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猪白细胞介素-4重组蛋白的纯化及其生物学特性分析 被引量：4
1
作者 陈国华 景志忠 +3 位作者 窦永喜 蒙学莲 张巧颖 宋世斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1072-1076,共5页
用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸... 用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸铵沉淀和Sephadex-G100凝胶层析柱进一步纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。在体外利用MTT法检测其生物学特性,结果表明其具有较好的生物学活性,本试验为获得猪IL-4重组蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 重组表达 纯化 活性分析
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重组白细胞介素-2对猪瘟疫苗免疫效果的影响 被引量：12
2
作者 张光勤 李旺 +1 位作者 赵星灿 李治力 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期174-176,共3页
观察了重组IL 2对经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗免疫效果的影响.结果表明,进行猪瘟免疫时应用重组IL 2,可以显著提高经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗的抗体滴度水平及整齐度.
关键词 重组白细胞介素-2 猪瘟 疫苗 免疫效果 抗体滴度
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猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建
3
作者 王淑娟 陈红英 +3 位作者 魏战勇 刘金朋 耿静微 崔保安 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期71-75,共5页
采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入... 采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2。NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2。测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因长482 bp,包含1个完整读码框(465 bp),与GenBank中其他5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9%。重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-2 克隆 重组禽痘病毒 载体 构建
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重组猪IL-7在真核细胞的分泌表达及生物活性分析 被引量：1
4
作者 温洁霞 林洪羽 +5 位作者 王利月 李文艳 张考 陈慧慧 仲飞 李秀锦 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期98-101,106,共5页
为了解猪IL-7(pIL-7)在防治猪免疫抑制性传染病及疫苗生物佐剂中的作用,通过RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出含有自身信号肽序列的pIL-7 cDNA基因,将其克隆到pcDNA3.1A表达载体上,构建出羧基端与Myc/His融合的pIL-7基因真核表达载体pcDNA3.1... 为了解猪IL-7(pIL-7)在防治猪免疫抑制性传染病及疫苗生物佐剂中的作用,通过RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出含有自身信号肽序列的pIL-7 cDNA基因,将其克隆到pcDNA3.1A表达载体上,构建出羧基端与Myc/His融合的pIL-7基因真核表达载体pcDNA3.1A-pIL-7/MH。由磷酸钙介导将pcDNA3.1A-pIL-7/MH质粒转染人类胚胎肾细胞293T(HEK293T)使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的pIL-7基因表达载体是否可介导重组pIL-7在真核细胞中进行分泌型表达。然后利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化表达的重组pIL-7,并通过淋巴细胞增殖试验检测其的生物活性。结果表明,扩增的pIL-7基因序列与GenBank序列完全一致;构建的表达载体可介导重组pIL-7在真核细胞HEK293T中进行分泌型表达。表达的重组pIL-7对猪脾淋巴细胞有明显的促增殖效应。由此可见,利用真核细胞表达的重组pIL-7具有生物活性。 展开更多
关键词 重组猪白细胞介素-7 真核表达 生物活性
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猪白细胞介素-2和融合抗菌肽重组酵母菌构建及其对小鼠免疫和生长的协同效应
5
作者 胡冰 吴雪颖 +7 位作者 马常俊 万小平 肖永乐 陈建林 李江淩 吕学斌 王泽洲 高荣 《四川动物》 北大核心 2018年第6期609-619,共11页
为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和... 为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P <0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P <0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P <0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P <0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P <0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-2 融合抗菌肽 重组毕赤酵母 小鼠 免疫
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猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达 被引量：10
6
作者 严琳 陈焕春 +2 位作者 覃雅丽 何启盖 肖少波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期208-212,共5页
