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基于单细胞转录组学测序的巨噬细胞在肝硬化-肝癌疾病进展中的功能研究 被引量:3
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作者 任凌萱 卢子琪 +1 位作者 齐威 冯志杰 《中国全科医学》 北大核心 2024年第29期3654-3663,共10页
背景肝脏巨噬细胞在构建宿主防御机制及维持机体内环境稳定中发挥重要作用,也是参与肝脏损伤和修复的重要细胞成分。单核细胞来源的巨噬细胞在基因调控以及具体功能方面与肝脏固有巨噬细胞不尽相同。90%以上的原发性肝癌发生在肝硬化的... 背景肝脏巨噬细胞在构建宿主防御机制及维持机体内环境稳定中发挥重要作用,也是参与肝脏损伤和修复的重要细胞成分。单核细胞来源的巨噬细胞在基因调控以及具体功能方面与肝脏固有巨噬细胞不尽相同。90%以上的原发性肝癌发生在肝硬化的基础上,巨噬细胞在肝硬化及肝癌疾病进展中的动态变化规律值得探讨。目的解析不同来源肝脏巨噬细胞的转录组学差异,分析巨噬细胞在肝硬化-肝癌疾病进展中的动态变化规律,探索预防肝硬化进展为肝癌的潜在策略。方法本研究通过从GEO数据库获取健康、肝硬化及肝癌组织的单细胞转录组学数据。健康及肝硬化数据来自GEO数据库GSE136103数据集,取自5例健康肝脏以及5例肝硬化肝脏的数据。肝癌数据来自GEO数据库GSE149614数据集,取自10例肝癌患者的数据。通过Seurat软件包分别对肝硬化及肝癌样本的数据进行聚类,鉴定各个细胞类型。将肝硬化样本中的3簇巨噬细胞亚群提取后,分析各个亚群前200个特异性表达基因,应用Metascape在线分析软件对各亚簇特异性表达基因进行功能分析。提取巨噬细胞亚群肝硬化特异性表达基因,通过KEGG功能分析探究巨噬细胞在肝硬化中的功能。将肝硬化以及肝癌单细胞转录组数据通过CellChat软件包进行细胞间相互作用分析,对比肝硬化与肝癌样本巨噬细胞的细胞通讯的差异。将健康对照、肝硬化以及肝癌三者不同来源的巨噬细胞通过Harmony软件包去批次效应,之后导入Monocle软件包进行伪时序分析,构建健康肝脏-肝硬化肝脏-肝癌巨噬细胞的演变轨迹。利用limma软件包找寻在健康肝脏-肝硬化肝脏-肝癌巨噬细胞的演变过程中连续上调以及下调的基因,并进行功能富集分析。结果对所有细胞进行无监督聚类,根据标记基因表达情况,共提取出3个巨噬细胞亚簇(分别为Mac1,Mac2和Mac3)。其中Mac1起源于组织驻留巨噬细胞(Kupffer细胞),Mac2以及Mac3起源于血液单核细胞,并且其数量在肝硬化组织中明显增多。在肝硬化组织中的Mac1表现了适应性免疫系统相关功能的上调,Mac2以及Mac3亚群均表现出吞噬体相关功能以及抗原提呈功能的下调。肝硬化与肝癌样本中巨噬细胞与其他类型细胞的通讯存在巨大的差异。某些细胞间通讯仅发生于肝硬化巨噬细胞中,这包括干扰素Ⅱ(IFN-Ⅱ)以及CD40等信号通路的细胞通讯。经过去批次效应的处理后,对健康肝脏、肝硬化肝脏以及肝癌巨噬细胞进行伪时序分析,结果提示三组数据存在特定的时序关系。本研究发现81个在该过程中连续下调的基因,然而未发现在健康肝脏-肝硬化肝脏-肝癌巨噬细胞演变过程中连续上调的基因。功能分析提示连续下调基因存在对细菌免疫反应的功能富集。结论肝硬化巨噬细胞可以分为3个亚群,其中Mac1来自肝脏固有Kupffer细胞,Mac2、Mac3来自血液单核细胞。肝硬化中诸多免疫相关细胞通讯例如IFN-Ⅱ以及CD40通路在肝癌中消失。健康肝脏-肝硬化肝脏-肝癌巨噬细胞演变过程存在对细菌免疫反应的持续下调,这可能加重了门脉高压造成的肠道菌群位移的危害。对于肝硬化患者,尽早地治疗门脉高压造成的肠漏,可能是重要的治疗策略。 展开更多
关键词 巨噬细胞 肝硬化 肝纤维化 肝肿瘤 单细胞转录组学测序 细胞间相互作用
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基于转录组学测序与生物信息学筛选低氧诱导小鼠肾脏炎症反应的关键基因并验证
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作者 许鑫桐 龙启福 +3 位作者 胡英 贾茹涵 马如雪 永胜 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第12期1071-1079,共9页
