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纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度 被引量：2
1
作者 刘颖达 刘海媛 +5 位作者 苏娜 李庆辉 刘佳 TUYATSETSEG Jambel 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期291-299,共9页
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容... 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。 展开更多
关键词 竞争性酶联免疫吸附实验 纳米抗体 多聚化 灵敏度增强方法
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环鸟苷酸兔单克隆抗体的制备和竞争酶联免疫吸附测定方法的建立 被引量：1
2
作者 谭兴梅 胡海峰 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期423-428,共6页
目的：研制环鸟苷酸（cGMP）兔单克隆抗体，并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。方法：用人工合成的环鸟苷酸一钥孔血蓝蛋白（cGMP-KLH）免疫新西兰大白兔，采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体；应用cGMP... 目的：研制环鸟苷酸（cGMP）兔单克隆抗体，并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。方法：用人工合成的环鸟苷酸一钥孔血蓝蛋白（cGMP-KLH）免疫新西兰大白兔，采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体；应用cGMP兔单克隆抗体建立竞争ELISA方法，并对该方法的特异性、精密度和回收率进行测定。结果：所制备的cGMP兔单克隆抗体的效价为3．1．g／mL，50％抑制浓度（IC50）为12．57ng／mL。与环磷酸肌苷的交叉反应率为33．1％，与其他结构类似的化合物无交叉反应。所建立的cGMP竞争ELISA方法的检测范围为0～120ng／mL，最低检测限为1．95ng／mL，回收率为89％～103％，批次内和批次间的精密度分别小于11．68％和13．85％。结论：成功制备高效价、高特异性的cGMP兔单克隆抗体，并建立了测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。 展开更多
关键词 环GMP 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定 兔
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猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体间接酶联免疫吸附测定方法的建立与应用 被引量：4
3
作者 谢晓妍 石玉佩 +3 位作者 李潇南 段燕方 张永红 周双海 《北京农学院学报》 2022年第1期66-69,共4页
【目的】建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法。【方法】以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步... 【目的】建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法。【方法】以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步临床应用。【结果】确定检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法的各项最佳反应条件;仅有猪圆环病毒3型阳性血清的检测结果为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数和批间变异系数都小于5%,显示出良好的可重复性。在来源于北京地区与河北地区的318份猪的血清中检出猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体阳性率为32.70%,表明这两个地区存在较多的猪圆环病毒3型感染。【结论】建立了一种具有良好特异性和可重复性的检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,可用于猪圆环病毒3型抗体的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 衣壳蛋白 间接酶联免疫吸附测定方法 抗体检测
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菊酯类农药酶联免疫吸附测定研究进展 被引量：14
4
作者 刘廷凤 杨敏娜 +2 位作者 刘亚子 顾颖 孙成 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期100-102,共3页
介绍了菊酯类农药残留的酶联免疫分析(ELISA)的技术原理、关键技术环节,综述了国内外的酶联免疫测定菊酯类农药残留的研究动态,并展望了此技术的发展及应用前景。
关键词 酶联免疫吸附测定(ELISA) 拟除虫菊酯 农药 进展
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酶联免疫吸附分析法测定水样中的毒死蜱 被引量：8
5
作者 韩丽君 钱传范 +2 位作者 李文明 江树人 王小如 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期35-37,共3页
自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经... 自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经简单前处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得水样中毒死蜱的添加回收率为93.40%～102.1%,C.V为4.04%～5.18%,在水样中的最低检出浓度为0.08μg/L,检测灵敏度远高于GC,符合农药残留检测的要求。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 毒死蜱 水样 残留检测
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酶联免疫吸附方法测定酱油中黄曲霉毒素B1 被引量：7
6
作者 熊剑娟 《中国调味品》 CAS 北大核心 1999年第4期27-28,共2页
到目前为止，食品中黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法主要有薄层色谱法〔１〕，气相色谱（ＧＣ）及高级液相色谱（ＨＰＬＣ）法等。国标中食品黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法为薄层层析法，该法不仅样品处理繁琐，试剂消耗大，而且在检出阳性或假阳... 到目前为止，食品中黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法主要有薄层色谱法〔１〕，气相色谱（ＧＣ）及高级液相色谱（ＨＰＬＣ）法等。国标中食品黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法为薄层层析法，该法不仅样品处理繁琐，试剂消耗大，而且在检出阳性或假阳性样品时需在多块薄层板上经反复分离... 展开更多
关键词 酱油 黄曲霉毒素B1 测定 酶联免疫吸附
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吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立 被引量：7
7
作者 李广领 姜金庆 +2 位作者 陈锡岭 张淑静 王自良 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期228-233,共6页
通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行... 通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性。在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株。结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克隆抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10-6～3.24×10-4mg/mL(R2=0.9928),最低检测限为8.00×10-6mg/mL。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 残留 酶联免疫吸附测定法
