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基于色谱法的超螺旋质粒DNA纯化与分析进展
被引量：
4
1
作者
李亮
柳方方
+1 位作者
宛煜嵩
金芜军
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1089-1094,共6页
质粒DNA含有独立复制的遗传结构,是基因工程的常用工具,广泛应用于分子生物学基础研究、农业转基因检测、医疗诊断与基因治疗等领域。质粒DNA的构型一般分为超螺旋、开口环状及线性3种。初步纯化的质粒DNA溶液中常混有3种构型,并且掺杂...
质粒DNA含有独立复制的遗传结构,是基因工程的常用工具,广泛应用于分子生物学基础研究、农业转基因检测、医疗诊断与基因治疗等领域。质粒DNA的构型一般分为超螺旋、开口环状及线性3种。初步纯化的质粒DNA溶液中常混有3种构型,并且掺杂一定量的蛋白质、RNA、内毒素以及宿主基因组DNA,这些杂质会影响后续的应用,因此质粒DNA需要进一步精细纯化。该文对质粒DNA的新应用领域、基于色谱的精细纯化技术及产物质量分析体系进行了综述,并展望了高纯度质粒DNA精细纯化及产物分析的发展方向。
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关键词
超螺旋质粒dna
精细纯化
色谱技术
数字PCR
综述
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职称材料
混合模式层析分离纯化超螺旋质粒DNA
2
作者
张鹏程
谭远志
+3 位作者
孙艳娜
张其磊
姚善泾
林东强
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期806-812,共7页
针对细胞裂解液中的超螺旋质粒DNA(sc pDNA)的分离,以质粒pVAX1为典型对象、采用Capto PlasmidSelect作为混合模式层析介质,探讨了料液中主要成分sc pDNA、开环质粒DNA(oc pDNA)和RNA的吸附行为,优化了分离条件,实现了从成分较为复杂的...
针对细胞裂解液中的超螺旋质粒DNA(sc pDNA)的分离,以质粒pVAX1为典型对象、采用Capto PlasmidSelect作为混合模式层析介质,探讨了料液中主要成分sc pDNA、开环质粒DNA(oc pDNA)和RNA的吸附行为,优化了分离条件,实现了从成分较为复杂的料液中高效分离sc pDNA。考察了上述3种组分的静态吸附,发现在(NH_(4))_(2)SO_(4)浓度c(NH_(4))_(2)SO4为1.9~2.5 mol·L^(-1)时,sc pDNA均具有较高的吸附量,确定c(NH_(4))_(2)SO_(4)=2.5 mol·L^(-1)的料液可直接上样,此时sc pDNA饱和吸附量为每克介质吸附3.3 mg。动态吸附实验发现,sc pDNA穿透略晚于oc pDNA,sc pDNA动态载量为每毫升介质负载2.00 mg,RNA吸附能力明显强于pDNA。进一步优化了洗脱、冲洗和上样量等分离条件,采用c(NH_(4))_(2)SO_(4)=2.5 mol·L^(-1)上样、c(NH_(4))_(2)SO_(4)=1.9 mol·L^(-1)冲洗、(c(NH_(4))_(2)SO_(4)=1.7 mol·L^(-1))+(cNaCl=0.3 mol·L^(-1))洗脱,sc pDNA纯度可达83.9%、同质性高达95.8%、收率为80.6%。结果表明,混合模式层析对sc pDNA选择性好、处理量较大,具有良好的应用价值。
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关键词
超螺旋质粒dna
吸附
混合模式层析
核酸分离
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职称材料
用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法
被引量：
3
3
作者
王洪涛
张绍铃
刘望夷
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期991-995,共5页
植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类能作用于核糖体最大RNA的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体RNA结构与功能的有力工具.利用RIP能在DNA中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋DNA解旋的特点,分别以常用的质...
植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类能作用于核糖体最大RNA的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体RNA结构与功能的有力工具.利用RIP能在DNA中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋DNA解旋的特点,分别以常用的质粒PUC18、PUC19和PBR322 DNA为底物,建立了测定RIP酶活性的一种新方法,其灵敏度是50ng(天花粉蛋白)和5ng(还原型的辛纳毒蛋白),酶催化反应的时间是60min.这个新方法具有方便、快捷、灵敏的特点,避免了常用方法中制备核糖体、提取RNA的仪器和技术条件的限制,检测的时间由原来的几天缩短到约120min,大大地降低了检测的费用,为广泛和深入地研究RIP提供了有利的条件.