目的利用转录组学测序与生物信息学挖掘低氧诱导小鼠肾脏炎症反应的关键基因并验证。方法于海拔4200 m和海拔400 m分别饲养C57/BL6小鼠,构建高原低氧组和平原常氧组小鼠模型,30 d后无菌取出小鼠肾脏组织,HE染色分析肾脏病理学变化,并测... 目的利用转录组学测序与生物信息学挖掘低氧诱导小鼠肾脏炎症反应的关键基因并验证。方法于海拔4200 m和海拔400 m分别饲养C57/BL6小鼠,构建高原低氧组和平原常氧组小鼠模型,30 d后无菌取出小鼠肾脏组织,HE染色分析肾脏病理学变化,并测定低氧暴露下小鼠血气分析和肾脏指数改变。然后对高原低氧组和平原常氧组小鼠肾脏组织进行转录组学测序分析,并利用生物信息学技术筛选关键基因,通过实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)和Western blotting对关键基因进行验证。结果HE染色结果显示与平原常氧组比较,高原低氧组小鼠肾小球萎缩,低氧暴露下小鼠血气分析和肾脏指数均下降。转录组学测序分析结果显示,高原低氧组中共有3007个差异表达基因,其中123个是与炎症相关的差异表达基因(IR-DEGs)。对IR-DEGs进行GO和KEGG富集分析结果显示,在细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子等炎症相关信号通路显著富集。对IR-DEGs构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络结果显示,共鉴定出STAT3、TLR7、CD68、NFKBIA、LEP、APOE 6个Hub基因。RT-qPCR检测结果显示,6个Hub基因的mRNA表达均上调,与转录组测序结果一致。Western blotting检测结果显示,CD68、NFKBIA、LEP、TLR7和APOE蛋白表达上调,STAT3表达下调。结论STAT3、CD68、NFKBIA、LEP、TLR7和APOE是低氧诱导炎症反应的关键基因。低氧环境通过上调机体TLR7、CD68、STAT3、LEP、APOE的表达,诱导小鼠肾脏组织发生炎症反应。 展开更多
关键词 高原低氧 肾脏 炎症反应 转录组学测序 生物信息
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基于转录组测序解析干旱胁迫对祁连山黄参基因表达的调控 被引量:2
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作者 张春梅 祁世明 +4 位作者 闫芳 赵刚 宋海 张喜峰 陈叶 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2024年第3期68-79,共12页
以栽培2个月的黄参为试材,设置对照(土壤相对含水量70%~80%)和适度干旱胁迫(土壤相对含水量55%~60%)处理,利用高通量转录组测序BGISEQ-500平台,对测序结果进行基因功能注释、差异表达基因(DEGs,differentially expressed genes)筛选。... 以栽培2个月的黄参为试材,设置对照(土壤相对含水量70%~80%)和适度干旱胁迫(土壤相对含水量55%~60%)处理,利用高通量转录组测序BGISEQ-500平台,对测序结果进行基因功能注释、差异表达基因(DEGs,differentially expressed genes)筛选。结果表明:(1)获得的68193条Unigene中,分别有34230(50.20%)、34170(50.11%)、31727(46.53%)、27701(40.62%)、27092(39.73%)和22793(33.42%)个Unigene分别被分配到NCBI非冗余蛋白(NR)、eggNOG(基因的进化谱系,Evolutionary genealogy of genes:Non-supervised Orthologous Groups)、基因本体(Gene ontology,GO)、Pfam(Protein family)、SwissProt(Reviewed protein sequence database)和KEGG(Kyoto encyelopedia of genes and genomes)六大功能数据库。