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重组白细胞介素-2对固始鸡免疫机能的影响 被引量：7
1
作者 张怀 高春生 +2 位作者 蒋媛媛 赵峰 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期48-51,共4页
本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗... 本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗体水平在第2～3周达到最高水平,以后在4～7周内基本保持恒定水平;注射IL-2的各免疫组的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数基本上均高于空白对照组和鸡志贺氏菌苗组。重组IL-2可促进固始鸡免疫器官的生长发育和成熟,增强鸡的免疫机能,可抵抗各种病原微生物的感染。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 固始鸡 免疫机能 抗体
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重组白细胞介素-2对猪瘟疫苗免疫效果的影响 被引量：12
2
作者 张光勤 李旺 +1 位作者 赵星灿 李治力 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期174-176,共3页
观察了重组IL 2对经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗免疫效果的影响.结果表明,进行猪瘟免疫时应用重组IL 2,可以显著提高经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗的抗体滴度水平及整齐度.
关键词 重组白细胞介素-2 猪瘟 疫苗 免疫效果 抗体滴度
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重组白细胞介素2对固始鸡空肠黏膜免疫增强作用的研究 被引量：3
3
作者 赵珊珊 张怀 +2 位作者 徐亚平 李超 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期60-64,共5页
本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠... 本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)阳性细胞及其分泌物分布和阳性面积量进行系统分析。结果表明,sIgA阳性细胞及其分泌物主要分布于肠绒毛的固有层和肠腺腔中。在新城疫疫苗组中添加重组IL-2能够提高sIgA细胞的分泌,从而提高动物体的免疫能力。重组IL-2对增强免疫性有一定的作用,且IL-2的添加剂量在50μg时对增加新城疫疫苗的免疫性效果最佳。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 空肠 分泌型免疫球蛋白 固始鸡
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纯化基因重组白细胞介素-2的初步研究 被引量：1
4
作者 阎颖 郝茜 +4 位作者 范国梁 赵秋雯 刘迎五 王建林 万冬林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期325-327,共3页
采用羟基磷灰石 (HAP)作为填料 ,以pH 6 8的磷酸盐缓冲液为流动相 ,用制备型高效液相色谱来分离提纯基因重组白细胞介素 2 (IL 2 ) ,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳测定IL 2的纯度 ,测定其活性为1× 1 0 6 U/mg。该法对IL ... 采用羟基磷灰石 (HAP)作为填料 ,以pH 6 8的磷酸盐缓冲液为流动相 ,用制备型高效液相色谱来分离提纯基因重组白细胞介素 2 (IL 2 ) ,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳测定IL 2的纯度 ,测定其活性为1× 1 0 6 U/mg。该法对IL 2的纯化、含量测定及活性测定等效果良好。 展开更多
关键词 基因重组白细胞介素-2 分离提纯 HAP HPLC
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人重组白细胞介素-6对成牙骨质细胞的生长及分泌骨钙素能力的影响 被引量：1
5
作者 侯建霞 由江峰 +1 位作者 曹采方 孟焕新 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期133-136,共4页
