重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选 被引量：7

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作者 杨光勇 郭海涛 +5 位作者 刘茜明 何光志 田维毅 蔡琨 王平 王文佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期829-833,共5页

目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制... 目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素4(rhil-4r) 噬菌体展示技术 单链抗体

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重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制 被引量：9

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作者 陈祥 张成全 +4 位作者 徐正中 孟闯 黄金林 潘志明 焦新安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-656,共4页

目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以... 目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 重组牛白细胞介素4 原核表达 单克隆抗体

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猪白细胞介素-4重组蛋白的纯化及其生物学特性分析 被引量：4

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作者 陈国华 景志忠 +3 位作者 窦永喜 蒙学莲 张巧颖 宋世斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1072-1076,共5页

用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸... 用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸铵沉淀和Sephadex-G100凝胶层析柱进一步纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。在体外利用MTT法检测其生物学特性,结果表明其具有较好的生物学活性,本试验为获得猪IL-4重组蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素4 重组表达 纯化 活性分析

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疏水层析纯化人重组白细胞介素－4

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作者 戴燕 李燕 +2 位作者 刘洁 王宏 陈慰峰 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第1期83-87,共5页

应用疏水层析对大肠杆菌表达的人重组白细胞介素－４（ｒｈＩＬ－４）进行了纯化，含有ｒｈＩＬ－４的包涵体，经洗涤、变性、复性后，以Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到了高纯度的ｒｈＩＬ－４．纯度达９７％；回收率为３２... 应用疏水层析对大肠杆菌表达的人重组白细胞介素－４（ｒｈＩＬ－４）进行了纯化，含有ｒｈＩＬ－４的包涵体，经洗涤、变性、复性后，以Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到了高纯度的ｒｈＩＬ－４．纯度达９７％；回收率为３２％；比活性为２×１０~７Ｕ／ｍｇ，讨论了ｒｈＩＬ－４疏水层析的条件，并对不同的方法纯化白细胞介素－４进行了比较． 展开更多

关键词 重组 白细胞介素-4 疏水层析 制备

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重组人白细胞介素-4对人肺腺癌细胞SPC-A_1/TAX化疗增敏研究

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作者 林安华 李羲 《中国肺癌杂志》 CAS 2005年第3期233-235,共3页

关键词 人肺腺癌细胞SPC-A1 白细胞介素-4 化疗增敏 细胞多药耐药性 TAX 重组人 rhil-4 化疗药物 癌细胞分化 上升趋势 综合治疗 化疗失败 逆转方法 产生机制 肿瘤细胞 肺癌 死亡率 发病率 可替代 针对性 敏感性 MDr 严重 临床

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人白细胞介素4介导LPAK细胞体内外抗肿瘤作用研究

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作者 许树旭 崔清江 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期278-278,共1页

应用rhIL-2和PHA诱导人外周血单个核细胞得到的杀伤细胞称为LPAK细胞。本文研究了rIL-4介导的LPAK细胞在体外杀伤人胃癌细胞BGC803的细胞毒作用，和体内对Lewis肺癌的抗瘤作用。电镜观察了rIL-4对肿瘤的损伤作用。研究结果初步表明：rI... 应用rhIL-2和PHA诱导人外周血单个核细胞得到的杀伤细胞称为LPAK细胞。本文研究了rIL-4介导的LPAK细胞在体外杀伤人胃癌细胞BGC803的细胞毒作用，和体内对Lewis肺癌的抗瘤作用。电镜观察了rIL-4对肿瘤的损伤作用。研究结果初步表明：rIL-4在体内抗肿瘤作用的发挥，可能主要依靠机体的免疫机制， 展开更多

关键词 体内 IL-4 抗肿瘤作用 介导 人白细胞介素4 LEWIS肺癌 rhil-2 人外周血单个核细胞 PHA 损伤作用

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究 被引量：4

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作者 杨晓璐 闫若潜 +6 位作者 吴志明 刘梅芬 张代宝 张书阳 王淑娟 赵雪丽 刘毅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期175-178,共4页

