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检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立
被引量：
2
1
作者
姚新生
马骊
+4 位作者
温茜
邹红云
阮光平
杨介钻
王小宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期342-345,共4页
目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用...
目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BWLinker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(TALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BWlinker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定。结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端,在2例TALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LMPCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合。结论:1例胸腺组织和2例TALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCRBD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LMPCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。
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关键词
连接介导PCR(LM-PCR)
胸腺
基因重排
重组信号序列
(RSS)
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职称材料
牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析
2
作者
李敏
陈丽梅
+3 位作者
林爱星
杨兴元
安晓荣
陈永福
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期857-864,共8页
根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品...
根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中.
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关键词
Holstein牛
胚系基因
抗体
抗体重链恒定区μ基因(Cμ)
抗体重链可变区J基因(JH)
重组信号序列
(RSS)
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职称材料
RSSs的组成和特征对体细胞V(D)J基因重排效率的影响
3
作者
姚新生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第17期2156-2160,2164,共6页
T/B细胞的多样性源于V(D)J基因片段重排,重排所形成的TCR/BCR组库中,各V(D)J基因的表达频率与其在初始重组中的利用、自身耐受过程中的选择、克隆增生中的应答相关,但V(D)J基因在初始重组中利用效率差异的研究较少。影响V(D)J基因重排...
T/B细胞的多样性源于V(D)J基因片段重排,重排所形成的TCR/BCR组库中,各V(D)J基因的表达频率与其在初始重组中的利用、自身耐受过程中的选择、克隆增生中的应答相关,但V(D)J基因在初始重组中利用效率差异的研究较少。影响V(D)J基因重排利用的因素和机制复杂,重组信号序列(RSSs)的heptamer、nonamer、spacer的组成和特征发挥重要作用。本文将对保守与改变的RSSs对体细胞重排V(D)J基因利用效率的影响进行综述。
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关键词
重组信号序列
体细胞基因重排
可变区基因片段
连接区基因片段
多样区基因片段
TCR/BCR受体库
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职称材料
题名
检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立
被引量：
2
1
作者
姚新生
马骊
温茜
邹红云
阮光平
杨介钻
王小宁
机构
南方医科大学-原第一军医大学生物技术学院分子免疫学研究所
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期342-345,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划基金资助(973子课题项目:2001CB510008)
文摘
目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BWLinker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(TALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BWlinker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定。结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端,在2例TALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LMPCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合。结论:1例胸腺组织和2例TALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCRBD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LMPCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。
关键词
连接介导PCR(LM-PCR)
胸腺
基因重排
重组信号序列
(RSS)
Keywords
Ligation-mediated PCR（LM-PCR）
Rearrangement
Recombination signal sequence（RSS）
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析
2
作者
李敏
陈丽梅
林爱星
杨兴元
安晓荣
陈永福
机构
中国农业大学农业生物技术国家重点实验室
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期857-864,共8页
基金
国家高技术"863"计划资助项目(2002AA206311).~~
文摘
根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中.
关键词
Holstein牛
胚系基因
抗体
抗体重链恒定区μ基因(Cμ)
抗体重链可变区J基因(JH)
重组信号序列
(RSS)
Keywords
Holstein bovine, germline gene, immunoglobulin, immunoglobulin heavy chain constant region μ gene （Cμ）, immunoglobulin heavy chain joining region （JH）, recombination signal sequence （RSS）
分类号
Q951.3 [生物学—动物学]
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
RSSs的组成和特征对体细胞V(D)J基因重排效率的影响
3
作者
姚新生
机构
遵义医科大学免疫学教研室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第17期2156-2160,2164,共6页
基金
国家自然科学基金(81860300)
贵州省百层次人才基金[No.(2018)5637]资助。
文摘
T/B细胞的多样性源于V(D)J基因片段重排,重排所形成的TCR/BCR组库中,各V(D)J基因的表达频率与其在初始重组中的利用、自身耐受过程中的选择、克隆增生中的应答相关,但V(D)J基因在初始重组中利用效率差异的研究较少。影响V(D)J基因重排利用的因素和机制复杂,重组信号序列(RSSs)的heptamer、nonamer、spacer的组成和特征发挥重要作用。本文将对保守与改变的RSSs对体细胞重排V(D)J基因利用效率的影响进行综述。
关键词
重组信号序列
体细胞基因重排
可变区基因片段
连接区基因片段
多样区基因片段
TCR/BCR受体库
Keywords
Recombination signal sequences(RSSs)
Somatic rearrangement
Varliable gene segment
Joining gene segment
Diverstiy gene segaments
TCR/BCR repertoire
分类号
R392.2 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立
姚新生
马骊
温茜
邹红云
阮光平
杨介钻
王小宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析
李敏
陈丽梅
林爱星
杨兴元
安晓荣
陈永福
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
RSSs的组成和特征对体细胞V(D)J基因重排效率的影响
姚新生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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