目的 :了解rhIL 6对成牙骨质细胞 (cementoblasts,CBs)增殖活性及分泌骨钙素 (osteocalcin ,OC)能力的影响。方法 :试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs。实验组培养液为 10 % (体积分数 )FCS +RPMI16 40加不同 ... 目的 :了解rhIL 6对成牙骨质细胞 (cementoblasts,CBs)增殖活性及分泌骨钙素 (osteocalcin ,OC)能力的影响。方法 :试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs。实验组培养液为 10 % (体积分数 )FCS +RPMI16 40加不同 (质量 )浓度的rhIL 6 ,对照组不加rhIL 6。采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法观察CBs生长及存活状态 ;放射免疫分析法测定CBs培养上清液中OC的含量。结果 :rhIL 6对CBs的生长有抑制作用 ,并呈剂量依赖趋势 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;同一 (质量 )浓度rhIL 6在不同的培养时间段对CBs分泌OC的影响不同 ,除 0 .1μg·L- 1 IL 6组外 ,1、10、10 0 μg·L- 1 组上清液中的OC浓度在最初的 5d内有明显增高 ,以 10 0 μg·L- 1 组最显著 ,呈浓度依赖性 ,但在第 7天时 ,10 0 μg·L- 1 组的OC浓度明显下降至仅略高于第 3天的水平。 0 .1、1和 10μg·L- 1 组在第 3天和第 7天时 ,OC浓度均低于空白对照组。结论 :IL 6可能通过调节CBs的生长和OC的分泌而在CBs的代谢及牙骨质的形成、修复中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 人重组白细胞介素-6 成牙骨质细胞 生长 分泌 骨钙素 影响
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重组白细胞介素13对成纤维细胞增殖的影响 被引量：1
6
作者 肖莉 李振华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期574-576,F0002,共4页
目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对NIH3T3细胞增殖作用的影响,探讨肺纤维化的发病机制。方法:NIH3T3细胞分为rIL-13组和不含rIL-13的对照组r,IL-13组加入不同浓度的rIL-13,作用24及48h。透射电镜观察3T3细胞的超微结构,Hoechst试剂... 目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对NIH3T3细胞增殖作用的影响,探讨肺纤维化的发病机制。方法:NIH3T3细胞分为rIL-13组和不含rIL-13的对照组r,IL-13组加入不同浓度的rIL-13,作用24及48h。透射电镜观察3T3细胞的超微结构,Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态变化,噻唑蓝比色试验(MTT法)测定细胞增殖率。结果r:IL-13呈剂量依赖方式刺激3T3细胞细胞生长。经rIL-13 80 ng/ml孵育的细胞DNA合成增加,细胞核增大,细胞质中可见较多核糖体及线粒体。rIL-13组细胞增殖率增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论r:IL-13可能通过促进成纤维细胞增殖,在肺纤维化的发病机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 重组白细胞介素13 NIH 3T3细胞 细胞增殖
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重组白细胞介素10-pEGFP-N2质粒构建及表达 被引量：1
7
作者 程远雄 钟南山 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期241-243,共3页
目的　将IL 10基因定向克隆入pEGFP N2质粒 ,探讨采用构建的质粒转染支气管上皮细胞H2 92株 ,稳定表达IL 10和荧光蛋白可行性。方法　采用定向克隆技术 ,将IL 10基因克隆入pEGFP N2质粒 ,用构建成功的IL 10 pEGFP N2质粒在Fuge 6介导... 目的　将IL 10基因定向克隆入pEGFP N2质粒 ,探讨采用构建的质粒转染支气管上皮细胞H2 92株 ,稳定表达IL 10和荧光蛋白可行性。方法　采用定向克隆技术 ,将IL 10基因克隆入pEGFP N2质粒 ,用构建成功的IL 10 pEGFP N2质粒在Fuge 6介导下转染培养的支气管上皮细胞株 (H2 92 ) ,利用免疫组化、RT PCR检测细胞中IL 10蛋白和mRNA的表达 ,并在荧光显微镜下观察荧光蛋白表达。结果　①重组后的pEGFP N2质粒已成功载入IL 10基因。②IL 10 pEGFP N2质粒转染支气管上皮细胞H2 92株后 ,可在H2 92株内表达IL 10mRNA、IL 10蛋白和荧光蛋白。结论　重组的IL 10 pEGFP N2质粒可在上皮细胞内表达IL 10和荧光蛋白。由于两者共用一个启动子 ,荧光蛋白表达可报告IL 10表达 ,适用于动物实验气道内的IL 10转基因研究。 展开更多
关键词 重组白细胞介素10-PEGFP-N2 质粒 克隆 IL-10转基因
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重组白细胞介素—2的抗病毒机制及在兽医中的应用 被引量：5
8
作者 宋晓华 金红 +1 位作者 李媛 于康震 《预防兽医学进展》 2001年第3期1-5,共5页