为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试... 为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）中CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分含量以及CD4^＋/CD8^＋比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3～14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^＋CD4^＋细胞百分含量,降低CD3^＋CD8^＋细胞的百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值;接种后3～7d期间,第2组鸡的CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞含量及CD4^＋/CD8^＋比值与PBS对照组（第1组）相比差异均极显著（P〈0.01）,第3组与第1组相比差异均显著（P〈0.05）。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^＋/CD8^＋比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。 展开更多

关键词 重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白 重组鸡α干扰素蛋白 T淋巴细胞亚群 CD4^+/CD8^+比值 免疫功能

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rhIL-1ra对儿童自身免疫性甲状腺病IFN-γ/IL-4水平失衡的影响 被引量：1

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作者 董文斌 邓蕾丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期146-147,共2页

关键词 自身免疫甲状腺病 γ-干扰素 白细胞介素-4 白细胞介素-1 rhil-1ra 儿童

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不同刺激因子对人气道平滑肌细胞白细胞介素-22R1表达的影响

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作者 张旃 罗雅玲 +6 位作者 周丽丽 赖文岩 徐建 黎振兴 任敦强 叶涵 钟浩海 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期979-982,共4页

目的探讨哮喘血清、地塞米松、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)等不同刺激因子对人气道平滑肌细胞白细胞介素-22R1(IL-22R1)mRNA及蛋白表达的影响。方法用免疫荧光PCR检测不同因素刺激下人气道平滑肌细... 目的探讨哮喘血清、地塞米松、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)等不同刺激因子对人气道平滑肌细胞白细胞介素-22R1(IL-22R1)mRNA及蛋白表达的影响。方法用免疫荧光PCR检测不同因素刺激下人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA的表达,用Westernblot检测人不同因素刺激下的人气道平滑肌细胞IL-22R1蛋白的表达,比较不同组别之间的差异。结果哮喘血清刺激下的人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA升至对照组345倍,而蛋白表达明显增强(P<0.01);加用地塞米松后IL-22R1mRNA降至对照组10倍,蛋白表达较仅用哮喘血清刺激明显减弱(P<0.01)。IL-4、IFN-γ、TGF-β刺激后人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA及蛋白表达均显著性增加。结论 IL-22R1表达的改变可能参与支气管哮喘的病程,影响人气道平滑肌细胞IL-22R1受体的表达可能是地塞米松发挥其在支气管哮喘病程中作用的机制之一。IFN-γ、IL-4、TGF-β对气道平滑肌细胞IL-22R1的作用可能是其对支气管哮喘疾病产生影响的机制之一。 展开更多

关键词 人气道平滑肌细胞白细胞介素-22r1 人气道平滑肌细胞 白细胞介素-4 干扰素Γ 转化生长因子-Β

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离子交换柱层析法纯化重组人IL－4

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作者 王宏 王锦娟 +2 位作者 李燕 刘洁 陈慰峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第5期468-472,共5页

用离子交换层析法一步纯化重组人白细胞介素４，该方法简单易行，对样品不产生稀释作用；所得产品具有高纯度（≥９５％），高生物学活性（≥１０ＭＵ／ｍｇ）和低毒性（内毒素含量≤０．５ＺＵ／Ｌ）的特点，可满足实验室工作的需要．... 用离子交换层析法一步纯化重组人白细胞介素４，该方法简单易行，对样品不产生稀释作用；所得产品具有高纯度（≥９５％），高生物学活性（≥１０ＭＵ／ｍｇ）和低毒性（内毒素含量≤０．５ＺＵ／Ｌ）的特点，可满足实验室工作的需要．当与凝胶过滤法结合使用时，所得产品纯度可达９８％，生物学活性进一步提高． 展开更多

关键词 重组白细胞介素 人白细胞介素4 提纯 离子交换

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rIL-18对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/Th2免疫应答的影响

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作者 熊盛道 徐国鹏 熊维宁 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期546-546,共1页

关键词 TH1/TH2免疫应答 BALB/C小鼠 肺炎链球菌肺炎 IL-4MrNA 支气管肺泡灌洗液 重组白细胞介素 PCr法检测 IFN-γ

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