植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定 被引量：5

1

作者 杨丽琛 常团结 +3 位作者 蔡华雅 陈宛新 杨晓光 朱祯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期30-36,共7页

为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形... 为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,且与Glutathione Sephrose 4B纯化介质的结合率不高。后经优化诱导表达的各种条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,该蛋白具有明显的生物活性。经Glutathione Sephrose 4B亲和层析,所得蛋白纯度>95％。动物实验显示,融合蛋白还具有良好的免疫原性,免疫家兔后可诱导产生高滴度的抗体(>1:10000)。ELISA及Western blotting检测进一步证实了所获纯化蛋白及其抗体的特性。这为深入进行HPT蛋白的安全性评价打下了良好的基础。 展开更多

关键词 植物选择标记基因 大肠杆菌 融合表达 纯化 生物活性 HPT蛋白 包涵体 可溶性 免疫原性

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转基因植物中删除选择标记基因的研究进展 被引量：4

2

作者 祁永斌 刘庆龙 +1 位作者 陆艳婷 金庆生 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1387-1393,共7页

选择标记基因广泛应用于植物转基因工程中,然而这些基于除草剂和抗生素类抗性选择标记基因的利用,在转基因筛选和鉴定完成后功能多余。当前转基因植物的标记基因及相关产物对环境污染和食用安全的潜在影响,已经引起了人们的广泛关注。... 选择标记基因广泛应用于植物转基因工程中,然而这些基于除草剂和抗生素类抗性选择标记基因的利用,在转基因筛选和鉴定完成后功能多余。当前转基因植物的标记基因及相关产物对环境污染和食用安全的潜在影响,已经引起了人们的广泛关注。随着转基因技术的不断发展和人们对转基因植物和食品安全性的关注,删除转基因植物中的选择标记基因非常重要。文章着重讨论了植物转基因过程中,选择标记基因的利用,删除选择标记基因的几种方法,包括共转化法、位点特异性重组、染色体内重组、转座子介导的重组、删除叶绿体转化中选择标记基因,以及无选择标记基因植株的直接再生等。同时,还对这些技术的发展作了展望。 展开更多

关键词 选择标记基因 共转化 位点特异性重组 转座子 叶绿体转化

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质体基因工程中选择标记基因研究进展 被引量：2

3

作者 何勇 罗岸 +4 位作者 母连胜 陈强 张艳 叶开温 田志宏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期810-827,共18页

与细胞核基因工程相比,质体基因工程能更安全、精确和高效地对外源基因进行表达,作为下一代转基因技术已广泛用于基础研究和生物技术应用领域。与细胞核基因工程一样,质体基因工程中也需要合适的选择标记基因用于转化子的筛选和同质化,... 与细胞核基因工程相比,质体基因工程能更安全、精确和高效地对外源基因进行表达,作为下一代转基因技术已广泛用于基础研究和生物技术应用领域。与细胞核基因工程一样,质体基因工程中也需要合适的选择标记基因用于转化子的筛选和同质化,但基于质体基因组的多拷贝性和母系遗传特点,转化子的同质化需要一个长期的筛选过程,这就决定了质体基因工程中选择标记基因的选择标准将不同于细胞核基因工程中广泛使用的现行标准。目前,质体基因工程的遗传转化操作中使用较多的是抗生素选择标记基因,出于安全性考虑,需要找到可替换、安全的选择标记基因或有效的标记基因删除方法。本文在对质体基因工程研究的相关文献分析基础之上,对主要使用的选择标记基因及其删除体系进行了综述,并对比了其优缺点,同时探讨了质体基因工程中所使用的报告基因,以期为现有选择标记基因及其删除体系的改进和开发提供一定参考,进一步推动质体基因工程,尤其是单子叶植物质体基因工程的发展。 展开更多

关键词 质体基因工程 叶绿体基因工程 质体遗传转化 叶绿体遗传转化 选择标记基因 标记基因删除

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转Bt基因棉花选择标记基因nptⅡ转录后沉默分析 被引量：1

4

作者 晋昕 常瞡 +2 位作者 司怀军 张宁 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期385-390,共6页

