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靶向HER2的通用型CAR-T细胞来源的细胞外囊泡的制备及功能鉴定
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作者 蒙若彤 王鹏举 +9 位作者 赵晓娟 郑瑞 梁思辛 张依婷 董昊 韩玉洁 杨安钢 白占涛 阎博 路凡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期121-128,共8页
目的 利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法 采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文... 目的 利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法 采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术和慢病毒感染的方法构建底盘Jurkat细胞。流式细胞术检测底盘Jurkat细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞和CAR-Jurkat细胞的构建。通过聚乙二醇6000(PEG6000)浓缩方法和细胞挤压方法制备EV;微粒子追踪分析(NTA)和Western blot法鉴定EV。萤光素酶报告基因系统检测细胞和EV对肿瘤细胞的杀伤作用。荧光显微镜观察免疫细胞对EV的吞噬作用。结果 酶切鉴定和基因测序结果表明重组质粒构建成功。流式细胞术结果显示底盘Jurkat细胞、 CAR-T细胞和CAR-Jurkat细胞顺利制备。NTA结果显示制备的EV大小正确。萤光素酶报告基因系统证明CAR-T细胞、 CAR-Jurkat细胞、 CAR-T EV和CAR-Jurkat EV对HER2+肿瘤细胞均具有靶向杀伤能力。荧光显微镜观察表明,提高CD47分子的表达水平能够减弱免疫细胞对通用型CAR-Jurkat EV的吞噬作用。结论 通用型CAR-T细胞来源EV能够靶向杀伤HER2+肿瘤细胞。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体T(car-t)细胞 同种异体 底盘细胞 细胞外囊泡
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HER2靶向TRAC和B2M双基因敲除通用型CAR-T细胞的制备及对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用 被引量:3
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作者 宋源 李秧 +7 位作者 阎博 左百乐 赵丽君 赵晓娟 王鹏举 王依依 杨安钢 王向鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期432-438,共7页
目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CA... 目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CAR-T细胞;利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术敲除CAR-T的T细胞受体(TCR)和人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ),制备靶向HER2的通用型CAR-T细胞,CCK-8试验检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。结果制备通用型CAR-T细胞,CAR阳性率为(67.1±1.46)%,TCR和HLA-Ⅰ类分子的敲除率为(86.31±1.78)%。体外杀伤试验显示通用型CAR-T细胞能够有效杀伤HER2阳性肿瘤细胞,其杀伤能力与CAR-T细胞无明显区别。结论成功制备能够靶向杀伤HER2阳性肿瘤细胞的通用型CAR-T细胞,为实现应用通用型同种异体CAR-T细胞治疗HER2阳性肿瘤患者奠定了基础。 展开更多
关键词 同种异体 表皮生长因子受体2 嵌合抗原受体T(car-t)细胞 通用型car-t细胞
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靶向实体瘤CAR-T细胞设计:安全性与通用性提升策略
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作者 邱毓灵 廖天艺 +1 位作者 刘宝瑞 李茹恬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第6期559-569,共11页
