数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用 被引量：3

1

作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 刘帅 麦贤俊 贾瑞宗 郭安平 徐志胜 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期663-673,共11页

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛... 传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770,以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照,利用数字PCR鉴定其拷贝数,进一步以其为内参基因,以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因,建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明:Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因;建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠,而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高,对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低,因此,荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因,且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法,操作简单,速度快,适合批量检测,可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 拷贝数 内参基因 数字PCR 荧光定量PCR

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转基因番木瓜的抗病性及分子鉴定 被引量：19

2

作者 叶长明 魏祥东 +2 位作者 陈东红 蓝崇钰 朱利民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期181-184,共4页

对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基... 对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析。结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S启动子序列、标记基因NPTII。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 抗病性 检测 分子鉴定

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转基因番木瓜“华农一号”事件特异性定性PCR检测方法的建立 被引量：11

3

作者 姜大刚 周峰 +2 位作者 姚涓 穆虹 梅曼彤 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期37-41,共5页

以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番... 以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番木瓜基因组序列的2套特异引物,对"华农一号"进行检测,证明其可特异地把"华农一号"从转基因番木瓜品系中检测出来;2对引物的检测灵敏度都可以达到0.05%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求;利用2对特异引物对"华农一号"的果肉、果皮、种子进行检测,可得到特异性良好的扩增. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 TAIL-PCR “华农一号” 事件特异性检测

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番木瓜及其深加工制品中转基因成分定性PCR检测方法的建立(英文) 被引量：5

4

作者 庄逸林 相大鹏 +4 位作者 周木龙 蔡颖 陈燕勤 许逸缅 梁希扬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第7期352-355,共4页

本研究对番木瓜不同材料及其深加工制品的核酸提取方法进行了优化,成功提取出可用于PCR扩增反应的DNA。选取番木瓜特异性的内源蛋白PAPAIN基因片段作为内参基因,用于检验提取DNA的质量,有效避免了PCR反应的假阴性并能用于确定检测样品... 本研究对番木瓜不同材料及其深加工制品的核酸提取方法进行了优化,成功提取出可用于PCR扩增反应的DNA。选取番木瓜特异性的内源蛋白PAPAIN基因片段作为内参基因,用于检验提取DNA的质量,有效避免了PCR反应的假阴性并能用于确定检测样品中是否含有番木瓜成分。选取国内目前应用比较多的外源目的基因环斑病毒外壳蛋白(CP)基因以及复制酶(RP)基因作为品系鉴定的基因。本方法适用于出入境检验检疫部门和农业部门对转基因番木瓜及其制品的检验监测。 展开更多

关键词 转基因 番木瓜 深加工制品 PCR检测

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采用多重PCR技术检测转基因番木瓜华农一号 被引量：5

5

作者 白卫滨 曹春廷 +4 位作者 朱翠娟 文罗娜 吴贤权 欧仕益 孙建霞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期165-169,共5页

为了建立针对转基因番木瓜华农一号简便、快速、高灵敏度的多重PCR技术,用DP305植物基因组试剂盒方法提取3种转基因番木瓜(Event 55-1、GM-YK和华农一号)和非转基因番木瓜(台农2号)样品DNA,以木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内参基因,进行... 为了建立针对转基因番木瓜华农一号简便、快速、高灵敏度的多重PCR技术,用DP305植物基因组试剂盒方法提取3种转基因番木瓜(Event 55-1、GM-YK和华农一号)和非转基因番木瓜(台农2号)样品DNA,以木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内参基因,进行了单重PCR技术引物特异性验证,多重PCR方法条件摸索及引物的灵敏度确定。结果表明∶5对特异性引物(CP、35s、NPTII、Papain、RP)得到相应的不同大小单一条带,其大小分别103、166、213、281、369 bp,说明引物具有特异性;建立了检测转基因番木瓜华农一号的五重PCR检测技术,检测限为0.2 ng。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 华农一号 通用引物 多重PCR

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PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究 被引量：15

6

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期77-83,共7页

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ... 利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。 展开更多

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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PRV-CP-SN转基因番木瓜表达与抗病能力的研究 被引量：9

7

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期84-87,共4页

通过ＲＮＡ斑点杂交和酶联吸附免疫试验等技术定性地分析了ＰＲＶ－ＣＰ－ＳＮ转基因番木瓜的表达，又通过大田接种攻毒试验检验了ＰＲＶ－ＣＰ－ＳＮ转基因番木瓜的抗病能力，这为定量分析表达量和抗病能力关系研究奠定了理论的基础。

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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转基因番木瓜小规模田间攻毒试验 被引量：11

8

作者 周鹏 郑学勤 +1 位作者 陈向民 刘北洋 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期58-62,共5页