本研究利用病毒诱导基因沉默技术对转Bt基因棉花选择标记基因nptⅡ进行沉默,分析标记基因转录后沉默的可行性。以烟草脆裂病毒载体为骨架构建nptⅡRNAi载体,利用农杆菌浸染棉花子叶,获得nptⅡ干涉的转Bt基因棉花植株,然后涂抹卡那霉素... 本研究利用病毒诱导基因沉默技术对转Bt基因棉花选择标记基因nptⅡ进行沉默,分析标记基因转录后沉默的可行性。以烟草脆裂病毒载体为骨架构建nptⅡRNAi载体,利用农杆菌浸染棉花子叶,获得nptⅡ干涉的转Bt基因棉花植株,然后涂抹卡那霉素进行检测。结果表明nptⅡ沉默植株叶片出现黄斑症状,RT-PCR和q RT-PCR检测表明叶片、根和茎中nptⅡ基因转录分别被抑制了99.25%、99.05%和98.65%,沉默后期的转录抑制也达到98%。本研究结果为解决已经在环境中释放转基因生物发生意外扩散和不可预料的生物安全事件提供了快速有效的应对方法和新思路。 展开更多

关键词 棉花 选择标记基因 病毒诱导的基因沉默 转录后调控 转基因生物安全

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以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法 被引量：2

5

作者 李淑洁 王红梅 +2 位作者 张正英 杨随庄 倪建福 《甘肃农业科技》 2008年第5期5-8,共4页

采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时（A方法）,50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进... 采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时（A方法）,50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时（常规方法,B方法）,80～100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。 展开更多

关键词 nptⅡ选择标记基因 卡那霉素 转基因小麦 高效 筛选方法

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水稻基因枪转化过程中选择标记基因的研究

6

作者 林鸿生 华志华 +4 位作者 卢德赵 高振宇 颜美仙 钱前 黄大年 《上海农业学报》 CSCD 2001年第3期9-12,共4页

标记基因的利用是筛选和鉴定基因转化的细胞、组织和转基因植株的有效方法。针对目前植物遗传转化中常用的 4种抗性标记基因 :卡那霉素抗性基因 (nptⅡ )、潮霉素抗性基因(hpt)、草丁膦 (Glufosinate)抗性基因 (bar)和草甘膦 (Glyfosina... 标记基因的利用是筛选和鉴定基因转化的细胞、组织和转基因植株的有效方法。针对目前植物遗传转化中常用的 4种抗性标记基因 :卡那霉素抗性基因 (nptⅡ )、潮霉素抗性基因(hpt)、草丁膦 (Glufosinate)抗性基因 (bar)和草甘膦 (Glyfosinate)抗性基因 (epsps)对水稻遗传转化过程所起的选择作用的差异作了较系统的比较 。 展开更多

关键词 基因枪 遗传转化 水稻 选择标记基因

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安全选择标记的转基因食用菌研究进展 被引量：15

7

作者 赵姝娴 林俊芳 +1 位作者 王杰 郭丽琼 《食用菌学报》 2007年第1期55-61,共7页

在食用菌外源基因转化过程中,目的基因的导入常需要串联易于识别的选择标记基因,用于转化子的筛选。当筛选完成后,选择标记基因特别是抗性标记基因的存在即是多余的,甚至是有害的,存在生物安全隐患。有鉴于此,本文对获得安全选择标记基... 在食用菌外源基因转化过程中,目的基因的导入常需要串联易于识别的选择标记基因,用于转化子的筛选。当筛选完成后,选择标记基因特别是抗性标记基因的存在即是多余的,甚至是有害的,存在生物安全隐患。有鉴于此,本文对获得安全选择标记基因的转基因食用菌作一综述。 展开更多

关键词 转基因食用菌 选择标记基因 生物安全性

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分子标记辅助选择聚合Xa23,Pi9和Bt基因 被引量：12

8

作者 陈圣 倪大虎 +7 位作者 陆徐忠 李莉 王文相 章琦 赵开军 张亮 郭霞 杨剑波 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期7-9,共3页