嵌合抗原受体基因修饰T细胞(CAR-T细胞)疗法是一种肿瘤免疫治疗方法:来自人体的T细胞在体外经遗传学修饰、表达特异性嵌合抗原受体(CAR),然后将其回输入患者体内,用于靶向识别和消除肿瘤细胞。尽管CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤治疗中取... 嵌合抗原受体基因修饰T细胞(CAR-T细胞)疗法是一种肿瘤免疫治疗方法:来自人体的T细胞在体外经遗传学修饰、表达特异性嵌合抗原受体(CAR),然后将其回输入患者体内,用于靶向识别和消除肿瘤细胞。尽管CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤治疗中取得了较为显著的成功,其在实体瘤治疗中仍面临障碍。细胞因子释放综合征(CRS)等免疫相关不良反应(irAE)制约了CAR-T细胞的安全应用,肿瘤相关抗原(TAA)的异质性限制了单一CAR-T细胞的广谱适用性,也制约了其通用型开发。鉴于此,要使CAR-T细胞疗法在实体瘤临床治疗中得到应用,还需开展进一步的改良与提升研究。本文围绕实体瘤中CAR-T细胞疗法,从“CAR基因修饰策略”、“通用免疫受体的再靶向策略”及“抗原通用性‘赋靶’策略”三个方面对CAR-T细胞领域中为提高安全性和通用性所进行的探索进行述评,系统剖析各策略的研究路径、优势及局限性,并展望未来发展方向。通过综述CAR-T细胞安全性和普适性设计策略的进展,本文旨在为实体瘤的CAR-T细胞疗法研发提供创新思路。 展开更多
关键词 实体瘤免疫治疗 嵌合抗原T细胞疗法 脱靶效应 开关car-t细胞
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CAR-T细胞精准治疗血液恶性肿瘤发展进程中的四大突破及其存在的问题和解决对策 被引量:1
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作者 李梅芳 周丽娟 李玉华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第2期127-139,共13页
血液系统恶性肿瘤严重威胁人类健康,CAR-T细胞疗法是治疗血液系统恶性肿瘤的有效方法,是近年来发展最为迅猛的肿瘤免疫治疗方法之一。为获得高效低毒的CAR-T细胞,经过不断发展及探索,CAR-T细胞疗法在血液恶性肿瘤中取得了一系列重大突破... 血液系统恶性肿瘤严重威胁人类健康,CAR-T细胞疗法是治疗血液系统恶性肿瘤的有效方法,是近年来发展最为迅猛的肿瘤免疫治疗方法之一。为获得高效低毒的CAR-T细胞,经过不断发展及探索,CAR-T细胞疗法在血液恶性肿瘤中取得了一系列重大突破,包括人源化CAR-T细胞技术、双靶点及多靶点CAR-T细胞技术、通用型CAR-T细胞技术和CAR-T细胞联合策略技术。人源化CAR-T细胞技术通过人源化改造,降低其免疫原性;双靶点及多靶点CAR-T细胞技术能够同时识别两种或多种肿瘤相关抗原,减少抗原逃逸,提高疗效;通用型CAR-T细胞技术解决了成本高及可及性等问题;CAR-T细胞联合策略技术通过不同治疗方式的组合,有效解决了一部分CAR-T细胞后复发等问题,提高了其疗效和安全性等。尽管CAR-T细胞疗法在血液恶性肿瘤治疗中取得了重大突破,但仍然面临着耐药与抗原逃逸、细胞毒性和治疗后复发等问题。本文介绍CAR-T细胞精准治疗血液恶性肿瘤进程中的重大突破成果及存在的问题与解决对策。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞 精准治疗 血液恶性肿瘤 人源化 双靶点 多靶点 通用型 联合策略
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CAR-T细胞治疗胃癌:从靶点探索到临床转化的突破与挑战
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作者 刘恋 陶民 +3 位作者 李嘉瑞 刘畅 齐长松 沈琳 《中国肿瘤临床》 北大核心 2025年第16期820-825,共6页
胃癌是全球高发的恶性肿瘤,治疗手段有限。嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法为胃癌治疗带来新希望,但其应用仍面临诸多挑战。本文旨在综述CAR-T细胞治疗胃癌的最新进展,系统阐述其从靶点探索到临床转化... 胃癌是全球高发的恶性肿瘤,治疗手段有限。嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法为胃癌治疗带来新希望,但其应用仍面临诸多挑战。本文旨在综述CAR-T细胞治疗胃癌的最新进展,系统阐述其从靶点探索到临床转化的关键突破与核心挑战,并展望未来发展方向。本文讨论了理想靶点的筛选标准,并重点评述了主流靶点的研究现状,包括已证实显著疗效的Claudin-18.2(CLDN18.2)以及面临不同挑战的HER-2、CEA、EpCAM和MUC1等。本文亦深入剖析了制约CART疗效的三大核心障碍及其应对策略:通过局部递送、武装型CAR-T及联合治疗等方式攻克免疫抑制性肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME);利用亲和力调控及逻辑门设计等工程化改造规避中靶脱瘤毒性(on-target/off-tumor toxicity,OTOT);采用早期单采、快速制备平台及通用型CAR-T等策略优化生产流程、降低成本。未来多维度、整合性的创新策略是推动CAR-T疗法在实体瘤领域取得全面突破的关键。 展开更多
关键词 car-t 细胞疗法 胃癌 靶点 实体瘤
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^(18)F-FDG PET/CT代谢参数对接受CAR-T治疗的弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后价值的队列研究
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作者 何超 周夜夜 +1 位作者 章斌 邓胜明 《中国癌症杂志》 北大核心 2025年第8期743-751,共9页