白细胞介素-2(IL-2)是一种T细胞生长因子,具有许多生物活性,例如诱导细胞毒性T细胞,激活自然杀伤细胞,诱生LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞),提高IFN-γ产量[1],激活B细胞而参与机体的体液免疫.IL-2是由辅助型T细胞(helper T cell)Th1细胞... 白细胞介素-2(IL-2)是一种T细胞生长因子,具有许多生物活性,例如诱导细胞毒性T细胞,激活自然杀伤细胞,诱生LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞),提高IFN-γ产量[1],激活B细胞而参与机体的体液免疫.IL-2是由辅助型T细胞(helper T cell)Th1细胞分泌的,通过激活包括T细胞,NK细胞和LAK细胞的受体而介导细胞毒性反应,从而提高细胞毒性防御[2]. 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 抗病毒机制 兽医 免疫增强剂 应用 免疫治疗剂 基因工程疫苗
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重组白细胞介素-2提高口蹄疫疫苗免疫效果的试验 被引量：9
9
作者 张光勤 赵星灿 +2 位作者 胡益源 李治力 姚延峰 《河南畜牧兽医》 2002年第10期4-5,共2页
本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶195... 本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶1955.6,两组中所有抗体滴度均大于1∶64;对育成母猪的试验显示类似结果:重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫55天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶1361.8,且抗体滴度均大于1∶64,而对照组平均抗体滴度为1∶855.4,且其中抗体滴度小于1∶64的占7.1%。说明重组IL-2可以显著提高经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗的抗体滴度水平,同时也可提高育成母猪口蹄疫抗体整齐度。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 口蹄疫 疫苗 免疫效果 抗体滴度
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重组白细胞介素-2高效纯化方法建立
10
作者 王坤 李海涛 +4 位作者 张润祥 朱言柱 刘艳环 冯卓 苗利光 《特产研究》 2014年第1期30-34,共5页
依次通过离子交换法、凝胶过滤法纯化重组白细胞介素-2(IL-2)粗品,利用SDS-PAGE电泳和hIL-2 Elisa kit检测纯化后重组IL-2的纯度和浓度。结果表明,纯化后的重组IL-2纯度和浓度高。本纯化方法简单、稳定、纯化效果好,可为重组IL-2的生产... 依次通过离子交换法、凝胶过滤法纯化重组白细胞介素-2(IL-2)粗品,利用SDS-PAGE电泳和hIL-2 Elisa kit检测纯化后重组IL-2的纯度和浓度。结果表明,纯化后的重组IL-2纯度和浓度高。本纯化方法简单、稳定、纯化效果好,可为重组IL-2的生产工艺提供技术支持和依据。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 离子交换法 凝胶过滤法 纯化策略
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人重组白细胞介素11在毕氏酵母系统中的表达及纯化 被引量：8
11
作者 朱剑昆 许志祥 +4 位作者 黄伟达 闵太善 谢炜 徐颖 张学光 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期127-131,共5页
目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11（ rhIL-11），便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因，构建表达载体 pPICZα A-IL-11，经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71，甲醇诱导表达，用 EL... 目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11（ rhIL-11），便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因，构建表达载体 pPICZα A-IL-11，经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71，甲醇诱导表达，用 ELISA和 SDS-PAGE检测发酵上清中 IL-11的抗原性和表达量，用 IL-11依赖的 B9-11细胞株分析其生物学活性，采用疏水层析、离子交换和凝胶过滤纯化发酵上清中的 IL-11。 结果 序列分析表明，克隆载体中 IL-11人工基因序列与设计相符；基因工程菌株 KM71-2424在摇瓶培养上清中 IL-11的表达量超过 60 mg/L，生物学活性测定显示其比活性为 5.5× 107 U/mg，而标准品的生物学活性为 2.2× 107 U/mg。经过三步层析纯化得到电泳纯的 rhIL-11蛋白质。结论 成功获得 IL-11人工基因和稳定分泌重组蛋白的基因工程菌株 KM71-2424，该重组蛋白的生物学活性显著高于大肠杆菌表达的标准品，并获得较高纯度的重组蛋白。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 毕氏酵母 表达 分离 纯化