利用分子标记辅助选择将高抗水稻白叶枯病的Xa23基因、广谱高抗稻瘟病的Pi9基因、抗水稻螟虫和稻纵卷叶螟的Bt基因聚合到同一株系中,获得了三基因聚合的纯合株系。病、虫抗性鉴定结果显示:聚合了Xa23、Pi9和Bt基因的株系HB1471、HB1473... 利用分子标记辅助选择将高抗水稻白叶枯病的Xa23基因、广谱高抗稻瘟病的Pi9基因、抗水稻螟虫和稻纵卷叶螟的Bt基因聚合到同一株系中,获得了三基因聚合的纯合株系。病、虫抗性鉴定结果显示:聚合了Xa23、Pi9和Bt基因的株系HB1471、HB1473能同时抗白叶枯病、稻瘟病和稻纵卷叶螟;与Xa23、Pi9基因的供体材料L10相比,对白叶枯病和稻瘟病的抗谱相同、抗性水平相当;对稻纵卷叶螟抗性与Bt基因的供体亲本MH63-Bt水平相当。Xa23、Pi9和Bt三基因纯合株系可以作为水稻育种的多抗供体材料。 展开更多

关键词 分子标记辅助选择聚合Xa23 Pi9和Bt基因

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雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)基因工程选择试剂的筛选 被引量：7

9

作者 滕长英 梁成伟 +1 位作者 秦松 曾呈奎 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期302-306,共5页

采用细胞计数法,研究了重要经济微藻——雨生红球藻对10种基因工程常用选择试剂的敏感性。结果表明,雨生红球藻对除草剂草丁膦和抗生素Zeocin比较敏感,50μg/ml的草丁膦和25μg/ml的Zeocin可明显地抑制雨生红球藻生长,尤其是50μg/ml的... 采用细胞计数法,研究了重要经济微藻——雨生红球藻对10种基因工程常用选择试剂的敏感性。结果表明,雨生红球藻对除草剂草丁膦和抗生素Zeocin比较敏感,50μg/ml的草丁膦和25μg/ml的Zeocin可明显地抑制雨生红球藻生长,尤其是50μg/ml的草丁膦能导致细胞两周内全部死亡;高浓度的卡那霉素和硫酸链霉素也可抑制雨生红球藻的生长;雨生红球藻对包括氯霉素和G418在内的其他6种试剂不敏感,即使处理浓度高达1000μg/ml。本文结果提示草丁膦可能是雨生红球藻基因工程适宜的选择试剂,其相应的抗性基因bar可能成为雨生红球藻遗传转化的选择标记基因。 展开更多

关键词 雨生红球藻 选择标记基因 选择试剂 草丁膦

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利用CRISPR/Cas9技术敲除转基因水稻中的潮霉素标记基因 被引量：1

10

作者 彭梅芳 甘凤 +3 位作者 潘春梅 宋健兰 范晓丽 陈克贵 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期901-906,共6页

【目的】在植物转基因研究中,使用选择标记基因(Selectable Marker Gene,SMG)使得转化子的筛选更准确便利,但存在SMG的转基因植株可能对人类健康及生态环境造成潜在危害,这也限制了转基因植物商业化的应用前景。因此去除转基因植物中的... 【目的】在植物转基因研究中,使用选择标记基因(Selectable Marker Gene,SMG)使得转化子的筛选更准确便利,但存在SMG的转基因植株可能对人类健康及生态环境造成潜在危害,这也限制了转基因植物商业化的应用前景。因此去除转基因植物中的SMG十分必要。【方法】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对水稻转基因中常用的SMG潮霉素抗性基因(hygromycin phosphotransferase II,hptII)设计构建了编辑载体,利用农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化方法转化水稻日本晴,得到转化植株,再将转化植株与带有hptII基因的植株进行杂交。【结果】通过遗传转化及分子鉴定,本研究得到了18株可用于编辑hptII基因的转化植株,进一步对转化植株与带有hptII基因的植株杂交的F1代进行检测,经PCR检测及测序验证表明,在杂交F1代植株中,hptII基因的DNA确有编辑发生,包括碱基缺失、替换以及插入等,使得hptII基因不能成功转录。【结论】利用CRISPR/Cas9技术,成功获得了删除hptII基因的转基因水稻。这为植物转基因研究实现无选择标记基因(marker-free)奠定了基础。 展开更多