背景与目的:复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)可采用嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法进行治疗。基于影像学的特征有助于筛选可能对该免疫疗法产生临床应答的患者。... 背景与目的:复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)可采用嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法进行治疗。基于影像学的特征有助于筛选可能对该免疫疗法产生临床应答的患者。本研究旨在建立一个基于18氟脱氧葡萄糖正电子发射断层显像(18-f1uoro-2-deoxy-D-glucose positronemision tomography-computed tomography,18F-FDG PET/CT)参数的模型,用于评估接受CAR-T疗法的复发或难治性DLBCL患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)。方法:回顾性分析2017年3月—2022年1月于苏州大学附属第一医院接受CAR-T治疗的DLBCL患者的临床和影像学资料。纳入标准:①年龄≥18岁;②病理学检查证实为复发或难治性DLBCL;③CAR-T治疗前行18F-FDG PET/CT检查;④临床病理学数据完整;⑤患者必须有可测量的病灶。排除标准:①患者的临床或影像学数据不完整;②患有其他类型的恶性肿瘤;③在PET/CT扫描前1个月内接受过粒细胞集落刺激因子治疗。本研究通过苏州大学附属第一医院伦理委员会的审查(编号:2025256)。利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)确定最大标准摄取值(maximum standard uptake value,SUVmax)、肿瘤代谢体积(metabolic tumour volume,MTV)和总糖酵解量(total lesion glycolysis,TLG)的最佳阈值,并将患者分为高风险组和低风险组。采用单因素和多因素Cox回归分析来确定潜在的影响预后的因素并构建预测模型,绘制列线图进行可视化分析。计算受试者工作特征曲线下面积评估各模型的性能。结果:本研究共纳入了61例(男性37例,女性24例,年龄26~75岁)在CAR-T输注前接受18F-FDG PET/CT检查的DLBCL患者。中位随访时间为14个月,36例(59.02%)患者出现疾病进展,25例(40.98%)患者死亡。多因素分析显示,细胞因子释放综合征(cytokine release syndrome,CRS)分级[风险比(HR)=3.671,P=0.003]和MTV(HR=0.171,P=0.004)是影响OS的独立预后因素;东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)评分(HR=2.411,P=0.019)、CRS分级(HR=2.499,P=0.027)和MTV(HR=0.338,P=0.007)是影响PFS的独立预后因素。综合模型(MTV、ECOG评分、CRS分级)在预测PFS和OS方面比临床模型(ECOG评分、CRS分级)、代谢参数模型(MTV)更佳。结论:18F-FDG PET/CT代谢参数MTV联合传统的临床风险因素(ECOG评分、CRS分级)可识别出超高风险的DLBCL患者。 展开更多
关键词 弥漫大B细胞淋巴瘤 PET/CT 肿瘤代谢体积 car-t 预后
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通用型CAR-NK细胞治疗系统性红斑狼疮的应用与展望 被引量:3
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作者 于奕奕 胡佳琪 +2 位作者 靳正逸 孔瑞娜 高洁 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1199-1204,共6页
系统性红斑狼疮(SLE)的特点是B细胞异常活化产生大量自身抗体,这些自身抗体与自身抗原形成免疫复合物诱发系统性炎症,导致全身多系统多器官受累。现有靶向B细胞治疗策略(如贝利尤单抗、泰它西普及利妥昔单抗等)的临床疗效仍然有限,近年... 系统性红斑狼疮(SLE)的特点是B细胞异常活化产生大量自身抗体,这些自身抗体与自身抗原形成免疫复合物诱发系统性炎症,导致全身多系统多器官受累。现有靶向B细胞治疗策略(如贝利尤单抗、泰它西普及利妥昔单抗等)的临床疗效仍然有限,近年来靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞治疗SLE展现出卓越的疗效。但自体CAR-T细胞治疗存在细胞因子释放综合征、T细胞肿瘤、感染等潜在风险,且价格昂贵。CAR-自然杀伤(NK)细胞治疗是现货型细胞疗法,其安全性高,无神经毒性及肿瘤化风险,且治疗费用低。目前,CAR-NK细胞在治疗血液系统肿瘤中取得了显著的研究成果,且CAR-NK细胞治疗SLE的初步临床研究展现出良好的治疗效果、优异的安全性及可预期的持久性。本文将重点阐述新一代通用型CAR-NK细胞的特点及其用于治疗复发难治性SLE的最新临床研究结果,展望其治疗SLE及B细胞相关自身免疫病的广阔前景。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 嵌合抗原受体 自然杀伤细胞 通用型