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重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选 被引量：7
12
作者 杨光勇 郭海涛 +5 位作者 刘茜明 何光志 田维毅 蔡琨 王平 王文佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期829-833,共5页
目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制... 目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素4(rhIL-4R) 噬菌体展示技术 单链抗体
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人重组白细胞介素-13在毕氏酵母中的表达及其体外诱导DC分化作用的研究
13
作者 江阳 时宏珍 +3 位作者 黄伟达 谢炜 赵文宝 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期82-87,共6页
目的:在毕氏酵母中表达重组人IL-13并探讨其对DC的诱导作用。方法:用基因工程的方法人工合成IL-13的全长片段,并转化至毕氏酵母菌株GS115中,筛选后获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株,用rhIL-13来替代IL-4体外诱导DC。... 目的:在毕氏酵母中表达重组人IL-13并探讨其对DC的诱导作用。方法:用基因工程的方法人工合成IL-13的全长片段,并转化至毕氏酵母菌株GS115中,筛选后获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株,用rhIL-13来替代IL-4体外诱导DC。结果:得到表达量达25 mg/L且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株;rhIL-13具有rhIL-4同样的体外诱导外周血单核细胞向DC增殖分化的作用,MHCII、CD1α、CD80、CD83、CD86等DC表型分析和混合淋巴细胞反应刺激T细胞增殖的作用与IL-4诱导得到的成熟DC并无显著差别,其所诱导的未成熟DC具有很强的摄取抗原能力。结论:获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株,rhIL-13在体外可有效地诱导外周血单核细胞向DC分化。 展开更多
关键词 人重组白细胞介素-13 毕氏酵母 外周血单核细胞 DC分化 基因表达 基因工程
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重组人IL-37通过调控Wnt5a减少细颗粒物诱导的支气管上皮细胞外基质沉积 被引量：1
14
作者 曲芳芳 徐海博 +2 位作者 齐天杰 蔡志刚 阎锡新 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第1期46-53,共8页
目的:探讨重组人白细胞介素37(rhIL-37)干预对细颗粒物(PM_(2.5))暴露诱导的人支气管上皮细胞细胞外基质沉积的治疗作用及机制。方法:通过不同浓度(6.25、12.5、25和50 mg/L)的PM_(2.5)干预正常人支气管上皮细胞16HBE建立气道损伤的细... 目的:探讨重组人白细胞介素37(rhIL-37)干预对细颗粒物(PM_(2.5))暴露诱导的人支气管上皮细胞细胞外基质沉积的治疗作用及机制。方法:通过不同浓度(6.25、12.5、25和50 mg/L)的PM_(2.5)干预正常人支气管上皮细胞16HBE建立气道损伤的细胞模型,用Western blot和细胞免疫荧光检测Wnt家族成员5a(Wnt5a)表达水平,选取Wnt5a表达量最高时的PM_(2.5)浓度为最佳干预浓度。实验分为3组:PM_(2.5)+siRNA组、PM_(2.5)+Wnt5a siRNA组及control+Wnt5a siRNA,观察纤连蛋白(fibronectin)、IL-6和IL-1β的表达水平及活性氧(ROS)的产生。此外,又将实验分为PM_(2.5)+rhIL-37组、PM_(2.5)组和control组,研究rhIL-37是否能够下调Wnt5a、fibronectin、IL-6和IL-1β的表达。结果:(1)给予不同浓度(6.25、12.5、25和50 mg/L)的PM_(2.5)干预16HBE细胞24 h后,Wnt5a的表达除PM_(2.5)(50 mg/L)组,均较control组显著增加(P<0.05);在PM_(2.5)(12.5 mg/L)刺激下,Wnt5a表达最高(P<0.01)。(2)在PM_(2.5)(12.5 mg/L)干预16HBE细胞24 h后,fibronectin表达达到峰值(P<0.01)。(3)敲减Wnt5a后fibronectin和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达,ROS的产生,以及IL-6和IL-1β的分泌均较control组显著减少(P<0.01)。(4)rhIL-37干预后再给予PM_(2.5)刺激,Wnt5a、fibronectin和Nrf2的表达,ROS的产生,以及IL-6和IL-1β的分泌均较PM_(2.5)组显著减少(P<0.05)。结论:在体外细胞模型中,PM_(2.5)可能通过Wnt5a调控炎症反应和氧化应激,从而诱导支气管上皮细胞外基质沉积;rhIL-37通过下调Wnt5a减轻炎症反应和氧化应激,从而减少细胞外基质沉积。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素37 空气污染物 细颗粒物 人支气管上皮细胞 Wnt5a蛋白
