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尹长城团队揭示细胞内钙释放通道激活的关键机制
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作者 《北京大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期392-392,共1页
2025年2月24日北京大学基础医学院生物物理学系尹长城教授团队的论文“Structural insights into transmembrane helix S0 facilitated RyR1 channel gating by Ca^(2+)/ATP”(跨膜螺旋S0介导Ca^(2+)/ATP调控RyR1通道的结构机制)在Natur... 2025年2月24日北京大学基础医学院生物物理学系尹长城教授团队的论文“Structural insights into transmembrane helix S0 facilitated RyR1 channel gating by Ca^(2+)/ATP”(跨膜螺旋S0介导Ca^(2+)/ATP调控RyR1通道的结构机制)在Nature Communications在线发表。 展开更多
关键词 RyR1通道 细胞内释放通道 CaATP调控
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跨膜蛋白16A:钙激活氯通道的最新进展 被引量:4
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作者 陈娅斐 李婷 +6 位作者 安海龙 于慧 张素花 韩英荣 张玉红 郭鹏 展永 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1175-1181,共7页
钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)介导了众多生理过程,包括跨上皮离子与液体分泌、心肌和神经兴奋、感觉传导、平滑肌收缩和受精过程等,但目前对于其分子基础等重要问题尚未研究清楚.综述了最新报道的CaCC... 钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)介导了众多生理过程,包括跨上皮离子与液体分泌、心肌和神经兴奋、感觉传导、平滑肌收缩和受精过程等,但目前对于其分子基础等重要问题尚未研究清楚.综述了最新报道的CaCCs分子基础跨膜蛋白16A(TMEM16A)的发现过程、基因结构和功能、离子通道电生理特性、相关病理与药理功能的一些热点问题,并展望了该研究领域的发展趋势. 展开更多
关键词 激活氯离子通道 分子基础 跨膜蛋白16A 电生理 药理学
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钙激活氯通道蛋白ANO1在小鼠主动脉平滑肌细胞的表达及其功能鉴定 被引量:3
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作者 张雲乔 王胜 +6 位作者 刘艳杰 崔爽 曲适 王鑫鑫 龙啸 方芳 郝峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期87-88,92,I0007,共4页
探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO... 探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在主动脉平滑肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。原代培养成功获得主动脉平滑肌细胞;RT-PCR结果分析表明,主动脉平滑肌细胞在mRNA水平有ANO1表达;免疫印迹显示主动脉平滑肌细胞蛋白水平有ANO1表达;荧光淬灭动力学实验证实表达在主动脉平滑肌细胞的ANO1具有阴离子转运功能,即钙激活氯通道典型特性。小鼠主动脉平滑肌细胞表达的ANO1是钙激活氯通道的分子基础。 展开更多
关键词 ANO1蛋白 激活氯离子通道 小鼠 主动脉平滑肌细胞
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肿瘤坏死因子-α激活ECV304钙激活钾通道及G蛋白的增强效应 被引量:10
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作者 林琳 郑永芳 +1 位作者 屈金河 鲍光宏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期232-236,共5页
目的 观察肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4钙激活钾通道 (BKca)的影响以及 G蛋白是否在此过程中起作用。方法 细胞贴附式膜片箝技术。结果 发现 ECV30 4细胞膜上存在大电导钙激活钾通道 (BKca) ,它的电导是 (2... 目的 观察肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4钙激活钾通道 (BKca)的影响以及 G蛋白是否在此过程中起作用。方法 细胞贴附式膜片箝技术。结果 发现 ECV30 4细胞膜上存在大电导钙激活钾通道 (BKca) ,它的电导是 (2 0 2 .5 4± 16 .6 2 ) p S,其活动可被 2 0 0 U / m l TNF-α增强 ,G蛋白在此过程中起介导作用。结论  TNF-α作用于内皮细胞 ,快速激活 BKca,促进钾离子大量外流 ,使细胞膜发生超极化 ,增大静息钙离子内流的电化学驱动力 ,开放静息钙通道升高静息胞内钙离子浓度。G蛋白可增强此激活效应。 展开更多
关键词 激活通道 肿瘤坏死因子-Α G蛋白 增强效应
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钙激活氯通道ANO1在小鼠心肌细胞的表达及其功能鉴定 被引量:6
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作者 侯毅鞠 许会静 +2 位作者 张雲乔 扈昕虹 郝峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期539-542,共4页
目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯... 目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯度;应用RT-PCR检测小鼠心肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在小鼠心肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。结果:RT-PCR结果表明原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1 mRNA。免疫印迹实验结果显示原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1蛋白。荧光淬灭动力学实验证实表达于小鼠心肌细胞的ANO1具有钙激活氯通道典型的阴离子转运功能特性。结论:ANO1在小鼠心肌细胞中有明确表达,并具有钙激活氯离子通道特性,提示ANO1是钙激活氯通道的分子基础。 展开更多
