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日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号转导蛋白epsilon亚型基因[Parasitol1]真核表达重组质粒的构建及序列分析
1
作者 唐小牛 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 陈文魁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期220-222,227,共4页
目的　构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法　根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一... 目的　构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法　根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,用RT -PCR法合成日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3蛋白epsilon亚型基因cDNA片段。将其克隆入 pGEM -T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK -CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。 结果　RT -PCR产物、pGEM -T -Sj14 - 3- 3及 pBK -Sj14 - 3- 3分别经双酶切均获得一特异性基因片段 经测序分析后该片段具有一个 75 3bp完整开放阅读框 (openreadingframe ,ORF) ,由此推导的氨基酸序列具有多种蛋白激酶的磷酸化位点。 结论　成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 ,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列蛋白激酶磷酸化位点进行分析。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14—3—3信号转导蛋白 epsilon亚型基因 真核表达 重组质粒 构建 序列分析
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检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立 被引量：2
2
作者 姚新生 马骊 +4 位作者 温茜 邹红云 阮光平 杨介钻 王小宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期342-345,共4页
目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用... 目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BWLinker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(TALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BWlinker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定。结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端,在2例TALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LMPCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合。结论:1例胸腺组织和2例TALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCRBD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LMPCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。 展开更多
关键词 连接介导PCR(LM-PCR) 胸腺 基因重排 重组信号序列(rss)
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RSSs的组成和特征对体细胞V(D)J基因重排效率的影响
3
作者 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期2156-2160,2164,共6页
T/B细胞的多样性源于V(D)J基因片段重排,重排所形成的TCR/BCR组库中,各V(D)J基因的表达频率与其在初始重组中的利用、自身耐受过程中的选择、克隆增生中的应答相关,但V(D)J基因在初始重组中利用效率差异的研究较少。影响V(D)J基因重排... T/B细胞的多样性源于V(D)J基因片段重排,重排所形成的TCR/BCR组库中,各V(D)J基因的表达频率与其在初始重组中的利用、自身耐受过程中的选择、克隆增生中的应答相关,但V(D)J基因在初始重组中利用效率差异的研究较少。影响V(D)J基因重排利用的因素和机制复杂,重组信号序列(RSSs)的heptamer、nonamer、spacer的组成和特征发挥重要作用。本文将对保守与改变的RSSs对体细胞重排V(D)J基因利用效率的影响进行综述。 展开更多
关键词 重组信号序列 体细胞基因重排 可变区基因片段 连接区基因片段 多样区基因片段 TCR/BCR受体库
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瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因在酿酒酵母中的表达研究 被引量：6
4
作者 丁新丽 黄晶 汪天虹 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期18-22,共5页
将PCR合成的瑞氏木霉 (Trichodermareesei) β 内切葡聚糖酶I(EGI)cDNA基因片断分别插入酵母met1 0和 pgk1启动子和终止子序列之间 ,构建了在不同启动子控制下 ,具有不同拷贝数的eg1表达分泌质粒pRS41 5ME、pRS41 5PE和 pRS42 5PE。通... 将PCR合成的瑞氏木霉 (Trichodermareesei) β 内切葡聚糖酶I(EGI)cDNA基因片断分别插入酵母met1 0和 pgk1启动子和终止子序列之间 ,构建了在不同启动子控制下 ,具有不同拷贝数的eg1表达分泌质粒pRS41 5ME、pRS41 5PE和 pRS42 5PE。通过电转化使重组质粒转移至实验室酿酒酵母H1 5 8菌株中 ,分别得到了 3株酵母转化子H1 p、H2p和H1m。在 3株酵母转化子中 ,重组 β 内切葡聚糖酶I都能在酶自身信号肽序列引导下进行分泌型表达。在YPD培养基中 3株重组酵母生长速率大致相同 ,H1m ,H1 p与H2 p的内切葡聚糖酶活力分别为 70 .4,1 2 6.7和 1 2 5 .0U/mL。 展开更多
