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乳铁蛋白的免疫化学分析法——酶联免疫吸附测定法 被引量：15
1
作者 卢蓉蓉 孙震 +1 位作者 许时婴 王璋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第4期102-104,共3页
应用酶联免疫法测定初乳中乳铁蛋白的含量。检测的线性范围为３．１～２００　ｎｇ／ｍｌ，最小检测限为１．５　ｎｇ／ｍｌ，回收率在９１．８２％～１１５．５６　％之间，变异系数在６．２０％～９．１８　％之间。
关键词 乳铁蛋白 免疫化学分析法 酶联免疫吸附测定法
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完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染 被引量：4
2
作者 吕斌 吴少廷 +5 位作者 周宜开 徐顺清 张仁利 高世同 林敏 张志仁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期134-137,共4页
为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达... 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 . 展开更多
关键词 完整弓形虫表面抗原 P35-GST蛋白 弓形虫感染 IgM-酶联免疫吸附测定法
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异戊烯基腺苷组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法的建立 被引量：14
3
作者 陈以峰 周燮 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1996年第1期97-102,共6页
从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：... 从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：３４５００。交叉反应试验表明该抗血清只识别ｉＰＡ组细胞分裂素。因此本研究中采用直接型（即固相抗体型）ＥＬＩＳＡ，并将最佳免疫反应平衡时间缩短至３０ｍｉｎ（４℃）。所建立的ｉＰＡ组ＥＬＩＳＡ检测极限为４．７ｆｍｏｌｉＰＡ／孔，线性检测范围０．０１～５０ｐｍｏｌｉＰＡ／孔，板内、板间的变异系数分别为３．７％和５．３％。样品的稀释曲线与标准曲线平行，回收率为８７．１％，表明本研究中采用的８０％甲醇提取、Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱初纯化的快速制样程序适合于该ＥＬＩＳＡ。对大豆植株不同部位ｉＰＡｓ含量测定结果表明，根瘤与根尖内ｉＰＡｓ含量显著高于幼叶与顶芽内的ｉＰＡｓ含量。 展开更多
关键词 细胞分裂素 异戊烯基腺苷 酶联免疫吸附测定法
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酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立 被引量：2
4
作者 叶茂 韩双艳 +2 位作者 林影 唐语谦 王小宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1113-1117,共5页
以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yea... 以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性. 展开更多
关键词 酵母表面展示 抗体检测 酶联免疫吸附测定法
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三唑磷酶联免疫吸附测定法中包被抗体稳定剂的研究 被引量：1
5
作者 桂文君 梁赤周 +2 位作者 王姝婷 王春梅 朱国念 《农药学学报》 CAS CSCD 2007年第2期165-171,共7页
选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇（PEG）、卵清蛋白（OVA）、多肽、糖、氨基酸等试剂,通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂,对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理（37℃,1h）后,再在37℃下连续贮存7d,利用直接竞争EL... 选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇（PEG）、卵清蛋白（OVA）、多肽、糖、氨基酸等试剂,通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂,对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理（37℃,1h）后,再在37℃下连续贮存7d,利用直接竞争ELISA法对不同稳定剂处理的包被抗体免疫活性、亲合性及检测灵敏度进行检测,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选得到效果较好的稳定剂1（质量分数：甘油2.5%,氨基酸1.5%,蛋白胨3.0%,离子螯合剂0.1%,防腐剂0.01%）。用稳定剂1处理包被抗体后,4-6℃下保存半年及37℃下保存14d的试验结果表明,抗体的活性相对保持率分别为97.8%和94.2%;其免疫活性、亲合性（I50分别为68.43和54.38ng/mL）及灵敏度（I10分别为3.72和3.22ng/mL）与常规方法包被的抗体（包被好后不贮存,直接检测,I50为60.73ng/mL,I10为3.11ng/mL）无明显差异;冻融试验表明,经稳定剂1处理的三唑磷抗体在反复冻-融次数不超过8次时其活性也是稳定的。说明筛选出的稳定剂可以显著提高三唑磷多克隆包被抗体的稳定性,可用于三唑磷ELISA试剂盒的生产。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 稳定剂 三唑磷 多克隆抗体
