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用酵母双杂交体系筛选与FMRP相作用蛋白的cDNA 被引量:4
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作者 陈雨亭 Anne Sittler +4 位作者 余珉 Barbara Bardoni 吴冠芸 Jean Louis Mandel 沈岩 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期173-178,共6页
目的采用酵母双杂交体系寻找与脆性X智力低下蛋白(Fragile X men-tal retadation protein,FMRP)相互作用的蛋白,探讨FMRP的生物医学功能。方法以编码FMRP_(Pro327-Thr518)肽段的cDNA序列与pBTM116质粒DNA结合结构域重组作为"钓饵&q... 目的采用酵母双杂交体系寻找与脆性X智力低下蛋白(Fragile X men-tal retadation protein,FMRP)相互作用的蛋白,探讨FMRP的生物医学功能。方法以编码FMRP_(Pro327-Thr518)肽段的cDNA序列与pBTM116质粒DNA结合结构域重组作为"钓饵",从小鼠胚胎cDNA文库中筛选与之相互作用蛋白的cDNA。结果筛选出13个与FMRP_(Pro327-Thr518)肽段特异性地相互作用的克隆,其中12个为小鼠泛素转运酶9(UBC9),1个是在GenBank中无高同源序列的未知cDNA序列。结论小鼠UBC9与人UBC9的氨基酸序列完全相同,且FMRP与UBC9蛋白表达的时空特征相似,因此认为人UBC9是与FMRP相互作用的蛋白,其相互作用的生物学意义有待进一步研究。本工作表明酵母双杂交体系是研究蛋白质相互作用的有效方法。 展开更多
关键词 脆性X智力低下 蛋白 酵母双杂交体系 CDNA 筛选
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用酵母双杂交体系确定病毒特异性蛋白与宿主蛋白的相互作用
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作者 金红 周正任 小田切孝人 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期1-2,共2页
用B型流行性感冒病毒BM2 蛋白开放阅读框架片段 ,构建酵母双杂交体系中的“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,并用酵母双杂交法从人cDNA基因库中筛选出与BM2 蛋白相互作用的蛋白。结果表明 :B型流感病毒BM2 蛋白... 用B型流行性感冒病毒BM2 蛋白开放阅读框架片段 ,构建酵母双杂交体系中的“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,并用酵母双杂交法从人cDNA基因库中筛选出与BM2 蛋白相互作用的蛋白。结果表明 :B型流感病毒BM2 蛋白与宿主细胞的某一蛋白有相互作用。应用酵母双杂交体系 ,可以非常有效地从人cDNA基因库中确定与“饵”蛋白相互作用的蛋白基因。 展开更多
关键词 酵母双杂交体系 BM2蛋白 人cDNA基因库 病毒蛋白 宿主蛋白 相互作用
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利用酵母双杂交体系筛选拟南芥ABA信号新元件
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作者 唐玉林 Erwin Grill 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 2004年第3期210-216,共7页
酵母双杂交体系是用活体研究蛋白质间相互作用的有效途径.利用这一体系,从拟南芥的一cDNA表达文库中筛选出了与同源框蛋白AtHB6有相互作用的两蛋白质AtHB7和AtGluRS,提示这两个蛋白有可能是脱落酸(ABA)信号传导途径中的新元件.
关键词 酵母双杂交体系 拟南芥 脱落酸 AtHB6 AtHB7 AtGluRS
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拟南芥COI l互作基因的分离 被引量:2
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作者 戴良英 李栒 罗宽 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期359-363,共5页
为进一步阐明茉莉素调控植物生长发育的分子机理 ,为作物抗性和雄性不育基因工程提供新思路 ,以COI 1为诱饵 ,利用酵母双杂交分析体系筛选拟南芥 c DNA文库 ,得到 30 0多个阳性克隆 ,经 PCR,Rsa 酶切 PCR产物以后归为 12群 ,从代表菌... 为进一步阐明茉莉素调控植物生长发育的分子机理 ,为作物抗性和雄性不育基因工程提供新思路 ,以COI 1为诱饵 ,利用酵母双杂交分析体系筛选拟南芥 c DNA文库 ,得到 30 0多个阳性克隆 ,经 PCR,Rsa 酶切 PCR产物以后归为 12群 ,从代表菌落提取 p B42 AD c DNA重组质粒进行了测序 ,完成了序列分析 ,得到 ASK1,COAP2 ,COAP3,COAP4等 12个基因 ,其中 ASK1,COAP2 ,COAP3等基因与 Skp1等重要基因有较高的同源性 . 展开更多
关键词 茉莉素 拟南芥 互作基因 酵母双杂交体系 植物激素 COI1基因 信号传导
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FMRP蛋白6种异构体与FXR1蛋白间的相互作用 被引量:4
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作者 陈雨亭 A.Sittler +3 位作者 余珉 吴冠芸 J-L.Mandel 沈岩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期396-401,共6页
脆性X综合征是最常见的遗传性智力低下疾病,其致病基因FMR1存在复杂的选择剪接.FMR1基因的功能及其选择剪接的生物学意义尚未阐明.FMR1蛋白(FMRP)与脆性X相关蛋白1(FXR1)可形成异源二聚体.采用酵母双杂... 脆性X综合征是最常见的遗传性智力低下疾病,其致病基因FMR1存在复杂的选择剪接.FMR1基因的功能及其选择剪接的生物学意义尚未阐明.FMR1蛋白(FMRP)与脆性X相关蛋白1(FXR1)可形成异源二聚体.采用酵母双杂交体系研究了由FMR1第12、14、15外显子不同选择剪接方式产生的6种FMRP异构体与FXR1蛋白的相互作用,以期从蛋白质相互作用的角度探讨FMR1基因选择剪接表达的生物学意义.结果表明各种异构体与FXR1相互作用的强度随异构体蛋白肽链长度的增长而减弱.外显子12、14、15的选择剪接虽然不能开关式控制FMRP与FXR1的相互作用,但其C端亲水区在一定程度上影响相互作用的强弱.提示选择剪接对FMRP与FXR1异源二聚体的稳定性产生影响. 展开更多
