决明Ri质粒转化根离体培养研究 被引量：5

1

作者 常振战 沈昕 +4 位作者 果德安 王沙生 金明善 谢梅英 郑俊华 《北京医科大学学报》 CAS CSCD 1999年第2期117-119,共3页

目的：用Ｒｉ质粒转化决明，检测转化根培养物中蒽醌化合物的产物。方法：用叶盘转化决明外植体诱导Ｒｉ质粒转化根并用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ霜交加以鉴定，测定转化根的生长周期，用高效液相色谱法测定光培养及暗培养转化根中游离蒽醌化合... 目的：用Ｒｉ质粒转化决明，检测转化根培养物中蒽醌化合物的产物。方法：用叶盘转化决明外植体诱导Ｒｉ质粒转化根并用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ霜交加以鉴定，测定转化根的生长周期，用高效液相色谱法测定光培养及暗培养转化根中游离蒽醌化合物的质量分数。 展开更多

关键词 决明 生长 发育 RI质粒 转化根 蒽醌类 组织培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

AM真菌与紫云英Ri T-DNA转化根双重培养体系的建立 被引量：5

2

作者 曹玲 赵斌 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期212-216,共5页

丛枝菌根（Arbuscular mycorrhiza，AM）真菌是一类古老的植物共生真菌，与植物约有4亿年共生史，能与80％以上的陆生维管植物形成互惠共生体一丛枝菌根，可以改善植物对磷素营养的吸收，增强植物的抗逆性、抗病力或耐病力，与根瘤菌共... 丛枝菌根（Arbuscular mycorrhiza，AM）真菌是一类古老的植物共生真菌，与植物约有4亿年共生史，能与80％以上的陆生维管植物形成互惠共生体一丛枝菌根，可以改善植物对磷素营养的吸收，增强植物的抗逆性、抗病力或耐病力，与根瘤菌共同作用于豆科植物促进豆科植物正常的生长发育，提高产量，在自然生态系统和实践应用中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 双重培养 丛枝菌根 发根农杆菌 转化根

在线阅读 下载PDF 职称材料

Zn对AM真菌侵染紫云英转化根的影响

3

作者 贾胜洁 林会 +2 位作者 黄武 刘丰川 赵斌 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第4期685-688,692,共5页

分别建立丛枝菌根(AM)真菌Gigaspora margarita、Gigaspora rosea和Glomus intraradices与紫云英转化根双重共培养体系,并利用该体系研究不同Zn浓度对单接种与混合接种AM真菌侵染紫云英转化根的影响。结果表明,0.1 mmol/L Zn提高了大部... 分别建立丛枝菌根(AM)真菌Gigaspora margarita、Gigaspora rosea和Glomus intraradices与紫云英转化根双重共培养体系,并利用该体系研究不同Zn浓度对单接种与混合接种AM真菌侵染紫云英转化根的影响。结果表明,0.1 mmol/L Zn提高了大部分处理的根段侵染率、菌丝密度以及P的吸收,0.5mmol/L Zn抑制了AM真菌菌丝的生长,但能增加部分处理转化根对P的吸收。0.1 mmol/L Zn浓度下,单接种Glomus intraradices、混合接种Gigaspora margarita与Glomus intraradices的根段侵染率最高,并且在混合侵染根段中Glomus intraradices根段侵染率比Gigaspora margarita高12%。 展开更多

关键词 丛枝菌根(AM)真菌 转化根 共培养 ZN Nested PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

发根农杆菌介导的茶树遗传转化 被引量：27

4

作者 奚彪 刘祖生 +5 位作者 梁月荣 杨秀芳 黄卫红 须健 何玉科 白永延 《茶叶科学》 CAS CSCD 1997年第S1期76-77,共2页

发根农杆菌介导的茶树遗传转化奚彪１刘祖生１梁月荣１杨秀芳１黄卫红１须健２何玉科２白永延２（１浙江农业大学，杭州３１００２９；２中科院上海植生所，上海２０００３２关键词：发根农杆菌次生代谢多酚遗传转化毛状根Ｋｅｙｗｏｒ... 发根农杆菌介导的茶树遗传转化奚彪１刘祖生１梁月荣１杨秀芳１黄卫红１须健２何玉科２白永延２（１浙江农业大学，杭州３１００２９；２中科院上海植生所，上海２０００３２关键词：发根农杆菌次生代谢多酚遗传转化毛状根Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒ... 展开更多