将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株... 将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20KD),其表达量可达到80mg/L。用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106IU/ml。对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2。本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪 白细胞介素-2 甲醇酵母 基因表达 阳性克隆子
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HPLC-ESI-Q-TOF-MS鉴定重组人白细胞介素-11的一级结构 被引量：8
7
作者 杨英 饶春明 +3 位作者 王威 张翊 韩春梅 王军志 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2006年第2期117-121,共5页
用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定rhIL-11的精确分子质量,采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)测定其胰蛋白酶酶切... 用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定rhIL-11的精确分子质量,采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)测定其胰蛋白酶酶切后肽段的部分氨基酸序列并结合数据库检索进行结构鉴定。rhIL-11的实测分子质量为19 047.38 u,与理论分子质量19 047.29 u相比非常接近。HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS测定m/z664.45、m/z609.40的肽段的部分氨基酸序列分别为Glu-Pro-Glu-Leu-Gly-Thr-Leu和Leu-Asp-Ser-Thr-Val-Leu。将这两段序列在MASCOT数据库检索,结果表明rhIL-11的结构正确。 展开更多
关键词 液质联用 重组人白细胞介素-11 分子质量 氨基酸序列
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重组白细胞介素-2对固始鸡免疫机能的影响 被引量：7
8
作者 张怀 高春生 +2 位作者 蒋媛媛 赵峰 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期48-51,共4页
本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗... 本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗体水平在第2～3周达到最高水平,以后在4～7周内基本保持恒定水平;注射IL-2的各免疫组的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数基本上均高于空白对照组和鸡志贺氏菌苗组。重组IL-2可促进固始鸡免疫器官的生长发育和成熟,增强鸡的免疫机能,可抵抗各种病原微生物的感染。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 固始鸡 免疫机能 抗体
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重组人白细胞介素-11治疗化疗引起的血小板减少症的II期临床研究 被引量：9
9
作者 曹军宁 许立功 +7 位作者 吴晴 冯继锋 张沂平 秦凤展 徐建华 战榕 谭清和 吴昌平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第2期141-144,共4页
目的:评价重组人白细胞介素11(rhIL11)对化疗引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:采用多中心、非随机、自身对照试验。对照周期单用化疗,治疗周期化疗后给予rhIL1150μg/(kg·d),皮下注射,连续给药10～14天,或PLT>300×... 目的:评价重组人白细胞介素11(rhIL11)对化疗引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:采用多中心、非随机、自身对照试验。对照周期单用化疗,治疗周期化疗后给予rhIL1150μg/(kg·d),皮下注射,连续给药10～14天,或PLT>300×109/L后停药。结果:共入组106例患者,可评价疗效100例。PLT最低值(中位数)对照周期为49(5～76)×109/L,治疗周期为69(6～221)×109/L,P<0.001。PLT≤75×109/L的中位天数对照周期为7(0～26)天,治疗周期为3.5(0～28)天,P<0.001。PLT≤50×109/L的中位天数对照周期为2(0～20)天,治疗周期为0(0～23)天,P<0.01。PLT≤20×109/L的中位天数对照周期为0(0～9)天,治疗周期为0(0～5)天,P>0.05。从PLT最低点恢复到80×109/L的中位天数对照周期为5(1～18)天,治疗周期为2(0～28)天,P<0.001。对照周期输注血小板人数为6例,治疗周期为6例,无统计学差异。主要不良反应为发热、心悸、水肿、肌肉关节痛、感冒样症状等。结论:rhIL11对化疗引起的血小板减少症有防治作用,临床不良反应可以耐受,未发生严重不良事件。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 血小板减少症 化疗 Ⅱ期临床试验
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猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 被引量：3
10
作者 裴仉福 陈瑞爱 +5 位作者 唐秀英 朱文冠 唐满华 李琳 程含波 温纳相 《中国兽药杂志》 2007年第2期5-9,共5页
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,... 以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-18 基因表达 蛋白纯化
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基因重组人白细胞介素-11预防化疗所致血小板减少的临床效果 被引量：5
11
作者 黄镜 徐兵河 +1 位作者 蔡锐刚 储大同 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期258-260,共3页
