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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的培养产毒与柱层析纯化 被引量：7
1
作者 王小红 谢笔钧 +2 位作者 史贤明 孙科 李伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期88-91,共4页
本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球... 本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球菌B型肠毒素。实验证明,利用该简化的二步柱层析分离得到的金黄色葡萄球菌B型肠毒素完全能满足血清学检实验和鉴定的要求,方法简便易行,一般实验室均可使用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 b型肠毒素 培养产毒 离子交换层析 凝胶过滤
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乳品中金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫传感检测方法的研究 被引量：6
2
作者 高博 孙秀兰 +1 位作者 张银志 顾小红 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期169-172,共4页
本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ... 本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ng/mL和10～100 ng/mL,相关系数分别为0.9939和0.9926,检出限(S/N=3)为0.667 ng/mL,乳品检测回收率在84.3%～93.2%之间。该传感器特异性良好,稳定性好,可再生使用,可应用于乳品中SEB的快速检测。 展开更多
关键词 免疫传感器 金黄色葡萄球菌肠毒素b L-半胱氨酸 纳米金 交流阻抗谱
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及鉴定 被引量：3
3
作者 张琨 张月娟 万一 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期69-73,共5页
为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),... 为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),并在E.coil BL21(DE3)中得到有效表达,表达量达65.8%;采用Ni柱亲和层析和DEAE阴离子层析两步纯化得到纯度为95.2%的SEB,Western-blot和SEB免疫层析快速检测试纸条检测显示所纯化的重组SEB具有SEB的抗原性,可用于SEB快速检测试纸的应用研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素b 原核表达 纯化 免疫层析快速检测
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金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导兔急性上颌窦炎的实验研究 被引量：2
4
作者 卫红齐 王天友 +5 位作者 王秋萍 袁辉 朱政文 刘志勇 邬晓帆 曹忠胜 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第6期577-580,共4页
目的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为超抗原(superantigen)目前被认为可能是导致鼻窦炎发生、发展并向慢性转化的主要因素之一。文中通过向兔上颌窦腔注入不同浓度SEB,明确其能否成功诱导急性上颌窦炎。方... 目的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为超抗原(superantigen)目前被认为可能是导致鼻窦炎发生、发展并向慢性转化的主要因素之一。文中通过向兔上颌窦腔注入不同浓度SEB,明确其能否成功诱导急性上颌窦炎。方法 45只兔随机分成3组,每组15只。每天分别向兔右上颌窦腔注入低浓度SEB(0.3 ng/ml,A组)、中等浓度SEB(3 ng/ml,B组)及高浓度SEB(30ng/ml,C组)各2ml,3组兔左上颌窦腔每天注入2ml等渗盐水作为对照侧。3d、7d及14 d后每组随机选取5只兔处死,取双上颌窦分泌物行普通细菌培养及鼻窦黏膜标本光镜下观察。结果 3 d后,3组兔右上颌窦分泌物普通细菌培养结果均为阴性;7d及14d后,A组右上颌窦分泌物普通细菌培养结果为阴性,B、C组右上颌窦分泌物普通细菌培养阳性率均为100%。光镜下黏膜病理半定量结果示:B、C组与A组比较,3 d后炎性细胞浸润差异有统计学意义(P<0.05),7d及14d后炎性细胞浸润及上皮溃疡形成差异均有统计学意义(P<0.05);C组与B组比较,7d及14d后上皮溃疡形成差异均有统计学意义(P<0.05)。3组兔左上颌窦细菌培养结果均为阴性,黏膜形态学未见明显改变。结论持续灌注中高浓度SEB 7 d可成功诱导急性鼻窦炎,且随着SEB浓度增加鼻窦黏膜形态学改变更加显著。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 鼻窦炎 黏膜 组织形态学
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基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备 被引量：1
5
作者 张琨 王伟华 +4 位作者 万一 颜真 訾静 王军 高磊 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期403-407,共5页
采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试... 采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20＋0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素b 顺磁微粒 免疫层析
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利用简并引物检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因 被引量：1
6
作者 刘继超 陈柏儒 +1 位作者 姜铁民 陈历俊 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2015年第5期59-61,共3页
通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B... 通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B菌株和4株对照菌株进行PCR检测,评价该引物的特异性;对金黄色葡萄球菌肠毒素B的DNA系列10倍稀释,对其灵敏性进行PCR检测。结果显示,金黄色葡萄球菌肠毒素A和B菌株的DNA检测结果呈阳性,4株对照菌株的检测结果呈阴性,通过基因测序证实了PCR产物的特异性,SEB的DNA最低检测浓度为3.58ng,整个检测过程不超过20h。建立了一个特异、快速灵敏的在同一条件下,金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的PCR检测方法。 展开更多
关键词 PCR 金黄色葡萄球菌 肠毒素 A、b基因
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测 被引量：7
7
作者 段鸿斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2617-2619,共3页
[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺... [目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5-500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。 展开更多
关键词 牛奶 金黄色葡萄球菌b型肠毒素 抗原 抗体 ELISA
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化 被引量：1
8
作者 朱俊友 李玉锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-138,共3页
为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层... 为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 分离纯化
