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金黄色葡萄球菌肠毒素C促进异基因骨髓移植小鼠早期T细胞重建 被引量：1
1
作者 陈镜如 梁惠 +3 位作者 陈欣林 石明 黎诚耀 张玉明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第15期2365-2369,共5页
目的通过建立异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)小鼠模型联合腹腔给药,探讨金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcal enterotoxin C,SEC)对allo-BMT小鼠的T细胞早期重建的影响。方法以BALB/C雄性小鼠为受... 目的通过建立异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)小鼠模型联合腹腔给药,探讨金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcal enterotoxin C,SEC)对allo-BMT小鼠的T细胞早期重建的影响。方法以BALB/C雄性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,在移植前12 h对受鼠进行全身性照射的预处理,进行异基因骨髓内骨髓移植(intra-bone marrow bone marrow transplantation,IBM-BMT)后将其随机分为两组腹腔给药。实验组给予SEC 100μL/(g·d),对照组给予同剂量的生理盐水,每组10只。每天检测受鼠的体质量变化情况,并于移植2周后应用流式细胞仪检测两组外周血及脾脏T淋巴细胞重建情况,采用ELISA检测血浆IFN-γ、IL-2、TNF-α的分泌水平。结果实验组、对照组外周血CD8^+T细胞比例(12.63±1.33)%、(6.67±0.53)%,组间差异有统计学意义(P <0.01)。实验组脾脏和外周血的CD4^+T细胞比例分别为(1.798±0.110)%、(1.470±0.075)%,高于对照组(1.418±0.069)%、(1.112±0.064)%,差异有统计学意义(P <0.05)。实验组血浆中分泌的细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α水平分别为(383.7±49.22)pg/mL、(17.49±1.434)pg/mL和(144.9±14.38)pg/mL,高于对照组(230.0±13.17)pg/mL、(12.38±0.759)pg/mL和(102.0±7.58)pg/mL,组间差异有统计学意义(P <0.05)。结论腹腔注射SEC能有效促进移植后T细胞早期重建。 展开更多
关键词 异基因骨髓移植 金黄色葡萄球菌肠毒素c T细胞重建
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金黄色葡萄球菌肠毒素C2的基因克隆、表达及其生物学活性 被引量：13
2
作者 徐明恺 张成刚 +1 位作者 周亚凤 张先恩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期275-281,共7页
利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. ... 利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. 结果表明:成功克隆了SEC2全长基因,测序证实该基因共717 bp,编码239个氨基酸,与GenBank中收录的SEC2成熟蛋白质序列完全一致,SEC2基因登录GenBank(Accession number:AY450554);构建了SEC2的表达载体pET-28a-SEC2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,可溶性的rSEC2经Ni2+亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的rSEC2蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被rSEC2刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用. 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素c2 克隆表达 生物学活性
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金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定
3
作者 谢益欣 王敏 +6 位作者 李先平 杨敏 李碰玲 张婷婷 宋欢 董智慧 唐爱国 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1323-1326,1332,共5页
目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;... 目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA法测定慢病毒载体滴度。结果：获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR及DNA测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 k D大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA检测病毒载体滴度为5×10~8TU/ml。结论：成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素c3 慢病毒 载体构建 过表达
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重组金黄色葡萄球菌肠毒素C3生物学活性的初步研究 被引量：3
4
作者 李先平 王敏 +2 位作者 武婷 梅城 曹虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期589-593,共5页