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局部分泌IL-2的CD19 CAR-T细胞构建与功能
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作者 王文娟 陈静 +2 位作者 胡周 刘秀盈 王建勋 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第4期356-363,共8页
目的:探讨基于新型单载体SynNotch系统构建的局部分泌IL-2的CAR-T细胞(Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞)对传统CD19 CAR-T细胞功能的影响。方法:基于本课题组前期构建的单载体SynNotch系统,将CD19特异性FMC63抗体与IL-2表达模块整合,通过自失... 目的:探讨基于新型单载体SynNotch系统构建的局部分泌IL-2的CAR-T细胞(Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞)对传统CD19 CAR-T细胞功能的影响。方法:基于本课题组前期构建的单载体SynNotch系统,将CD19特异性FMC63抗体与IL-2表达模块整合,通过自失活逆转录病毒载体转导T细胞制备Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞。诱导验证实验分为Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞组和未转导T细胞组,通过ELISA检测抗原刺激后IL-2分泌水平。采用CFSE染色法检测在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞存在时,CD19 CAR-T细胞与肿瘤Raji-Luc或SW620-CD19-Luc细胞共培养时,IL-2的分泌对CD19 CAR-T细胞增殖的影响。流式细胞术检测CD69表达,观察在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2的情况下,CD19 CAR-T细胞与Raji-Luc细胞共培养时的激活情况。结果:成功构建自失活逆转录病毒载体Syn.CD19.IL-2 CAR,制备出Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞,病毒滴度>1×10^(7)拷贝/mL,转导效率达37.1%。抗原刺激后,SynNotch CAR-T细胞IL-2分泌量显著高于未转导T细胞(P<0.001)。在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2时,CD19 CAR-T细胞具有更强的增殖能力和更高的活化水平(均P<0.001)。结论:成功构建的Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞能显著增强CD19 CAR-T细胞的增殖和活化能力。 展开更多
关键词 SynNotch系统 car-t细胞 IL-2 CD19
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CAR-T细胞治疗后复发机制及治疗新策略研究进展
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作者 庞琼玉(综述) 孙慧生(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第9期975-982,共8页
嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)疗法作为肿瘤免疫治疗的重要突破,在血液系统恶性肿瘤中展现出显著疗效,但治疗后复发问题严重限制了其临床应用。本文系统总结了CAR-T细胞治疗后复发的关键机制,包括肿瘤抗原逃逸、CAR-T细胞... 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)疗法作为肿瘤免疫治疗的重要突破,在血液系统恶性肿瘤中展现出显著疗效,但治疗后复发问题严重限制了其临床应用。本文系统总结了CAR-T细胞治疗后复发的关键机制,包括肿瘤抗原逃逸、CAR-T细胞功能耗竭、免疫抑制性肿瘤微环境、肿瘤异质性及克隆演化、肿瘤干细胞耐药性等,并基于此提出新型治疗策略,如多靶点CAR设计、联合表观遗传调控与代谢干预、重塑肿瘤微环境及人工智能辅助优化等。通过多学科交叉融合与技术创新,未来有望突破CAR-T细胞疗法在实体瘤及复发难治性肿瘤中的瓶颈,推动精准免疫治疗的发展。 展开更多
关键词 car-t细胞 肿瘤复发 免疫逃逸 肿瘤微环境 T细胞耗竭 表观遗传调控 治疗策略
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国产与进口CD3/CD28激活磁珠制备CAR-T细胞的性能对比
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作者 魏献政 张书瑜 +5 位作者 金钰航 王璞 王旭 郑骏年 刘丹 施明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第5期492-497,共6页
