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核酸免疫识别的机制和功能及酪氨酸磷酸化修饰调控 被引量：1
1
作者 刘盛铎 徐平龙 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-46,共12页
核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核... 核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核酸识别通路中发挥重要调控功能。其中,介导核酸免疫识别通路的核心成员环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激因子(STING)以及TANK结合激酶1(TBK1)等蛋白均受到酪氨酸磷酸化修饰引发的活性调控,进而影响生理或病理条件下宿主的抗病毒防御和抗肿瘤免疫能力。本文综述了酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸化修饰在核酸免疫识别中的调控作用及研究现状,讨论了靶向酪氨酸磷酸化在抗肿瘤免疫中的功能和潜在应用,以期为理解并拓展全新的抗肿瘤手段提供思路。 展开更多
关键词 天然免疫 肿瘤免疫 酪氨酸磷酸化 酪氨酸激酶 信号转导 蛋白质修饰 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子 综述
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应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法
2
作者 梁富超 柯弥 田瑞军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期693-701,共9页
酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导... 酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导致获得与原代T细胞相差较大的结论。因此,本研究发展了一种解析原代T细胞酪氨酸磷酸化修饰信号的高灵敏度的蛋白质组学方法。首先,针对原代T细胞数量有限的问题,本研究优化了一套从小鼠脾脏中分离、活化和扩增T细胞的完整流程,第4天时T细胞数量扩增到7倍以上;其次,针对酪氨酸磷酸化修饰丰度较低、不易被质谱检测的难题,本研究利用SH2超亲体(SH2-superbinder)亲和富集和固定化钛离子亲和色谱(Ti^(4+)-IMAC)技术对抗CD3和抗CD28单克隆抗体共刺激条件下的原代T细胞多肽样品进行了酪氨酸磷酸化多肽富集,并结合纳升液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)进行解析。最终成功从1 mg蛋白质中鉴定到282个酪氨酸磷酸化位点,其中包含T细胞受体膜蛋白CD3胞内区的免疫受体酪氨酸激活序列(ITAM)上的多个酪氨酸磷酸化位点,以及信号转导相关蛋白ZAP70、LAT、VAV1等的重要位点信息。综上,本研究发展了一套深度解析原代T细胞中的酪氨酸磷酸化修饰的高灵敏度蛋白质组学分析流程,有望应用于绘制更接近生理状态下的信号转导网络。 展开更多
关键词 纳升液相色谱-串联质谱 酪氨酸磷酸化 原代T细胞 共刺激 信号转导
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TNF琢对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响 被引量：3
3
作者 王竹晨 顾熊飞 +3 位作者 卢汉平 高锦辉 杨冬梓 邝健全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期48-50,60,共4页
【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测... 【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析。【结果】①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF琢刺激浓度分别为0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNF琢刺激浓度达20ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P<0.05)。②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNF琢(5ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNF琢作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNF琢刺激浓度分别为10ng/mL(31.16%±10.44%)和20ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P<0.001)。【结论】①TNF琢刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。②TNF琢可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系。 展开更多
关键词 IRS-1 TNFα 脂肪细胞 葡萄糖摄取 酪氨酸磷酸化 体外培养 胰岛素 刺激 蛋白免疫印迹法 信号传导
