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低温对脑缺血-再灌注大鼠α-酮戊二酸脱氢酶复合物活性及脑梗死体积的影响 被引量：5
1
作者 张宁 潘耀华 +4 位作者 章卫桥 张晓华 葛建伟 江基尧 邱永明 《中国脑血管病杂志》 CAS 2008年第7期314-317,共4页
目的观察不同温度下脑缺血-再灌注大鼠线粒体α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)活性及脑梗死体积的变化,进一步探讨不同低温的神经保护机制。方法取雄性SD大鼠35只,按随机数字法分为假手术组(n=5)及大脑中动脉闭塞2h再灌注组(n=30),后... 目的观察不同温度下脑缺血-再灌注大鼠线粒体α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)活性及脑梗死体积的变化,进一步探讨不同低温的神经保护机制。方法取雄性SD大鼠35只,按随机数字法分为假手术组(n=5)及大脑中动脉闭塞2h再灌注组(n=30),后者根据再灌注时温度的不同,再分为37℃、33℃及28℃组(n=10)。采用线栓法制备脑缺血-再灌注大鼠模型,再灌注时利用降温毯降温,使肛温分别保持37℃、33℃及28℃,时间为3 h。在缺血后24h时检测各组大鼠双侧大脑皮质和海马区线粒体α-KGDHC活性及脑梗死体积。结果①假手术组、37℃组、33℃组、28℃组缺血侧皮质α-KGDHC分别为(20.1±1.3)、(9.5±0.9)、(15.2±1.1)、(5.5±1.2)mU/mg(蛋白);海马区为(17.1±1.1)、(8.1±1.1)、(12.2±1.0)、(4.1±1.1)mU/mg(蛋白)。33℃组与37℃组和28℃组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。②37℃组脑梗死的体积最大,占对侧大脑半球的(48.2±1.1)%,33℃组梗死体积最小,占(31.6±1.3)%,28℃组占(34.8±1.2)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论提高缺血-再灌注大鼠线粒体α-KGDHC活性是低温干预的神经保护作用机制之一。33℃低温比28℃低温有更好的效果。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注 低温 人工 酮戊二酸脱氢酶复合物 大鼠
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α-酮戊二酸脱氢酶复合物在缺血性脑卒中后的适应性再灌注中的保护作用研究 被引量：3
2
作者 陈作乾 林国诗 +5 位作者 戴学军 王梦莹 陈炳宏 杨建 邱永明 林瑞生 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第9期961-967,共7页
目的:研究α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)在大鼠缺血性脑卒中后的适应性再灌注中的保护作用,且探讨其作用机制。方法:建立脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠的缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型,TT... 目的:研究α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)在大鼠缺血性脑卒中后的适应性再灌注中的保护作用,且探讨其作用机制。方法:建立脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠的缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型,TTC染色后使用成像软件计算缺血后的脑梗死体积。化学方法检测α-KGDHC活性,评估α-KGDHC活性随脑缺血时间的变化趋势,并比较普通再灌注组和适应性再灌注组的差异;用CoCl 2处理大鼠神经母细胞瘤细胞B35和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y模拟细胞缺氧,用E1K siRNA抑制α-KGDHC活性,Western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2,促凋亡蛋白Bax和Caspase 3的表达变化。结果:在MCAO模型中适应性再灌注较普通再灌注进一步减少了脑梗死体积(P<0.05),凋亡蛋白Caspase 3表达量降低;大脑皮层和海马脑组织中α-KGDHC活性随着缺血时间延长而降低(P<0.05),适应性再灌注抑制了α-KGDHC活性衰减的速率(P<0.05)。通过干扰α-KGDHC的组分E1K可以抑制Bcl-2的表达(P<0.05),促进Bax的表达(P<0.05)和Caspase 3的表达(P<0.05)。结论:研究表明,α-KGDHC是脑缺血后适应性再灌注脑保护作用的重要因子,其发挥脑保护作用可能与抑制凋亡通路的活化有关。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 适应性再灌注 α-酮戊二酸脱氢酶复合物 凋亡