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关键词
核糖体失活蛋白(RIP)
超螺旋质粒dna
凝胶电泳
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职称材料
题名
基于色谱法的超螺旋质粒DNA纯化与分析进展
被引量：
4
1
作者
李亮
柳方方
宛煜嵩
金芜军
机构
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1089-1094,共6页
基金
转基因生物新品种培育重大专项项目(2014ZX08012-003)
文摘
质粒DNA含有独立复制的遗传结构,是基因工程的常用工具,广泛应用于分子生物学基础研究、农业转基因检测、医疗诊断与基因治疗等领域。质粒DNA的构型一般分为超螺旋、开口环状及线性3种。初步纯化的质粒DNA溶液中常混有3种构型,并且掺杂一定量的蛋白质、RNA、内毒素以及宿主基因组DNA,这些杂质会影响后续的应用,因此质粒DNA需要进一步精细纯化。该文对质粒DNA的新应用领域、基于色谱的精细纯化技术及产物质量分析体系进行了综述,并展望了高纯度质粒DNA精细纯化及产物分析的发展方向。
关键词
超螺旋质粒dna
精细纯化
色谱技术
数字PCR
综述
Keywords
supercoiled plasmid
dna
fine purification
chromatography
digital PCR
review
分类号
O657.7 [理学—分析化学]
Q523 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
混合模式层析分离纯化超螺旋质粒DNA
2
作者
张鹏程
谭远志
孙艳娜
张其磊
姚善泾
林东强
机构
浙江大学生物质化工教育部重点实验室
出处
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期806-812,共7页
基金
国家重点研发计划(2021YFC2103401,2021YFE0113300)
国家自然科学基金(22078286)。
文摘
针对细胞裂解液中的超螺旋质粒DNA(sc pDNA)的分离,以质粒pVAX1为典型对象、采用Capto PlasmidSelect作为混合模式层析介质,探讨了料液中主要成分sc pDNA、开环质粒DNA(oc pDNA)和RNA的吸附行为,优化了分离条件,实现了从成分较为复杂的料液中高效分离sc pDNA。考察了上述3种组分的静态吸附,发现在(NH_(4))_(2)SO_(4)浓度c(NH_(4))_(2)SO4为1.9~2.5 mol·L^(-1)时,sc pDNA均具有较高的吸附量,确定c(NH_(4))_(2)SO_(4)=2.5 mol·L^(-1)的料液可直接上样,此时sc pDNA饱和吸附量为每克介质吸附3.3 mg。动态吸附实验发现,sc pDNA穿透略晚于oc pDNA,sc pDNA动态载量为每毫升介质负载2.00 mg,RNA吸附能力明显强于pDNA。进一步优化了洗脱、冲洗和上样量等分离条件,采用c(NH_(4))_(2)SO_(4)=2.5 mol·L^(-1)上样、c(NH_(4))_(2)SO_(4)=1.9 mol·L^(-1)冲洗、(c(NH_(4))_(2)SO_(4)=1.7 mol·L^(-1))+(cNaCl=0.3 mol·L^(-1))洗脱,sc pDNA纯度可达83.9%、同质性高达95.8%、收率为80.6%。结果表明,混合模式层析对sc pDNA选择性好、处理量较大,具有良好的应用价值。
关键词
超螺旋质粒dna
吸附
混合模式层析
核酸分离
Keywords
supercoiled plasmid
dna
adsorption
mixed-mode chromatography
nucleic acid separation
分类号
TQ028.8 [化学工程]
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职称材料
题名
用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法
被引量：
3
3
作者
王洪涛
张绍铃
刘望夷
机构
南京农业大学园艺学院
河南大学生命科学学院
中国科学院生物化学与细胞生物学研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期991-995,共5页
文摘
植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类能作用于核糖体最大RNA的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体RNA结构与功能的有力工具.利用RIP能在DNA中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋DNA解旋的特点,分别以常用的质粒PUC18、PUC19和PBR322 DNA为底物,建立了测定RIP酶活性的一种新方法,其灵敏度是50ng(天花粉蛋白)和5ng(还原型的辛纳毒蛋白),酶催化反应的时间是60min.这个新方法具有方便、快捷、灵敏的特点,避免了常用方法中制备核糖体、提取RNA的仪器和技术条件的限制,检测的时间由原来的几天缩短到约120min,大大地降低了检测的费用,为广泛和深入地研究RIP提供了有利的条件.
关键词
核糖体失活蛋白(RIP)
超螺旋质粒dna
凝胶电泳
Keywords
ribosome-inactivating protein（RIP）, double-stranded supercoiled
dna
, gel electrophoresis
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于色谱法的超螺旋质粒DNA纯化与分析进展
李亮
柳方方
宛煜嵩
金芜军
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
混合模式层析分离纯化超螺旋质粒DNA
张鹏程
谭远志
孙艳娜
张其磊
姚善泾
林东强
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
3
用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法
王洪涛
张绍铃
刘望夷
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007
3
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职称材料
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