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多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者子宫内膜胰岛素受体底物1、2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化 被引量：4
4
作者 盛慧 刘义 +1 位作者 吕立群 刘向前 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期473-475,559,共4页
目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1和2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度。探讨PCOS子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制。方法于月经周期第1天刮取PCOS... 目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1和2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度。探讨PCOS子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制。方法于月经周期第1天刮取PCOS合并胰岛素抵抗患者(PCOS组,15例)和正常妇女(对照组,10例)子宫内膜,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜IRS-1和IRS-2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化程度。结果①PCOS组和对照组IRS-1蛋白表达的灰度值分别为(121.94±16.00)和(55.35±0.98),IRS-2蛋白分别为(169.35±13.00)和(111.65±8.02),两组比较差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05),PCOS组子宫内膜IRS-1和IRS-2蛋白的表达明显降低;②PCOS组子宫内膜IRS酪氨酸磷酸化的程度明显低于对照组,其灰度值分别为(141.98±22.50)、(102.72±9.78),两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论PCOS合并胰岛素抵抗患者子宫内膜组织的IRS-1和IRS-2蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度异常所导致的受体后信号传导障碍,可能是发生胰岛素抵抗机制之一。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 子宫内膜 磷蛋白类 酪氨酸磷酸化
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糖尿病和硝化条件下胰岛素受体及底物酪氨酸磷酸化的研究 被引量：3
5
作者 葛伊莉 彭红 +1 位作者 周军 黄开勋 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1040-1045,共6页
利用新颖的定量核磁共振(31P NMR)法和免疫印迹法研究了四氧嘧啶诱导的糖尿病状态下以及酪氨酸经过氧亚硝酸根供体SIN-1硝化条件下大鼠肝脏胰岛素受体(IR)的自磷酸化和受体底物1(IRS1)的磷酸化。结果表明,四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肝脏... 利用新颖的定量核磁共振(31P NMR)法和免疫印迹法研究了四氧嘧啶诱导的糖尿病状态下以及酪氨酸经过氧亚硝酸根供体SIN-1硝化条件下大鼠肝脏胰岛素受体(IR)的自磷酸化和受体底物1(IRS1)的磷酸化。结果表明,四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肝脏中IR自磷酸化水平削弱了,硝化对大鼠肝脏中IR自磷酸化的影响依赖于SIN-1浓度,根据IRS1磷酸化位点基序设计的多肽的硝化完全抑制了其磷酸化,提示酪氨酸硝化可能干扰胰岛素磷酸化信号通路。 展开更多
关键词 酪氨酸磷酸化 31^PNMR 免疫印迹法 糖尿病
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人胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞间酪氨酸磷酸化的比较蛋白质组学研究 被引量：3
6
作者 贾红玲 朱用阳 +2 位作者 晏光荣 徐振 孙黎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期83-86,共4页