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α-酮戊二酸介导异柠檬酸脱氢酶3A发挥抑制心肌细胞肥大的作用
3
作者 伍华燕 温艺红 +5 位作者 赵亨利 高原 周川孟 王娅 朱杰宁 单志新 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第2期275-283,共9页
【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌... 【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌标本以及去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心肌细胞(NRVCs)中IDH3A的表达水平。利用腺病毒介导在PE诱导的NRVCs中过表达IDH3A,检测其对NRVCs肥厚相关基因表达的影响,并通过鬼笔环肽染色检测IDH3A对NRVCs面积的影响。利用序列突变方式构建消除IDH3A酶活性的突变体(IDH3A_D208A),通过检测其对NRVCs肥大表型、ATP和ROS水平影响来验证IDH3A是否依赖酶活性发挥调节心肌细胞肥大作用。Western blot和鬼笔环肽染色检测外源给予α-酮戊二酸(AKG)对心肌细胞肥大的影响。【结果】IDH3A在心衰患者心肌、TAC手术小鼠心肌、PE诱导的NRVCs中表达均显著下调(分别为P=0.0052、P=0.0266、P=0.0413和P=0.0066)。过表达IDH3A可显著抑制PE诱导的NRVCs中肥厚相关基因表达和细胞表面积增大(分别为P<0.0001、P=0.0001和P=0.0002)。ATP和ROS水平检测结果表明过表达IDH3A能够抑制PE诱导的NRVCs中ATP和ROS水平的增加(分别为P=0.0012和P<0.0001),而无酶活性的IDH3A突变体则不具备该作用。外源给予AKG可以,而无酶活性的IDH3A突变体无法抑制PE诱导的NRVCs肥大。【结论】IDH3A通过生成AKG发挥抑制心肌细胞肥大的作用,为以IDH3A为靶点的心肌肥厚治疗研究提供科学资料。 展开更多
关键词 心肌肥厚 异柠檬酸脱氢酶3A Α-酮戊二酸 心肌细胞 线粒体
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异柠檬酸脱氢酶1突变介导D-2-羟基戊二酸代谢重编程在肿瘤免疫调控中的作用及相关药物研发进展
4
作者 杨全军 柏丁源 +2 位作者 周雨萱 白露 郭澄 《上海交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第9期1239-1248,共10页
异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)突变可异常产生致癌代谢物D-2-羟基戊二酸(D-2-hydroxyglutarate,D2HG),进而重塑肿瘤免疫微环境,近年来已成为肿瘤代谢-免疫交互研究的关键靶点。D2HG通过竞争性抑制内源性α-酮戊二... 异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)突变可异常产生致癌代谢物D-2-羟基戊二酸(D-2-hydroxyglutarate,D2HG),进而重塑肿瘤免疫微环境,近年来已成为肿瘤代谢-免疫交互研究的关键靶点。D2HG通过竞争性抑制内源性α-酮戊二酸依赖性双加氧酶,引发DNA组蛋白过甲基化与细胞分化阻滞,从而促进肿瘤的发生、发展、转移,并促使肿瘤产生耐药性。同时,D2HG抑制T细胞功能,促进髓系细胞扩增以及巨噬细胞极化,削弱免疫监视能力,形成免疫抑制状态,对免疫治疗响应产生影响。在胶质瘤、急性髓系白血病、胆管癌等多种肿瘤中,IDH1呈现出异质性和不同的预后特征。目前,针对IDH1突变的小分子抑制剂,如艾伏尼布(ivosidenib)、沃拉西尼布(vorasidenib)等,能够通过降低D2HG水平,部分逆转免疫抑制,在临床试验中显示出一定的疗效。然而,这些抑制剂存在疗效差异、耐药性及安全性等问题。IDH1抑制剂联合治疗旨在协同逆转代谢-表观遗传-免疫三重抑制网络,增强抗肿瘤药理效应,因而受到广泛关注。该文综述了IDH1突变介导D2HG代谢的肿瘤免疫调控网络,并全面综述了相关药物研发进展,希冀为肿瘤防治提供参考和思路。 展开更多
关键词 异柠檬酸脱氢酶1(IDH1) D-2-羟基戊二酸(D2HG) 免疫调控 艾伏尼布 沃拉西尼布 代谢重编程