(2)DEGs分析显示,黄参块状根和叶中分别有10674个和13402个DEGs;GO富集结果表明,根和叶中的DEGs功能部位中的分布基本一致,主要富集在生物过程、DNA的复制和翻译调控、氧化还原过程、蛋白质磷酸化、防御响应等;KEGG富集分析表明,根中DEGs显著富集在苯丙烷类生物合成、半乳糖代谢、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、植物-病原菌相互作用、植物激素信号转导等途径,叶中DEGs则主要富集在半乳糖代谢、淀粉和蔗糖代谢、苯丙烷类生物合成、戊糖、葡萄糖醛酸转换、植物激素信号转导等途径,说明淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、苯丙烷类生物合成途径、植物激素信号转导途径在黄参应对干旱胁迫中起重要作用。干旱胁迫影响黄参不同器官中差异基因的表达,为解析黄参耐受干旱的生物学途径、黄参药效成分的生物合成和分子机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 黄参 干旱胁迫 转录组学测序 差异基因
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基于转录组测序技术研究高原低氧对小鼠脾脏组织的影响 被引量:5
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作者 李慧倩 胡英 +3 位作者 许玉珍 李积东 郭玉静 永胜(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期11-17,共7页
目的:利用转录组学测序技术探究免疫系统在高原低氧胁迫适应过程中相关基因的表达及响应的分子机制。方法:本研究在高、低海拔环境分别饲养C57BL/6小鼠30 d,取脾脏组织利用RNA-Seq进行转录组测序,将得到的差异基因(DEGs)进行GO和KEGG富... 目的:利用转录组学测序技术探究免疫系统在高原低氧胁迫适应过程中相关基因的表达及响应的分子机制。方法:本研究在高、低海拔环境分别饲养C57BL/6小鼠30 d,取脾脏组织利用RNA-Seq进行转录组测序,将得到的差异基因(DEGs)进行GO和KEGG富集分析,并通过荧光定量PCR验证测序数据的准确性。结果:与平原常氧组相比,共富集到4218个DEGs(P<0.05)。其中,ANXA1、S100A8、S100A9和HSPB1等基因显著富集;GO结果表明DEGs主要富集于B细胞激活、免疫球蛋白复合体和抗原结合分类,且JAK-STAT及NOD样受体信号通路为显著富集通路。结论:免疫系统响应高原低氧胁迫的转录调控分子可能致使机体内部免疫调节和炎症反应失衡,为相关高原病的病因学探究提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 高原低氧 免疫系统 脾脏 转录组学测序
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不同水稻抗性淀粉含量差异的转录组学解析
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作者 王蕊 张风琴 +3 位作者 田蕾 罗成科 李培富 马天利 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1109-1123,共15页
【目的】抗性淀粉是功能性水稻研究的热点品质性状之一。旨在研究水稻籽粒灌浆过程中不同抗性淀粉含量品种之间的差异表达基因及可能参与的调控通路,探究水稻抗性淀粉合成的规律和分子机制。【方法】分别对高抗性淀粉粳稻品种JTD和低抗... 【目的】抗性淀粉是功能性水稻研究的热点品质性状之一。旨在研究水稻籽粒灌浆过程中不同抗性淀粉含量品种之间的差异表达基因及可能参与的调控通路,探究水稻抗性淀粉合成的规律和分子机制。【方法】分别对高抗性淀粉粳稻品种JTD和低抗性淀粉粳稻品种宁粳28号(NJ28)在籽粒灌浆中后期2个时间点(10 d和16 d),每个时间点每个样品3次重复,共12个样品进行转录组学测序和分析。【结果】NJ28和JTD在灌浆10 d相比有1326个差异表达基因(DEGs),包含986个上调DEGs和340个下调DEGs;在16 d时有1158个DEGs,包含384个上调DEGs和786个下调DEGs;在10 d和16 d共同变化的DEGs 689个,包含435个上调DEGs和254个下调DEGs。GO功能和KEGG富集分析发现DEGs主要参与淀粉代谢和脂肪酸代谢,例如α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、异淀粉酶、脂肪酸延长和降解相关酶等。利用qRT-PCR对3个基因进行验证发现,其mRNA表达趋势均与转录组分析中的表达趋势一致。利用气质联用仪对36个脂肪酸进行定量测定,发现包括油酸在内的7个脂肪酸在高抗性淀粉品种中含量较高。【结论】筛选到一些可能参与抗性淀粉合成的候选基因和重要脂肪酸,为深入理解水稻籽粒中RS合成、其与非淀粉物质脂肪酸之间的关联提供了研究思路和分子基础,为制备具有酶抗性结构和低升糖指数的淀粉类食品提供理论依据。 展开更多