比较人正常胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901间酪氨酸磷酸化蛋白质的差异,筛选差异磷酸化蛋白质分子,为揭示胃癌发生发展的分子机制提供新的理论依据。采用免疫沉淀方法从人胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901总蛋白质中... 比较人正常胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901间酪氨酸磷酸化蛋白质的差异,筛选差异磷酸化蛋白质分子,为揭示胃癌发生发展的分子机制提供新的理论依据。采用免疫沉淀方法从人胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901总蛋白质中免疫沉淀出酪氨酸磷酸化蛋白质,用SDS-PAGE和二维凝胶电泳技术分离沉淀出的酪氨酸磷酸化蛋白质,银染,差异蛋白点进行胶内酶解,采用MALDI-TOF/TOF-MS质谱进行差异蛋白质鉴定。结果显示获得了7个差异酪氨酸磷酸化蛋白质,这些蛋白质涉及细胞骨架、细胞调控等。通过比较正常胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞内酪氨酸磷酸化蛋白质的差异,筛选获得7个差异酪氨酸磷酸化蛋白质分子,有助于深入研究胃癌发生发展的分子机制,进而为胃癌的早期诊断和防治提供新的理论依据和作用靶标。 展开更多
关键词 胃癌 酪氨酸磷酸化 蛋白质组学
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力竭运动后大鼠脑皮质运动区谷氨酸受体NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平的变化 被引量：5
7
作者 白宝丰 张蕴琨 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期400-403,433,共5页
目的:观察力竭运动前后大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量及其自身酪氨酸磷酸化水平变化,分析二者之间的相关关系,为探讨中枢兴奋信号在运动中的传递机理以及运动性疲劳的中枢机制提供实验依据。方法:SD大鼠进行一次性力竭跑台运动。采用抗N... 目的:观察力竭运动前后大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量及其自身酪氨酸磷酸化水平变化,分析二者之间的相关关系,为探讨中枢兴奋信号在运动中的传递机理以及运动性疲劳的中枢机制提供实验依据。方法:SD大鼠进行一次性力竭跑台运动。采用抗NR2A抗体和抗磷酸酪氨酸单抗以免疫沉淀法和免疫印迹法检测皮质运动区NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平。结果:力竭运动后即刻,大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量与安静组相比无显著性变化,运动后1小时与安静组和运动后即刻比较显著升高(P<0.05,P<0.01),运动后3小时NR2A蛋白含量下降,运动后恢复24小时大鼠脑皮质中NR2A蛋白含量显著低于安静组和运动后即刻组(P<0.01,P<0.05)。NR2A酪氨酸磷酸化水平力竭运动后与对照组相比呈升高趋势但无显著性差异,NR2A酪氨酸磷酸化水平与NR2A蛋白含量变化无显著相关。结论:(1)大鼠在力竭运动后即刻及恢复期过程中,大脑皮质运动区NR2A蛋白含量变化表现为下降,上升,再下降,表明运动过程中NR2A蛋白含量变化具有较敏感的可调控性,力竭运动后即刻NR2A蛋白含量的下降可能是导致中枢抑制的一个因素。(2)NR2A酪氨酸磷酸化水平在力竭运动后呈升高趋势,可能有利于维持中枢的兴奋性,提示运动过程中NR蛋白含量的变化可能是多方面原因造成的,受体蛋白含量与受体活性之间可能存在较为复杂的关系。 展开更多
关键词 酪氨酸磷酸化水平 NR2A 蛋白含量 谷氨酸受体 力竭 大脑皮质运动区 含量变化 运动过程 运动性疲劳 免疫印迹法 免疫沉淀法 磷酸酪氨酸 运动后恢复 显著性差异 A蛋白 水平变化 运动前后 相关关系 中枢机制 兴奋信号 跑台运动
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蛋白质酪氨酸磷酸化在抗失巢凋亡的癌细胞中的失调变化 被引量：3
8
作者 张利能 查锡良 俞强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1047-1054,共8页
失巢凋亡是细胞与细胞外基质脱离发生的一种特定的凋亡方式.癌细胞抗失巢凋亡或失巢生存能力可以使之在转移过程中生存.业已发现癌细胞失巢生存与PI3K-PKB/Akt、MAPK这两条重要信号途径有关,但是PI3K-PKB/Akt、MAPK通路的上游酪氨酸激... 失巢凋亡是细胞与细胞外基质脱离发生的一种特定的凋亡方式.癌细胞抗失巢凋亡或失巢生存能力可以使之在转移过程中生存.业已发现癌细胞失巢生存与PI3K-PKB/Akt、MAPK这两条重要信号途径有关,但是PI3K-PKB/Akt、MAPK通路的上游酪氨酸激酶途径还不甚清楚.为此设计了一种基于SH2-pTyr特异性结合特性的功能性筛选方法,以期发现癌细胞失巢生存相关的酪氨酸磷酸化蛋白质,为最终明确酪氨酸激酶途径提供有力的实验依据.实验发现,MDCK细胞悬浮培养后失巢凋亡,但癌细胞可以失巢生存.与这一现象相一致的是,悬浮培养后,MDCK细胞中一系列SH2结合的酪氨酸磷酸化蛋白质水平急剧下降,而癌细胞中蛋白质酪氨酸磷酸化水平并不呈锚着依赖性.细胞悬浮培养后,随着培养时间的延长,MDCK细胞中AblSSH2结合的靶蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐降低,在H460肺癌细胞中经过短暂下降后升高,H1792肺癌细胞随着培养时间的延长,AblSH2结合的靶蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐增加.FynSH2和CrkSH2结合的蛋白质分别为FAK和p130Cas,后者是重要的失巢生存信号.这些结果提示,酪氨酸磷酸化蛋白质可能赋予肺癌细胞失巢生存能力.结果也表明,功能性SH2筛查方法可以有效地发现肿瘤细胞中失巢生存相关的酪氨酸磷酸化蛋白质. 展开更多
