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重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化
被引量：
4
1
作者
王新
陈海旭
+3 位作者
陆坚峰
张毅
屈贤铭
杨胜利
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期337-341,共5页
为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再...
为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 .
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关键词
重组刺桐胰蛋白酶
抑制剂a
大肠杆菌
表达
纯化
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职称材料
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用
被引量：
4
2
作者
王新
屈贤铭
杨胜利
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期420-423,共4页
将基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa高密度发酵 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a (rETIa)蛋白在E .coli中得到较高水平表达 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 .经菌体破碎、包涵体变性、复...
将基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa高密度发酵 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a (rETIa)蛋白在E .coli中得到较高水平表达 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 .经菌体破碎、包涵体变性、复性 ,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白 .测得rETIa对t PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki 为 8 72× 10 -8mol/L .据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa Sepharose 4B亲和层析柱 .直接一步纯化NTA复性液 ,纯化的NTA纯度达 90 %以上 ,收率为 96 2 % ,纯化倍数为 13 2 ,比活为(5 6 5 7± 71 3)U/μg .
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关键词
重组刺桐胰蛋白酶
抑制剂a
制备
tPA突变体
纯化
应用
高效表达
亲和层析
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职称材料
题名
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化
被引量：
4
1
作者
王新
陈海旭
陆坚峰
张毅
屈贤铭
杨胜利
机构
中国科学院上海生物工程研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期337-341,共5页
文摘
为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 .
关键词
重组刺桐胰蛋白酶
抑制剂a
大肠杆菌
表达
纯化
Keywords
rETIa, E.coli BL21(DE3), high expression, purification
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用
被引量：
4
2
作者
王新
屈贤铭
杨胜利
机构
中国科学院上海生物工程研究中心
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期420-423,共4页
文摘
将基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa高密度发酵 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a (rETIa)蛋白在E .coli中得到较高水平表达 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 .经菌体破碎、包涵体变性、复性 ,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白 .测得rETIa对t PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki 为 8 72× 10 -8mol/L .据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa Sepharose 4B亲和层析柱 .直接一步纯化NTA复性液 ,纯化的NTA纯度达 90 %以上 ,收率为 96 2 % ,纯化倍数为 13 2 ,比活为(5 6 5 7± 71 3)U/μg .
关键词
重组刺桐胰蛋白酶
抑制剂a
制备
tPA突变体
纯化
应用
高效表达
亲和层析
Keywords
rETIa
high cell density
affinity chromatography
tPA deletion variant (NTA)
分类号
TQ460.38 [化学工程—制药化工]
Q789 [生物学—分子生物学]
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1
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化
王新
陈海旭
陆坚峰
张毅
屈贤铭
杨胜利
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
4
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职称材料
2
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用
王新
屈贤铭
杨胜利
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002
4
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