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酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶基因治疗系统对K562B细胞杀伤效应的初步研究
被引量：
1
1
作者
张雨生
王健民
翟勇平
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期166-169,共4页
目的 :克隆酵母菌胞嘧啶脱氨酶 (YCD)基因 ,观察 YCD/ 5氟胞嘧啶 (YCD/ 5 - FC)系统对转基因肿瘤细胞的杀伤效应。 方法 :扩增 YCD基因并构建 YCD基因重组逆转录病毒载体 ;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染高致瘤细胞K5 6 2 B,筛...
目的 :克隆酵母菌胞嘧啶脱氨酶 (YCD)基因 ,观察 YCD/ 5氟胞嘧啶 (YCD/ 5 - FC)系统对转基因肿瘤细胞的杀伤效应。 方法 :扩增 YCD基因并构建 YCD基因重组逆转录病毒载体 ;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染高致瘤细胞K5 6 2 B,筛选并鉴定阳性转基因克隆 ;以 MTT法检测 5 - FC对 YCD转基因细胞的杀伤效应 ,测定转基因细胞裂解产物对5 - FC→ 5 - FU的转化。结果 :PCR法扩增出全长 YCD基因 ,经测序证实序列正确 ;构建了 MSCV - YCD- IRES- EGFP逆转录病毒载体 ,载体转染包装细胞Ф NX- A,获得滴度为 3.5× 10 6 CFU / m l的逆转录病毒 ;病毒转染 K5 6 2 B,转染率为 30 % ,经筛选获得转基因阳性克隆 YCD- K 5 6 2 B,RT- PCR检测显示 YCD- K5 6 2 B有 YCD基因的 m RNA表达 ,其细胞裂解产物可使 5 - FC转化为 5 - FU,表明其有 CD酶活性 ;MTT法检测低浓度 5 - FC(15μmol/ L )作用 96 h对 YCD- K5 6 2 B有明显的杀伤效应。 结论 :YCD/ 5 - FC系统对转基因肿瘤细胞有明显的杀伤效应。
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关键词
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
5-氟
胞嘧啶
白血病
杀伤效应
逆转录病毒载体
基因治疗
K562B细胞
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职称材料
慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
被引量：
1
2
作者
侯军
陈洁
+4 位作者
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期30-35,共6页
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含...
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含YCD基因的慢病毒载体质粒,体内外观察YCD/5-FC自杀基因系统的杀伤效应。方法:应用亚克隆技术将YCD和绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein,GFP)连接至慢病毒空载体pFUW,构建获得pGC-FU-YCD-GFP。将3质粒系统(含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)脂质体法共转染包装细胞293T,获得的慢病毒转染人Jurkat细胞,流式细胞仪(FACS)和Western blot检测Jurkat/YCD-GFP表达水平;加入前体药物5-FC,观察对靶细胞的杀伤情况和旁观者效应。转基因细胞接种至裸鼠前肢皮下,观察体内肿瘤杀伤情况。结果:慢病毒载体3质粒系统感染293T细胞后,获得的慢病毒滴度为1.2×108 TU/mL。该病毒可高效转染人Jurkat细胞,感染率达96.93%,Western blot显示转基因细胞可分泌YCD蛋白。100μmol/L 5-FC作用96 h可杀伤(89.37±6.57)%的Jurkat/YCD-GFP细胞。混合培养提示存在明显的旁观者效应。转基因细胞可在小鼠体内致瘤,5-FC可明显抑制肿瘤生长。结论:成功构建慢病毒载体pGC-FU-YCD-GFP,YCD/5-FC自杀基因系统在体内外均有显著的特异性杀伤效应。
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关键词
自杀基因
慢病毒载体
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
JURKAT细胞
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职称材料
题名
酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶基因治疗系统对K562B细胞杀伤效应的初步研究
被引量：
1
1
作者
张雨生
王健民
翟勇平
机构
第二军医大学长海医院血液科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期166-169,共4页
基金
上海市博士后科研资助计划
上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划资助项目 (98BR0 2 9)
文摘
目的 :克隆酵母菌胞嘧啶脱氨酶 (YCD)基因 ,观察 YCD/ 5氟胞嘧啶 (YCD/ 5 - FC)系统对转基因肿瘤细胞的杀伤效应。 方法 :扩增 YCD基因并构建 YCD基因重组逆转录病毒载体 ;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染高致瘤细胞K5 6 2 B,筛选并鉴定阳性转基因克隆 ;以 MTT法检测 5 - FC对 YCD转基因细胞的杀伤效应 ,测定转基因细胞裂解产物对5 - FC→ 5 - FU的转化。结果 :PCR法扩增出全长 YCD基因 ,经测序证实序列正确 ;构建了 MSCV - YCD- IRES- EGFP逆转录病毒载体 ,载体转染包装细胞Ф NX- A,获得滴度为 3.5× 10 6 CFU / m l的逆转录病毒 ;病毒转染 K5 6 2 B,转染率为 30 % ,经筛选获得转基因阳性克隆 YCD- K 5 6 2 B,RT- PCR检测显示 YCD- K5 6 2 B有 YCD基因的 m RNA表达 ,其细胞裂解产物可使 5 - FC转化为 5 - FU,表明其有 CD酶活性 ;MTT法检测低浓度 5 - FC(15μmol/ L )作用 96 h对 YCD- K5 6 2 B有明显的杀伤效应。 结论 :YCD/ 5 - FC系统对转基因肿瘤细胞有明显的杀伤效应。
关键词
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
5-氟
胞嘧啶
白血病
杀伤效应
逆转录病毒载体
基因治疗
K562B细胞
Keywords
cytosine deaminase,yeast
fluorocytosine
efficacy,killing
vector,retroviral
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
被引量：
1
2
作者
侯军
陈洁
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
机构
第二军医大学附属长海医院血液科
同济大学附属上海第十人民医院血液科
出处
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期30-35,共6页
文摘
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含YCD基因的慢病毒载体质粒,体内外观察YCD/5-FC自杀基因系统的杀伤效应。方法:应用亚克隆技术将YCD和绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein,GFP)连接至慢病毒空载体pFUW,构建获得pGC-FU-YCD-GFP。将3质粒系统(含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)脂质体法共转染包装细胞293T,获得的慢病毒转染人Jurkat细胞,流式细胞仪(FACS)和Western blot检测Jurkat/YCD-GFP表达水平;加入前体药物5-FC,观察对靶细胞的杀伤情况和旁观者效应。转基因细胞接种至裸鼠前肢皮下,观察体内肿瘤杀伤情况。结果:慢病毒载体3质粒系统感染293T细胞后,获得的慢病毒滴度为1.2×108 TU/mL。该病毒可高效转染人Jurkat细胞,感染率达96.93%,Western blot显示转基因细胞可分泌YCD蛋白。100μmol/L 5-FC作用96 h可杀伤(89.37±6.57)%的Jurkat/YCD-GFP细胞。混合培养提示存在明显的旁观者效应。转基因细胞可在小鼠体内致瘤,5-FC可明显抑制肿瘤生长。结论:成功构建慢病毒载体pGC-FU-YCD-GFP,YCD/5-FC自杀基因系统在体内外均有显著的特异性杀伤效应。
关键词
自杀基因
慢病毒载体
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
JURKAT细胞
Keywords
Suicide gene
Lentiviral vector
Yeast cytosine deaminase
Jurkat cell
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶基因治疗系统对K562B细胞杀伤效应的初步研究
张雨生
王健民
翟勇平
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
侯军
陈洁
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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