关键词 失巢凋亡 Src同源结构域2 酪氨酸磷酸化 癌细胞
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胰岛素抵抗大鼠肝脏丝氨酸/酪氨酸磷酸化IRS-1表达异常与脂联素相关的研究 被引量：1
9
作者 刘向阳 都健 +5 位作者 王慧敏 裴丽娜 王娟 吴峰 关丽娜 林志楠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期250-252,共3页
目的探讨胰岛素抵抗大鼠丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与脂联素(APN)的关系。方法高脂饲料喂养10周建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估。应用ELISA法检测大鼠血清APN含量,Westernblot法检测肝脏组织中胰岛素受体... 目的探讨胰岛素抵抗大鼠丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与脂联素(APN)的关系。方法高脂饲料喂养10周建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估。应用ELISA法检测大鼠血清APN含量,Westernblot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物1(IRS-1)磷酸化丝氨酸(IRS-1Ser636)及磷酸化酪氨酸(IRS-1Tyr465)表达。结果高脂组大鼠葡萄糖输注率(GIR60～120)明显低于基础饲料组(1.56±0.43vs5.15±0.66mg·kg-1·min-1,P<0.01);与基础饲料组相比,高脂饲料组大鼠血清APN水平显著降低(0.70±0.07vs0.85±0.12pg/ml,P<0.01),IRS-1Tyr465表达显著降低(111.68±13.41vs127.77±13.17,P<0.05),IRS-1Ser636水平显著升高(109.47±13.75vs94.23±15.05,P<0.05)。血清APN水平与IRS-1Tyr465正相关(r=0.68,P<0.01),与IRS-1Ser636负相关(r=-0.70,P<0.01)。结论胰岛素抵抗大鼠APN水平与IRS-1Tyr465正相关,与IRS-1Ser636负相关,提示APN改善胰岛素抵抗机制可能与纠正IRS-1磷酸化异常有关。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 大鼠 丝氨酸磷酸化 酪氨酸磷酸化 脂联素
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肝切除诱导c-met受体酪氨酸磷酸化及组织再生的调控机制 被引量：1
10
作者 吴向阳 时开网 +1 位作者 卞建民 井清源 《医学研究生学报》 CAS 2006年第5期431-434,共4页
目的:探讨部分肝切除(PH)诱导残余肝细胞膜受体c-met酪氨酸磷酸化及肝再生的调控机制。方法: 采用PH建立急性肝损伤再生模型,用免疫沉淀和免疫印迹等方法评价肝损伤后组织再生、功能恢复和c-met酪氨酸磷酸化的变化以及染料木黄酮对它们... 目的:探讨部分肝切除(PH)诱导残余肝细胞膜受体c-met酪氨酸磷酸化及肝再生的调控机制。方法: 采用PH建立急性肝损伤再生模型,用免疫沉淀和免疫印迹等方法评价肝损伤后组织再生、功能恢复和c-met酪氨酸磷酸化的变化以及染料木黄酮对它们的影响。结果:急性PH能显著诱导膜受体c-met酪氨酸磷酸化,且在术后1 h升至最高(P<0．05);染料木黄酮能有效减少PH后早期c-met酪氨酸磷酸化,且抑制肝冉生和功能恢复 (P<0．05)。结论:PH可能诱导c-met受体激活,参与肝细胞生长因子(HGF)介导的肝组织再生调控,且残余肝细胞内酪氨酸蛋白激酶的活性上调,对肝组织的再生及其损伤后的功能恢复有明显作用。 展开更多
关键词 部分肝切除 C-MET 酪氨酸磷酸化 染料木黄酮
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酪氨酸磷酸化在精子获能过程中的作用 被引量：3
11
作者 陈璇 金一 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2486-2491,共6页
在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带(ZP)相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合... 在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带(ZP)相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合,进而完成受精过程。然而精子获能的分子机制十分复杂,目前还未完全明确,但获能后的精子会有诸多结构及生化方面的变化,如蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化。蛋白质通过磷酸化或去磷酸化调节精子获能和顶体反应等一些重要的现象,这是精子到达、结合、穿透和融合卵母细胞所必需的过程。因此蛋白磷酸化是获能的一个非常重要的过程,尤其是在酪氨酸残基处的磷酸化是获能过程中发生的最重要的事件之一,且酪氨酸磷酸化可能是细胞中信号转导途径的主要甚至是唯一的指标。作者主要针对蛋白磷酸化、精子中酪氨酸磷酸化的发现、作用和定位,以及影响获能过程中酪氨酸磷酸化的几个因素进行阐述。 展开更多