关键词 发根农杆菌次生代谢多酚遗传转化毛状根

在线阅读 下载PDF 职称材料

小麦、玉米根际磷转化及VA菌根对其影响研究 被引量：4

5

作者 刘建玲 张福锁 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期4-9,共6页

研究了小麦、玉米根际磷转化特性及ＶＡ菌根对小麦、玉米根际磷转化的影响。研究结果表明：磷胁迫、施用磷肥时小麦、玉米根际均形成Ｏｌｓｅｎ－Ｐ、Ｃａ２－Ｐ、Ｃａ８－Ｐ、ＡＩ－Ｐ等养分耗竭区。两种作物接种ＶＡ菌根后均显著增加... 研究了小麦、玉米根际磷转化特性及ＶＡ菌根对小麦、玉米根际磷转化的影响。研究结果表明：磷胁迫、施用磷肥时小麦、玉米根际均形成Ｏｌｓｅｎ－Ｐ、Ｃａ２－Ｐ、Ｃａ８－Ｐ、ＡＩ－Ｐ等养分耗竭区。两种作物接种ＶＡ菌根后均显著增加了根际Ｏｌｓｅｎ－Ｐ、Ｃａ２－Ｐ、Ｃａ８－Ｐ、ＡＩ－Ｐ等形态无机磷的消耗量，而且，根际、非根际土壤各形态磷的浓度梯度显著减小。施磷及不施磷的处理，小麦根际土壤Ｏｌｓｅｎ－Ｐ、Ｃａ２－Ｐ的耗竭量高于玉米，施磷接种ＶＡ菌根的处理，玉米根际土壤Ｃａ８－Ｐ、ＡＩ－Ｐ的消耗量明显增加。 展开更多

关键词 小麦 玉米 根际磷转化 VA菌根

在线阅读 下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立 被引量：10

6

作者 杨迎青 杨媚 +3 位作者 李明海 李勇 贺晓霞 周而勋 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期617-622,共6页

为建立水稻纹枯病菌的T-DNA插入诱变转化系统,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1ⅠA)强致病力菌株GD118为转化的初始菌株,从预诱导时间、共培养时间、共培养时乙酰丁香酮的浓度、共培养温度和共培养时固体诱导培养基(SIM)的pH值等... 为建立水稻纹枯病菌的T-DNA插入诱变转化系统,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1ⅠA)强致病力菌株GD118为转化的初始菌株,从预诱导时间、共培养时间、共培养时乙酰丁香酮的浓度、共培养温度和共培养时固体诱导培养基(SIM)的pH值等5个方面对转化条件进行了优化,成功地建立了适合于水稻纹枯病菌根癌农杆菌介导转化(ATMT)的优化系统。这个优化系统的转化条件如下:以30μg/mL的潮霉素B作为转化子的筛选浓度,预诱导8h,共培养20h,共培养时固体诱导培养基上的乙酰丁香酮浓度为200μmol/L,共培养温度25℃,共培养时固体诱导培养基pH5.6～5.8。采用这个系统筛选到的转化子继代培养5代后,在含30μg/mL潮霉素B的PDA平板上仍表现明显的抗性。从得到的转化子中随机抽取10个,利用根据抗潮霉素hph基因设计的特异性引物进行PCR扩增,转化子均能扩增出500bp左右的预期条带;与此同时,以4个根癌农杆菌作为阳性对照,用根癌农杆菌Vir基因特异引物对转化子进行PCR扩增,以排除转化子受农杆菌污染所致的假阳性,结果表明:4个根癌农杆菌均能扩增出Vir基因条带(730bp),而10个转化子均未能扩增出相应条带。以上两个PCR扩增的实验结果清楚地表明,T-DNA已经插入到目标菌株GD118中。 展开更多