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克雷伯杆菌烯还原酶与葡萄糖脱氢酶共表达及其在二氢香芹酮合成中的应用
5
作者 李泽浩 王婉莹 +6 位作者 王子轩 张佳月 张婷 王果果 王婧玥 段至柔 张璐璐 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第9期25-32,共8页
天然萜类化合物二氢香芹酮在医药、食品、化妆品、以及化工等领域具有广泛的应用,可由香芹酮经烯还原酶催化制备,但反应过程中所需的辅酶NAD(P)H价格昂贵,是进行大规模生产的限制性因素。该研究克隆表达了来自枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢... 天然萜类化合物二氢香芹酮在医药、食品、化妆品、以及化工等领域具有广泛的应用,可由香芹酮经烯还原酶催化制备,但反应过程中所需的辅酶NAD(P)H价格昂贵,是进行大规模生产的限制性因素。该研究克隆表达了来自枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase,GDH),并基于前期获得的克雷伯杆菌烯还原酶KlebER1A303N,通过共表达和融合表达策略构建了KlebER1A303N和GDH在大肠杆菌中的共表达体系,比较和分析了在不同策略下目的蛋白表达的差异及其催化合成二氢香芹酮的差异。结果表明,共表达和融合表达均能成功表达出所需的目的蛋白,并且催化香芹酮生成二氢香芹酮,但融合表达的效果优于共表达,在反应3 h后,转化率达50%。此外,在融合表达中,基因的排列顺序对工程菌催化合成二氢香芹酮也有一定的影响。该研究为建立高效、低成本的二氢香芹酮工业化生产方法提供了基础。 展开更多
关键词 烯还原酶 葡萄糖脱氢酶 共表达 二氢香芹酮 NADPH
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氧戊二酸脱氢酶L调控肾小管上皮细胞线粒体代谢重编程缓解肾纤维化
6
作者 杨应现 黄英辉 赵景宏 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第11期1145-1154,共10页
目的探究氧戊二酸脱氢酶L(oxoglutarate dehydrogenase-L,OGDHL)在肾纤维化中的作用及其机制。方法采用随机数字表法将12只雄性野生型C57BL/6J小鼠(8周龄,体质量约25 g)分为对照组与单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO... 目的探究氧戊二酸脱氢酶L(oxoglutarate dehydrogenase-L,OGDHL)在肾纤维化中的作用及其机制。方法采用随机数字表法将12只雄性野生型C57BL/6J小鼠(8周龄,体质量约25 g)分为对照组与单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)组(n=6),通过UUO建立小鼠肾纤维化模型。采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色、免疫荧光染色、免疫组织化学染色、Masson染色检测模型的纤维化程度;培养人近端小管上皮细胞系-2(human kidney-2 proximal tubule cell line,HK-2),分为对照质粒空载体组(Vector组)、过表达OGDHL组(OGDHL OE组)、TGF-β1+对照质粒空载体组(TGF-β1+Vector组)、TGF-β1+过表达OGDHL组(TGF-β1+OGDHL OE组)4组,通过透射电镜观察线粒体形态;通过RT-qPCR、Western blot、免疫荧光染色检测OGDHL及线粒体代谢相关基因的表达水平,并通过试剂盒检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平,通过安捷伦Seahorse细胞代谢分析仪检测氧耗率(oxygen consumption rate,OCR)、细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)等线粒体代谢相关指标。结果UUO术后肾脏肾皮质明显变薄、肾积水显著。HE染色显示肾小管萎缩、管腔扩大;免疫荧光、免疫组织化学染色、Masson染色显示纤维化明显。肾纤维化时,肾脏OGDHL的表达在mRNA水平下降82.9%(P<0.001),在蛋白水平下降81.9%(P<0.001)。线粒体ATP生成减少(0.970±0.151)μmol/L(P<0.01),线粒体结构损伤,最大呼吸能力降低(25.260±1.920)pmol/min(P<0.001),脂肪酸氧化相关基因下降50.2%(P<0.05),糖酵解增强,ECAR上升,糖酵解相关基因上升为对照组的2.5倍(P<0.05)。OGDHL过表达后线粒体形态学损伤显著改善,ATP生成增加(0.980±0.090)μmol/L(P<0.001),能量代谢障碍显著缓解,肾纤维化明显减轻(P<0.05)。结论OGDHL调控线粒体代谢重编程从而缓解肾小管上皮细胞的纤维化,提示OGDHL可能成为肾纤维化治疗的新靶点。 展开更多