目的:表达和纯化重组金黄色葡萄球菌肠毒素C3(rSEC3),并初步探讨rSEC3的生物学活性。方法:将转化有pET-32a(+)-SEC3重组质粒的大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达、纯化后,MTT法检测0.1、0.5、1、5、10、50、100μg/ml的rSEC3促进人外周血单个... 目的:表达和纯化重组金黄色葡萄球菌肠毒素C3(rSEC3),并初步探讨rSEC3的生物学活性。方法:将转化有pET-32a(+)-SEC3重组质粒的大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达、纯化后,MTT法检测0.1、0.5、1、5、10、50、100μg/ml的rSEC3促进人外周血单个核细胞(PBMC)增殖及抑制人宫颈癌细胞(Hela细胞)、人食管癌细胞(KYSE细胞)的作用。结果:重组金黄色葡萄球菌肠毒素C3在大肠杆菌BL21中成功表达。与空白对照相比,0.1～100μg/ml的rSEC3对PBMC均有显著的促增殖作用(P<0.05),1μg/ml时促增殖作用最强(t=113.851,P=0.000),和100μg/ml PHA作用相似(t=0.693,P=0.527)。以Hela细胞为靶细胞,培养48小时后,与空白对照相比,0.5、1、5μg/ml的rSEC3能显著增强PBMC对Hela细胞杀伤作用(P<0.05),抑瘤率分别为(70.44±9.27)%、(93.65±8.05)%、(103.40±6.65)%;以KYSE细胞为靶细胞,与空白对照相比,3个浓度的rSEC3也都有抑瘤作用(P<0.05),抑瘤率分别为(28.10±2.72)%、(46.62±4.17)%、(19.35±3.05)%。结论:rSEC3蛋白具有良好促人外周血单个核细胞增殖活性,并能够增强PBMC对肿瘤细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 表达 生物学活性
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金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究 被引量：2
5
作者 应跃斌 孙红颖 +3 位作者 丁丁 李丹曦 薛乔 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期505-510,共6页
目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 ... 目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解。当溶液中有β-巯基乙醇（2%）、苯甲基磺酰胺（5-10 mmol/L）、咪唑（1 mol/L）或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制。结论：肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关。 展开更多
关键词 肠毒素类 葡萄球菌 金黄色 超抗原 重组融合蛋白质类 生物降解 温度 氢离子浓度 蛋白酶抑制药
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牛奶模拟样本中金黄色葡萄球菌肠毒素C含量的两种发光检测方法比较 被引量：2
6
作者 郑玉玲 王叶 律清宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1089-1093,共5页
目的 比较均相光激化学发光检测法(AlphaLISA)和磁微粒化学发光检测法(MP-CLIA)在检测牛奶模拟样本中金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)含量的敏感性和精确性。方法 以山羊抗SEC多克隆抗体偶联受体微球、生物素标记的SEC单克隆抗体和链霉亲和... 目的 比较均相光激化学发光检测法(AlphaLISA)和磁微粒化学发光检测法(MP-CLIA)在检测牛奶模拟样本中金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)含量的敏感性和精确性。方法 以山羊抗SEC多克隆抗体偶联受体微球、生物素标记的SEC单克隆抗体和链霉亲和素偶联的供体微球,构建AlphaLISA检测体系;以山羊抗SEC多克隆抗体偶联碱性磷酸酶、生物素标记的SEC单克隆抗体和链霉亲和素偶联磁珠,构建MP-CLIA检测体系。结果 AlphaLISA检测牛奶模拟样本中SEC含量的灵敏度为4.04 ng/L,变异系数(CV)为1.98%~9.82%;MP-CLIA的灵敏度为108.19 ng/L,CV为4.63%~20.40%。结论 与MP-CLIA相比,AlphaLISA检测牛奶模拟样本中SEC含量的敏感性和精确性更高。 展开更多
关键词 均相光激化学发光检测法(AlphaLISA) 金黄色葡萄球菌肠毒素c(SEc) 磁微粒化学发光检测法(MP-cLIA)
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荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立 被引量：13
7
作者 唐吉思 布日额 +4 位作者 吴金花 孙立杰 薛晓阳 刘洋 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期56-59,共4页
为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特... 为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 牛乳 金黄色葡萄球菌 肠毒素A 荧光定量PcR
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PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因 被引量：12
8
作者 云泓若 李月琴 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1999年第5期84-87,共4页
根据金黄色葡萄球菌肠毒素 Ｄ 基因的序列，设计相应的引物，建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素 Ｄ 基因的 Ｐ Ｃ Ｒ 技术利用该方法可从含有肠毒素 Ｄ 基因的金黄色葡萄球菌中扩增出 Ｐ Ｃ Ｒ产物扩增产物具有特异性，长为３１６ 个碱... 根据金黄色葡萄球菌肠毒素 Ｄ 基因的序列，设计相应的引物，建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素 Ｄ 基因的 Ｐ Ｃ Ｒ 技术利用该方法可从含有肠毒素 Ｄ 基因的金黄色葡萄球菌中扩增出 Ｐ Ｃ Ｒ产物扩增产物具有特异性，长为３１６ 个碱基对经限制性核酸内切酶 Ｈｈ Ｉ Ⅰ酶切证实扩增产物为 Ｓ Ｅ Ｄ 基因片段 Ｐ Ｃ Ｒ 敏感度实验显示：建立的检测金黄色葡萄球菌肠毒素 Ｄ 基因的 Ｐ Ｃ Ｒ 技术具有快速敏感简易和特异性强等特点。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因
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分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用 被引量：4
9
作者 杨琨 董邦权 +3 位作者 赵宁 刘雪松 金伯泉 李恩善 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第3期26-29,共4页
应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及Ｓ... 应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素c1 单克隆抗体 无性素