关键词 水稻纹枯病 立枯丝核菌 根癌农杆菌介导转化 T-DNA插入诱变 方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立 被引量：2

7

作者 赵冬梅 何佳昱 +2 位作者 杨志辉 朱杰华 徐进 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第9期83-87,共5页

为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系，以菌株 HK0919为材料，从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果... 为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系，以菌株 HK0919为材料，从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果，建立的转化体系条件为：以1．0μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选，采用玻璃纸作为共培养介质，AS浓度为200μmol/L，培养6 d，温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50～60个转化子。随机选取10个转化子，利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增，转化子均能扩增出800 bp左右的预期条带；同时，利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行 PCR扩增，排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性；转化子继代培养5代后，仍能在含潮霉素 B的黑麦培养基上生长。说明外源T DNA已成功整合到致病疫霉基因组中，并能稳定遗传。 展开更多

关键词 致病疫霉 根癌农杆菌介导的转化 T—DNA 转化效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

紫花苜蓿毛状根转化体系的建立及应用 被引量：7

8

作者 赵恩华 谢建平 +2 位作者 张钰靖 安渊 周鹏 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期1-9,共9页

以紫花苜蓿品种WL-525HQ为材料,用发根农杆菌介导毛状根转化,分析毛状根分化率及转化率,筛选最优的转化方案,以快速获得紫花苜蓿转基因材料。结果表明:当发根农杆菌侵染苜蓿叶片的菌液浓度OD_(600)达0.5时,毛状根分化率可达72%;筛选培... 以紫花苜蓿品种WL-525HQ为材料,用发根农杆菌介导毛状根转化,分析毛状根分化率及转化率,筛选最优的转化方案,以快速获得紫花苜蓿转基因材料。结果表明:当发根农杆菌侵染苜蓿叶片的菌液浓度OD_(600)达0.5时,毛状根分化率可达72%;筛选培养基中添加5~8mg/L潮霉素时,毛状根的分化率及转化率都相对较高,分别为30.7%~33.2%和59.7%~67.9%,转化方案可靠;在以毛状根为外植体诱导全株时,采用羧苄青霉素能够有效抑制细菌,5mg/L潮霉素对愈伤组织的分化效果最好。优化了以毛状根为外植体探究紫花苜蓿全株的转化方案,并应用于耐铝基因MsLEA2研究,为紫花苜蓿功能基因研究提供了一种快速有效的手段。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 发根农杆菌 毛状根转化 铝胁迫

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同品种小麦根际磷转化及VA菌根对小麦根际磷转化的影响 被引量：15

9

作者 建玲 张福锁 廖文华 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期23-30,共8页

采用三室根箱研究了磷高效小麦 81( 85) 5 3 3 3及磷低效NC37两个小麦品种根际磷转化及VA菌根对根际土壤磷转化的影响。结果表明 ,磷胁迫下 ,81( 85) 5 3 3 3的吸磷量略高于NC37,两种小麦品种根际土壤均形成了明显的Olsen P ,Ca2 P ,... 采用三室根箱研究了磷高效小麦 81( 85) 5 3 3 3及磷低效NC37两个小麦品种根际磷转化及VA菌根对根际土壤磷转化的影响。结果表明 ,磷胁迫下 ,81( 85) 5 3 3 3的吸磷量略高于NC37,两种小麦品种根际土壤均形成了明显的Olsen P ,Ca2 P ,Ca8 P ,Al P等形态磷的耗竭区。两种小麦品种在不施磷肥和施用磷肥下接种VA菌根 ,小麦的生物量、植株磷浓度、小麦根际Olsen P ,Ca2 P ,Ca8 P ,Al P ,Fe P的消耗量均显著增加 ;根际、非根际土壤各形态磷素的浓度梯度明显降低。 展开更多