目的:比较国产与进口CD3/CD28激活磁珠制备的CAR-T细胞的性能差异,为国内CAR-T细胞研发和生产提供备用或替代方案。方法:以进口CD3/CD28激活磁珠︰CD3+T细胞比例为1∶1的成熟方案作为研究对照,国产磁珠设置1∶2、1∶1和2∶1的比例梯度激... 目的:比较国产与进口CD3/CD28激活磁珠制备的CAR-T细胞的性能差异,为国内CAR-T细胞研发和生产提供备用或替代方案。方法:以进口CD3/CD28激活磁珠︰CD3+T细胞比例为1∶1的成熟方案作为研究对照,国产磁珠设置1∶2、1∶1和2∶1的比例梯度激活T细胞,T细胞激活72 h后使用CAR慢病毒感染制备CAR-T细胞。分别在慢病毒感染后的第2、4、7天计数,监测CAR-T细胞增殖情况;感染5 d后采用流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率;感染8 d后采用流式细胞术检测CAR-T细胞的CD4/CD8分型情况和PD1+TIM3+耗竭细胞比例。结果:国产CD3/CD28激活磁珠与进口磁珠制备的CAR-T细胞CD4/CD8分型相似,CAR-T细胞阳性率略低于进口磁珠(53.7%vs 57.9%),但CAR-T细胞扩增较进口磁珠增加1倍左右,耗竭水平仅为进口磁珠的一半(4.21%vs 7.91%)。此外,国产磁珠的使用量低于进口磁珠,有利于降低CAR-T细胞研发和生产成本。结论:国产CD3/CD28激活磁珠用于制备CAR-T细胞总体性能不劣于进口磁珠,有潜力作为进口磁珠的备用或替代方案。 展开更多
关键词 CD3/CD28激活磁珠 car-t细胞制备 性能对比 国产替代
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靶向T细胞的工程化外泌体在体生成CD19 CAR-T细胞及其对淋巴瘤细胞的杀伤研究
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作者 董廷 周颖 +8 位作者 余博宇 夏学娇 马艺戈 马妍 高阳 周梦莹 王长俊 李秋漪 顾潮江 《中国肿瘤临床》 北大核心 2025年第6期279-286,共8页
目的:嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)免疫疗法在血液肿瘤治疗方面取得了重大突破,但目前的CAR-T细胞疗法仍存在局限性,如需采集患者本人细胞,存在制备周期长、价格昂贵且慢病毒转导存在插入致癌风险。因此... 目的:嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)免疫疗法在血液肿瘤治疗方面取得了重大突破,但目前的CAR-T细胞疗法仍存在局限性,如需采集患者本人细胞,存在制备周期长、价格昂贵且慢病毒转导存在插入致癌风险。因此,迫切需要构建一种通用型的、能定向转染体内T细胞生成CAR-T细胞的肿瘤免疫治疗新方法。方法:本研究通过构建外泌体靶向递送系统。通过与人PBMC细胞共孵育探索外泌体生成CAR-T细胞的最佳转染剂量及CAR分子表达随时间动力学曲线;利用钙黄绿素法检测CAR-T细胞的杀伤能力;通过尾静脉注射外泌体至肿瘤动物模型体内来评价其在体内的抗肿瘤效果及安全性。结果:本研究成功建立了能够特异性靶向人CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的靶向外泌体。外泌体与PBMC孵育结果表明外泌体靶向生成CAR-T与剂量呈正相关,剂量在10~6粒子/细胞时转染效率最高可达到97.8%;体外细胞毒性实验及体内动物实验结果表明经外泌体孵育构建的CAR-T细胞能够特异性杀伤CD19阳性的Raji细胞。结论:本研究所建立的外泌体靶向递送系统能够成功将CD8^(+)T细胞改造成CAR-T细胞,在体外和小鼠体内均具有显著肿瘤杀伤能力,与传统慢病毒载体体外制备CAR-T细胞的方式相比,转染效率更高、消除了病毒插入存在致癌风险、生产周期短成本更低、成药后可实现药物的现货供应,大幅加速了CART细胞免疫治疗的通用性和实用性。 展开更多
关键词 在体生成car-t细胞 靶向CD8外泌体递送系统 小鼠人源化建模 B淋巴瘤细胞
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IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的增殖及体外抗肿瘤活性 被引量:2
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作者 龚福生 陈珊珊 +1 位作者 郑秋红 刘沁颖 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期951-956,共6页
目的:探讨IL-7的诱导表达对靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)的增殖和体外抗肿瘤活性的影响。方法:通过无缝克隆将GPC3 CAR序列片段插入GV400载体的Bam HⅠ/Eco RⅠ位置,构建第二代CAR慢病毒载体... 目的:探讨IL-7的诱导表达对靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)的增殖和体外抗肿瘤活性的影响。方法:通过无缝克隆将GPC3 CAR序列片段插入GV400载体的Bam HⅠ/Eco RⅠ位置,构建第二代CAR慢病毒载体GPC3-BBZ及GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,以293T细胞包装相应的慢病毒载体后,感染人T细胞制备CAR-T细胞。实验分为未转导T细胞(NT)组、GPC3-BBZ CAR-T细胞组、GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞组。