关键词 Anoctamin 1 激活氯离子通道 心肌细胞
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TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究 被引量:6
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作者 郝峰 白雪松 +6 位作者 鞠晓红 方芳 藏雨轩 朱杭飞 向国艳 张雲乔 袁忠海 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1633-1639,共7页
目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效... 目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。 展开更多
关键词 跨膜蛋白16A 激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞
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G蛋白对血管紧张素Ⅱ抑制ECV304钙激活钾通道的调节效应 被引量:2
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作者 林琳 郑永芳 +1 位作者 屈金河 鲍光宏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期336-339,共4页
目的 探讨血管紧张素 (A )对人脐静脉内皮细胞株 ECV 30 4大电导钙激活钾通道 (BKCa)的影响及 G蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录 BKCa的活动电流。结果  10 - 7mol/ L A 可抑制 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ... 目的 探讨血管紧张素 (A )对人脐静脉内皮细胞株 ECV 30 4大电导钙激活钾通道 (BKCa)的影响及 G蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录 BKCa的活动电流。结果  10 - 7mol/ L A 可抑制 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,表现为电流幅值下降 ,开放概率减小 ,通道开放时间缩短 ,关闭时间延长 ;G蛋白稳定激动剂 GTPγS可对抗 A 的抑制效应 ,G蛋白稳定抑制剂 GDPβS则增强 A 的抑制效应。结论  A 可明显减弱 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,使膜向着去极化方向发展 ,从而改变膜的稳定性 ,导致内皮细胞功能障碍。 G蛋白在此过程中起调节作用。 展开更多
关键词 激活通道 血管紧张素Ⅱ 血管内皮细胞 G蛋白
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转移抑制因子1和钙激活蛋白43在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 寇炜 窦春江 +2 位作者 周云松 兰咏梅 顾巧玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期842-846,I0004,共6页
目的:探讨转移抑制因子1(MTSS1)和钙激活蛋白43(Cap43)在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中表达,阐明其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法:收集食管鳞癌标本80例和癌旁正常组织30例,采用免疫组织化学SP染色法和RT-PCR法检测食管鳞癌组织... 目的:探讨转移抑制因子1(MTSS1)和钙激活蛋白43(Cap43)在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中表达,阐明其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法:收集食管鳞癌标本80例和癌旁正常组织30例,采用免疫组织化学SP染色法和RT-PCR法检测食管鳞癌组织和正常组织中MTSS1、Cap43蛋白和mRNA的表达情况,分析MTSS1和Cap43表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系,分析两者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果:免疫组织化学SP染色法,MTSS1和Cap43在癌细胞的胞浆/细胞膜呈现棕黄色,MTSS1在正常组织和食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为83.3%(25/30)和21.3%(17/80),Cap43在正常组织和食管癌组织中的阳性表达率分别为16.7%(5/30)和76.3%(61/80),组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR法检测,MTSS1mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中表达水平分别为0.703±0.085和0.295±0.065,而Cap43mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中的表达水平分别为0.236±0.052和0.693±0.078,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。食管鳞癌组织中MTSS1和Cap43的表达与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期有关联(P<0.05),而与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小和组织类型均无关联(P>0.05);MTSS1与Cap43的表达呈负相关关系(r=-0.457,P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中MTSS1的低表达和Cap43的高表达可能促进了肿瘤的浸润和转移,二者之间的平衡失调可能是食管鳞癌侵袭和转移的重要机制之一。 展开更多
关键词 食管肿瘤 鳞状细胞癌 转移抑制因子1 激活蛋白43
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TMEM16A:钙激活氯通道研究进展 被引量:2
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作者 刘雅妮 张海林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1490-1493,共4页
钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)组织分布广泛,参与了众多生理过程,如感觉传导、神经和心肌兴奋性调节、腺体和上皮分泌等,甚至可能参与细胞分裂周期与细胞增殖。钙激活氯通道生理病理意义如此重要,但直到200... 钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)组织分布广泛,参与了众多生理过程,如感觉传导、神经和心肌兴奋性调节、腺体和上皮分泌等,甚至可能参与细胞分裂周期与细胞增殖。钙激活氯通道生理病理意义如此重要,但直到2008年才报道了跨膜蛋白16A(transmem-brane protein 16A,TMEM16A)为钙激活氯通道的分子基础,同时研究揭示TMEM16A在一些肿瘤组织中表达明显上调。该文即对钙激活氯通道的生理、病理学意义进行综述。 展开更多
关键词 激活通道(CaCCs) 跨膜蛋白16A 分子基础 构效关系 特异性 肿瘤
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FK-506结合蛋白对钙释放通道的调控 被引量:1
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作者 孙俊辉 朱培闳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第5期418-422,共5页
细胞内自由钙作为一种重要的细胞信使广泛地参与细胞生理功能调控 .胞内钙库 (内质网系和肌浆网系 )对调节细胞内自由钙水平起着重要的作用 .钙库膜上的钙释放通道 (ryanodine受体和三磷酸肌醇受体 )受许多因素调控 ,其中之一就是新近... 细胞内自由钙作为一种重要的细胞信使广泛地参与细胞生理功能调控 .胞内钙库 (内质网系和肌浆网系 )对调节细胞内自由钙水平起着重要的作用 .钙库膜上的钙释放通道 (ryanodine受体和三磷酸肌醇受体 )受许多因素调控 ,其中之一就是新近研究得相当多的FK50 6结合蛋白 .免疫抑制剂FK50 6能特异地结合钙库上一种分子质量为 1 2ku左右的蛋白 ,这种FK50 6结合蛋白与钙释放通道形成一种紧密连接的复合体 ,在正常生理情况下对钙释放通道起着十分重要的调控作用 . 展开更多
关键词 FK506结合蛋白 释放通道 调控
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豚鼠心肌组织Cav1.2钙通道蛋白的提取与纯化
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作者 封瑞 于丽凤 +3 位作者 胡慧媛 郭凤 龟山正树 郝丽英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1610-1613,共4页
目的探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法。方法采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav... 目的探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法。方法采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav1.2钙通道抗体对所制备的心肌Cav1.2钙通道蛋白进行鉴定。结果比较CHAPS和Triton X-100的增溶效果,发现去污剂CHAPS能够更好地促进钙通道蛋白的溶解,且浓度为2%CHAPS是能够使钙通道蛋白溶解且不损害钙通道结构的最适浓度;同时,蛋白电泳和免疫印迹结果显示,提取制备所得的蛋白为心肌Cav1.2钙通道蛋白。结论亲和层析方法提取了纯度较高的全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白,为系统研究心肌Cav1.2钙通道奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 Cav1 2通道 蛋白 心肌 豚鼠 亲和层析 表面活性剂
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沉默钙激活氯通道ANO1促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡
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作者 宋艳 关立照 王克威 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期9-9,共1页
目的探讨沉默钙激活氯通道(anoctamin1,ANO1)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其分子机制.方法采用siRNA沉默ANO1在PC-3细胞的表达;采用ELISA、流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Apo-ONEHomogeneous Caspase-3/7Assay检测Caspase活性;采... 目的探讨沉默钙激活氯通道(anoctamin1,ANO1)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其分子机制.方法采用siRNA沉默ANO1在PC-3细胞的表达;采用ELISA、流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Apo-ONEHomogeneous Caspase-3/7Assay检测Caspase活性;采用基因表达谱分析检测沉默ANO1表达后PC-3细胞内基因变化,以及Real-timePCR和Westernblot验证.将全长ANO1基因(来源于NCBI)与pIRES2-EGFP融合,构建ANO1-IRES2表达载体,获得稳定表达ANO1的RWPE-1细胞系.结果ANO1在人前列腺癌PC-3细胞中呈高表达,沉默ANO1可诱导PC-3细胞凋亡,并增加肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF-α)表达和Caspase-3/7活性.TNF-α抑制剂来那度胺(lenalidomide)20nmol·L^-1可逆转沉默ANO1诱导的细胞凋亡.同时,ANO1在人正常前列腺细胞RWPE-1中呈低表达,过表达ANO1可降低RWPE-1细胞凋亡,同时降低TNF-α表达和Caspase-3/7活性.总之,ANO1表达与TNF-α呈负相关.结论沉默ANO1表达可诱导PC-3细胞凋亡,其机制可能与激活TNF-α介导的信号转导通路相关. 展开更多
关键词 激活通道 ANO1-TMEM16A 前列腺癌 细胞凋亡 肿瘤坏死因子TNF-Α
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Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展
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作者 吴明达 洪啟元 +6 位作者 兰月娇 姚岚 习诗婷 刘雪莹 高俊涛 郑锴 郝峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期445-454,共10页
钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊... 钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。 展开更多