关键词 小麦 根际磷转化 磷素形态 VA菌根 品种

在线阅读 下载PDF 职称材料

发根农杆菌介导的白花草木樨毛状根转化体系的建立 被引量：5

10

作者 王升升 段珍 张吉宇 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2591-2599,共9页

白花草木樨(Melilotus albus Medic.ex Desr.)是草木樨最常见的栽培用种之一,具有较强的抗逆性和固氮能力。为了开发一套高效的草木樨转化体系,本研究以白花草木樨为材料,以结瘤基因MaROP6为目的基因,建立了发根农杆菌(Agrobacterium rh... 白花草木樨(Melilotus albus Medic.ex Desr.)是草木樨最常见的栽培用种之一,具有较强的抗逆性和固氮能力。为了开发一套高效的草木樨转化体系,本研究以白花草木樨为材料,以结瘤基因MaROP6为目的基因,建立了发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的高效白花草木樨毛状根转化体系。结果表明:利用该方法可以在两周左右获得毛状根,其发生率可达78%,MaROP6基因的毛状根转化率可达70.8%。qRT-PCR鉴定结果表明,MaROP6转基因毛状根的平均相对表达量为对照的36.87倍。毛状根转化体系的建立为白花草木樨基因功能的验证奠定了基础。 展开更多

关键词 白花草木樨 发根农杆菌 毛状根转化 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的新方法 被引量：1

11

作者 鲍广稳 祝嫦巍 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1168-1171,共4页

设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培... 设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培养,实现转化,利用潮霉素抗性筛选获得转化子,平均转化效率33%左右。此方法操作简单,周期短,极易扩大实验规模,为平菇的分子育种以及其他丝状真菌的遗传转化提供参考。 展开更多

关键词 根癌农杆菌介导转化 菌丝体 平菇

在线阅读 下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建 被引量：3

12

作者 陈凤 王坤 +3 位作者 银超 李德明 任楠 李俊星 《安徽农业科学》 CAS 2012年第16期8800-8805,共6页

[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并... [目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性。[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因(HygBr)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT),将带有HygBr的质粒pHGW-amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115.52,建立以HygBr为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系。利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS-PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达。[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性。 展开更多

关键词 泡盛曲霉 根癌农杆菌介导转化(ATMT) 潮霉素抗性基因 米黑根毛霉脂肪酶(RML)

在线阅读 下载PDF 职称材料

农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选 被引量：25

13

作者 刘朋娟 王政逸 +1 位作者 王秋华 李德葆 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期231-237,共7页

在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮... 在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的T-DNA插入是单拷贝的。用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体:A1-412。该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1-412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。进一步的表型分析发现A1-412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发也略有延迟。Southern杂交显示A1-412基因组中T-DNA插入是单拷贝的。上述结果表明,A1-412突变体表型的改变可能是由于T-DNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致。 展开更多

关键词 稻瘟病菌 根癌农杆菌介导转化 插入突变 致病缺陷突变体

在线阅读 下载PDF 职称材料

草酸氧化酶基因转化烟草的研究 被引量：6

14

作者 景岚 康振生 +1 位作者 孙燕飞 张岗 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第10期1845-1849,共5页

为研究草酸氧化酶基因(OxO)对植物抗病的作用,将含有CaMV35s启动子的植物表达载体以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的叶盘方法,转化了烟草97131。具有卡那霉素抗性的再生植株经PCR检测,得到了与阳性对照一致的470bp的片段,... 为研究草酸氧化酶基因(OxO)对植物抗病的作用,将含有CaMV35s启动子的植物表达载体以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的叶盘方法,转化了烟草97131。具有卡那霉素抗性的再生植株经PCR检测,得到了与阳性对照一致的470bp的片段,进一步对PCR产物测序表明OxO基因已整合进烟草基因组中。在对草酸的耐受性实验中,转基因烟草对草酸的抗性明显高于未转化烟草。 展开更多

关键词 草酸氧化酶基因(OxO) 根癌农杆菌介导转化 转基因烟草 耐受性

在线阅读 下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达 被引量：3

15

作者 潘力 王云艳 +2 位作者 王斌 何攀 李俊星 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期84-89,共6页

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉... 黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上. 展开更多