关键词 精子获能 分子机制 酪氨酸磷酸化
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妊娠期糖尿病患者腹部皮下脂肪组织胰岛素受体底物表达及其酪氨酸磷酸化的变化 被引量：2
12
作者 朱颖 朱旋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第23期3962-3965,共4页
目的:探讨胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)表达及其酪氨酸磷酸化的变化在妊娠期糖尿病(GDM)发病机制中的作用。方法:收集40例正常妊娠妇女和39例GDM患者的腹部皮下脂肪组织,分别用RT-PCR技术和Western blot印迹法检测... 目的:探讨胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)表达及其酪氨酸磷酸化的变化在妊娠期糖尿病(GDM)发病机制中的作用。方法:收集40例正常妊娠妇女和39例GDM患者的腹部皮下脂肪组织,分别用RT-PCR技术和Western blot印迹法检测组织中IRS-1和IRS-2 mRNA及其蛋白质的表达,同时测定患者空腹血糖、空腹胰岛素、体质指数等临床指标。结果:与正常妊娠妇女比较,GDM患者不仅存在明显的胰岛素抵抗(P<0.05),而且其腹部皮下脂肪组织中的IRS-1 mRNA和蛋白质的表达水平均显著降低,其酪氨酸磷酸化程度亦显著减弱,但是IRS-2 mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,其酪氨酸磷酸化程度亦显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:脂肪组织中IRS-1表达及其酪氨酸磷酸化水平减弱参与了胰岛素抵抗的发生,与GDM的发病关系密切。IRS-2表达及其酪氨酸磷酸化水平的增强不能完全代偿IRS-1信号缺陷。 展开更多
关键词 糖尿病 妊娠 胰岛素受体底物 脂肪组织 胰岛素抵抗 酪氨酸磷酸化
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中华眼镜蛇毒F组份对血小板活化时蛋白酪氨酸磷酸化的影响 被引量：2
13
作者 张梅 余清声 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期293-295,共3页
目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting... 目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定血小板内蛋白酪氨酸磷酸化的表达。结果 :F组份呈浓度依赖性抑制二磷酸腺苷 (ADP)引起的分子量为 76、6 6和 37 5kD蛋白酪氨酸磷酸化的表达 ,其中 30、10 0mg/L给药组中 ,3个分子量蛋白与对照组比较均有显著差异 ,P <0 . 0 5。F组份对ADP引起血小板聚集作用的抑制同降低 76、6 6和 37 5kD 3个分子量蛋白酪氨酸磷酸化的表达呈明显的正相关 (r=0 . 936 7,P <0 . 0 1)。结论 :中华眼镜蛇毒F组份通过抑制分子量为 76、6 6和37 5kD蛋白的酪氨酸磷酸化表达 ,对血小板胞内信号转导过程发生影响 ,可能是其抗栓机制之一。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒液类 血小板聚集 印迹法 蛋白质 蛋白质酪氨酸磷酸化 信号转导
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瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响 被引量：1
14
作者 郭启煜 高妍 +1 位作者 丛琳 邵宁生 《首都医科大学学报》 CAS 2007年第3期304-306,共3页
目的观察瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠肝脏细胞,与瘦素共同孵育12 h、24 h及36 h,提取蛋白后用Western blot法检测瘦素受体的蛋白水平的变化,用RT-PCR法检测大... 目的观察瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠肝脏细胞,与瘦素共同孵育12 h、24 h及36 h,提取蛋白后用Western blot法检测瘦素受体的蛋白水平的变化,用RT-PCR法检测大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA水平,用免疫共沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。结果大鼠肝细胞的瘦素受体的蛋白水平在与瘦素共同孵育12 h、24 h和36 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达在孵育12 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),孵育24 h及36 h后,与对照组及孵育12 h时相比,mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经瘦素作用12 h后,对大鼠肝脏细胞瘦素受体酪氨酸磷酸化无显著影响(P>0.05),但孵育24 h及36 h后,大鼠肝脏细胞瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度与对照组及瘦素作用12 h后相比均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素可促进大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达并增强其酪氨酸磷酸化程度。 展开更多