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多重PCR方法快速检测牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型 被引量：2
10
作者 李荔枝 张军 +3 位作者 胡萍 周国君 王晓静 朱建荣 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第12期34-39,45,共6页
针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结... 针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结果表明,该方法特异性好、检测效率高、能够同时对4种肠毒素进行分型,其中SEA,SEB,SEC,SED的检测灵敏度达到0.072,0.072,0.2268,0.198 g/L,适合运用于牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的快速检测。 展开更多
关键词 多重PcR 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因型 牛乳
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牛乳中产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A的双重PCR检测法 被引量：3
11
作者 张曼 王晶钰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期29-33,共5页
建立牛奶乳样中产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A的双重PCR检测方法。根据产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A基因序列分别设计了2对特异性引物,分别从产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌参考菌株的肉汤培养物中提取DNA,进... 建立牛奶乳样中产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A的双重PCR检测方法。根据产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A基因序列分别设计了2对特异性引物,分别从产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌参考菌株的肉汤培养物中提取DNA,进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验和临床样品检测。经过PCR反应条件的优化,建立了产气荚膜梭菌α毒素和金黄色葡萄球菌肠毒素A的双重PCR检测方法,均扩出了相应的目的条带。该方法将参考菌株的肉汤培养物稀释1 000倍后仍可扩出目的条带,且对大肠埃希菌等的PCR检测为阴性。对临床采集的50份乳品样本分别用细菌分离培养法和PCR方法进行检测,两种方法的符合率达90%以上,但双重PCR检测方法具有特异性强和敏感性高的特点。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 金黄色葡萄球菌 肠毒素A PcR检测
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PCR法检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因 被引量：3
12
作者 叶云 钟英英 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11238-11239,共2页
[目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结... [目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结果呈阳性,检测底限达100 cfu/L,而大肠杆菌和沙门氏菌及空白对照均未出现特异性片段,整个检测过程只需要24 h。[结论]试验建立的PCR方法可检测水及类似食品中的金黄色葡萄球菌SEA基因,并具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的特点。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素A基因 PcR技术 水样
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乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的PCR检测
13
作者 李一松 相丽 +1 位作者 霍贵成 姜毓君 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2006年第6期46-49,共4页
介绍了PCR技术在检测乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素方面的研究进展,并对其今后的发展方向和前景进行了展望。
关键词 乳 金黄色葡萄球菌 肠毒素 PcR 检测
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金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立
14
作者 陈彬 王颖 +4 位作者 郑晶 黄晓蓉 林杰 彭华毅 邵碧英 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期172-177,共6页
本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR... 本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 聚合酶链式反应(PcR) 变性高效液相色谱(DHPLc)
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金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析 被引量：17
15
作者 曹虹 王敏 +4 位作者 郑荣 李先平 王芳 蒋云生 杨一芬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期738-741,745,共5页