关键词 水稻 抗性淀粉 灌浆时期 转录组学测序
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基于转录组学的白扁豆总皂苷抑制前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的机制研究 被引量:2
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作者 袁强华 韩君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1597-1606,共10页
目的白扁豆总皂苷是中药白扁豆经过提取分离纯化步骤制备得到,关于白扁豆的总皂苷成分如何影响前列腺癌细胞系PC-3细胞的生长情况缺少研究。因此,有必要探讨白扁豆总皂苷对前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的机制研究。方法本研究采用CCK8方... 目的白扁豆总皂苷是中药白扁豆经过提取分离纯化步骤制备得到,关于白扁豆的总皂苷成分如何影响前列腺癌细胞系PC-3细胞的生长情况缺少研究。因此,有必要探讨白扁豆总皂苷对前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的机制研究。方法本研究采用CCK8方法检测不同浓度的白扁豆总皂苷对前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的影响。利用转录组学分析白扁豆总皂苷抑制前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的分子机制,并且进一步通过实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)实验对相关差异基因的表达进行验证。利用Western blot和CCK8检测白扁豆总皂苷处理过表达醛脱氢酶7家族成员A1(ALDH7A1)的PC-3细胞存活率。结果随着白扁豆总皂苷浓度升高,前列腺癌细胞PC-3的存活率显著下降,白扁豆总皂苷的IC50值为1086 mg/L。转录组学测序结果显示,与对照组相比,白扁豆总皂苷处理的细胞中有2360个差异表达基因,其中1982个基因上调,378个基因下调。基因功能注释(GO)结果显示,差异表达基因显著富集到与有丝分裂纺锤体检查点(mitotic spindle checkpoint)、纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint)等一系列跟癌症的发生发展密切相关的生物学过程。此外,基因组京都百科全书(KEGG)分析结果也显示,差异表达基因富集在肿瘤代谢等信号通路。进一步对其中的差异基因进行验证,结果显示,与对照组相比,白扁豆总皂苷处理的前列腺癌细胞中ALDH7A1、甘氨酸C-乙酰转移酶(GCAT)和磷酸甘油酸变位酶家族成员4(PGAM4)的蛋白质表达水平明显降低(P<0.05),而二甲基甘氨酸脱氢酶(DMGDH)和胱硫醚β合成酶样(CBSL)的蛋白质表达水平显著升高(P<0.001)。体外细胞实验结果表明,白扁豆总皂苷通过下调前列腺癌细胞中ALDH7A1的表达抑制PC-3细胞生长。结论白扁豆总皂苷可能通过下调ALDH7A1表达从而在体外抑制前列腺癌细胞的生长。 展开更多
关键词 前列腺癌 白扁豆总皂苷 转录组学测序
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基于转录组学研究高原低氧胁迫对小鼠肾脏能量代谢相关通路的影响机制
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作者 高玉杰 龙启福 +4 位作者 李积东 胡英 李长兴 唐超群 永胜 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第4期475-483,共9页