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芍药苷对重组人白细胞介素1α诱导的人成纤维样滑膜细胞功能的影响 被引量：18
15
作者 郭晓蓉 戴杏 +1 位作者 张玲玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期465-469,共5页
目的研究芍药苷(Paeoniflorin,Pae)对重组人白细胞介素1α(rhIL-1α)诱导的人成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。方法采用组织块培养法分离培养正常人FLS,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)检测FLS产生的TNF-α含... 目的研究芍药苷(Paeoniflorin,Pae)对重组人白细胞介素1α(rhIL-1α)诱导的人成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。方法采用组织块培养法分离培养正常人FLS,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)检测FLS产生的TNF-α含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测FLS产生的PGE2和cAMP水平。结果在rhIL-1α(0.01、0.1、1、10、100μg.L-1)的刺激下FLS增殖能力增强,产生的TNF-α和PGE2水平均不同程度升高,cAMP水平下降。Pae(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol.L-1)体外作用可不同程度抑制由rhIL-1α诱导的FLS增殖,降低FLS产生的TNF-α和PGE2水平,升高cAMP水平。结论rhIL-1α体外刺激可以促进正常人FLS的增殖和分泌功能;Pae可以逆转rhIL-1α对人FLS功能的影响。 展开更多
关键词 成纤维样滑膜细胞 芍药苷 重组人白细胞介素1α
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重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制 被引量：9
16
作者 陈祥 张成全 +4 位作者 徐正中 孟闯 黄金林 潘志明 焦新安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-656,共4页
目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以... 目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组牛白细胞介素4 原核表达 单克隆抗体
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HPLC-ESI-Q-TOF-MS鉴定重组人白细胞介素-11的一级结构 被引量：8
17
作者 杨英 饶春明 +3 位作者 王威 张翊 韩春梅 王军志 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2006年第2期117-121,共5页
用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定rhIL-11的精确分子质量,采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)测定其胰蛋白酶酶切... 用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定rhIL-11的精确分子质量,采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)测定其胰蛋白酶酶切后肽段的部分氨基酸序列并结合数据库检索进行结构鉴定。rhIL-11的实测分子质量为19 047.38 u,与理论分子质量19 047.29 u相比非常接近。HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS测定m/z664.45、m/z609.40的肽段的部分氨基酸序列分别为Glu-Pro-Glu-Leu-Gly-Thr-Leu和Leu-Asp-Ser-Thr-Val-Leu。将这两段序列在MASCOT数据库检索,结果表明rhIL-11的结构正确。 展开更多
关键词 液质联用 重组人白细胞介素-11 分子质量 氨基酸序列
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抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究 被引量：5
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作者 马颖 邹全明 +2 位作者 朱永红 罗萍 毛旭虎 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-414,417,共4页