关键词 水稻 遗传转化 潮霉素抗性基因 无选择标记基因 CRISPR/Cas9

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波吉卵囊藻遗传转化体系选择标记的筛选 被引量：3

11

作者 张晓琴 张宁 +4 位作者 黄翔鹄 李长玲 李蒙杰 谢丽施 张家嘉 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第6期35-41,共7页

【目的】确定波吉卵囊藻(Oocystis borgei)遗传转化体系中的选择筛选标记。【方法】使用分光光度计法测定藻体生物量、叶绿素含量及观察藻液颜色变化,综合评定波吉卵囊藻对6种抗生素的敏感性。【结果】1)波吉卵囊藻对博来霉素非常敏感,2... 【目的】确定波吉卵囊藻(Oocystis borgei)遗传转化体系中的选择筛选标记。【方法】使用分光光度计法测定藻体生物量、叶绿素含量及观察藻液颜色变化,综合评定波吉卵囊藻对6种抗生素的敏感性。【结果】1)波吉卵囊藻对博来霉素非常敏感,25μg/m L的博来霉素即能完全抑制藻体生长,叶绿素含量极显著低于对照组(P<0.01),藻体颜色发黄变白;2)红霉素和氯霉素各浓度的处理都会使藻体生物量和叶绿素含量极显著降低(P<0.01),但是溶解红霉素和氯霉素的乙醇溶剂会对藻体生长产生抑制,不适用作筛选试剂;3)氨苄青霉素、遗传霉素和庆大霉素对波吉卵囊藻生长抑制作用不明显,甚至会促进叶绿素含量的增加。【结论】质量浓度为25μg/m L的博来霉素可以作为波吉卵囊藻遗传转化中的筛选试剂。 展开更多

关键词 波吉卵囊藻 抗生素 基因工程选择标记 遗传转化

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转基因植物中标记基因去除方法的研究进展

12

作者 郎遥玲 管晓燕 +1 位作者 白国辉 刘建国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期41-47,共7页

随着越来越多的转基因植物品种的出现,转基因植物的环境安全及食用安全越来越受到人们的广泛关注。目前存在的问题之一是转基因植物中抗生素或除草剂抗性的选择标记基因的存留。为了提高转基因植物的安全性,将转基因植物中选择性标记基... 随着越来越多的转基因植物品种的出现,转基因植物的环境安全及食用安全越来越受到人们的广泛关注。目前存在的问题之一是转基因植物中抗生素或除草剂抗性的选择标记基因的存留。为了提高转基因植物的安全性,将转基因植物中选择性标记基因去除,不仅利于同一转基因植物的多次操作,而且更容易被人们所接受。就目前转基因植物中选择性标记基因去除的方法及其优缺点进行了横纵向的比较,希望对相关研究领域方法的选择方向具有指导意义。 展开更多

关键词 转基因植物 选择性标记基因 安全性

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转基因技术在大豆育种中的应用

13

作者 练云 梁慧珍 +5 位作者 余永亮 王树峰 位艳丽 董薇 张孟臣 蒋春志 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期333-336,共4页

获得转基因植株是植物基因工程的基础,但是由于转化效率较低,在转基因的过程中通常需要一个有效筛选细胞和组织的手段,于是选择标记基因被广泛应用。然而,选择标记基因的使用,存在生物安全性和环境安全性隐患。因此,建立一个安全高效稳... 获得转基因植株是植物基因工程的基础,但是由于转化效率较低,在转基因的过程中通常需要一个有效筛选细胞和组织的手段,于是选择标记基因被广泛应用。然而,选择标记基因的使用,存在生物安全性和环境安全性隐患。因此,建立一个安全高效稳定的大豆转化体系,是改善大豆产量、品质、抗逆能力,培育新型大豆品种的保障。该文综述了新型标记基因在大豆育种上的应用及转基因技术在大豆和其它作物育种中的应用。 展开更多

