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锤头型核酶作用机理的研究进展 被引量:3
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作者 邓文生 杨希才 +1 位作者 彭毅 康良仪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第5期422-425,共4页
概述了锤头型核酶的二级结构特征, 动力学反应的特点以及核酶切割反应的催化机制,
关键词 锤头型核酶 动力学反应 催化机制
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丙型肝炎病毒特异性核酶对HepG2.9706细胞HCV5′NCR基因表达的抑制作用 被引量:3
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作者 王小红 王升启 +2 位作者 管伟 刘立忠 毛秉智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期391-394,共4页
为探讨锤头型核酶抗丙型肝炎病毒的作用 ,根据HCV 5′NCR及翻译起始区的二级结构 ,设计及合成了 1个锤头型核酶RzA .将其插入pCI neo表达载体的多克隆位点 ,构建了表达RzA的质粒pHCV RzA .采用转基因细胞模型HepG2 970 6细胞 ,评价了pH... 为探讨锤头型核酶抗丙型肝炎病毒的作用 ,根据HCV 5′NCR及翻译起始区的二级结构 ,设计及合成了 1个锤头型核酶RzA .将其插入pCI neo表达载体的多克隆位点 ,构建了表达RzA的质粒pHCV RzA .采用转基因细胞模型HepG2 970 6细胞 ,评价了pHCV RzA质粒对HCV 5′NCR调控荧光素酶表达的抑制活性 .结果表明 ,在HepG2 970 6细胞中 ,pHCV RzA以序列特异性、剂量依赖性方式抑制荧光素酶基因的表达 ,抑制率达 80 % ,提示核酶有可能作为HCV感染基因治疗的一种有效途径 . 展开更多
关键词 肝炎病毒 锤头型核酶 HepG2.9706细胞 基因表达 抑制作用
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丙型肝炎病毒RNA特异性核酶的切割活性研究 被引量:1
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作者 刘立忠 王升启 +1 位作者 朱宝珍 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期449-453,共5页
针对丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozymeA,ribozymeB,ribozymeC1,ribozymeC2).首先应用体外切割实验... 针对丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozymeA,ribozymeB,ribozymeC1,ribozymeC2).首先应用体外切割实验筛选出作用于HCVRNA起始密码子上游GTA↓位点的核酶RzA有较好的活性.为初步验证核酶RzA在细胞内的切割活性,经脂质体介导,将RzARNA与另一携带该核酶靶基因的质粒表达载体pClneoluciferase(载体中荧光素酶基因受核酶靶基因的调控)共转染HepG2细胞.通过测定荧光素酶基因的表达证实了核酶在细胞内有较好的切割活性.在此实验基础上,把RzA基因克隆至pClneo质粒表达载体中,再次经脂质体介导,将重组的表达载体pClneoRzA与携带该核酶靶基因的质粒表达载体pClneoluciferase共转染HepG2细胞,获得了更好的切割效果. 展开更多
关键词 锤头型核酶 肝炎病毒 基因治疗
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核酶在我国植物抗病毒领域的研究和应用现状 被引量:2
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作者 刘萍 祁喜涛 +4 位作者 胡建广 丁义峰 常云霞 韩德果 赵乐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第13期2940-2943,共4页
简要介绍了锤头型和发夹型核酶的结构、功能及催化机制,并对我国利用核酶抗植物病毒病害方面的研究和应用现状作一概述。
关键词 锤头型核酶 发夹核酶 植物病毒病
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专一切割猴免疫缺陷病毒3′端LTR 10拷贝自切割核酶的制备及体外催化活性动力学分析 被引量:1
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作者 邓文生 张奉学 +3 位作者 杨希才 符林春 康良仪 990.net 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期363-367,共5页
将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5... 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5min,至少 85%的 1 0体核酶发生自切割 ,并释放出单体核酶 .反式切割研究表明 ,1 0体核酶表现出极高的催化活性 .尽管 1 0体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一 ,在反应初始 2 5min内 ,1 0体核酶的催化产物平均超过单体核酶1 3.31 % .1 0体核酶一级反应速度常数是单体核酶的 1 .86倍 .从这些数据可以推断 ,1 展开更多
关键词 锤头型核酶 多体自切割 制备 酶学动力学
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快速制备RNA小分子质量标记的新方法
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作者 邓文生 杨希才 +3 位作者 康良仪 张奉学 符林春 990.net 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期309-311,共3页
在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过... 在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过程中多体酶发生了自切割 ,核酶转录物切割成从 70nt到 70 6nt的RNA等梯度带 ,因此 。 展开更多
关键词 锤头型核酶 自切割 RNA分子质量标记 制备
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