观察迈格尔(基因重组人白细胞介素-11,rhIL-11)预防化疗所致血小板减少的疗效和不良反应。方法:对21例接受以卡铂或健择为主的方案化疗患者,采用随机双盲安慰剂对照,自身交叉研究方法,比较rhIL-11和安慰剂对化疗后血小板最低值的影响及... 观察迈格尔(基因重组人白细胞介素-11,rhIL-11)预防化疗所致血小板减少的疗效和不良反应。方法:对21例接受以卡铂或健择为主的方案化疗患者,采用随机双盲安慰剂对照,自身交叉研究方法,比较rhIL-11和安慰剂对化疗后血小板最低值的影响及毒性。rhIL-11在化疗药给药结束后24小时开始用药,25μg/kg皮下注射,连续用药7～14天,血小板高于300×109/L时停药。结果:rhIL-11可以明显升高化疗中血小板最低值,减少输血的次数,rhIL-11的不良反应主要是轻度水肿,乏力及感冒样症状等。结论:rhIL-11对化疗所致血小板降低有明显的防治作用,可以作为升血小板的有效、安全药物在化疗中推广应用。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 化疗 血小板减少症 迈格尔
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重组人白细胞介素-Ⅱ辅助治疗复治肺结核临床观察 被引量：6
12
作者 张红梅 吴卫华 +3 位作者 韩志荣 郑华 梁瑞武 李宝兰 《中国防痨杂志》 CAS 2005年第4期219-223,共5页
目的研究和评价重组人白细胞介素-Ⅱ(IL-2)辅助治疗肺结核的临床效果。方法选痰菌阳性复治肺结核43例,观察组22例,采用2HL2AK(E)Z(TH)V+IL-2/1HL2(TH)V+IL-2/5HL2V方案化疗;对照组21例,采用2HL2AK(E)Z(TH)V/1HL2(TH)V/5HL2V方案化疗。... 目的研究和评价重组人白细胞介素-Ⅱ(IL-2)辅助治疗肺结核的临床效果。方法选痰菌阳性复治肺结核43例,观察组22例,采用2HL2AK(E)Z(TH)V+IL-2/1HL2(TH)V+IL-2/5HL2V方案化疗;对照组21例,采用2HL2AK(E)Z(TH)V/1HL2(TH)V/5HL2V方案化疗。结果完成疗程可评价疗效者40例,其中观察组20例,对照组20例,观察组痰菌阴转、病灶吸收、空洞的缩小和闭合以及免疫检测结果均优于对照组。无严重不良反应发生。结论重组人IL—2有辅助治疗肺结核的作用,可加速结核菌阴转速度,促进病灶吸收,提高机体免疫力,是安全可靠的生物制剂。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-Ⅱ 辅助疗法 肺结核 IL-2 免疫力
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重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性 被引量：6
13
作者 胡志明 林来兴妹 +2 位作者 周明乾 陈泽洪 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期206-207,214,共3页
目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具... 目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-2 绿脓杆菌外毒素 融合蛋白 纯化 复性
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重组人白细胞介素-11治疗消化道肿瘤化疗后血小板减少症的临床研究 被引量：3
14
作者 李洁 沈琳 +3 位作者 李燕 张晓东 李健 龚继芳 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期1297-1299,共3页
目的:评价重组人白细胞介素-11(巨和粒#)治疗消化道肿瘤化疗后引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:单中心、开放性、非随机平行对照的临床研究。按NCI-CTC毒性分级标准对化疗后血小板减少至Ⅱ度及以下者(即≤75(109/L)进行观察治... 目的:评价重组人白细胞介素-11(巨和粒#)治疗消化道肿瘤化疗后引起的血小板减少症的疗效和安全性。方法:单中心、开放性、非随机平行对照的临床研究。按NCI-CTC毒性分级标准对化疗后血小板减少至Ⅱ度及以下者(即≤75(109/L)进行观察治疗。治疗组给予巨和粒25μg/(kg·d),皮下注射,连续给药7～14天。随机选择未使用巨和粒的化疗后血小板减少者作为平行对照。观察28天。结果:治疗组与对照组各38例。治疗组血小板从最低值升至≥100×109/L平均需要8.1天,而对照组平均需要12.2天(P<0.01)。血小板≤50×109/L者,治疗组升至≥100×109/L平均需要8.9天,对照组平均需要12.9天(P<0.05)。有统计学差异。主要不良反应为水肿、发热、关节肌肉酸痛等,均为Ⅰ～Ⅱ级,无严重不良反应发生。结论:重组人白细胞介素-11(巨和粒#)对消化道肿瘤化疗后引起的血小板减少症有治疗作用,可以促进血小板减少的恢复,且耐受性较好,无严重不良反应。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 血小板减少 消化道肿瘤 化疗
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猪白细胞介素-10的分子克隆与序列测定 被引量：2
15
作者 兰文升 童光志 +3 位作者 仇华吉 王云峰 周艳君 郭海龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期113-115,共3页
从LPS活化的猪外周血单个核细胞 (PBMC)提取总RNA ,用RT_PCR方法扩增出猪白细胞介素_10 (IL_10 )的编码基因 ,将其连接到pUC18质粒上 ,然后进行BamHI和HindIII双酶切鉴定筛选阳性克隆 ,序列分析结果表明该基因开放阅读框由5 2 8个核苷... 从LPS活化的猪外周血单个核细胞 (PBMC)提取总RNA ,用RT_PCR方法扩增出猪白细胞介素_10 (IL_10 )的编码基因 ,将其连接到pUC18质粒上 ,然后进行BamHI和HindIII双酶切鉴定筛选阳性克隆 ,序列分析结果表明该基因开放阅读框由5 2 8个核苷酸组成 ,推测产生的编码产物由 175个氨基酸组成。猪IL_10基因与人、大鼠和小鼠基因序列的同源性分别为84%、79%和 79% ,与国外报道的猪IL_10基因序列完全一致 。 展开更多
关键词 猪 白细胞 介素-10 分子克隆 序列测定
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猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定 被引量：4
16
作者 兰文升 童光志 +3 位作者 仇华吉 周艳君 王云峰 郭海龙 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期38-41,共4页