关键词 肾纤维化 氧戊二酸脱氢酶L 线粒体代谢重编程 肾小管上皮细胞
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3-甾酮-9α-羟基化酶的C-1,2位脱氢和C-9位羟基化双重特性的研究
7
作者 吕德强 马倩倩 +4 位作者 胡青 董新林 何建新 苏正定 宋士奎 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期54-62,共9页
【目的】验证来自新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)NRRL B-3805的3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是否具有C-9位羟基化和C-1,2位脱氢功能。【方法】将ksh基因中的加氧酶组分kshA395和还原酶组分kshB122分别在大肠杆菌(Escherichia coli,E... 【目的】验证来自新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)NRRL B-3805的3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是否具有C-9位羟基化和C-1,2位脱氢功能。【方法】将ksh基因中的加氧酶组分kshA395和还原酶组分kshB122分别在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中进行异源表达,以4-雄烯-3,17-二酮(4-AD)为底物,分别用KshA395、KshB122以及两者等比例混合对其进行酶催化反应。通过对反应体系优化构建pET28a-kshBkshA等融合质粒,对KSH的双组分酶进行共表达,并以4-AD为底物进行酶催化反应。【结果】KshA395和KshB122均对4-AD表现出脱氢功能,产物为1,4-雄二烯-3,17-二酮(ADD),未出现羟基化作用;等比例混合的KSH双组分酶在催化4-AD过程中,前期表现出强烈的C-9位羟基化作用,后期羟基化功能关闭,转为C-1,2位脱氢功能。KSH的双组分融合蛋白,包括KshB122-MBP-KshA395、MBP-KshB122-MBP-KshA395、MBPKshB122-KshA395,在催化4-AD前期表现出C-9位羟基化作用,后期转变为C-1,2位脱氢作用;而KshB122-KshA395仅表现出C-1,2位脱氢作用,未表现出羟基化作用。【结论】在甾醇降解途径中,KSH可以同时承担羟基化及脱氢功能,且先在C-9位羟基化,随后在C-1,2位脱氢,导致甾醇母核B环打开。 展开更多
关键词 3-甾酮-9α-羟基化酶 C-1 2位脱氢 C-9位羟基化 4-雄烯-3 17-二酮 3-羟基-9 10-断裂雄甾-1 3 5(10)-三烯-9 17-二酮
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丙酮酸脱氢酶复合物缺陷与疾病 被引量：11
8
作者 张尧 杨艳玲 秦炯 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期956-958,965,共4页
关键词 丙酮酸脱氢酶复合物 基因缺陷 基因突变
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丙酮酸脱氢酶复合物X蛋白的原核表达与血清学鉴定
9
作者 舒翠莉 赵军 +3 位作者 雷历 李靖 高蓉 程云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期668-670,共3页
目的获得丙酮酸脱氢酶复合物的X蛋白(Pro-X)的原核表达蛋白。方法采用RT-PCR技术从人淋巴细胞RNA中扩增出Pro-X的基因片段,克隆至pET28a(+)表达载体进行诱导表达,并对表达产物进行Western blot和ELISA鉴定。结果成功构建了表达载体pET28... 目的获得丙酮酸脱氢酶复合物的X蛋白(Pro-X)的原核表达蛋白。方法采用RT-PCR技术从人淋巴细胞RNA中扩增出Pro-X的基因片段,克隆至pET28a(+)表达载体进行诱导表达,并对表达产物进行Western blot和ELISA鉴定。结果成功构建了表达载体pET28a(+)/Pro-X;表达产物能特异性的被原发性胆汁性肝硬化(primary bili-ary cirrhosis,PBC)患者血清中的抗线粒体抗体识别。结论获得Pro-X蛋白的原核高效表达,为利用原核表达的丙酮酸复合物对PBC患者进行血清学检测进一步奠定了基础。 展开更多