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金黄色葡萄球菌肠毒素B对体外培养小鼠胚胎发育的影响
9
作者 闵宏林 管俊昌 +3 位作者 夏佩莹 刘勇 吕小艳 唐素兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期143-145,共3页
目的了解金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为0.1、1及10μg/ml的SEB共培养48h后,观察SEB对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果SEB可影响体外小鼠胚胎的发育。... 目的了解金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为0.1、1及10μg/ml的SEB共培养48h后,观察SEB对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果SEB可影响体外小鼠胚胎的发育。0.1μg/mlSEB首先影响卵黄囊直径,当SEB为1及10μg/ml时,胚胎生长发育指标和器官形态分化评分均明显低于对照组,并出现小头、脑膨出、前后神经管未闭、体位异常、鳃弓及前肢发育迟缓、大心包及心包积液等畸形。结论SEB能明显影响体外小鼠胚胎发育,可能是金葡菌L型导致体外胚胎发育畸形的主要机制之一。 展开更多
关键词 全胚胎培养 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 胚胎发育
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重组超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和序列分析
10
作者 龙军 陈清 俞守义 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期22-23,共2页
目的　采用基因工程技术制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)。方法　根据SEB已知序列 ,设计一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒 pET32a上 ,转化大肠埃希菌JM10 9感受态细胞 ,经酶切和PC... 目的　采用基因工程技术制备金黄色葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)。方法　根据SEB已知序列 ,设计一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒 pET32a上 ,转化大肠埃希菌JM10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果　PCR扩增产物大小为 74 0bp ,重组质粒经双酶切PCR鉴定表明已正确重组 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　成功地克隆了金黄色葡萄球菌B型肠毒素 ,为下一步研究发病机制奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 克隆 PCR 序列分析
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低温等离子体对金黄色葡萄球菌肠毒素B的灭活作用 被引量：4
11
作者 潘迪 张大革 +1 位作者 孙运金 马挺军 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期192-195,202,共5页
采用金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)休克小鼠模型评价低温等离子体对SEB的灭活效果。实验设定为空白对照组、阳性组和3个处理组(等离子体降解处理SEB 10、20、30 min组),小鼠注射SEB后,观察120 h。记录各组小鼠存活时间和体重,并测定小鼠... 采用金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)休克小鼠模型评价低温等离子体对SEB的灭活效果。实验设定为空白对照组、阳性组和3个处理组(等离子体降解处理SEB 10、20、30 min组),小鼠注射SEB后,观察120 h。记录各组小鼠存活时间和体重,并测定小鼠肝脏中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明:SEB的含量随等离子体处理时间的延长而降低,在处理30 min时SEB的降解率最大为96%。与阳性组相比,处理SEB 10、20、30 min组小鼠平均生存时间均显著延长(P<0.05),分别为阳性组的2.50、3.33、5.00倍;处理SEB 30 min组小鼠平均体重显著高于阳性组(P<0.05);处理SEB 30 min组小鼠肝脏中CAT、SOD、GSH-Px的活性与阳性组相比显著提高(P<0.05),分别提高了69.33%、74.93%、47.92%。综上,低温等离子体处理可以降低SEB的含量,从而提高小鼠体内抗氧化酶活性,增强机体免疫力,延长存活时间,且其存活时间具有处理时间依赖性。 展开更多
关键词 低温等离子体 金黄色葡萄球菌肠毒素b 介质阻挡放电 灭活效果 抗氧化活性
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金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析 被引量：17
12
作者 曹虹 王敏 +4 位作者 郑荣 李先平 王芳 蒋云生 杨一芬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期738-741,745,共5页
目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果 67株甲氧西林耐药的SA(MR... 目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果 67株甲氧西林耐药的SA(MRSA)和57株甲氧西林敏感的SA(MSSA)肠毒素基因携带率(100%vs 83.5%)无明显差异(χ2=0.203,P>0.05)。肠毒素基因检出率为93.5%(116株),其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株(67.2%),以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比,携带多种肠毒素基因的菌株耐药率呈上升趋势,其中携带SEA+SEC+SEF的菌株对复方新诺明的耐药率为75.0%,高于单独携带SEA(28.6%)、SEA+SEC(38.7%)的耐药率,具有统计学差异(P<0.05)。携带SEA+SEC+SEF、SEA+SEF、SEA的菌株对阿米卡星耐药率分别为75.0%、77.0%和21.5%,前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异(P<0.05)。结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株,提示肠毒素在SA耐药中起重要作用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 耐药性
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荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立 被引量：13
13
作者 唐吉思 布日额 +4 位作者 吴金花 孙立杰 薛晓阳 刘洋 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期56-59,共4页
为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特... 为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 牛乳 金黄色葡萄球菌 肠毒素A 荧光定量PCR
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6种食品防腐剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果及肠毒素基因表达的影响 被引量：15
14
作者 王琼 唐俊妮 +1 位作者 汤承 陈娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第21期151-156,共6页
