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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度 被引量：17
1
作者 宋君 雷绍荣 +6 位作者 刘勇 向冰 王东 尹全 张富丽 刘文娟 常丽娟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20312-20315,共4页
[目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微... [目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定测量的不确定度。[结果]研究得到uA=1.7×10-2,uB=9.0×10-4,uC=1.7×10-2,U95=0.036,测量结果为1.08%±0.036。[结论]转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。 展开更多
关键词 转基因玉米mon863 结构特异基因含量 不确定度
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实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分 被引量：9
2
作者 覃文 曹际娟 朱水芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期132-134,共3页
采用实时荧光PCR技术,建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性,特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成... 采用实时荧光PCR技术,建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性,特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分,还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法,即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0.1%),也可以用于定性检测,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。 展开更多
关键词 转基因玉米 实时荧光PCR技术 定量检测 食品 饲料 mon810成分
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定性PCR方法检测转基因玉米MON810转化事件的研究 被引量：5
3
作者 易小平 贺萍萍 +5 位作者 夏启玉 肖苏生 谢翔 杨小亮 李美英 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期2384-2390,共7页
转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在... 转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在建立MON810品系玉米的转化事件特异性定性PCR检测方法。根据MON810的插入序列信息,在3′端的侧翼序列处设计定性PCR检测的引物,检测MON810在其他几种常见转基因作物混合样品的特异性。结果表明,该方法具有很好的特异性。同时检测该引物系统的扩增灵敏度,结果表明,检测引物的灵敏度可达0.1%。建立的MON810特异定性PCR检测方法经全国7家实验室的验证,进一步证实该方法能够特异地检测出样品中的MON810转化事件,检测方法的灵敏度可达0.1%,且检测结果具有良好的可重复性和可重现性。MON810转化事件定性PCR检测方法的建立可满足于抗虫转基因玉米MON810及其衍生品种生物安全管理的需要。 展开更多
关键词 转基因玉米mon810 定性PCR 灵敏度 特异性
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转基因玉米MON810基体标准物质Q—PCR量值协同实验研究 被引量：1
4
作者 傅博强 臧超 +7 位作者 宋贵文 孟亚男 王晶 董莲华 余笑波 李亮 隋志伟 杨立桃 《计量学报》 CSCD 北大核心 2011年第B12期114-118,共5页
针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平... 针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质，组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法进行了协同实验研究，并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析。经过加权平均，转基因玉米MONS10A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q—PCR方法参考值分别为0．51％±0．10％、1．1％±0．2％、4．7％±0．7％（k=2）。 展开更多
关键词 计量学 转基因玉米 mon810 基体标准物质 实时荧光定量PCR 协同实验
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017 被引量：3
5
作者 宋君 王东 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期992-998,共7页
为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方... 为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方法分析转基因玉米MON88017特异性很强;29次重复测量含量为1.50%的转基因玉米MON88017样品,平均测量值(1.541%)接近真实值(1.50%),相对偏差为2.70%,测量值的变异系数为0.110 4,回收率为100.00%,测量不确定度为0.096;在97.5%的置信水平下能检测到最低含量为5个拷贝的MON88017分子片段。因此,本研究建立的转基因玉米MON88017实时荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确度和灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米mon88017 实时荧光定量PCR 特异性 灵敏度 精确度 测量不确定度
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转基因玉米MON87427/zSSIIb二重微滴数字PCR方法建立及应用 被引量：6
6