关键词 丙酮酸脱氢酶复合物的X蛋白 克隆表达 酶联免疫吸附试验
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丙酮酸脱氢酶复合物缺陷Leigh综合征2例临床及PDHA1基因分析 被引量：8
10
作者 陆相朋 张婧韬 +3 位作者 梁瑞星 牛冬鹤 卢婷婷 郑宏 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期218-222,共5页
目的探讨PDHA1基因突变所致丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位缺陷Leigh综合征的临床特点及诊断和治疗。方法回顾分析2例因发育落后就诊,磁共振扫描提示Leigh综合征,并经生化代谢及基因检测确诊患儿的临床资料。结果 2例男性患儿分别于1岁1... 目的探讨PDHA1基因突变所致丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位缺陷Leigh综合征的临床特点及诊断和治疗。方法回顾分析2例因发育落后就诊,磁共振扫描提示Leigh综合征,并经生化代谢及基因检测确诊患儿的临床资料。结果 2例男性患儿分别于1岁1个月、4个月就诊,发育落后,肌张力障碍,肌力低下;头颅磁共振检查发现双侧基底节区对称性损害;血清丙酮酸、乳酸明显增高,血氨基酸及酯酰肉碱谱无异常。基因分析发现2例患儿X染色体PDHA1基因分别存在c.615C>G、c.605A>G错义突变,均为未报道的新突变,证实为丙酮酸脱氢酶复合物E1α亚单位缺陷所致Leigh综合征。结论 PDHA1基因突变患儿临床表现复杂多样,对于不明原因的发育落后儿童,应注意线粒体病的可能,基因检测有助于诊断、治疗及遗传咨询。 展开更多
关键词 线粒体病 LEIGH综合征 PDHA1基因 丙酮酸脱氢酶复合物 发育迟缓
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丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症1例 被引量：2
11
作者 郎继荣 韩凝 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期303-305,共3页
丙酮酸脱氢酶复合物（pyruvate dehydrogenase complex,PDHc）是糖有氧氧化的限速酶,其不可逆的催化由糖酵解反应生成的丙酮酸为乙酰Co A,后乙酰Co A参与到三羧酸循环中氧化磷酸化产生能量。PDHc缺乏症是一种较罕见的遗传代谢性疾病,由... 丙酮酸脱氢酶复合物（pyruvate dehydrogenase complex,PDHc）是糖有氧氧化的限速酶,其不可逆的催化由糖酵解反应生成的丙酮酸为乙酰Co A,后乙酰Co A参与到三羧酸循环中氧化磷酸化产生能量。PDHc缺乏症是一种较罕见的遗传代谢性疾病,由于基因突变造成丙酮酸代谢障碍,导致乳酸堆积和能量生成障碍,临床常表现为乳酸酸中毒,神经发育迟滞,肌张力低下等. 展开更多
关键词 丙酮酸脱氢酶复合物 基因 突变
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高湿环境对大鼠肝脏异柠檬酸脱氢酶及α-酮戊二酸脱氢酶的影响 被引量：7
12
作者 李昆 郭鑫 +4 位作者 杨芸 李薇 王超 宋富强 呼永河 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期2595-2596,共2页
目的观察高湿环境对肝脏异柠檬酸脱氢酶（IDH）与α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDHc）含量的影响。方法32只sD大鼠按随机数字表法分为常温常湿对照组及高湿环境20、30、40d组，每组8只大鼠。采用人工气候箱模拟高湿环境，条件设置为温度25℃... 目的观察高湿环境对肝脏异柠檬酸脱氢酶（IDH）与α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDHc）含量的影响。方法32只sD大鼠按随机数字表法分为常温常湿对照组及高湿环境20、30、40d组，每组8只大鼠。采用人工气候箱模拟高湿环境，条件设置为温度25℃、相对湿度90％～95％RH。实验组大鼠每天置于箱中10h，其余时间与常温常湿对照组饲养于清洁环境（温度22～26℃，相对湿度40％～60％RH）。动物模型制作完成后，取腹主动脉血及肝组织，酶联免疫法（EusA）检测肝脏组织IDH及α-KGDHc，比色法检测血清乳酸含量，并行肝组织HE病理切片观察。结果高湿环境20d组，肝脏IDH、α-KGDHc及血清乳酸含量较常温常湿对照组无显著变化。高湿环境30、40d组，肝脏IDH含量分别降至常温常湿对照组的75.98％和79.90％（P〈0.05），α-KGDHc含量分别降至常温常湿对照组的80.00％和81.01％（P〈0.05）。血清乳酸含量较常温常湿对照组分别升高了34.58％和23.33％（P〈0.01）。病理切片显示高湿环境40d大鼠肝脏点状坏死灶增多。结论高湿环境可致大鼠肝脏组织IDH、α-KGDHc含量降低，血乳酸升高，机体有氧代谢功能不足。 展开更多
