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中国汉族人IgE重链恒定区CH_2、CH_3及CH_4亚基cDNA的克隆 被引量:1
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作者 唐昊 修清玉 +1 位作者 陆慧琦 韩焕兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1146-1148,共3页
关键词 免疫球蛋白E 重链恒定区 基因克隆 质粒构建
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中国汉族人IgE重链恒定区CH_2-CH_4cDNA的克隆 被引量:1
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作者 唐昊 陆慧琦 +1 位作者 韩焕兴 修清玉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1158-1159,共2页
关键词 免疫球蛋白E 重链恒定区 基因克隆 质粒构建
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抗CEA抗体C2-45重链恒定区的置换与活性鉴定
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作者 黄健 芝口浩智 黑木政秀 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期650-653,共4页
目的:将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(mAb)C245(IgG4)转变成IgG1,增强其在抗肿瘤免疫中的作用。方法:采用PCR从C245(IgG4)基因中克隆VH和Vk基因,并插入到含有人IgG1恒定区(CH)基因的杆状病毒表达载体pAckCH3中。用构建的重组基因感染Sf9... 目的:将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(mAb)C245(IgG4)转变成IgG1,增强其在抗肿瘤免疫中的作用。方法:采用PCR从C245(IgG4)基因中克隆VH和Vk基因,并插入到含有人IgG1恒定区(CH)基因的杆状病毒表达载体pAckCH3中。用构建的重组基因感染Sf9昆虫细胞,将获得的高滴度重组病毒用于最终表达重组蛋白。应用免疫亲和层析法,纯化培养上清中表达的重组蛋白C245(IgG1),并鉴定其与CEA结合的能力和CH的生物学功能CDC及ADCC。结果:经CH置换形成的重组蛋白C245(IgG1),既保留了对于表达CEA的肿瘤细胞的结合,又比原抗体C245(IgG4)的补体依赖的细胞毒作用(CDC)和抗体依赖的淋巴细胞的细胞毒作用(ADCC)强得多。结论:成功地应用基因工程的方法制备了置换CH的抗CEA的人抗体C245(IgG1),使其在肿瘤的免疫治疗中具有更广泛的应用价值。 展开更多
关键词 癌胚抗原 IGG 重链恒定区置换
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A型口蹄疫病毒抗原表位与牛IgG重链恒定区的融合表达及活性鉴定
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作者 陈建文 王兴叶 +3 位作者 邵军军 郝春霞 常惠芸 胡永浩 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第7期24-28,共5页
为了研制广谱高效的A型口蹄疫新型多表位疫苗,根据GenBank数据库的A型代表毒株VP1序列设计并合成了VP1结构蛋白上的主要抗原表位DNA段,即135aa~160aa和200aa~213aa,与牛IgG重链恒定区编码基因连接,将合成的2个表位基因经XhoⅠ、EcoRⅠ... 为了研制广谱高效的A型口蹄疫新型多表位疫苗,根据GenBank数据库的A型代表毒株VP1序列设计并合成了VP1结构蛋白上的主要抗原表位DNA段,即135aa~160aa和200aa~213aa,与牛IgG重链恒定区编码基因连接,将合成的2个表位基因经XhoⅠ、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切后依次克隆到pET-30a(+)载体上,构建重组质粒pRE2IgG,将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达融合蛋白pRE2IgG,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot检测。结果显示,重组蛋白获得高效表达,并以包涵体形式存在,其分子质量约为60ku,且能与抗A型FMDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 中和表位 牛IgG 重链恒定区
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IGHG1对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡的影响 被引量:1
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作者 高鑫 储李婧 陈天平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1263-1271,共9页
目的:探讨免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)对急性髓系白血病(AML)细胞系THP-1细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养人AML THP-1细胞,分为对照(正常培养的THP-1细胞)、pcDNA3.1[转染IGHG1过表达(pcDNA3.1-IGHG1)阴性对... 目的:探讨免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)对急性髓系白血病(AML)细胞系THP-1细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养人AML THP-1细胞,分为对照(正常培养的THP-1细胞)、pcDNA3.1[转染IGHG1过表达(pcDNA3.1-IGHG1)阴性对照质粒的THP-1细胞]、pcDNA3.1-IGHG1(转染pcDNA3.1-IGHG1的THP-1细胞)、LY364947[转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)抑制剂LY36494720μmol/L处理THP-1细胞)]、si-NC[转染IGHG1小干扰RNA(IGHG1-siRNA)阴性对照的THP-1细胞]、si-IGHG1(转染IGHG1-siRNA的THP-1细胞)和si-IGHG1+LY364947(IGHG1-siRNA和LY364947共同处理THP-1细胞)共7组。