作者 肖芳 张秀杰 +7 位作者 李俊 王颢潜 李允静 单露英 翟杉杉 高鸿飞 吴刚 武玉花 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期90-98,共9页
实施转基因产品定量标识制度需要建立准确可靠的定量检测技术和方法。数字PCR(dPCR)不依赖标准物质,实现对DNA分子的绝对定量,已成功用于转基因含量检测和标准物质定值。为建立可靠的dPCR方法,获得准确测量结果,本研究以耐除草剂玉米MON... 实施转基因产品定量标识制度需要建立准确可靠的定量检测技术和方法。数字PCR(dPCR)不依赖标准物质,实现对DNA分子的绝对定量,已成功用于转基因含量检测和标准物质定值。为建立可靠的dPCR方法,获得准确测量结果,本研究以耐除草剂玉米MON87427为材料,探索建立二重微滴数字PCR(ddPCR)的策略。以构建的聚合MON87427转化体和5个玉米内标基因的重组质粒pUC57-M为质控样品,将5个不同的玉米内标基因分别与MON87427组合,通过优化退火温度,根据阳性微滴与阴性微滴分辨率、中等信号强度雨滴数量及测量值与理论值的一致性等,确定了二重ddPCR组合为MON87427/zSSIIb,最适退火温度为58.4℃。MON87427/zSSIIb二重ddPCR的动力学范围为10~60000拷贝。对盲样进行定量检测,二重ddPCR的定量结果与荧光定量PCR有良好的可比性,表明MON87427/zSSIIb二重ddPCR可取代qPCR方法进行转基因玉米MON87427的定量检测及标准物质定值。 展开更多
关键词 转基因玉米mon87427 二重微滴数字PCR 荧光定量PCR 内标基因
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转基因抗虫耐除草剂玉米MON87411精准定量检测方法的建立 被引量：8
7
作者 李凌燕 张旭冬 +6 位作者 陈子言 王颢潜 乌兰 田锦 张秀杰 陈红 梁晋刚 《生物安全学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期38-45,共8页
【目的】抗虫耐除草剂玉米MON87411是孟山都远东有限公司利用农杆菌介导方法研发的玉米转化体,已获得我国进口用作加工原料的农业转基因生物安全证书。为满足生物安全监管的要求,亟需建立该转化体的定量检测方法。【方法】根据抗虫耐除... 【目的】抗虫耐除草剂玉米MON87411是孟山都远东有限公司利用农杆菌介导方法研发的玉米转化体,已获得我国进口用作加工原料的农业转基因生物安全证书。为满足生物安全监管的要求,亟需建立该转化体的定量检测方法。【方法】根据抗虫耐除草剂玉米MON87411的两端旁侧序列信息设计引物和Taqman探针,进行引物筛选、特异性检测、PCR体系优化、标准曲线建立、正确度及精密度检测、检出限及定量限测试、微滴数字PCR方法验证等。【结果】该方法能特异、定量地检测出抗虫耐除草剂玉米MON87411转化体成分,检出限低至10拷贝,定量限为40拷贝。对测试样品定值准确,经微滴数字PCR方法验证结果一致。【结论】本方法为该新品种转基因玉米品系的精准定量提供了一种新的检测方法,为生物安全监管提供了有效的技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米 mon87411 抗虫耐除草剂 实时荧光PCR 微滴数字PCR 精准定量
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转基因耐除草剂玉米MON87419品系特异性定性PCR检测方法的建立 被引量：6
8
作者 李凌燕 肖冰 +5 位作者 张旭冬 陈子言 王颢潜 张秀杰 陈红 梁晋刚 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第1期50-57,共8页
转基因耐除草剂玉米MON87419是由孟山都远东有限公司研发的玉米转化体,能够耐受麦草畏和草铵膦2种除草剂,已向我国申请进口用作加工原料的转基因生物安全证书。本文旨在建立转基因耐除草剂玉米MON87419转化体的特异性定性检测方法,以MON... 转基因耐除草剂玉米MON87419是由孟山都远东有限公司研发的玉米转化体,能够耐受麦草畏和草铵膦2种除草剂,已向我国申请进口用作加工原料的转基因生物安全证书。本文旨在建立转基因耐除草剂玉米MON87419转化体的特异性定性检测方法,以MON87419转化体特异性序列为靶标,设计一系列特异性引物,进行引物筛选、特异性测试、反应条件优化、灵敏度测试、检出限测试和再现性测试等试验。结果表明,本特异性检测方法的主要技术参数全部符合相关转基因分子检测标准的要求,特异性片段大小为216 bp,品系特异性高,灵敏度低至0.05%,检出限达到0.1%,具有良好的再现性和重复性。本方法的建立可为该转基因品系及其衍生产品的检测和安全监管提供有效技术支撑。 展开更多
关键词 转基因耐除草剂玉米 mon87419 定性PCR 转基因监管 特异性检测
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转基因玉米MON87419实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：4
9
作者 李凌燕 陈红 +5 位作者 马玥 张旭冬 陈子言 王颢潜 张秀杰 梁晋刚 《山东农业科学》 北大核心 2022年第11期121-126,共6页
转基因玉米MON87419是耐受麦草畏和草铵膦两种除草剂的玉米新品系。为了建立转基因玉米MON87419实时荧光定量检测方法,本研究根据转基因玉米MON87419的3′端旁侧序列信息设计引物和Taqman探针,经引物筛选、PCR体系优化、特异性检测、标... 转基因玉米MON87419是耐受麦草畏和草铵膦两种除草剂的玉米新品系。为了建立转基因玉米MON87419实时荧光定量检测方法,本研究根据转基因玉米MON87419的3′端旁侧序列信息设计引物和Taqman探针,经引物筛选、PCR体系优化、特异性检测、标准曲线建立、正确度及精密度检测和定量限测试等试验,表明该方法能特异、定量检测出转基因玉米MON87419转化体成分,可以对0.1%以上的MON87419转基因成分进行准确定量。本研究结果可为该转基因玉米品系的安全监管提供有效技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米mon87419 实时荧光定量PCR 检测
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多重DPO-PCR检测转基因玉米MON810和MIR604体系建立
10
作者 周陆宁 张锐 +1 位作者 麦晨 魏霜 《现代农业科技》 2018年第17期1-2,共2页
针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强... 针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强、灵敏度高,适合于对转基因玉米MON810和MIR604品系进行快速检测。 展开更多
关键词 转基因玉米 mon810 MIR604 多重DPO-PCR
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