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灵芝酸A多克隆抗体制备及酶联免疫吸附测定法的建立 被引量：4
6
作者 袁耀武 田益玲 +2 位作者 李升云 杨心怡 马晓飞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第16期332-337,共6页
以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中... 以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6~27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%~118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。 展开更多
关键词 灵芝酸A 多克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附测定法
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电鳐乙酰胆碱酯酶标记第二抗体酶联免疫吸附测定法 被引量：1
7
作者 李前 李凤珍 +1 位作者 孙曼霁 刘伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期469-471,共3页
目的:以电鳐乙酰胆碱酯酶标记二抗,建立该酶的酶联免疫吸附方法。方法:采用改良高碘酸钠氧化法。结果:标记过程中对AChE的酶活性影响较大的因素有pH值,温度以及NaIO4浓度。AChE酶标记的羊抗小鼠IgG的效价至少高于HRP,酶标记的羊抗小鼠Ig... 目的:以电鳐乙酰胆碱酯酶标记二抗,建立该酶的酶联免疫吸附方法。方法:采用改良高碘酸钠氧化法。结果:标记过程中对AChE的酶活性影响较大的因素有pH值,温度以及NaIO4浓度。AChE酶标记的羊抗小鼠IgG的效价至少高于HRP,酶标记的羊抗小鼠IgG一个数量级。结论:制备的乙酰胆碱酯酶标记第二抗体在酶联免疫吸附测定法中高效地取代辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶标记第二抗体。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 电鳐乙酰胆碱酯酶 高碘酸钠氧化法 乙酰胆碱酯酶标记二抗 酶标抗体结合物
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ELISA酶联免疫吸附测定法简介 被引量：7
8
作者 蒲健 冯晓红 《肉类研究》 2002年第2期41-41,40,共2页
近年来由于工业"三废"处理不当,引起了对农作物、畜禽及水产品的污染;农业与畜牧业生产中大量使用农药、化肥、抗生素、生长素,引起农药、抗生素、生长素残留超标;流通过程中的保存、包装不当造成霉菌、毒素的污染;在食品的... 近年来由于工业"三废"处理不当,引起了对农作物、畜禽及水产品的污染;农业与畜牧业生产中大量使用农药、化肥、抗生素、生长素,引起农药、抗生素、生长素残留超标;流通过程中的保存、包装不当造成霉菌、毒素的污染;在食品的生产环节中,不法者为了牟取暴利掺杂、使假、滥用添加物质引起的食品安全问题不断发生. 展开更多
关键词 ELISA酶联免疫吸附测定法 猪肉 盐酸克伦特罗 瘦肉精 质量检测
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酶联免疫吸附测定法及在兽药饲料分析中的应用 被引量：7
9
作者 田颖 李玉文 《中国饲料》 北大核心 2004年第10期33-34,共2页
关键词 酶联免疫吸附测定法 兽药分析 饲料分析 竞争分析模式 工作原理
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小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)的建立 被引量：4
10
作者 王兆华 宋希云 +2 位作者 张恩盈 张元景 吕俊华 《莱阳农学院学报》 2006年第3期161-164,169,共5页
通过对比试验研究了蛋白提取液、提取时间、还原剂DTT、封闭液、包被物与抗体浓度等对小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体的影响,建立了适宜于小麦胚乳醇溶蛋白(G liad in)和低分子量谷蛋白亚基(Low molecu lar we ight glute-n in subun it,LM... 通过对比试验研究了蛋白提取液、提取时间、还原剂DTT、封闭液、包被物与抗体浓度等对小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体的影响,建立了适宜于小麦胚乳醇溶蛋白(G liad in)和低分子量谷蛋白亚基(Low molecu lar we ight glute-n in subun it,LMW-GS)多克隆抗体的间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)。 展开更多