关键词 瘦素 瘦素受体 信号转导 酪氨酸磷酸化
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失血性休克对大鼠血管平滑肌BK_(Ca)通道酪氨酸磷酸化水平的影响 被引量：1
15
作者 周荣 刘良明 胡德耀 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2189-2193,共5页
目的探讨失血性休克对大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌BKCa通道酪氨酸磷酸化的影响以及NO对BKCa通道酪氨酸磷酸化的调控。方法建立大鼠失血性休克模型[(35±5)mmHg]并提取肠系膜上动脉总裂解蛋白,采用免疫沉淀及免疫印迹技术,观察休克... 目的探讨失血性休克对大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌BKCa通道酪氨酸磷酸化的影响以及NO对BKCa通道酪氨酸磷酸化的调控。方法建立大鼠失血性休克模型[(35±5)mmHg]并提取肠系膜上动脉总裂解蛋白,采用免疫沉淀及免疫印迹技术,观察休克血管平滑肌BKCa通道酪氨酸磷酸化的变化情况;采用原代培养的大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌细胞,观察NO对BKCa通道酪氨酸磷酸化的调控及其时-效、量-效关系。结果失血性休克2h及4h后大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌BKCa通道α亚基酪氨酸磷酸化明显增强(P<001);L-精氨酸(5×10-5-5×10-4mol/L)孵育30min即可诱导培养血管平滑肌细胞BKCa通道α亚基酪氨酸磷酸化增强,2h内无明显下降;且L-精氨酸诱导BKCa通道α亚基酪氨酸磷酸化具有剂量依赖性。结论重症失血性休克可增强血管平滑肌BKCa通道酪氨酸磷酸化,且NO参与了该调控过程。 展开更多
关键词 休克 失血性 大电导钙依赖性钾通道 酪氨酸磷酸化
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哺乳动物获能精子蛋白酪氨酸磷酸化研究进展 被引量：2
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作者 胡启蒙 何群 +2 位作者 何建云 李蒙玉 杨宇新 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第1期9-13,共5页
哺乳动物成熟精子是一种高度分化的生殖细胞,"获能"后具有受精能力,其中酪氨酸磷酸化过程是获能过程中非常重要的环节,参与调控获能相关的顶体反应和超激活运动。精子获能分子机理研究有助于解决临床男性不育以及男性避孕问题... 哺乳动物成熟精子是一种高度分化的生殖细胞,"获能"后具有受精能力,其中酪氨酸磷酸化过程是获能过程中非常重要的环节,参与调控获能相关的顶体反应和超激活运动。精子获能分子机理研究有助于解决临床男性不育以及男性避孕问题,同时为牲畜体外人工授精技术应用提供理论支持。目前哺乳动物获能精子蛋白酪氨酸磷酸化的分子机制研究主要集中在信号通路、蛋白质种类鉴定、影响因素等方面。 展开更多
关键词 精子 酪氨酸磷酸化 调节因子
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猪精子获能前后细胞亚组分蛋白分离及酪氨酸磷酸化蛋白的鉴定
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作者 胡启蒙 张媛媛 +2 位作者 陈振亮 王亮亮 李新红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1310-1316,共7页
本研究对猪精子获能前后细胞亚组分蛋白进行分离以及对酪氨酸磷酸化蛋白进行鉴定,旨在为哺乳动物精子受精生物学研究奠定理论基础。利用动物精子体外获能培养、细胞亚组分分离技术及蛋白免疫印迹的方法,分离猪精子细胞亚组分蛋白及酪氨... 本研究对猪精子获能前后细胞亚组分蛋白进行分离以及对酪氨酸磷酸化蛋白进行鉴定,旨在为哺乳动物精子受精生物学研究奠定理论基础。利用动物精子体外获能培养、细胞亚组分分离技术及蛋白免疫印迹的方法,分离猪精子细胞亚组分蛋白及酪氨酸磷酸化蛋白鉴定。结果表明,猪精子经过获能培养后各项活力指标均得到显著提高,且与精子蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰密切相关;获能精子中126、108、79ku的高分子量蛋白磷酸化程度明显高于未获能精子;分子质量约为25、47、50ku的膜蛋白及47ku胞浆蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中25、47ku的膜蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05);分子量约为23、37、42～50ku的核蛋白发生酪氨酸磷酸化,获能精子中23ku的核蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05)。结果提示,猪精子细胞不同亚组分中,发生酪氨酸磷酸化修饰的蛋白以膜蛋白及核蛋白为主,同时有少量的胞浆蛋白。 展开更多