关键词 FMRP蛋白 FXR1蛋白 异构体 酵母双杂交体系
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人胎脑中hSNF5结合蛋白的筛选、克隆及分析 被引量:1
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作者 张怡 杨珺 +1 位作者 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期529-532,共4页
目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定... 目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定核苷酸序列,计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。结果获得9个阳性克隆。DNA序列分析及同源性比较表明,1个克隆的序列与推导蛋白FLJ20643羧基端的mRNA同源性高达97%,4个克隆与GenBank中可编码蛋白的序列有较高的同源性,其他4个克隆编码的氨基酸顺序与GenBank中的已知序列无同源性。结论在人胎脑cDNA文库中克隆到hSNF5的结合蛋白,这些蛋白质可能通过hSNF5募集染色质重塑复合物以调节其靶基因的转录活性熏及其参与的细胞功能。 展开更多
关键词 hSNF5 酵母双杂交体系 基因调控
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ABA信号元件ABI1和AtGluRS间相互作用分析 被引量:4
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作者 唐玉林 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 2004年第4期319-323,共5页
利用酵母双杂交体系,研究拟南芥脱落酸(ABA)信号传导元件———蛋白磷酸酶ABI1与谷氨酸-tRNA合成酶AtGluRS间的相互作用.结果表明,在与AtGluRS发生相互作用时,ABI1C-端的第262-434位氨基酸是极为关键的接触位点,包含蛋白磷酸酶PP2C特征... 利用酵母双杂交体系,研究拟南芥脱落酸(ABA)信号传导元件———蛋白磷酸酶ABI1与谷氨酸-tRNA合成酶AtGluRS间的相互作用.结果表明,在与AtGluRS发生相互作用时,ABI1C-端的第262-434位氨基酸是极为关键的接触位点,包含蛋白磷酸酶PP2C特征信号(FFGVYDGHG)的区域(122-262位氨基酸)可显著强化其相互作用. 展开更多
关键词 ABI 蛋白磷酸酶 相互作用 信号传导 氨基酸 谷氨酸 RNA 酵母双杂交体系 拟南芥 脱落酸(ABA)
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肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白CEP65相互作用蛋白的筛选与鉴定
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作者 靳更林 孙玉宁 +4 位作者 张建芝 马泓 孟麟 吴健 寿成超 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期512-517,共6页
CEP6 5蛋白 (cancerandembryoexpressionprotein 6 5 )为肿瘤单克隆抗体 3H11所识别的抗原分子 ,RT PCR及RNA印迹检测表明 ,CEP6 5蛋白表达于肿瘤及胚胎组织 .为了研究CEP6 5在肿瘤发生中的作用机制 ,以CEP6 5为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂... CEP6 5蛋白 (cancerandembryoexpressionprotein 6 5 )为肿瘤单克隆抗体 3H11所识别的抗原分子 ,RT PCR及RNA印迹检测表明 ,CEP6 5蛋白表达于肿瘤及胚胎组织 .为了研究CEP6 5在肿瘤发生中的作用机制 ,以CEP6 5为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交体系筛选人胚胎组织cDNA表达文库 .从 5 2× 10 6个克隆中筛选得到 14个阳性克隆 ,并在酵母体系中通过不同方法得到验证 .在此基础上 ,选取在双杂交中作用明显的 5 1号克隆 ,与CEP6 5作GSTpull down实验 ,结果证明 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白确能相互作用 .生物信息学分析发现 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白相互作用 。 展开更多
关键词 CEP65 单克隆抗体 酵母双杂交体系 相互作用
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脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用 被引量:2
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作者 楼蓉 梅品超 +4 位作者 贡金英 朱宁 寇朝辉 吴冠芸 沈岩 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期580-584,共5页
目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对... 目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位。结果(1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆。序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合。结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子。Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控。这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能。 展开更多
关键词 酵母双杂交体系 脆性X智力低下蛋白 人胚海马文库 脆性X综合征 遗传性疾病
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