采用人工接种PRV（木瓜环斑病毒）和大田自然攻毒试验．检测了木瓜环斑病毒外壳蛋白基因转基因木瓜（PRV-CP+）和木瓜环斑病毒外壳蛋白基因──核酸酶SN基因的议价基因（PRV—CP－SN）转基因木瓜（PRVCP一SN+）对PRV侵染的抗病能力。试... 采用人工接种PRV（木瓜环斑病毒）和大田自然攻毒试验．检测了木瓜环斑病毒外壳蛋白基因转基因木瓜（PRV-CP+）和木瓜环斑病毒外壳蛋白基因──核酸酶SN基因的议价基因（PRV—CP－SN）转基因木瓜（PRVCP一SN+）对PRV侵染的抗病能力。试验结果表明，绝大多数的转基因植株对PRV的浸染表现不同程度的延缓能力，部分植株能抵抗PRV达2－3个月以上，甚至更长时间。两样本均数之差的显著性测验结果表明，PRV-CP－SN+的大田自然攻毒表现对PRV的抵抗能力比PRV－CP+的强。 展开更多

关键词 转基因 番木瓜 人工接种 田间攻毒 抗病性

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抗环斑病毒番木瓜的开发技术及转基因对基因组影响研究进展 被引量：2

9

作者 方静平 林艺华 +1 位作者 杨川毓 陈如凯 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第2期121-128,共8页

本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究... 本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究前景. 展开更多

关键词 转基因 番木瓜环斑病毒 结构与功能 SunUp基因组

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T4转基因番木瓜遗传性和果实品质分析 被引量：1

10

作者 魏祥东 蓝崇钰 +1 位作者 卢志菁 叶长明 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期3301-3306,共6页

对T4代转基因番木瓜进行了分子生物学和果实品质分析,结果表明,筛选获得的转基因番木瓜均为转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶突变体基因(RP),且对PRV抗性达到了高抗或免疫,RP基因在转基因植物中能稳定遗传至后代并在RNA水平上表达.在田间种... 对T4代转基因番木瓜进行了分子生物学和果实品质分析,结果表明,筛选获得的转基因番木瓜均为转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶突变体基因(RP),且对PRV抗性达到了高抗或免疫,RP基因在转基因植物中能稳定遗传至后代并在RNA水平上表达.在田间种植时,转基因木瓜的生长状况普遍好于普通番木瓜,尤其在生长后期(10月以后),普通番木瓜100%发病(大规模种植时),而大部分(约91.8%)转基因植株生长良好,果实较多且表面光洁、基本上无环斑.与非转基因亲本相比,T4代转基因番木瓜的果实长度增加2.6%～5%,果实直径变小0.6%～1.5%,果肉厚度增加了12%～15%,因而果实形状与亲本相近或更好,且信用价值更高.转基因番木瓜果实中水分、蛋白质、氮、脂肪、还原性糖、维生素A、维生素C和类胡萝卜素的含量与对照都无显著性差异,即转基因番木瓜与亲本具有实质等同性,这表明转入的外源基因对番木瓜果实品质没有不良影响. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 分子检测 果实品质

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转基因番木瓜55-1转化事件定性PCR检测方法的建立 被引量：1

11

作者 王恒波 肖乃衍 +1 位作者 张华 陈平华 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1751-1757,共7页

为了防止国外商业化生产的转基因番木瓜流入国内市场,建立转基因番木瓜55-1转化事件定性PCR检测方法,对于保护国内消费者知情权意义重大。本研究以转基因抗环斑病毒番木瓜55-1为研究材料,利用外源基因和番木瓜基因组序列设计了9对特异... 为了防止国外商业化生产的转基因番木瓜流入国内市场,建立转基因番木瓜55-1转化事件定性PCR检测方法,对于保护国内消费者知情权意义重大。本研究以转基因抗环斑病毒番木瓜55-1为研究材料,利用外源基因和番木瓜基因组序列设计了9对特异性检测引物,通过特异性引物筛选、熔解曲线分析、退火温度优化、特异性验证、灵敏度分析及检测限验证,建立转基因番木瓜55-1转化事件定性PCR检测方法。结果表明:本研究筛选出的检测引物,可特异的检出转基因番木瓜55-1转化事件,引物的检测灵敏度达到了0.1%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求,完全可满足转基因检测标识制度的顺利实施。 展开更多

关键词 番木瓜 转基因 定性PCR 检测

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抗病毒转基因番木瓜及其安全性问题 被引量：7

12

作者 李世访 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期59-63,共5页

本文对番木瓜生产上存在的病害问题、转基因番木瓜的研发、转基因番木瓜国际竞争的动态与趋势、转基因番木瓜的安全性、转基因木瓜的标识等几个方面进行综述。

关键词 转基因番木瓜 病毒 安全性

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转基因番木瓜55-1品系的环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：1

13

作者 夏启玉 李美英 +4 位作者 肖苏生 贺萍萍 杨小亮 张雨良 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期308-316,共9页

根据55-1的品系特异性序列设计了5套LAMP引物,筛选扩增效率高的引物。对筛选到的LAMP引物的反应温度和反应体系进行了优化,并进行了特异性、灵敏度和稳定性的实验。结果表明,该套LAMP引物的特异性和稳定性良好,灵敏度为0.05%,最快能在30... 根据55-1的品系特异性序列设计了5套LAMP引物,筛选扩增效率高的引物。对筛选到的LAMP引物的反应温度和反应体系进行了优化,并进行了特异性、灵敏度和稳定性的实验。结果表明,该套LAMP引物的特异性和稳定性良好,灵敏度为0.05%,最快能在30 min内得到检测结果。建立的LAMP检测方法能有效地检测转基因番木瓜55-1品系,既简化了检测步骤,又缩短了检测时间,为转基因番木瓜的快速检测提供了技术支撑。 展开更多