荧光定量PCR法检测各组THP-1细胞中IGHG1和免疫球蛋白G(IgG)mRNA的表达;CCK-8法检测各组THP-1细胞增殖活力;流式细胞术检测各组THP-1细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白印迹法检测各组THP-1细胞增殖、凋亡及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,过表达IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、IgG、TGF-β1、磷酸化Smad3(p-Smad3)/Smad3蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。抑制TGF-β/Smad信号通路或沉默IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);且与沉默IGHG1相比,IGHG1基因沉默和TGF-β/Smad通路抑制共同处理的THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:沉默IGHG1基因可下调IgG的表达,抑制人AML THP-1细胞增殖,阻滞细胞周期进程,并诱导细胞凋亡;其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路的激活有关。 展开更多
关键词 免疫球蛋白G1重链恒定区 急性髓系白血病THP-1细胞 免疫球蛋白G 凋亡 增殖 转化生长因子-β/信号转导蛋白
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牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析
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作者 李敏 陈丽梅 +3 位作者 林爱星 杨兴元 安晓荣 陈永福 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期857-864,共8页
根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品... 根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中. 展开更多
关键词 Holstein牛 胚系基因 抗体 抗体重链恒定区μ基因(Cμ) 抗体可变J基因(JH) 组信号序列(RSS)
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IGHG1对急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡和侵袭的机制研究 被引量:1
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作者 李长美 金亚 +6 位作者 孙寅 刘建 姜道亮 张教国 杨瑞 杨勇 邱立 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期7-13,54,共8页
目的 探讨免疫球蛋白γ-1重链恒定区(immunoglobulin γ-1 heavy chain constant region,IGHG1)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)THP-1细胞中的表达以及调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad... 目的 探讨免疫球蛋白γ-1重链恒定区(immunoglobulin γ-1 heavy chain constant region,IGHG1)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)THP-1细胞中的表达以及调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad通路对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 以9例AML患儿的骨髓标本、8例骨折患儿的骨髓标本、人骨髓基质细胞HS-5及人AML细胞THP-1、HL60为研究对象,Western blot检测IGHG1蛋白表达;将THP-1细胞分组为空白(细胞未经任何处理)、si-NC、si-IGHG1-1、si-IGHG1-2、si-IGHG1-3、TGF-β、si-IGHG1-1+TGF-β、si-IGHG1-1+TGF-β+LY364947(TGF-β/Smad通路抑制剂)组。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术和Transwell实验分别测定细胞凋亡和侵袭;Western blot评估细胞中IGHG1、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果 与骨折患儿骨髓比较,AML患儿骨髓中IGHG1蛋白((0.24±0.03)vs(0.87±0.12))表达水平显著升高(P<0.05);与HS-5细胞比较,THP-1、HL60细胞中IGHG1蛋白((0.89±0.14)(0.75±0.08)vs(0.21±0.02))表达升高(P<0.05);与空白组比较,si-IGHG1-1组THP-1细胞OD_(450)值(24、48、72 h)、侵袭细胞数目、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率升高,TGF-β组对应指标呈相反变化(P<0.05);TGF-β逆转了沉默IGHG1对THP-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响;与si-IGHG1-1+TGF-β组比较,si-IGHG1-1+TGF-β+LY364947组TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白、OD_(450)值(24、48、72 h)及侵袭细胞数目显著降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论 IGHG1在AML细胞中高表达,沉默IGHG1可抑制AML细胞增殖及侵袭,并促进AML细胞凋亡,该机制可能与抑制TGF-β/Smad通路有关。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 免疫球蛋白γ-1重链恒定区 TGF-β/Smad通路 增殖 凋亡
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