为研究白细胞介素－１２在机体免疫应答中的作用，从猪外周血提取单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），用含ＬＰＳ的培养基培养细胞，从培养２　ｈ和１２　ｈ的活化细胞中分别提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出编码猪ＩＬ－１２两个亚基的... 为研究白细胞介素－１２在机体免疫应答中的作用，从猪外周血提取单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），用含ＬＰＳ的培养基培养细胞，从培养２　ｈ和１２　ｈ的活化细胞中分别提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出编码猪ＩＬ－１２两个亚基的基因，其大小分别为７２０　ｂｐ（Ｐ３５）和１　０４４　ｂｐ（Ｐ４０），将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化，用ＳａｃＩ和ＳａｌＩ双酶切后，分别将其连接至ｐＵＣ１８质粒上，进行质粒ＰＣＲ和ＳａｃＩ、ＳａｌＩ双酶切鉴定后筛选阳性克隆，并进行序列测定和分析。序列分析表明Ｐ３５基因开放阅读框含有６６９个核苷酸，序列与人、小鼠和羊同源性分别为７９．２％，３７．６％　，８６．１％，Ｐ４０基因开放阅读框含有９７５个核苷酸，与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为７９．５％，５３．１％，８４．３％。结果表明克隆到了猪白细胞介素－１２　Ｐ３５和Ｐ４０两个亚基的基因，得到的Ｐ３５基因序列与国外报道完全一致，Ｐ４０基因序列与发表的序列有４个碱基差异，提示Ｐ４０基因可能存在多态性。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-12 基因克隆 序列测定 免疫调节作用
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猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究 被引量：2
17
作者 张桂红 林海波 +7 位作者 詹国英 廖明 任涛 罗开健 曹伟胜 徐成刚 江经纬 辛朝安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期474-477,共4页
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的... 用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。 展开更多
关键词 猪 白细胞介素-6基因 非融合原核表达 SDS-PAGE ELISA
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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究 被引量：4
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作者 杨晓璐 闫若潜 +4 位作者 李勤楠 赵雪丽 谢彩华 刘梅芬 张书阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3153-3159,共7页
为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应... 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素-2 重组融合蛋白 体外活性
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荣昌猪白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆及原核表达 被引量：4
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作者 李晓琪 郭万柱 +1 位作者 黄亚平 张丽 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第15期4446-4447,4459,共3页
根据GenBank收录的猪白细胞介素-10(PIL-10)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(conA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,RT-PCR方法首次扩增出荣昌猪PIL-10的全长基因。序列分析表明PIL-10全长771 bp。设计1对引物亚克隆荣昌猪IL-10基因成熟蛋... 根据GenBank收录的猪白细胞介素-10(PIL-10)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(conA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,RT-PCR方法首次扩增出荣昌猪PIL-10的全长基因。序列分析表明PIL-10全长771 bp。设计1对引物亚克隆荣昌猪IL-10基因成熟蛋白编码基因(477 bp)。利用基因重组技术构建了PET32a(+)-PIL-10融合表达载体,经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE,重组菌的RT-PCR,Western blotting结果表明融合表达成功。 展开更多
关键词 荣昌猪 白细胞介素-10 克隆 原核表达
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重组人白细胞介素-11治疗吉西他滨引起肿瘤患者血小板减少的临床观察 被引量：2
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作者 傅强 王宁 +1 位作者 杨林军 王雅杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第3期284-285,288,共3页
目的：评价重组人白细胞介素-11（rhlL-11，吉巨芬）治疗吉西他滨引起肿瘤患者血小板减少的疗效和安全性。方法：开放性、非随机平行对照的临床研究，按NCI—CTC毒性分级标准对含吉西他滨化疗后血小板减少者（即〈100×10^9／L）进... 目的：评价重组人白细胞介素-11（rhlL-11，吉巨芬）治疗吉西他滨引起肿瘤患者血小板减少的疗效和安全性。方法：开放性、非随机平行对照的临床研究，按NCI—CTC毒性分级标准对含吉西他滨化疗后血小板减少者（即〈100×10^9／L）进行观察治疗，治疗组给予rhlL-1150μg/（kg·d），皮下注射，连续给药2～14d或至血小板〉100×10^9／L时停药；治疗过程中如血小板≤30×10^9／L或有出血倾向时，给予血小板输注。随机选择未使用rhlL-11的化疗后血小板减少者作为平行对照，观察28d。结果：治疗组与对照组各32例，治疗组血小板升至≥100×10^9／L中位时间4-四分位数间距为（5．0±3．0）d；而对照组为（9．5±5．0）d，两组差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗组中血小板输注次数为2次，对照组为9次，两组差异无统计学意义（P=0．249）。rh1L-11不良反应主要为：乏力、水肿、结膜充血、注射部位红肿、肌肉、关节痛、头痛、心动过速、发热、胸闷等，多为Ⅰ～Ⅱ级，无严重不良反应发生。结论：rhlL-11治疗吉西他滨所致血小板减少具有良好的疗效和安全性，为临床安全应用吉西他滨提供了保障。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 肿瘤 血小板减少 吉西他滨 化疗
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