目的:探索6种食品防腐剂——亚硝酸盐、苯甲酸钠、ε-聚赖氨酸、壳聚糖、茶多酚、Nisin对1株引起食物中毒的金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用,以及对该菌株所含不同肠毒素基因在m RNA水平表达的影响。方法:按照GB 2760—2014《食品添加剂... 目的:探索6种食品防腐剂——亚硝酸盐、苯甲酸钠、ε-聚赖氨酸、壳聚糖、茶多酚、Nisin对1株引起食物中毒的金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用,以及对该菌株所含不同肠毒素基因在m RNA水平表达的影响。方法:按照GB 2760—2014《食品添加剂使用标准》限量标准的质量浓度,分别添加6种不同的防腐剂在金黄色葡萄球菌SA003初始接菌量约为105 CFU/m L的TSB液体培养基中,37℃培养24 h后进行菌落计数;同时收集菌体用于RNA提取,将提取的RNA进行反转录后,采用荧光定量聚合酶链式反应方法检测各肠毒素基因在m RNA水平上的相对表达量。结果:在国标最大限量条件下,不同添加剂对金黄色葡萄球菌SA003的抑菌作用强弱顺序分别为:Nisin>茶多酚>壳聚糖>ε-聚赖氨酸>苯甲酸钠>亚硝酸盐。6种防腐剂均能抑制肠毒素sea、sed、seg、sei、selj、selm、selr和selu基因在转录水平上的表达,但作用效果存在差异。结论:在TSB液体培养基中添加一定剂量的防腐剂不仅能抑制金黄色葡萄球菌的生长,还能够显著降低肠毒素基因的表达量。 展开更多
关键词 食品防腐剂 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 表达
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金黄色葡萄球菌肠毒素C2的基因克隆、表达及其生物学活性 被引量：13
15
作者 徐明恺 张成刚 +1 位作者 周亚凤 张先恩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期275-281,共7页
利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. ... 利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. 结果表明:成功克隆了SEC2全长基因,测序证实该基因共717 bp,编码239个氨基酸,与GenBank中收录的SEC2成熟蛋白质序列完全一致,SEC2基因登录GenBank(Accession number:AY450554);构建了SEC2的表达载体pET-28a-SEC2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,可溶性的rSEC2经Ni2+亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的rSEC2蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被rSEC2刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用. 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素C2 克隆表达 生物学活性
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量：7
16
作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究 被引量：12
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作者 王营 于宏伟 +1 位作者 郭润芳 贾英民 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期84-88,共5页
为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株... 为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株金黄色葡萄球菌检出含有肠毒素基因,总检出率为71.97%。其中SEg基因的总检出率为67.93%,SEi基因的总检出率为57.68%。各来源间金黄色葡萄球菌肠毒素的检出率不同,且同一来源的菌株其SEg和SEi的检出率也不同,表明不同来源以及不同肠毒素的基因型在金黄色葡萄球菌中的分布存在差异。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 分布
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牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究 被引量：10
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作者 王娟 黄秀梅 +5 位作者 刘书科 李玉清 赵思俊 曲志娜 王玉东 王君玮 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期30-32,共3页
为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果... 为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54%;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重;92.3%的菌株含SEA SAJ基因肠毒素。 展开更多
关键词 生鲜牛奶 金黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素分型
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金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究 被引量：8
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作者 史红 王娟 +7 位作者 郑增忍 单虎 王述柏 李玉清 黄秀梅 刘开成 韩艳 张鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期87-90,共4页
为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率... 为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素sek基因在3株食品分离菌株中的表达 被引量：7
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作者 王琼 唐俊妮 +3 位作者 汤承 陈娟 刘骥 蔡自建 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第13期140-146,共7页
目的：肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法：本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基... 目的：肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法：本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基因检测,筛选出3株含sek基因的菌株SA005、SA008和SAB0,针对3株菌株进行生长曲线测定,随后在培养不同时间段收集菌体提取RNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reaction,real time-PCR）检测肠毒素sek基因在12~120 h的相对表达水平。结果：基因检测结果显示,菌株SA005含有16S、nuc、mec A、seb、sec、sek、sex基因,SA008含有16S、nuc、mec A、sea、sek、sex基因,SAB0含有16S、nuc、sek、sex基因。3株菌株在胰酪胨大豆肉汤培养基中的生长曲线趋势较相似,18 h左右出现折点,之后细菌进入生长稳定期。3株菌株的sek基因在12~120 h全程表达,SA005的sek基因在48 h时相对表达量最高,在84 h相对表达量最低;SA008在24 h时的相对表达量最高,在48 h相对表达量最低,在60~120 h表达量相对比较稳定;SAB0在12~120 h之间相对表达量呈现抛物线趋势,在60 h和72 h的表达量相对较高且差异不显著（P〉0.05）。结论：3株菌株sek表达水平存在明显差异,相同菌株sek基因不同时间点表达也存在差异性,菌株基因背景的影响可能是造成sek基因表达差异性的关键。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 新型肠毒素 sek基因 实时荧光定量聚合酶链式反应 时序性表达
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