关键词 小麦 贮藏蛋白 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定法
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酶联免疫吸附测定法检测青虫菌工业产品中晶体蛋白的含量
11
作者 洪华珠 王大庆 丁宜斌 《中国生物防治学报》 CSCD 1990年第S1期88-89,共2页
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的研究和应用在国内有很大进展。用于生物防治的青虫菌(B.t.subsp.galleriae)已进入工业化生产,其产品中伴孢晶体蛋白含量的检测方法在探索中。酶联免疫吸附测定法(ELISA),作为一项新兴的免疫化学技... 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的研究和应用在国内有很大进展。用于生物防治的青虫菌(B.t.subsp.galleriae)已进入工业化生产,其产品中伴孢晶体蛋白含量的检测方法在探索中。酶联免疫吸附测定法(ELISA),作为一项新兴的免疫化学技术,具有灵敏、精确、迅速的特点,已被用于苏云金杆菌晶体蛋的测定。 展开更多
关键词 青虫菌 晶体蛋白 酶联免疫吸附测定法 工业产品 晶体毒素 昆虫学研究所 OD值 苏云金杆菌 华中师范大学 B.t.
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双模态改良型酶联免疫吸附测定法用于黄曲霉毒素B 1 的检测研究 被引量：4
12
作者 张光胤 蔡爱丽 +2 位作者 邓放明 赵倩 石星波 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期224-230,共7页
食品中真菌毒素的污染问题已经引起了广泛关注,而传统的酶联免疫吸附检测方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)中的灵敏度不能满足痕量检测需求。该文拟对传统ELISA进行改进,建立一种比色与热双模态改良型ELISA用于真菌毒素... 食品中真菌毒素的污染问题已经引起了广泛关注,而传统的酶联免疫吸附检测方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)中的灵敏度不能满足痕量检测需求。该文拟对传统ELISA进行改进,建立一种比色与热双模态改良型ELISA用于真菌毒素的检测。使用亲和素化的磁纳米颗粒(magnetic nanoparticles,MNPs)为载体富集辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),与生物素化的黄曲霉毒素B 1核酸适配体(aptamer,Apt)制备复合物(MNPs@Apt@HRP)为检测探针。以核酸适配体与抗体组合作为识别元件,3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)-H 2O 2的显色反应和氧化态TMB的光热反应为信号输出,实现了检测黄曲霉毒素B 1的高灵敏及高选择性的比色及热信号的双模态检测,检测灵敏度分别达到了2.47×10^(-12 )g/L及3.79×10^(-13) g/L,并将该方法成功应用于部分食品中黄曲霉毒素B 1的检测。 展开更多
关键词 改良型酶联免疫吸附测定法 适配体 磁纳米颗粒 比色信号 热信号
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猪尿中克伦特罗检测方法——酶联免疫吸附测定法 被引量：6
13
《中国兽药杂志》 2002年第12期12-13,共2页
关键词 猪尿 克伦特罗 检测方法 酶联免疫吸附测定法 动物源食品
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生猪尿液中盐酸克伦特罗残留测定方法——酶联免疫吸附测定法
14
作者 赖碧清 黄理芳 《广东畜牧兽医科技》 2002年第4期41-41,45,共2页
通过酶联免疫反应测定尿液中盐酸克伦特罗的含量,该方法适用于猪尿中盐酸克伦特罗残留的常规快速筛选检测。
关键词 生猪 尿液 盐酸克伦特罗残留 测定方法 酶联免疫吸附测定法
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酶联免疫吸附分析法测定水样中的毒死蜱 被引量：8
15
作者 韩丽君 钱传范 +2 位作者 李文明 江树人 王小如 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期35-37,共3页
自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经... 自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经简单前处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得水样中毒死蜱的添加回收率为93.40%～102.1%,C.V为4.04%～5.18%,在水样中的最低检出浓度为0.08μg/L,检测灵敏度远高于GC,符合农药残留检测的要求。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 毒死蜱 水样 残留检测
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酶联免疫吸附分析法测定土壤中的毒死蜱 被引量：7