关键词 无孢黑曲霉 根癌农杆菌介导转化 米黑根毛霉脂肪酶 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

潮霉素作为筛选剂对大豆发状根诱导的影响 被引量：8

16

作者 刘京 刘建巍 +1 位作者 韩天富 侯文胜 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期449-454,共6页

筛选标记是转基因材料创制中转化细胞存活、生长和发育筛选的基本要素。选用4个不同的大豆基因型,分别以发根农杆菌诱导子叶节产生发状根的数量和根的伸长量为指标,研究了不同质量浓度潮霉素对发状根诱导和根伸长的影响,以期为大豆遗传... 筛选标记是转基因材料创制中转化细胞存活、生长和发育筛选的基本要素。选用4个不同的大豆基因型,分别以发根农杆菌诱导子叶节产生发状根的数量和根的伸长量为指标,研究了不同质量浓度潮霉素对发状根诱导和根伸长的影响,以期为大豆遗传转化过程中筛选剂的多样性选择及抗潮霉素育种奠定基础。结果表明:潮霉素可以有效抑制非转化细胞的生长,能够用作大豆发状根转化系统中的筛选剂,但不同基因型大豆品种对潮霉素的敏感性存在较大差异。自贡冬豆、吉林小粒1号、吉育47和中黄30在发状根诱导阶段的潮霉素适宜筛选浓度分别为40,16,16,24 mg·L-1;根伸长阶段分别为49,46,33,55 mg·L-1。 展开更多

关键词 大豆 基因型 发状根转化 潮霉素 适宜浓度

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于绿豆发状根的快速CRISPR/Cas9基因编辑方法

17

作者 闫强 胡亚群 +5 位作者 薛冬 周琰琰 丁佩 韦雅雯 袁星星 陈新 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第10期48-52,共5页

由于缺乏有效稳定的遗传转化体系,导致基因编辑技术在绿豆中的应用受到极大限制,也使绿豆基因功能研究受到极大阻碍。因此,建立一套基于发根农杆菌的操作简便、快速且高效的绿豆嵌合植株转化技术,可以为绿豆基因功能研究提供技术支撑。... 由于缺乏有效稳定的遗传转化体系,导致基因编辑技术在绿豆中的应用受到极大限制,也使绿豆基因功能研究受到极大阻碍。因此,建立一套基于发根农杆菌的操作简便、快速且高效的绿豆嵌合植株转化技术,可以为绿豆基因功能研究提供技术支撑。首先在CRISPR/Cas9载体骨架中插入1个绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达框用于阳性发状根的快速筛选,然后将含有靶标基因gRNA的CRISPR/Cas9质粒导入发根农杆菌K599。菌液注射侵染绿豆幼苗植株下胚轴,评价K599在绿豆中诱导发状根发生及CRISPR/Cas9系统在绿豆转基因发状根组织中的效率。结果显示,K599菌液侵染种植7 d的绿豆幼苗植株并在保湿条件下培养3周可在侵染点诱导发状根产生,此嵌合植株在切除原生根后可在霍格兰培养液中正常生长且培养1周后即可用于后续检测。用GFP筛选的结果显示,阳性发状根占比约为(57.8±10.0)%。随机选择15个荧光检测阳性的转基因发状根组织,利用测序检测靶位点的编辑效果,结果显示有10个靶位点的序列发生了突变,突变比例达到67%,其中碱基缺失突变9个,碱基转换突变1个。由本研究结果可知,利用该方法可以在无菌组织培养的条件下于4周内获得目的基因编辑的转基因组织,极大地便利了绿豆分子水平上的功能研究,也为其他尚缺乏稳定遗传转化体系的作物进行基因功能研究提供了参考。 展开更多

关键词 绿豆 CRISPR/Cas9 基因编辑 发状根转化 遗传转化 绿色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

黑曲霉pyrG遗传转化系统的构建及应用 被引量：3

18

作者 胡江峰 刘舒雯 +3 位作者 杨焱 李林霖 李迎凯 张健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期15-19,共5页