采用流式细胞术检测各组CAR-T细胞中CAR的表达水平,qPCR法检测经GPC3蛋白激活的CAR-T细胞中IL-7 m RNA的表达水平,细胞计数法检测CAR-T细胞在GPC3抗原刺激下的增殖能力,ELISA检测CAR-T细胞在受到肿瘤细胞刺激后IL-7、IFN-γ和TNF-α的分泌水平。应用实时细胞分析(RTCA)技术检测CAR-T细胞对人肝癌Huh-7细胞的杀伤作用。结果:成功构建慢病毒载体GPC3-BBZ和GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,制备出靶向GPC3的CAR-T细胞。经GPC3抗原激活后,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞可有效表达IL-7 mRNA(P<0.01),其表现出更强的增殖能力(P<0.05)。与GPC3-BBZ CAR-T细胞相比,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞与GPC3阳性靶细胞Huh-7细胞共培养后,分泌更高水平的IL-7、IFN-γ和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。RTCA结果显示,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞对GPC3阳性Huh-7细胞的杀伤活性显著高于GPC3-BBZ CAR-T细胞(P<0.05)。结论:成功制备可诱导表达IL-7的靶向GPC3的CAR-T细胞,IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的免疫活性,在体外展现出较强的肿瘤细胞杀伤能力。 展开更多
关键词 细胞 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 car-t细胞 IL-7 诱导表达
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通用型红细胞工程的研究进展 被引量:1
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作者 檀英霞 季守平 宫锋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期814-819,共6页
生产、使用O型通用型红细胞(universal red blood cells)是未来输血医学发展的方向,本文综述了近年制备通用型红细胞的技术。第1种是红细胞血型抗原修饰技术,又分为2种方法:①糖苷酶酶解法,利用特异的外切糖苷水解酶将红细胞表面的A、B... 生产、使用O型通用型红细胞(universal red blood cells)是未来输血医学发展的方向,本文综述了近年制备通用型红细胞的技术。第1种是红细胞血型抗原修饰技术,又分为2种方法:①糖苷酶酶解法,利用特异的外切糖苷水解酶将红细胞表面的A、B抗原的糖基去除,制备酶解转变的O型红细胞(ECO-RBC);B型红细胞制备的ECO-RBC已经成功地进行了临床输血试验,可安全地输给A型和O型患者;由于A抗原结构的复杂性,A型红细胞的酶解转变研究存在很大困难,目前应用细菌来源的新型糖苷酶同时实现了A1→O、A2→O的转变;②PEG化技术,利用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)非特异地遮蔽红细胞表面抗原,制备O型及表面稀有血型抗原阴性的通用型红细胞。第2种是诱导多能干细胞或成体细胞分化为成熟的红细胞的技术,不仅可制备ORh-型红细胞,还可作为新的血液来源以解决目前的血源短缺问题。目前,可用来诱导产生红细胞体系的启动细胞有造血干细胞(HSC),诱导性多能干细胞(iPSC)和人胚胎干细胞(hESC)或真皮成纤维细胞(Fib);利用多能干细胞制备通用型红细胞尚处于实验研究阶段,其生产工艺、生产成本及生产的红细胞的安全性、有效性距离临床应用还有许多问题有待解决。尽管如此,这些研究结果对防止血荒或血液传染性疾病的发生,保障应急用血,提高临床输血安全具有重要意义。 展开更多
关键词 通用型细胞工程 酶解转变的通用型细胞 多能干细胞 人胚胎干细胞 成纤维细胞
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通用型辅助性T细胞表位增强了猪瘟病毒合成肽抗原的免疫原性 被引量:1
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作者 李国新 郑宝亮 +3 位作者 周艳君 于海 童武 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第2期1-6,共6页
为了探讨通用型辅助性T细胞表位对猪瘟病毒人工合成短肽抗原免疫原性的影响,本研究合成了含有猪瘟病毒E2蛋白线性中和表位的短肽B,合成了含有通用型辅助性T细胞表位的短肽Th-B。同时,为了探讨免疫刺激基序对人工合成短肽抗原免疫原性的... 为了探讨通用型辅助性T细胞表位对猪瘟病毒人工合成短肽抗原免疫原性的影响,本研究合成了含有猪瘟病毒E2蛋白线性中和表位的短肽B,合成了含有通用型辅助性T细胞表位的短肽Th-B。同时,为了探讨免疫刺激基序对人工合成短肽抗原免疫原性的影响,合成了含有免疫刺激序列的IS-Th-B。将上述3种合成肽与弗氏佐剂混合乳化后,免疫兔子,比较3种不同的抗原肽诱导的抗体水平,并用猪瘟弱毒对免疫兔子进行攻击,比较抗原肽的免疫保护效果。结果显示,Th-B和IS-Th-B诱导了相当的抗体水平,但显著高于抗原肽B诱导的抗体水平。Th-B和IS-Th-B免疫延迟但没有阻止兔定型热的产生,而抗原肽B免疫兔和未免疫兔一样发生了明显的定型热反应。本研究表明,免疫刺激基序对本研究中的短肽诱导的抗体应答没有产生明显影响,但通用型辅助性T细胞表位增强了短肽抗原的免疫原性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 通用型辅助性T细胞表位 线性中和表位 合成肽