关键词 激活氯离子通道 Anoctamin Ano1 Ano2 高通量筛选 特异性调节剂
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钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用 被引量:1
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1773-1780,共8页
目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受... 目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。 展开更多
关键词 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 敏感受体 一氧化氮
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二甲双胍调节糖尿病大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型蛋白表达的信号通路 被引量:3
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作者 刘长河 付茜 +3 位作者 李斌 潘一龙 刘贞 李晓东 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期70-74,共5页
目的探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂... 目的探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂高脂高糖饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型后,再随机分为DM组、Met组、H-89组(腹腔注射PKA抑制剂H-89)和KN-93组(腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN-93),每组8只。用ELISA检测大鼠心房组织PKA活性,qRT-PCR检测CaMKⅡmRNA表达,Western blot和免疫组织化学检测KCa2.2、KCa2.3和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)蛋白表达。结果 Con组、DM组、Met组和H-89组PKA活性分别为0.74±0.04、0.50±0.05、0.69±0.03和0.48±0.03。与DM组比较,Met组PKA活性明显提升(P<0.01);与Met组比较,H-89组显著抑制PKA活性(P<0.01)。Con组、DM组及Met组CaMKⅡmRNA分别为1.00±0.07、0.61±0.03和0.92±0.09。与Con组比较,DM组CaMKⅡmRNA表达明显降低(P<0.01);与DM组比较,Met组CaMKⅡmRNA表达明显增加(P<0.01)。与Con组比较,DM组心房组织p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达均明显降低,KCa2.3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与DM组比较,Met组明显提升p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达,明显抑制KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。与Met组比较,KN-93组和H-89组分别显著抑制p-CaMKⅡ蛋白表达和PKA活性,均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Met组比较,KN-93组和H-89组均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),与Western blot检测结果一致。结论 Met通过激活PKA/CaMKⅡ信号通路部分修复T2DM大鼠心房KCa2.2蛋白下调和KCa2.3蛋白上调。 展开更多
关键词 二甲双胍 糖尿病 小电导激活通道 环AMP依赖性蛋白激酶类 蛋白
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TMEM16A:一种钙离子激活的氯离子通道 被引量:5
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作者 郭思呈 李铁松 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1187-1194,共8页
钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)是一类在多种细胞中广泛表达的氯离子通道,介导一系列重要的生理功能。TMEM16A(transmembrane protein 16A)于2008年被确认为CaCCs的分子身份之一。TMEM16A在多种病理生理过程... 钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)是一类在多种细胞中广泛表达的氯离子通道,介导一系列重要的生理功能。TMEM16A(transmembrane protein 16A)于2008年被确认为CaCCs的分子身份之一。TMEM16A在多种病理生理过程中发挥重要的作用,如卵母细胞多重受精、分泌上皮细胞的液体分泌、平滑肌收缩、神经元兴奋、膜电位调节、感官信号传导以及肿瘤的发生和细胞迁移。近年来,TMEM16A在病理生理学中的作用及其在疾病治疗中的药靶地位受到高度重视。本文对TMEM16A研究的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 激活通道(CaCCs) 跨膜蛋白16A(TMEM16A) 构效关系 细胞功能
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蛋白激酶A在慢性心房颤动患者2型小电导钙激活钾通道调控中的作用 被引量:1
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作者 张丽 李涛 +4 位作者 李妙龄 毛亮 谭晓秋 杨艳 曾晓荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1345-1351,共7页