关键词 大豆 选择标记基因 遗传转化 转基因技术

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植物转基因技术的过去、现在和未来 被引量：12

14

作者 屈聪玲 贺榆婷 +2 位作者 王瑞良 杨致荣 王兴春 《山西农业科学》 2017年第8期1376-1380,1383,共6页

植物转基因技术是植物基因功能解析和农作物遗传改良的重要手段之一。首先回顾了植物转基因技术的诞生和发展历程,然后系统介绍了载体、选择标记基因和植物转基因常用的农杆菌介导法的研究进展。最后,结合对拟南芥和谷子转基因的研究分... 植物转基因技术是植物基因功能解析和农作物遗传改良的重要手段之一。首先回顾了植物转基因技术的诞生和发展历程,然后系统介绍了载体、选择标记基因和植物转基因常用的农杆菌介导法的研究进展。最后,结合对拟南芥和谷子转基因的研究分析了目前植物转基因存在的难题,并展望了植物转基因技术未来的发展方向和趋势,以期为植物转基因技术的研究与应用提供借鉴。 展开更多

关键词 植物转基因技术 农杆菌介导法 选择标记基因 植物离体再生

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产生无标记农杆菌突变体方法的建立及优化(英文) 被引量：7

15

作者 郭敏亮 诸庆 高佃坤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期556-565,共10页

农杆菌已经用作许多生物过程研究的模型细菌,为了解析这些生物过程的分子机理,对农杆菌的某些基因进行突变就显得非常重要.以自杀性基因sacB作为反向可选择性标记基因,利用同源重组的原理,建立了一种可对农杆菌基因进行准确插入、删除... 农杆菌已经用作许多生物过程研究的模型细菌,为了解析这些生物过程的分子机理,对农杆菌的某些基因进行突变就显得非常重要.以自杀性基因sacB作为反向可选择性标记基因,利用同源重组的原理,建立了一种可对农杆菌基因进行准确插入、删除和位点置换的突变方法,所获突变体不带任何不需要的外源DNA序列.通过详细研究同源序列的长度对农杆菌同源重组效率和突变体产生概率的影响,以及对农杆菌中的同源重组机理的分析,提出了优化该突变体产生方法的方案,即通过设计不等长的上下游同源序列和选择其中一种类型的单交换重组体来筛选二次交换重组体的方法,可以显著地提高理想突变体的产生概率.研究结果对如何提高突变体的产生概率和减少突变体筛选的工作量具重要的参考价值.利用该方法成功地获得了两个基因被同时删除而且不含抗性标记的农杆菌突变株. 展开更多

关键词 农杆菌 反向可选择性标记基因 同源重组机理 无标记突变体

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可删除非目的基因表达载体的构建

16

作者 王贺伟 王立民 +1 位作者 周平 张银国 《安徽农业科学》 CAS 2013年第7期2852-2856,共5页

[目的]通过构建能够删除选择标记基因的表达载体,消除由非目的基因带来的影响,更好地研究转入基因的单一功能。[方法]利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,对DsRed2-1载体进行改造,分别引入LoxP序列及多克隆位点序列,并引入TK基因进行负筛选... [目的]通过构建能够删除选择标记基因的表达载体,消除由非目的基因带来的影响,更好地研究转入基因的单一功能。[方法]利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,对DsRed2-1载体进行改造,分别引入LoxP序列及多克隆位点序列,并引入TK基因进行负筛选,最终获得无目的基因的表达载体。[结果]诱导的载体片段在分子水平上发生了重组,载体转染细胞在细胞水平上也产生了特异性红色荧光。[结论]Cre/loxP系统的标记基因诱导删除体系切实可行,有着广泛的应用前景。 展开更多

关键词 CRE loxP重组系统 选择标记基因 红色荧光蛋白 删除

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柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展

17

作者 江学友 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2014年第6期24-26,共3页

基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有... 基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。 展开更多

关键词 柑桔基因工程 选择标记基因 位点特异性重组系统 基因删除

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低磷条件下过表达OsPHF1基因对粳稻农艺性状的影响

18

作者 胡张华 刘秀艳 +3 位作者 王玉锋 彭瑜 史晓亮 滕胜 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期557-564,共8页