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儿童CD19 CAR-T细胞治疗相关B细胞再生障碍的临床意义和对策
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作者 卢俊 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期578-582,共5页
急性B系淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿在CD 19 CAR-T细胞治疗后普遍发生B细胞再生障碍(BCA),BCA持续的时间长短对患者的免疫状态及预后会产生影响。对BCA的充分认识有助于临床医师科学、规范、合理地选择治疗策略,减少CAR-T治疗后白血病患... 急性B系淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿在CD 19 CAR-T细胞治疗后普遍发生B细胞再生障碍(BCA),BCA持续的时间长短对患者的免疫状态及预后会产生影响。对BCA的充分认识有助于临床医师科学、规范、合理地选择治疗策略,减少CAR-T治疗后白血病患儿的感染机会,提高生活质量,改善预后。 展开更多
关键词 急性B系淋巴细胞白血病 CD 19 car-t B细胞再生障碍 儿童
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消化系统肿瘤过继性免疫细胞治疗中存在的问题与解决思路
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作者 徐斌(综述) 蒋敬庭(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第3期338-343,共6页
消化系统肿瘤因早期诊断率低、异质性高,加之治疗仍以手术、放化疗为主,缺乏有效治疗手段,患者预后欠佳。虽然靶向药物和免疫检查点抑制剂(ICI)的应用为消化道肿瘤的治疗提供了新的手段,但仅有部分患者对治疗产生响应。目前,过继性细胞... 消化系统肿瘤因早期诊断率低、异质性高,加之治疗仍以手术、放化疗为主,缺乏有效治疗手段,患者预后欠佳。虽然靶向药物和免疫检查点抑制剂(ICI)的应用为消化道肿瘤的治疗提供了新的手段,但仅有部分患者对治疗产生响应。目前,过继性细胞免疫疗法(ACT)在抗肿瘤治疗领域不断创新并取得了重要进展。因此,在了解ACT治疗作用机制的基础上,进一步分析其在消化系统肿瘤治疗过程中存在的问题,总结采取的针对性措施及优化方案,有望为消化系统肿瘤ACT治疗提供参考,并形成新的策略。 展开更多
关键词 消化系统肿瘤 过继性细胞免疫治疗 car-t TCR-T
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CAR-T细胞体内外扩增方法的优化策略 被引量:3
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作者 潘心怡 任政乾 +1 位作者 王欣玥 王婷婷 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期647-654,共8页
嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞免疫治疗被认为是最有前景的肿瘤治疗方法之一,效应CAR-T细胞的数量是决定CAR-T细胞疗法治疗效果的关键因素。CAR-T细胞的体外扩增耗时耗力,回输体内后,CAR-T细胞大量耗竭且难以浸润实体瘤,导致能有效... 嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞免疫治疗被认为是最有前景的肿瘤治疗方法之一,效应CAR-T细胞的数量是决定CAR-T细胞疗法治疗效果的关键因素。CAR-T细胞的体外扩增耗时耗力,回输体内后,CAR-T细胞大量耗竭且难以浸润实体瘤,导致能有效抑制实体瘤的CAR-T细胞数量大幅下降。目前,CAR-T细胞的扩增方法在提高扩增特异性和治疗安全性等方面均存在问题,为CAR-T细胞疗法的临床转化造成困难。近年来,新型免疫激动剂及其下游信号的发现为CAR-T细胞扩增方案提供了更多选择,免疫激动剂给药方式的更新迭代进一步提高了其在体内扩增CAR-T细胞的安全性。本文分析了目前扩增CAR-T细胞面临的挑战,系统阐述了近年来在体内外扩增CAR-T细胞的新策略,为CAR-T细胞疗法的疗效和产能优化提供了新思路。 展开更多
关键词 肿瘤 实体瘤 免疫治疗 car-t细胞疗法 特异性扩增
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CAR-T细胞治疗中T细胞的耗竭及改善途径
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作者 朱元玲 王月丹 李海潮 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第6期499-506,共8页