目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果 67株甲氧西林耐药的SA(MR... 目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果 67株甲氧西林耐药的SA(MRSA)和57株甲氧西林敏感的SA(MSSA)肠毒素基因携带率(100%vs 83.5%)无明显差异(χ2=0.203,P>0.05)。肠毒素基因检出率为93.5%(116株),其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株(67.2%),以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比,携带多种肠毒素基因的菌株耐药率呈上升趋势,其中携带SEA+SEC+SEF的菌株对复方新诺明的耐药率为75.0%,高于单独携带SEA(28.6%)、SEA+SEC(38.7%)的耐药率,具有统计学差异(P<0.05)。携带SEA+SEC+SEF、SEA+SEF、SEA的菌株对阿米卡星耐药率分别为75.0%、77.0%和21.5%,前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异(P<0.05)。结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株,提示肠毒素在SA耐药中起重要作用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 耐药性
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6种食品防腐剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果及肠毒素基因表达的影响 被引量：15
16
作者 王琼 唐俊妮 +1 位作者 汤承 陈娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第21期151-156,共6页
目的:探索6种食品防腐剂——亚硝酸盐、苯甲酸钠、ε-聚赖氨酸、壳聚糖、茶多酚、Nisin对1株引起食物中毒的金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用,以及对该菌株所含不同肠毒素基因在m RNA水平表达的影响。方法:按照GB 2760—2014《食品添加剂... 目的:探索6种食品防腐剂——亚硝酸盐、苯甲酸钠、ε-聚赖氨酸、壳聚糖、茶多酚、Nisin对1株引起食物中毒的金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用,以及对该菌株所含不同肠毒素基因在m RNA水平表达的影响。方法:按照GB 2760—2014《食品添加剂使用标准》限量标准的质量浓度,分别添加6种不同的防腐剂在金黄色葡萄球菌SA003初始接菌量约为105 CFU/m L的TSB液体培养基中,37℃培养24 h后进行菌落计数;同时收集菌体用于RNA提取,将提取的RNA进行反转录后,采用荧光定量聚合酶链式反应方法检测各肠毒素基因在m RNA水平上的相对表达量。结果:在国标最大限量条件下,不同添加剂对金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用强弱顺序分别为:Nisin>茶多酚>壳聚糖>ε-聚赖氨酸>苯甲酸钠>亚硝酸盐。6种防腐剂均能抑制肠毒素sea、sed、seg、sei、selj、selm、selr和selu基因在转录水平上的表达,但作用效果存在差异。结论:在TSB液体培养基中添加一定剂量的防腐剂不仅能抑制金黄色葡萄球菌的生长,还能够显著降低肠毒素基因的表达量。 展开更多
关键词 食品防腐剂 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 表达
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量：7
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作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究 被引量：12
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作者 王营 于宏伟 +1 位作者 郭润芳 贾英民 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期84-88,共5页
为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株... 为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株金黄色葡萄球菌检出含有肠毒素基因,总检出率为71.97%。其中SEg基因的总检出率为67.93%,SEi基因的总检出率为57.68%。各来源间金黄色葡萄球菌肠毒素的检出率不同,且同一来源的菌株其SEg和SEi的检出率也不同,表明不同来源以及不同肠毒素的基因型在金黄色葡萄球菌中的分布存在差异。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 分布
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牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究 被引量：10
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作者 王娟 黄秀梅 +5 位作者 刘书科 李玉清 赵思俊 曲志娜 王玉东 王君玮 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期30-32,共3页
为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果... 为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54%;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重;92.3%的菌株含SEA SAJ基因肠毒素。 展开更多
关键词 生鲜牛奶 金黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素分型
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的培养产毒与柱层析纯化 被引量：7
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作者 王小红 谢笔钧 +2 位作者 史贤明 孙科 李伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期88-91,共4页
本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球... 本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球菌B型肠毒素。实验证明,利用该简化的二步柱层析分离得到的金黄色葡萄球菌B型肠毒素完全能满足血清学检实验和鉴定的要求,方法简便易行,一般实验室均可使用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 B型肠毒素 培养产毒 离子交换层析 凝胶过滤
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