【目的】磷酸盐转运体运输协助因子(PHF1)通过转录后调节特定磷转运蛋白,影响磷酸盐的利用效率。本研究通过培育过表达OsPHF1的无选择标记转基因粳稻空育131,研究在不同磷浓度环境中OsPHF1的过表达对粳稻空育131产量的影响,为培育可商... 【目的】磷酸盐转运体运输协助因子(PHF1)通过转录后调节特定磷转运蛋白,影响磷酸盐的利用效率。本研究通过培育过表达OsPHF1的无选择标记转基因粳稻空育131,研究在不同磷浓度环境中OsPHF1的过表达对粳稻空育131产量的影响,为培育可商品化的磷高效转基因水稻品种提供依据。【方法】利用双T-DNA方法构建OsPHF1的过表达载体,通过农杆菌侵染法和后续筛选获得了无选择标记的转基因空育131纯合株系,通过对T_3和T_4代转基因植株的田间试验,研究转基因品系在低磷浓度(75或112.5 kg/hm^2过磷酸钙)、中低磷浓度(225或300 kg/hm^2过磷酸钙)和正常磷浓度(450 kg/hm^2过磷酸钙)下的农艺性状。【结果】获得了3个无筛选标记的纯合OsPHF1过表达转基因空育131株系F18-18、F22-32和F25-6。其中,F22-32和F25-6的OsPHF1的表达量远高于野生型。大田试验显示,F22-32和F25-6株系的T_3代在中低磷(300kg/hm^2过磷酸钙)环境中,分蘖数比对照分别增加了55%和25%,增产幅度分别为38%和34%;F22-32和F25-6株系T_4代在低磷条件下(112.5kg/hm^2过磷酸钙)产量的增幅最大,增产了30%～35%;在中低磷条件下(225 kg/hm^2过磷酸钙)分蘖数和产量也有明显增加。【结论】双T-DNA法能用于培育过表达OsPHF1的无筛选标记转基因水稻。田间试验显示,高表达OsPHF1的转基因株系在中低磷条件下(112.5、225或300 kg/hm^2过磷酸钙)分蘖数和产量稳定增加。 展开更多

关键词 OsPHF1 过表达 无选择标记的转基因水稻 低磷浓度 产量

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抗除草剂转基因水稻和大豆快速准确检测技术研究 被引量：6

19

作者 马林 周练 +3 位作者 周正剑 唐桂香 沈志成 寿惠霞 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期647-654,共8页

以实验室培育的转基因水稻和大豆为研究材料,对含草铵膦乙酰转移酶基因(phosphinothricin acetyl transferase gene,bar)和不与草甘膦结合的突变型5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶编码基因(5-enolpyruvylshi-kimate-3-phosate synthase gen... 以实验室培育的转基因水稻和大豆为研究材料,对含草铵膦乙酰转移酶基因(phosphinothricin acetyl transferase gene,bar)和不与草甘膦结合的突变型5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶编码基因(5-enolpyruvylshi-kimate-3-phosate synthase gene,EPSPS)2种不同除草剂筛选标记的转基因植株进行叶片喷涂、叶片离体平板培养、种子萌发试验,以建立快速、准确的转基因鉴定方法,并探索可有效区分转化和非转化植株鉴定用的筛选剂剂量.结果表明:这3种方法都能快速、简便、准确地鉴定相应的转基因植株;水稻和大豆叶片对农药吸收具有一定的差异,用300或135 mg/L草铵膦可有效区分是否转入bar基因,用1%或0.25%农达喷施可区分是否转入EPSPS基因;用含有50 mg/L草甘膦的平板培养离体大豆叶片可以方便地区分出转基因株系;种子萌发对除草剂剂量十分敏感,用远低于10 mg/L的2种除草剂即可有效区分阳性与阴性种子.本研究建立的快速鉴定转基因植株的方法在转基因研究材料的鉴定及转基因安全评估中具有重要意义. 展开更多

关键词 转基因 大豆 水稻 选择性标记基因 快速检测 草铵膦 草甘膦

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农杆菌介导的水稻双载体共转化法中部分影响因素的研究 被引量：14

20

作者 陆美芳 刘巧泉 +1 位作者 于恒秀 顾铭洪 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期55-62,共8页

以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌... 以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌株搭配及其不同浓度配比对共转化效率的影响。结果表明,在两种农杆菌菌液浓度比为1:1的情况下,农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301组合共转化水稻的效率要高于其他菌株的组合;在以农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301进行共转化时,两种菌液浓度比为1:2时共转化效率最高。 展开更多

关键词 水稻 共转化 T-DNA区 GUS瞬间表达 水稻愈伤组织 农杆菌介导 共转化法 双元载体 GUS报告基因 中部 选择标记基因 转化效率 T-DNA

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