目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和... 目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。 展开更多
关键词 抗重组人白细胞介素18 单克隆抗体 制备 特性 杂交瘤
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重组人白细胞介素-11治疗化疗引起的血小板减少症的II期临床研究 被引量：9
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作者 曹军宁 许立功 +7 位作者 吴晴 冯继锋 张沂平 秦凤展 徐建华 战榕 谭清和 吴昌平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第2期141-144,共4页
目的:评价重组人白细胞介素11(rhIL11)对化疗引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:采用多中心、非随机、自身对照试验。对照周期单用化疗,治疗周期化疗后给予rhIL1150μg/(kg·d),皮下注射,连续给药10～14天,或PLT>300×... 目的:评价重组人白细胞介素11(rhIL11)对化疗引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:采用多中心、非随机、自身对照试验。对照周期单用化疗,治疗周期化疗后给予rhIL1150μg/(kg·d),皮下注射,连续给药10～14天,或PLT>300×109/L后停药。结果:共入组106例患者,可评价疗效100例。PLT最低值(中位数)对照周期为49(5～76)×109/L,治疗周期为69(6～221)×109/L,P<0.001。PLT≤75×109/L的中位天数对照周期为7(0～26)天,治疗周期为3.5(0～28)天,P<0.001。PLT≤50×109/L的中位天数对照周期为2(0～20)天,治疗周期为0(0～23)天,P<0.01。PLT≤20×109/L的中位天数对照周期为0(0～9)天,治疗周期为0(0～5)天,P>0.05。从PLT最低点恢复到80×109/L的中位天数对照周期为5(1～18)天,治疗周期为2(0～28)天,P<0.001。对照周期输注血小板人数为6例,治疗周期为6例,无统计学差异。主要不良反应为发热、心悸、水肿、肌肉关节痛、感冒样症状等。结论:rhIL11对化疗引起的血小板减少症有防治作用,临床不良反应可以耐受,未发生严重不良事件。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 血小板减少症 化疗 Ⅱ期临床试验
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重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对大鼠胶原性关节炎的治疗作用 被引量：9
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作者 孙妩弋 张玲玲 +5 位作者 吴丽 汪倪萍 王华 岳莉 张运芳 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期92-95,共4页
目的　研究重组人白细胞介素 1受体拮抗剂 (recom binanthumaninterleukin1receptorantagonist, rhIL 1ra)对大鼠胶原性关节炎 (collagen inducedarthritis,CIA)的治疗作用。方法　SD大鼠随机分为 6组:正常对照组、模型组、rhIL 1ra3个... 目的　研究重组人白细胞介素 1受体拮抗剂 (recom binanthumaninterleukin1receptorantagonist, rhIL 1ra)对大鼠胶原性关节炎 (collagen inducedarthritis,CIA)的治疗作用。方法　SD大鼠随机分为 6组:正常对照组、模型组、rhIL 1ra3个剂量组和进口IL 1ra组;采用Ⅱ型胶原(CⅡ)乳剂皮内注射诱导大鼠CIA模型;每周测体重观察体重变化;足爪容积法测量大鼠足爪肿胀度;测定CⅡ的迟发性变态反应(DTH);ELISA法检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平;同时进行病理组织学的检查。结果　CIA大鼠在致炎d10,出现关节红、肿,体重减轻,血清抗CⅡ抗体水平升高,关节病理可见滑膜增生,炎性细胞浸润,血管翳形成,软骨和骨的破坏等。rhIL 1ra(7 5, 30, 120mg·kg-1 )和阳性对照组anakinra(120mg·kg-1 )皮下注射,连续 7d,能明显抑制CIA大鼠足肿胀;rhIL 1ra(30, 120mg·kg-1 )皮下注射,连续 7d,可以明显减轻CⅡ诱发的迟发性变态反应 (DTH);另外,rhIL 1ra也可明显降低CIA大鼠血清中抗CⅡ抗体的水平;病理学检查表明,rhIL 1ra大剂量能明显减轻CIA大鼠关节滑膜炎症和滑膜增生,减轻血管翳和软骨破坏。结论　rhIL 1ra对CIA具有治疗作用。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素1受体拮抗剂 Ⅱ型胶原性关节炎
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