关键词 高湿 异柠檬酸脱氢酶 α-酮戊二酸脱氢酶 乳酸
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α-酮戊二酸半醛脱氢酶的定点突变及酶学性质变化 被引量：2
13
作者 秦海彬 熊涛 +1 位作者 张博 牛坤 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期180-185,共6页
3-HP是一种性质优良的化学中间体,以甘油为底物生产3-HP的研究备受青睐,而限制3-HP产量的主要原因是Ald H活力过低。对源于Azospirillam brasilense的α-酮戊二酸半醛脱氢酶(KGSADH)基因同源建模和结构分析,采用定点突变方法得到高活力K... 3-HP是一种性质优良的化学中间体,以甘油为底物生产3-HP的研究备受青睐,而限制3-HP产量的主要原因是Ald H活力过低。对源于Azospirillam brasilense的α-酮戊二酸半醛脱氢酶(KGSADH)基因同源建模和结构分析,采用定点突变方法得到高活力KGSADH,将突变酶表达纯化,探讨酶学性质的变化。结果表明,TU-KGSADH(E120D/P219A)酶活力达6.03U/mg,比原始酶比酶活提高了322%,最适温度由35℃降低为30℃,且热稳定性降低,最适p H为8.0,在p H 6.0-8.0条件下酶活力有所提高。Zn^(2+)对KGSADH的酶活有较强的抑制作用,而Co^(2+)、Fe^(3+)、Fe^(2+)对KGSADH的酶活有较大的激活作用。在酶的动力学方面,TU-KGSADH对乙醛的K_m由7.58降为6.28 mmol/L,V_(max)由10.6提高为12.3 U/mg。对酶学性质改变的因素分析发现,120位突变与最适p H下降和p H稳定性向酸性偏移有关,219位突变可能是最适温度和热稳定性降低的原因,为醛脱氢酶进一步定向改造提供参考。 展开更多
关键词 α-酮戊二酸半醛脱氢酶 定点突变 表达纯化 酶学性质
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乳酸脱氢酶免疫球蛋白复合物电泳分析 被引量：2
14
作者 范霞 宋鉴清 +1 位作者 王丽 门春桥 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期279-280,共2页
对2例自身免疫病患者常规琼脂糖电泳法测定LDH同工酶,酶免疫电泳方法测定乳酸脱氢酶(LDH)免疫球蛋白复合物。结果LDH3同工酶区带增宽,染色较深。酶免疫电泳显示抗全血清抗体在抗IgA抗体、抗L链κ抗体出现沉降线。证实异常的LDH3区带是LD... 对2例自身免疫病患者常规琼脂糖电泳法测定LDH同工酶,酶免疫电泳方法测定乳酸脱氢酶(LDH)免疫球蛋白复合物。结果LDH3同工酶区带增宽,染色较深。酶免疫电泳显示抗全血清抗体在抗IgA抗体、抗L链κ抗体出现沉降线。证实异常的LDH3区带是LDH IgA(k)复合物。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶 同工酶 免疫球蛋白复合物
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过表达果糖脱氢酶促进氧化葡萄糖酸杆菌高效合成5-酮果糖
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作者 钱雪 赵晨休 +1 位作者 林金萍 魏东芝 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期58-66,共9页
5-酮果糖(5-KetoFructose,5-KF)具有与D-果糖相似的甜度和自然甜味,且不能被人体代谢而具有低热量的优点,是一种具有发展前景的非营养型天然甜味剂。为了获得5-酮果糖高产菌株,作者将来源于Gluconobacter japonicus的膜结合的果糖脱氢... 5-酮果糖(5-KetoFructose,5-KF)具有与D-果糖相似的甜度和自然甜味,且不能被人体代谢而具有低热量的优点,是一种具有发展前景的非营养型天然甜味剂。为了获得5-酮果糖高产菌株,作者将来源于Gluconobacter japonicus的膜结合的果糖脱氢酶基因在Gluconobacter oxydans中过表达,通过对不同的宿主、表达载体和启动子的筛选,获得一株能够高效合成5-KF的工程菌QT-10。在3 L发酵罐中进行补料发酵优化,最终采用恒速连续流加果糖的方式,该工程菌可在82 h内消耗质量浓度为650 g/L的D-果糖,5-KF的产量高达608 g/L,产率为94.6%,时空产率为7.41 g/(L·h)。 展开更多