目的:基于转录组测序技术研究小鼠肾脏组织在适应高原低氧胁迫过程中的基因表达和相应的分子机制。方法:在海拔4200 m(高原肾脏实验组,high⁃altitude kidney test group,HKT)和海拔400 m(平原肾脏对照组,plain kidney control group,PKC... 目的:基于转录组测序技术研究小鼠肾脏组织在适应高原低氧胁迫过程中的基因表达和相应的分子机制。方法:在海拔4200 m(高原肾脏实验组,high⁃altitude kidney test group,HKT)和海拔400 m(平原肾脏对照组,plain kidney control group,PKC)的环境下分别饲养C57BL/6小鼠,30 d后无菌取出小鼠肾脏组织用高通量测序技术(RNA⁃sequencing,RNA⁃Seq)进行转录组测序。将HKT组和PKC组的测序结果进行基因本体数据库(gene ontology,GO)注释分析和京都基因和基因组百科全书数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,并通过实时荧光定量PCR(real⁃time quantitative PCR,RT⁃qPCR)实验验证测序结果的可靠性。结果:相比于PKC组,HKT组中1349个基因表达上调(P<0.05),1658个基因表达下调(P<0.05)。其中催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)、载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)、载脂蛋白A4(apolipoprotein A4,APOA4)、细胞色素C(cytochrome C somatic,CYCS)、酰基辅酶A氧化酶2(acyl⁃coenzyme A oxidase 1,ACOX2)、细胞色素C氧化酶亚基5A(cytochrome C oxidase subunit 5A,COX5A)、细胞色素C氧化酶亚基5B(cytochrome C oxidase subunit 5B,COX5B)、细胞色素C氧化酶亚基7A(cytochrome C oxidase subunit 7A,COX7A)和热休克蛋白β⁃1(heat shock proteinβ⁃1,HSPB1)等基因显著富集。GO注释分析和KEGG富集分析结果显示,差异基因显著富集在细胞器内膜、线粒体内膜和线粒体蛋白复合物等部位,此外过氧化物酶体、氧化磷酸化、产热、碳代谢以及三羧酸循环等通路显著富集。结论:高原低氧刺激可能通过影响机体的能量代谢相关通路致使机体氧化应激、炎症反应和脂质代谢失衡。 展开更多
关键词 高原低氧 肾脏 能量代谢 转录组学测序
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小鼠胚肾发育过程中细胞衰老相关基因差异表达分析
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作者 罗佳 汪晓月 +4 位作者 喻芳 陈娟 陈客宏 何娅妮 陈佳 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1083-1091,共9页
目的通过转录组学筛选胚肾发育过程中的差异表达基因,采用生物信息学分析细胞衰老途径及其相关基因,进一步探讨细胞衰老与胚肾发育的关系。方法分别取胚龄为14.5 d(E14.5组)和18.5 d(E18.5组)的小鼠肾脏组织,使用过碘酸雪夫染色观察肾... 目的通过转录组学筛选胚肾发育过程中的差异表达基因,采用生物信息学分析细胞衰老途径及其相关基因,进一步探讨细胞衰老与胚肾发育的关系。方法分别取胚龄为14.5 d(E14.5组)和18.5 d(E18.5组)的小鼠肾脏组织,使用过碘酸雪夫染色观察肾脏组织结构,通过转录组学分析胚肾发育过程中基因谱表达变化,采用生物信息学分析细胞衰老相关基因表达变化,并采用实时定量荧光PCR及Western blot验证靶基因的表达水平。结果随着胚肾的发育,肾脏结构逐渐成熟,转录组学结果及生物信息学分析发现细胞衰老相关基因在胚肾发育过程中发挥重要作用,其中E18.5组中细胞衰老相关基因Cdkn1a(P21)mRNA及蛋白相对表达水平较E14.5组升高(P<0.05),而Skp2、Ccne1、Ccnd2和Cdk4 mRNA表达水平较E14.5组降低(P<0.05)。结论在胚肾发育过程中细胞衰老相关基因表达水平发生显著变化,表明细胞衰老在胚肾发育过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 胚肾发育 细胞衰老 转录组学测序 生物信息分析
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