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立
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作者 何金麟 王仍瑞 +4 位作者 张世伟 冯荣虎 范群艳 柳训才 徐敦明 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7630-7636,共7页
目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结... 目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。 展开更多
关键词 燕窝 唾液酸糖蛋白 间接竞争酶联免疫分析法
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基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立 被引量：5
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作者 张玉超 刘旭东 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第17期172-177,共6页
为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂... 为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL^50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。 展开更多
关键词 双酚A 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法
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基于异源包被的地索奈德间接竞争酶联免疫检测方法 被引量：2
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作者 谭攀 张世伟 《中国食品工业》 2022年第17期96-99,104,共5页
为监控保健食品和化妆品中地索奈德的滥用情况,本研究建立了地索奈德间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。将地索奈德(Desonide,DES)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyh... 为监控保健食品和化妆品中地索奈德的滥用情况,本研究建立了地索奈德间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。将地索奈德(Desonide,DES)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,获得地索奈德完整抗原DES-KLH;通过免疫小鼠和细胞融合获得抗地索奈德单克隆抗体。将地索奈德半抗原通过活泼酯法分别与牛血清白蛋白(bovine serumalbumin,BSA)偶联作为包被原,建立地索奈德同源及异源的间接竞争酶联免疫分析方法。在同源包被情况下,地索奈德灵敏度为7.9ng/m L,而DEX异源包下灵敏度为0.72ng/m L。对增强骨密度类保健食品、面霜、精华、眼霜、爽肤水的添加回收率在82%—105%之间。该方法能有效应用于食品和化妆品中地索奈德的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 地索奈德 异源包被 间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)
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