关键词 5-酮果糖 果糖脱氢酶 氧化葡萄糖酸杆菌 重组表达 发酵优化
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丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症1家系2例临床及遗传特点
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作者 刘嘉琪 阮小芹 +1 位作者 张刚 李杨 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第6期886-892,共7页
丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydroge-nase complex,PDHC)是一种分布于线粒体基质中的多酶复合体,通过催化丙酮酸的氧化脱羧反应生成乙酰辅酶A,有效连接糖酵解和三羧酸循环[1]。原核生物和真核生物的PDHC含有6种酶,丙酮酸脱羧酶(pyru... 丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydroge-nase complex,PDHC)是一种分布于线粒体基质中的多酶复合体,通过催化丙酮酸的氧化脱羧反应生成乙酰辅酶A,有效连接糖酵解和三羧酸循环[1]。原核生物和真核生物的PDHC含有6种酶,丙酮酸脱羧酶(pyruvate decarboxylase,简称E1)、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶(dihydrolipoamide acetyltransferase,简称E2)和二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,简称E3)是组成PDHC最关键的3种酶。 展开更多
关键词 PDHA1基因 丙酮酸脱氢酶复合物 发育迟缓 高乳酸血症
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Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化的作用 被引量：1
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作者 刘士明 丁涛 +5 位作者 雷良玉 胡琳 冒灵 陈超 郭萌萌 徐林 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第6期596-601,共6页
目的Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4(NDUFA4)在人结直肠癌发生中的作用和机制尚未阐明。文中旨在探讨NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和空载对照质粒(对照组)体外分别瞬时转入... 目的Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4(NDUFA4)在人结直肠癌发生中的作用和机制尚未阐明。文中旨在探讨NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和空载对照质粒(对照组)体外分别瞬时转入人结直肠癌HCT116细胞;利用Real-timePCR和Western blot 检测各组细胞中 NDUFA4 的表达;划痕实验、Transwell 小室迁移实验检测细胞的迁移能力变化;实时荧光定量 PCR 法检测 MMP2、MMP9、CXCR4 等表达;Western blot 检测 Twist、Snail、E-cadherin 等表达;免疫荧光法检测细胞中 E-cadherin 和 Vimentin 蛋白的表达。结果p-NDUFA4组 NDUFA4-mRNA、NDUFA4蛋白相对表达量[(1.94±0.08)%、(1.07±0.12)%]较对照组([ 0.96±0.15)%、(0.6±0.05)%]明显上调(P<0.05)。p-NDUFA4 组细胞的体外迁移能力、细胞迁移率([ 54.36±4.08)%、(1.85±0.10)%]较对照组([ 29.51± 3.17)%、(0.99±0.12)%]明显升高( P<0.01)。p-NDUFA4 组肿瘤细胞转移相关因子 MMP2、MMP9、CXCR4、间质标志物 N-cadherin、Vimentin,及转录相关因子 Snail、Twist 的 mRNA 表达较对照组显著上调,上皮标记分子 E-cadherin mRNA 明显下调(P<0.01)。结论过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞EMT的发生。 展开更多