关键词 猪 精子获能 酪氨酸磷酸化
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整合素诱导酪氨酸磷酸化蛋白在成纤维细胞原胶原基因表达中的作用
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作者 洪微 孔宪涛 +1 位作者 陈敏亮 廖万清 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期353-355,共3页
目的：研究粘附分子整合素的细胞内信号传导途径之一——酪氨酸磷酸化在成纤维细胞表达原胶原基因中的作用。方法：利用抗整合素单抗及相应二抗的交联作用，模拟整合素在成纤维细胞表面簇集而诱导酪氨酸磷酸化，用蛋白印迹和ＲＴ－ＰＣ... 目的：研究粘附分子整合素的细胞内信号传导途径之一——酪氨酸磷酸化在成纤维细胞表达原胶原基因中的作用。方法：利用抗整合素单抗及相应二抗的交联作用，模拟整合素在成纤维细胞表面簇集而诱导酪氨酸磷酸化，用蛋白印迹和ＲＴ－ＰＣＲ技术分别检测诱导生成的酪氨酸磷酸化蛋白和Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ水平；并观察阻断酪氨酸磷酸化后，酪氨酸磷酸化蛋白和Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的变化。结果：整合素β１亚基在成纤维细胞表面簇集可诱导相对分子质量分别为９８０００和６５０００的酪氨酸磷酸化蛋白，且Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的表达显著增加（Ｐ＜０．０１）；阻断酪氨酸磷酸化，不仅酪氨酸磷酸化蛋白显著减少（Ｐ＜０．０１），而且Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的表达也降低（Ｐ＜０．０５）。结论：整合素β１亚基在成纤维细胞表面簇集诱导的酪氨酸磷酸化蛋白在Ⅰ型原胶原基因表达中具有重要作用。 展开更多
关键词 整合素 成纤维细胞 原胶原蛋白 酪氨酸磷酸化
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辐射诱导小鼠免疫细胞蛋白质表达变化及酪氨酸磷酸化
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作者 陈沙力 孟庆勇 刘树铮 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1998年第2期117-119,共3页
目的：为进一步了解低剂量辐射对免疫细胞早期蛋白质表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、光密度扫描及免疫沉淀方法观察75mGyX射线全身照射对小鼠免疫细胞蛋白质表达变化及酪氨酸磷酸化的影响。结果：照射后... 目的：为进一步了解低剂量辐射对免疫细胞早期蛋白质表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、光密度扫描及免疫沉淀方法观察75mGyX射线全身照射对小鼠免疫细胞蛋白质表达变化及酪氨酸磷酸化的影响。结果：照射后小鼠胸腺细胞Mr=28000及Mr=43000蛋白质表达增强；脾细胞Mr=32000及Mr=43000蛋白质表达增强；三种蛋白质均发生酪氨酸磷酸化。结论：这些早期变化的蛋白质参与复杂的细胞功能调节，可能与辐射兴奋效应有关。 展开更多
关键词 低剂量辐射 免疫细胞 蛋白质表达 酪氨酸磷酸化
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抗BST-1抗体刺激介导的髓系细胞酪氨酸磷酸化及FcyR表达的研究
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作者 刘村兰 石原克彦 平野俊夫 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第6期431-434,共4页
目的　探讨髓系细胞表面BST 1(骨髓基质细胞抗原 1) /CD15 7分子能否作为一受体介导信号传导和调节细胞表面FcγR的表达。方法　制备兔抗人BST 1多克隆抗体及其F(ab’) 2 片段 ,以其刺激U937细胞后 ,用免疫沉淀及免疫印迹法研究胞内蛋... 目的　探讨髓系细胞表面BST 1(骨髓基质细胞抗原 1) /CD15 7分子能否作为一受体介导信号传导和调节细胞表面FcγR的表达。方法　制备兔抗人BST 1多克隆抗体及其F(ab’) 2 片段 ,以其刺激U937细胞后 ,用免疫沉淀及免疫印迹法研究胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平的变化 ;用FACS法检测细胞表面FcγR的表达。结果　抗人BST 1抗体刺激U937细胞可介导胞内多种蛋白的酪氨酸磷酸化水平增高 ,包括Mr 为 12 0× 10 3 的c cbl原癌蛋白 ;并可下调细胞表面CD6 4的表达。抗BST 1抗体的这些作用呈抗体Fc段依赖性。结论　髓系细胞表面BST 1分子可作为一受体介导细胞信号传导 ;抗BST 1抗体刺激U937细胞可下调其表面CD6 展开更多
关键词 抗BST-1抗体 酪氨酸磷酸化 风湿性关节炎
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