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以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究 被引量：19
8
作者 刘仁荣 余宙 +1 位作者 何庆华 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期174-177,共4页
本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒... 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%～116%,变异系数为9.4%～19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6～2.56μg/kg之间。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 人工抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析方法
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乳铁蛋白的免疫化学分析法——酶联免疫吸附测定法 被引量：15
9
作者 卢蓉蓉 孙震 +1 位作者 许时婴 王璋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第4期102-104,共3页
应用酶联免疫法测定初乳中乳铁蛋白的含量。检测的线性范围为３．１～２００　ｎｇ／ｍｌ，最小检测限为１．５　ｎｇ／ｍｌ，回收率在９１．８２％～１１５．５６　％之间，变异系数在６．２０％～９．１８　％之间。
关键词 乳铁蛋白 免疫化学分析法 酶联免疫吸附测定法
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检测T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法的研究 被引量：8
10
作者 曹艳红 孟宪清 +2 位作者 冯杰 惠洋 孙殿军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期132-135,共4页
目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上，结合市售抗T-2毒素单克隆抗体，建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法粮食样品经70％甲醇-水溶液提取，用滤纸过滤并稀释后。再用0．45μm滤器过滤净化... 目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上，结合市售抗T-2毒素单克隆抗体，建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法粮食样品经70％甲醇-水溶液提取，用滤纸过滤并稀释后。再用0．45μm滤器过滤净化，该滤液用于ELISA检测。结果本方法最低检出量为0．125ng／ml，添加70-280ng／g T-2毒素的大米样品和面粉样品的平均回收率分别为85～117．5％和98．1～102．5％。结论结果表明，该方法简化了粮样提取步骤。可用于谷物及加工产品中T-2毒素的检测。 展开更多
关键词 T-2毒素 直接竞争性酶联免疫吸附测定 谷物
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酶联免疫吸附分析法测定土壤中的毒死蜱 被引量：7
11
作者 韩丽君 钱传范 +2 位作者 李文明 江树人 王小如 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第8期53-56,共4页
采用自制多克隆抗体,考察了pH值和甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了土壤中毒死蜱的残留检测ELISA方法.试验表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8 μg/L, 方法检出限为5.2 μg/L.土壤样品经简单前处理后,... 采用自制多克隆抗体,考察了pH值和甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了土壤中毒死蜱的残留检测ELISA方法.试验表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8 μg/L, 方法检出限为5.2 μg/L.土壤样品经简单前处理后,分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得土壤中毒死蜱的添加回收率为80.33%～83.36%,CV为5.28%～9.83%,最低检出限为 0.005 mg/kg,与GC测定结果基本相当,符合农药残留分析的要求. 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定法 毒死蜱 土壤 残留检测
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竞争酶联免疫吸附方法检测氯霉素假阳性原因和质量控制的探讨 被引量：12
12
作者 周宏琛 朱涛 +2 位作者 闫秋成 王勇 田晓林 《水产科学》 CAS 北大核心 2007年第2期123-124,共2页
关键词 酶联免疫吸附方法(ELISA) 氯霉素 假阳性
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用于测定多环芳烃的酶联免疫吸附分析法的研究 被引量：7
13
作者 张彦峰 张清敏 +1 位作者 高志贤 戴树桂 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期537-540,共4页
将芘丁酸(1-pyrenebutyricacid,PBA)通过活性酯法与牛血清白蛋白(BSA)共价结合,以PBA-BSA结合物为免疫原制备抗血清,利用该抗血清建立了测定多环芳烃类物质的间接竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA),并研究... 将芘丁酸(1-pyrenebutyricacid,PBA)通过活性酯法与牛血清白蛋白(BSA)共价结合,以PBA-BSA结合物为免疫原制备抗血清,利用该抗血清建立了测定多环芳烃类物质的间接竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA),并研究了10种多环芳烃与该抗血清的交叉反应。结果表明,该方法用于测定芘和芘丁酸的IC50值分别为0.132mg·L-1和0.253mg·L-1,检出限分别为0.1mg·L-1和0.01mg·L-1,该方法不受溶剂甲醇的影响,因此可以用于经过预富集的环境样品中多环芳烃类物质的测定。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附分析法(ELISA) 多环芳烃(PAHs) 芘 测定
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高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值 被引量：9
14
作者 赵冰 侯萍 +4 位作者 黄静 贺文从 欧喜超 刘东鑫 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第12期1303-1308,共6页