关键词 分泌型表达 酶基因 葡聚糖 启动子 拷贝数 重组质粒 酿酒酵母 转化子 电转化 信号肽序列
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牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析
5
作者 李敏 陈丽梅 +3 位作者 林爱星 杨兴元 安晓荣 陈永福 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期857-864,共8页
根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品... 根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中. 展开更多
关键词 Holstein牛 胚系基因 抗体 抗体重链恒定区μ基因(Cμ) 抗体重链可变区J基因(JH) 重组信号序列(rss)
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WSSV-VAP1基因克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量：2
6
作者 刘庆慧 韩文君 +1 位作者 黄倢 王清印 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期67-70,共4页
根据 WSSV-黏附蛋白(VAP1)基因序列设计了一对引物,在5'引物和3'引物中分别引入EcoRI和XbaI酶切位点.经PCR扩增,将VAP1基因克隆至穿梭载体pGAPZαA之GAP启动子下游位点,构建成含α-factor信号肽的重组表达载体,获得的重组质粒pG... 根据 WSSV-黏附蛋白(VAP1)基因序列设计了一对引物,在5'引物和3'引物中分别引入EcoRI和XbaI酶切位点.经PCR扩增,将VAP1基因克隆至穿梭载体pGAPZαA之GAP启动子下游位点,构建成含α-factor信号肽的重组表达载体,获得的重组质粒pGAPZαA-VAP1经线性化后转入毕赤氏酵母SMD1168菌株,构建成分泌型表达VAP1的酵母工程菌株.SDS-PAGE和Western-blot及结合活性检测分析表明,VAP1基因在该体系中得到成功表达,表达产物与对虾细胞膜具明显的结合活性. 展开更多
关键词 基因克隆 毕赤酵母 WESTERN-BLOT SDS-PAGE 重组表达载体 PCR扩增 毕赤氏酵母 分泌型表达 序列设计 酶切位点 穿梭载体 重组质粒 工程菌株 活性检测 P1基因 结合活性 表达产物 启动子 GAP 信号肽 线性化 分析表 细胞膜
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人KiSS-1基因克隆及其真核表达载体的构建 被引量：1
7
作者 王春晖 乔宠 戴显伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期218-219,共2页
目的:克隆转移抑制基因KiSS1的不含信号肽的表达序列,构建人KiSS1基因的真核表达载体。方法:从人正常胰腺组织中提取总RNA,经RT PCR得到KiSS1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达质粒pcDNA3/KiSS1。... 目的:克隆转移抑制基因KiSS1的不含信号肽的表达序列,构建人KiSS1基因的真核表达载体。方法:从人正常胰腺组织中提取总RNA,经RT PCR得到KiSS1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达质粒pcDNA3/KiSS1。结果:经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入载体pcDNA3的片段为目的基因开放阅读框的核苷酸序列。结论:重组质粒pcDNA3/KiSS1的成功构建,为该基因相应蛋白质的表达和其抗体的制备研究提供基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 基因克隆 KISS-1基因 pcDNA3 开放阅读框 转移抑制基因 正常胰腺组织 cDNA序列 RT-PCR 真核表达质粒 基因序列测定 核苷酸序列 表达序列 总RNA 酶切鉴定 目的基因 重组质粒 信号肽 蛋白质 栽体
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人肥胖基因在大肠杆菌中的表达 被引量：2
8
作者 昔奋攻 李宁 吴常信 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期63-66,共4页
肥胖基因编码的瘦蛋白可以反映机体脂肪含量信息,在发育、繁殖、造血及体重调节等方面具有重要功能.本文利用PCR方法扩增去除信号肽的人肥胖基因cDNA序列,并将位于基因5'端的CCC转变为大肠杆菌常用密码子CCG,扩增片段经测序证实后,... 肥胖基因编码的瘦蛋白可以反映机体脂肪含量信息,在发育、繁殖、造血及体重调节等方面具有重要功能.本文利用PCR方法扩增去除信号肽的人肥胖基因cDNA序列,并将位于基因5'端的CCC转变为大肠杆菌常用密码子CCG,扩增片段经测序证实后,克隆原核表达载体pT7-7,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经温度诱导,SDS-PAGE电泳可见分子量约为16kD的特异蛋白表达带,表达量最高占菌体蛋白总含量的45%以上.表达重组蛋白经纯化,注射昆明白小白鼠,小白鼠体重明显下降,说明纯化的重组蛋白具有生物学活性. 展开更多
关键词 大肠杆菌 肥胖基因 SDS-PAGE电泳 CDNA序列 原核表达载体 重组蛋白 PCR方法 生物学活性 脂肪含量 基因编码 扩增片段 质粒转化 温度诱导 蛋白表达 菌体蛋白 小白鼠 瘦蛋白 信号肽 CCG 密码子 CCC 分子量 表达量 纯化 造血
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淋巴因子和干扰素
9
《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第7期71-72,共2页
912285 人成纤维细胞干扰素在酿酒酵母中的表达[会,英]/Demolder,J.…∥Yeast.-1990,6,Spec.Issue.-S413[译自DBA,1990,9(23),90-13446] 人成纤维细胞干扰素(IFN-β)基因在与α-因子前原信号序列结合的不同启动子控制下,在酿酒酵母中表... 912285 人成纤维细胞干扰素在酿酒酵母中的表达[会,英]/Demolder,J.…∥Yeast.-1990,6,Spec.Issue.-S413[译自DBA,1990,9(23),90-13446] 人成纤维细胞干扰素(IFN-β)基因在与α-因子前原信号序列结合的不同启动子控制下,在酿酒酵母中表达.用酵母菌交配因子启动子(MF-α-1)时,得到30ng/ml重组蛋白.IFN-β基因要在强构成性三糖磷酸异构酶启动子控制下可高水平表达.由于IFN-β的毒性,转化细胞生长很慢. 展开更多
关键词 淋巴因子 启动子 酿酒酵母 信号序列 重组蛋白 YEAST 细胞生长 人成纤维细胞 琼脂糖 粗提物
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