关键词 Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4 结直肠肿瘤 侵袭 转移 上皮-间质转化
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膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响 被引量：13
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作者 陶晓倩 王大勇 +6 位作者 柳海燕 林钗英 韩雪峰 时姗姗 崔英霞 戈一峰 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2010年第4期342-346,共5页
目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标... 目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00vs1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05)。10-9mol/L的an-nexin5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P>0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/Lvs(10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/Lvs(17.46±0.31)nmol/L](P<0.01)。结论在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一。 展开更多
关键词 膜联蛋白5 间质细胞 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶
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大豆黄酮对肉鸡血液胰岛素、胰高血糖素和肝脏苹果酸脱氢酶的影响 被引量：13
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作者 张桂春 刘皙洁 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期52-55,共4页
试验选用 2 1日龄艾维茵商品代肉鸡 4 8只 ,随机分成 2组 ,分别为基础日粮组和添加大豆黄酮 (daidzein Da)组 ,饲喂 5周。结果表明 ,外周血液中的胰岛素对照组与 Da组分别为 3.94± 0 .2 0 ,4 .30± 1.2 8︼ IU· m L- 1 ,... 试验选用 2 1日龄艾维茵商品代肉鸡 4 8只 ,随机分成 2组 ,分别为基础日粮组和添加大豆黄酮 (daidzein Da)组 ,饲喂 5周。结果表明 ,外周血液中的胰岛素对照组与 Da组分别为 3.94± 0 .2 0 ,4 .30± 1.2 8︼ IU· m L- 1 ,比对照组增加 8.30 % ;胰高血糖素分别为 319.90± 32 .72 ,4 73.13± 77.0 8pg· m L- 1 ,比对照组增加了 37.37% (P <0 .0 1) ;肝中的苹果酸脱氢酶 (MDH)分别为 331.14± 17.99,30 8.12± 79.90 U· mg- 1 。试验结果提示 展开更多
关键词 大豆黄酮 肉鸡 胰岛素 胰高血糖素 苹果酸脱氢酶
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睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达 被引量：5
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作者 张国华 徐国宾 +1 位作者 刘英民 夏铁安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期966-969,共4页
从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析... 从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。 展开更多
关键词 睾酮假单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶基因 质粒载体 构建 表达 胆汁酸 血清
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