目的评价以结核分枝杆菌（MTB）分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法（high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA）用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本，分别进... 目的评价以结核分枝杆菌（MTB）分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法（high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA）用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本，分别进行BACTEC MGIT960液体培养（简称“MGIT960培养”）、MTB／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统（Gene Xpert MTB／RIF，简称“Xpert检测”）和HI-ELISA检测，通过与MGIT 960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能。结果本研究97份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36．08％（35／97）、32．99％（32／97）；与MGIT 960培养比较，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88．57％（31／35）、98．39％（61／62）、94．85％（92／97）。在Xpert检测阳性的66份痰标本中，MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51．51％（34／66）、48．48％（32／66）；与MGIT 960培养相比，HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91．18％（31／34）、96．88％（31／32）、93．93％（62／66）。Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中，仅有1份标本的MGIT960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB，其他30份标本检测结果全部相符，符合率为96．77％（30／31）。结论HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌，对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分泌蛋白 MPB64 酶联免疫吸附测定 敏感性与特异性 诊断
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鸡血浆纤维连接蛋白的提纯及酶联免疫吸附检测方法的建立 被引量：6
15
作者 梁礼成 刘建华 +2 位作者 赵继勋 金久善 王刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期324-329,共6页
利用纤维连接蛋白 (FN)与明胶特异结合的特点 ,用明胶亲和层析结合电泳裁胶的方法提纯鸡血浆FN并制备了兔抗鸡FN抗血清。纯化的FN经凝胶电泳鉴定为一条蛋白带且与人FN在同一位置上 ,亚单位分子量约 2 3 0KDa ;经免疫鉴定 ,提纯鸡血浆FN... 利用纤维连接蛋白 (FN)与明胶特异结合的特点 ,用明胶亲和层析结合电泳裁胶的方法提纯鸡血浆FN并制备了兔抗鸡FN抗血清。纯化的FN经凝胶电泳鉴定为一条蛋白带且与人FN在同一位置上 ,亚单位分子量约 2 3 0KDa ;经免疫鉴定 ,提纯鸡血浆FN与兔抗人FN抗体有交叉反应性。用兔抗鸡FN抗体包被捕捉抗原 ,建立了检测鸡血浆FN的双抗体酶联免疫吸附法(ELISA) ,此法具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点 ,适用于鸡血浆FN的检测。鸡血浆FN的提纯及其检测方法的建立 ,为FN在兽医领域的进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 纤维连接蛋白 明胶亲和层析 提纯 检测方法 鸡 酶联免疫吸附法 血浆型 电泳凝胶
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应用酶联免疫吸附测定检测鸡血液中抗新城疫病毒抗体的动力学研究 被引量：3
16
作者 高维凡 宋世勇 +3 位作者 韩露 杜绍范 李义 宁志利 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 1997年第3期214-217,共4页
应用新城疫ＬａＳｏｔａ系疫苗接种１日龄雏鸡并在２１日龄用ＬａＳｏｔａ系疫苗及油佐剂灭活苗联合接种。应用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）检测鸡血液中抗体水平，并在３０，６０日龄进行攻毒试验。结果表明... 应用新城疫ＬａＳｏｔａ系疫苗接种１日龄雏鸡并在２１日龄用ＬａＳｏｔａ系疫苗及油佐剂灭活苗联合接种。应用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）检测鸡血液中抗体水平，并在３０，６０日龄进行攻毒试验。结果表明：ＨＩ效价与攻毒保护率之间没有相关性，不能真正反映出机体的免疫水平，而ＥＬＩＳＡ用于检测其抗体水平具有很高的敏感性，ＥＬＩＳＡ滴度与攻毒保护率具有相关性，可作为评定机体免疫力的可靠指标。 展开更多
关键词 新城疫 酶联免疫吸附 测定 血凝抑制试验 鸡病
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完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染 被引量：4
17
作者 吕斌 吴少廷 +5 位作者 周宜开 徐顺清 张仁利 高世同 林敏 张志仁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期134-137,共4页
为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达... 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 . 展开更多
关键词 完整弓形虫表面抗原 P35-GST蛋白 弓形虫感染 IgM-酶联免疫吸附测定法
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酶联免疫吸附试验在捕食作用研究中的方法与应用 被引量：8
18
作者 张古忍 古德祥 张文庆 《中国生物防治》 CSCD 1996年第1期33-38,共6页
在评价捕食作用的诸多实验方法中,以高灵敏度和特异性强的酶联免疫吸附试验最有应用前景。它主要包括抗原的提取、抗血清的制备、捕食者的采集与保存、酶联抗体的制备和检测等步骤。其中高效价、特异性强的抗血清的制备是成功的关键。... 在评价捕食作用的诸多实验方法中,以高灵敏度和特异性强的酶联免疫吸附试验最有应用前景。它主要包括抗原的提取、抗血清的制备、捕食者的采集与保存、酶联抗体的制备和检测等步骤。其中高效价、特异性强的抗血清的制备是成功的关键。文中也分析了该方法的优缺点和有待进一步研究的问题,并结合实际阐述了试验所得的阳性反应率在定量评价捕食作用上的具体应用。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附 试验 捕食作用 方法 应用
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酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立 被引量：2
19
作者 叶茂 韩双艳 +2 位作者 林影 唐语谦 王小宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1113-1117,共5页
以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yea... 以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性. 展开更多
关键词 酵母表面展示 抗体检测 酶联免疫吸附测定法
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β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立 被引量：3
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作者 张源淑 钟海涛 +1 位作者 邹思湘 陈伟华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期94-97,共4页
β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7... β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7与牛血清白蛋白(BSA)交联复合物的抗血清;酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶(HRP)交联的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3.3%,板间差异为8.6%,检测灵敏度20ng/ml,检测范围20～320ng/ml,在实验浓度范围内。β-Casomor-phin-7的抗血清与β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性,可用于酪啡肽的体内功能研究。 展开更多
关键词 生理学 β-Casomorphin-7 ELISA 多克隆抗体 检测 酶联免疫吸附分析方法 酪蛋白
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