目的:探讨心房颤动(AF)时心房肌细胞2型小电导钙激活钾通道(SK2通道)功能的改变及蛋白激酶A(PKA)相关途径对SK2通道电流的调节。方法:从体外循环手术中获取右心耳组织,应用改良的急性酶分离法获得人心房单个心肌细胞,采用膜片钳全细胞... 目的:探讨心房颤动(AF)时心房肌细胞2型小电导钙激活钾通道(SK2通道)功能的改变及蛋白激酶A(PKA)相关途径对SK2通道电流的调节。方法:从体外循环手术中获取右心耳组织,应用改良的急性酶分离法获得人心房单个心肌细胞,采用膜片钳全细胞记录模式进行SK2通道电流记录。对比窦性心律(SR)组和AF组SK2通道电流密度及其在混合电流中所占比例的变化。观察PKA特异性抑制剂H-89对SK2通道电流的作用。采用BCA法和ELISA法检测心房组织总蛋白和PKA的含量。结果:(1)SR组和AF组的SK2通道电流均呈现内向整流特性。AF组SK2通道电流密度明显增高,且在混合电流中所占比例增加。在-130 mV钳制电压下,SR组和AF组SK2通道电流密度分别为(-2.61±0.14)pA/pF和(-6.21±0.59)pA/pF,在混合电流中所占比例分别为(20.01±1.44)%和(42.87±1.79)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)H-89能够降低SR组和AF组SK2通道电流密度,且对AF组SK2通道电流密度的抑制更明显。在-130 mV钳制电压下,H-89对SR组和AF组SK2通道电流密度的抑制率分别为(39.27±4.08)%和(76.32±2.94)%;SK2通道电流在混合电流中比例亦下降,抑制率分别为(37.48±4.77)%和(56.40±3.66)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)AF使PKA含量下降。SR组和AF组PKA含量分别为(511.91±7.22)ng/L和(444.09±7.88)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AF患者心房肌细胞SK2通道电流密度及其在混合电流中比例升高,是AF发生和维持的基础之一,电流改变参与了心房电重构过程。PKA能够通过一定途径调节SK2通道功能,且对AF心房肌细胞SK2通道的调节更为显著。 展开更多
关键词 心房颤动 小电导激活通道 蛋白激酶A
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钙激活氯通道密度调节Anoctamin 1电流作用的研究
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作者 马可 王慧 +2 位作者 王清华 雒舒雅 肖庆桓 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期298-300,共3页
目的研究钙激活氯通道(CaCCs)密度对CaCCs蛋白—Anoctamin 1(Ano1)电流特性的调节作用,探讨高表达Ano1促进肿瘤发生的机制。方法瞬时转染Ano1质粒到HEK293细胞,高密度CaCCs通过表达Ano1 24 h获得,低密度CaCCs通过表达Ano16 h获得。膜片... 目的研究钙激活氯通道(CaCCs)密度对CaCCs蛋白—Anoctamin 1(Ano1)电流特性的调节作用,探讨高表达Ano1促进肿瘤发生的机制。方法瞬时转染Ano1质粒到HEK293细胞,高密度CaCCs通过表达Ano1 24 h获得,低密度CaCCs通过表达Ano16 h获得。膜片钳方法检测钙离子激活的Ano1的全细胞电流。激活电流曲线以指数曲线拟合。结果 Ano1质粒表达6 h的电流密度显著低于表达24 h的电流密度(P<0.05)。在低CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用单指数拟合,τslow为(292.71±38.11)ms。在高CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用两指数拟合,τfast为(47.78±4.58)ms;τslow为(385.74±71.44)ms。高CaCCs密度下的Ano1电流比低CaCCs密度下的Ano1电流多了一个快速激活成分(τfast),而高CaCCs密度与低CaCCs密度比较Ano1的τslow差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 CaCCs的密度可调节Ano1激活的动力学变化;高表达Ano1可促进CaCCs的激活。 展开更多
关键词 Anoctamin 1 激活通道 通道密度 激活动力学 肿瘤
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转化生长因子-β1受体依赖的心肌纤维化伴随大电导钙激活钾通道的表达和功能下调 被引量:5
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作者 李磊 董亚辉 +4 位作者 杨探 李秋芳 聂永梅 李光 于风旭 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期612-618,共7页
目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β... 目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β1基础上加入不同浓度TGF-β1受体特异阻断剂SB431542(0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组)进行分组,处理后提取蛋白及RNA,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组TGF-β1受体蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、BKCa蛋白和信使RNA(mRNA)的表达情况。单通道及全细胞膜片钳技术记录TGF-β1作用24 h前后的BKCa电流特点及其变化情况。结果:TGF-β15 ng/ml组和10 ng/ml组均上调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,10 ng/ml组TGF-β1下调BKCa蛋白和mRNA的表达。与TGF-β110 ng/ml组相比,在10 ng/ml TGF-β1基础上加入SB4315421μmol/L组、10μmol/L组下调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,加入SB43154210μmol/L组上调BKCa蛋白和mRNA的表达,差异均具有统计学意义。此外,单通道及全细胞膜片钳技术记录结果表明TGF-β1预处理24 h后可明显抑制成纤维细胞上BKCa电流。结论:BKCa可能参与了TGF-β1诱导乳大鼠心室成纤维细胞纤维化通路,其机制可能是TGF-β1抑制了成纤维细胞上BKCa的电流。这提示BKCa可能是防治心肌纤维化的潜在靶点。 展开更多
关键词 心肌纤维化 转化生长因子Β1 转化生长因子β1受体阻断剂SB431542 大电导激活通道 乳大鼠心室成纤维细胞
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基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建
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作者 丁旭 肖云萍 +4 位作者 郭佳琦 解宇浩 张嘉琪 聂文营 郝峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期519-526,共8页
目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋... 目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。 展开更多
关键词 Piezo 1 FRT细胞 激活氯离子通道蛋白1 YFP-H148Q/I152L 荧光淬灭动力学实验 Z′因子
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