用于黑曲霉遗传操作的筛选标记基因非常有限,而基因改造往往涉及诸多基因的敲除或表达,有限的筛选标记基因难以满足需要。该文构建了以pyrG为筛选标记的黑曲霉遗传转化系统,并利用该系统使红色荧光蛋白rfp在黑曲霉中成功表达。首先,运... 用于黑曲霉遗传操作的筛选标记基因非常有限,而基因改造往往涉及诸多基因的敲除或表达,有限的筛选标记基因难以满足需要。该文构建了以pyrG为筛选标记的黑曲霉遗传转化系统,并利用该系统使红色荧光蛋白rfp在黑曲霉中成功表达。首先,运用同源重组原理完全敲除pyrG基因,在含有5-氟乳清酸和尿苷/尿嘧啶的培养基平板进行筛选,获得1株稳定遗传的尿苷/尿嘧啶营养缺陷型菌株黑曲霉ng-1。然后构建了以pyrG作为回补标记,以三磷酸甘油醛脱氢酶启动子gpdA来调节rfp基因表达的质粒,将质粒转入农杆菌AGL1并侵染黑曲霉菌株ng-1,成功获得了黑曲霉rfp表达菌株,表明pyrG筛选标记可成功用于黑曲霉的遗传转化。 展开更多

关键词 黑曲霉 pyrG 根癌农杆菌介导的转化法 筛选标记 红色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

绿豆GR基因生物信息学分析及其CRISPR/Cas9重组载体的构建与转化

19

作者 李晓驹 方淑梅 +2 位作者 王庆燕 梁喜龙 郑殿峰 《黑龙江八一农垦大学学报》 2023年第4期1-10,25,共11页

绿豆(Vigna radiata L.)是一种严格闭花授粉作物,其人工授粉效率低、成本高,通过杂交获取新品种较为困难。目前,国内外绿豆遗传转化体系鲜见报道,这极大地限制了绿豆基因功能的研究和新品种的开发,因此尝试建立绿豆遗传转化途径具有重... 绿豆(Vigna radiata L.)是一种严格闭花授粉作物,其人工授粉效率低、成本高,通过杂交获取新品种较为困难。目前,国内外绿豆遗传转化体系鲜见报道,这极大地限制了绿豆基因功能的研究和新品种的开发,因此尝试建立绿豆遗传转化途径具有重要意义。首先对绿豆谷胱甘肽还原酶基因(GR)进行生物信息学分析,并以此为基础,构建基因编辑重组体,同时进行发根农杆菌的遗传转化。结果表明,GR蛋白相对分子质量为58.38 kDa,稳定性较好,为亲水蛋白,有多个磷酸化位点,不含跨膜结构,定位于细胞质中,二级结构主要包括ɑ-螺旋和延伸链,且含有Pyr_redox_2和Pyr_redox_dim两个结构域;系统进化分析发现该蛋白与赤豆(Vigna angularis)亲缘关系最近。在此基础上构建四靶点CRISPR/Cas9-GR-gRNA基因编辑载体,通过发根农杆菌遗传转化绿豆子叶节获取毛状根20株,后经PCR检测获取阳性克隆毛状根12株,其毛状根转化率约为60%,其研究结果可为绿豆后续基因编辑研究奠定重要基础。 展开更多

关键词 GR基因 绿豆 生物信息学分析 CRISPR/Cas9重组体构建 毛状根遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性 被引量：20

20

作者 蔡丹 郑易之 兰英 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2006年第3期230-236,共7页

将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体... 将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体的对照菌生长迟滞期约为50 h,含Em基因的重组菌生长迟滞期为32 h,表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性.在此基础上,构建了含Em基因的真核表达载体pB I-Em.再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草.PCR及RT-PCR结果显示,大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中,并能正常转录.转化率为53%.转Em基因烟草植株在含有质量分数1.5%NaC l的培养基中生长状况好于对照植株,叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片.结果表明,大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性. 展开更多

关键词 大豆 LEA1基因 Em蛋白 大肠杆菌 根癌农杆菌转化 转基因烟草 盐胁迫

在线阅读 下载PDF 职称材料