肿瘤免疫治疗在临床中取得了良好的治疗效果,受到越来越多的关注。其中嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞在血液系统肿瘤中的治疗更是取得了突破性进展。然而,随着肿瘤抗原的长期刺激,CAR-T细胞在体内会出现耗竭现... 肿瘤免疫治疗在临床中取得了良好的治疗效果,受到越来越多的关注。其中嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞在血液系统肿瘤中的治疗更是取得了突破性进展。然而,随着肿瘤抗原的长期刺激,CAR-T细胞在体内会出现耗竭现象。CAR-T细胞的耗竭会导致治疗效果不佳或治疗后肿瘤复发。其耗竭的机制涉及耗竭相关转录因子的表达、肿瘤免疫抑制性微环境的作用以及CAR结构本身的影响等一系列过程。本文旨在总结CAR-T细胞耗竭的过程和机制,以及通过改善T细胞耗竭来提高CAR-T细胞治疗效果的可能途径,以期促进CAR-T治疗在肿瘤治疗中的应用。 展开更多
关键词 car-t细胞 T细胞耗竭 免疫治疗 肿瘤
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B细胞肿瘤抵抗CAR-T细胞治疗的机制及逆转策略 被引量:1
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作者 张杨 伍志强 韩为东 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1043-1050,共8页
以CD19靶点为代表的嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞在B细胞恶性肿瘤治疗中取得突破性进展,但随着CAR-T细胞治疗患者数量的增加,复发、抵抗问题已成为临床亟待解决的问题和领域内研究热点。近年来除抗原丢失引发的免疫逃逸及CAR-T细... 以CD19靶点为代表的嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞在B细胞恶性肿瘤治疗中取得突破性进展,但随着CAR-T细胞治疗患者数量的增加,复发、抵抗问题已成为临床亟待解决的问题和领域内研究热点。近年来除抗原丢失引发的免疫逃逸及CAR-T细胞失能导致的治疗不敏感外,对于肿瘤细胞自身内在因素异常等导致的治疗抵抗的研究也取得了一定的进展。基于高通量的筛选体系,促凋亡分子[如佛波醇-12-肉豆蔻酸-13-乙酸酯诱导蛋白-1(PMAIP1,又称NOXA)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)等]和黏附分子[如CD58、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)等]表达降低或缺失介导的抵抗机制相继被识别。对于目前已被识别的抵抗机制,已形成多种针对性的逆转策略,如组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂联合CAR-T细胞治疗NOXA低表达的非霍奇金淋巴瘤;表观遗传学药物预处理CAR-T细胞增加其抗瘤效能与持久性;通过基因编辑技术解除相关基因的抑制作用从而增效CAR-T细胞;过表达细胞因子改善肿瘤微环境等,且部分策略已获得临床验证。本文综述已有CAR-T细胞治疗的抵抗机制及其针对性逆转策略,分析了相关研究的临床转归,旨在为提升CAR-T细胞在B细胞肿瘤中的疗效提供新的思路。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体T(car-t)细胞 B细胞肿瘤 抵抗机制 car-t细胞失能 逆转策略
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靶向CD70的CAR-T细胞联合疗法的研究进展
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作者 王佳煦(综述) 曹钰嵩 赵继敏(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期722-727,共6页
CAR-T细胞疗法是一种新兴的抗肿瘤免疫细胞疗法,在某些血液系统恶性肿瘤的治疗中取得进展。由于CAR-T细胞自身存在靶抗原的异质性、自发功能耗竭等问题,同时实体瘤有较强的逃避机体免疫系统的能力,导致单一CAR-T细胞应用于实体瘤中鲜有... CAR-T细胞疗法是一种新兴的抗肿瘤免疫细胞疗法,在某些血液系统恶性肿瘤的治疗中取得进展。由于CAR-T细胞自身存在靶抗原的异质性、自发功能耗竭等问题,同时实体瘤有较强的逃避机体免疫系统的能力,导致单一CAR-T细胞应用于实体瘤中鲜有成效。CD70是一种Ⅱ型穿膜糖蛋白,在正常人体组织中表达较少或不表达,在多种肿瘤组织中高表达,因此,成为CAR-T细胞疗法的有效靶点之一。近年来,研究聚焦于靶向CD70的嵌合抗原受体基因修饰T(CD70 CAR-T)细胞在CAR结构上的不断优化、与其他靶点联合构建双特异性CAR-T细胞(B7H3、CD19等)及联合治疗(PARP抑制剂、溶瘤病毒、表观遗传学调节剂等),探索增强疗效的新策略。本文论述了CD70 CAR-T细胞疗法的研究进展,分析联合疗法提高疗效的分子机制,为其早日应用于临床治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 肿瘤 CD70 car-t细胞 结构优化 联合疗法
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