关键词 转基因番木瓜55-1 环介导等温扩增 特异性检测

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PRSV—外壳蛋白基因在转基因番木瓜中的表达 被引量：3

14

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期36-39,共4页

用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检... 用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检测。ＥＬＩＳＡ的结果表明，外壳蛋白基因已在转基因番木瓜中表达；ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，外壳蛋白基因在转基因植株中的表达产物具有与天然蛋白同样的大小及相同的血清学反应。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 环斑病毒外壳蛋白 酶联免疫吸附试验 蛋白质免疫印迹

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农民获得转基因技术服务:基于广东番木瓜生产的实证研究 被引量：1

15

作者 郑玉亭 王纯洁 +1 位作者 陈艾 薛春玲 《农业工程》 2012年第2期101-105,共5页

该转基因番木瓜是被我国第一个批准商业化生产的可以直接食用的转基因农作物,该文在对农户转基因木瓜技术采用的影响因素进行计量经济分析的基础上,提出了尽快完善转基因生物技术信息服务等政策建议。

关键词 转基因番木瓜 农民选择 生物技术信息 推广服务

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农业部回应转基因问题:仅批准转基因棉花、番木瓜商业化生产 被引量：5

16

作者 牛巧鱼 《中国棉花》 2018年第3期43-43,共1页

十三届全国人大一次会议新闻中心于3月7日上午在梅地亚中心多功能厅举行记者会,邀请农业部部长韩长赋,农业部新闻发言人、办公厅主任潘显政就“实施乡村振兴战略 推动农业转型升级”的相关问题回答中外记者的提问。

关键词 转基因棉花 农业部 商业化生产 番木瓜 新闻发言人 多功能厅 新闻中心 全国人大

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转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

17

作者 潘志文 陈伟庭 +4 位作者 高洁儿 周峰 姚涓 王声斌 姜大刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期286-294,共9页

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因... 转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明,含量低至0.1%的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 DNA制备 PCR 检测方法

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转基因番木瓜pUC57-Papaya质粒标准分子的构建与适用性研究

18

作者 潘志文 陈伟庭 +2 位作者 姚涓 王声斌 姜大刚 《计量学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期422-429,共8页

构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9... 构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9个目的片段按照设计排列,序列完全一致;全部9个基因片段普通PCR和实时荧光PCR方法均能正确扩增得到预期结果,特异性、灵敏度与基因组DNA一致;全部9个基因构建标准曲线做定量测试时,与基因组DNA标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均大于0.99,其中内标准基因Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段的截距无差异;利用质粒分子测量2个样品的Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段拷贝数,计算转基因含量,结果与基因组DNA一致;测序结果显示各片段拷贝数比值为1,质粒DNA拷贝数浓度为(2.54±0.10)×10^(6)copies/μL。构建的标准质粒分子可代替基因组DNA用于定量检测,也可作为转基因番木瓜定性和定量检测用标准物质。 展开更多

关键词 计量学 转基因番木瓜 质粒标准分子 核酸标准物质

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转基因番木瓜检测方法的建立

19

作者 王恒波 余泽怀 +2 位作者 肖乃衍 张华 陈平华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1198-1200,共3页

番木瓜(Carica papaya)是一种有较高食用和药用价值的草本果树,番木瓜蛋白酶广泛应用于医药、美容、日化品等行业[1]。番木瓜环斑花叶病毒(PRSV)是危害番木瓜生产的一种世界性病毒,植株受到侵染后,无法进行有效治疗,目前的化学杀菌剂不... 番木瓜(Carica papaya)是一种有较高食用和药用价值的草本果树,番木瓜蛋白酶广泛应用于医药、美容、日化品等行业[1]。番木瓜环斑花叶病毒(PRSV)是危害番木瓜生产的一种世界性病毒,植株受到侵染后,无法进行有效治疗,目前的化学杀菌剂不能有效控制其蔓延[2]。培育抗病品种是防治环斑花叶病毒最紧迫的任务之一,但番木瓜栽培品种中缺乏有效抗病基因资源[3]。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 筛选 定性聚合酶链式反应(PCR) 检测

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SYBR-Green实时荧光PCR检测转基因番木瓜 被引量：5

20

作者 刘建越 邓欣 +3 位作者 康林 余道坚 高必达 陈冬美 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期371-374,共4页

分别以RBCL基因和PRSV-CP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,Ct值为15～16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜... 分别以RBCL基因和PRSV-CP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,Ct值为15～16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为20～25,PRSV-RP引物对转PRSV-RP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为21～22.运用熔解曲线进行产物分析,验证了试验结果的特异性和准确性. 展开更多

关键词 转基因番木瓜 番木瓜环斑病毒 SYBR-Green实时荧光PCR 检测

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