16
作者 韩丽君 钱传范 +2 位作者 李文明 江树人 王小如 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第8期53-56,共4页
采用自制多克隆抗体,考察了pH值和甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了土壤中毒死蜱的残留检测ELISA方法.试验表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8 μg/L, 方法检出限为5.2 μg/L.土壤样品经简单前处理后,... 采用自制多克隆抗体,考察了pH值和甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了土壤中毒死蜱的残留检测ELISA方法.试验表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8 μg/L, 方法检出限为5.2 μg/L.土壤样品经简单前处理后,分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得土壤中毒死蜱的添加回收率为80.33%～83.36%,CV为5.28%～9.83%,最低检出限为 0.005 mg/kg,与GC测定结果基本相当,符合农药残留分析的要求. 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 毒死蜱 土壤 残留检测
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酶联免疫吸附法测定猪尿中安定的残留
17
作者 岳秀英 彭莉 +4 位作者 程江 高岚 熊浩山 官艳丽 吴晓岚 《四川畜牧兽医》 2007年第7期21-21,23,共2页
用酶联免疫吸附法对猪尿中残留的安定进行检测,结果得出该方法的最低检出限为5.0μg/L;回收率在60%以上,批内变异系数≤17%,批间变异系数小于≤14%。表明该方法可用于安定残留量的筛选检测。
关键词 猪尿 安定 残留 酶联免疫吸附测定法
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吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立 被引量：7
18
作者 李广领 姜金庆 +2 位作者 陈锡岭 张淑静 王自良 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期228-233,共6页
通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行... 通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性。在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株。结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克隆抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10-6～3.24×10-4mg/mL(R2=0.9928),最低检测限为8.00×10-6mg/mL。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 残留 酶联免疫吸附测定法
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用酶联免疫吸附法测定畜产品、饲料中β-兴奋剂类药物 被引量：4
19
作者 孙作刚 赵晓凤 《草食家畜》 2017年第6期31-37,共7页
本实验采用酶联免疫吸附法测定β-兴奋剂类药物,在添加浓度为0.5μg/L,1.0μg/L的空白尿液中的回收率均在88.6%~110.3%之间;在添加浓度25μg/kg,50μg/kg的空白猪配合饲料中的回收率均在83.1%~106.2%之间;在添加浓度为0.5μg/kg,1.0μg... 本实验采用酶联免疫吸附法测定β-兴奋剂类药物,在添加浓度为0.5μg/L,1.0μg/L的空白尿液中的回收率均在88.6%~110.3%之间;在添加浓度25μg/kg,50μg/kg的空白猪配合饲料中的回收率均在83.1%~106.2%之间;在添加浓度为0.5μg/kg,1.0μg/kg的空白羊肉中的回收率均在73.6%~106.3%之间;在添加浓度为0.5μg/kg,1.5μg/kg的空白牛肉中的回收率在76.5%~106.5%之间。各添加浓度的批内、批间变异系数均小于11%,满足残留检测方法回收率在60%~120%;批内、批间变异系数小于等于20%的要求。结论:用酶联免疫吸附法可对畜产品、饲料中β-兴奋剂类药物残留进行初步筛选,对疑似阳性样品再用仪器方法确认。 展开更多
关键词 β-兴奋剂类药物 畜产品 饲料 酶联免疫吸附测定法
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酶联免疫吸附测定法 被引量：1
20
《生物技术产业》 2007年第02X期76-79,共4页
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种灵敏度、特异性和精度都十分优良的测定方法。在诊断、疾病监控以及研究用途方面得到了广泛的运用。现在还在对其进行开发，以简化工序，提高灵敏度。此讲由SRL公司试药部的原田弘智对其进行讲解。
关键词 酶联免疫吸附测定法 高灵敏度 测定方法 疾病监控
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