口蹄疫病毒3′UTR负链互作的宿主蛋白筛选

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作者 潘红 周赛赛 +1 位作者 袁红根 宋云峰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2279-2291,共13页

本研究旨在筛选口蹄疫病毒(foot and mouth disease,FMDV)负链RNA复制过程中与3′UTR结合的宿主蛋白。首先,通过RNA pull down结合质谱,鉴定出与3′UTR负链结合的宿主蛋白。对质谱鉴定到的蛋白结果进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分... 本研究旨在筛选口蹄疫病毒(foot and mouth disease,FMDV)负链RNA复制过程中与3′UTR结合的宿主蛋白。首先,通过RNA pull down结合质谱,鉴定出与3′UTR负链结合的宿主蛋白。对质谱鉴定到的蛋白结果进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分析和互作网络筛选分析,并构建真核表达质粒以及原核表达质粒,表达该互作蛋白来验证RNA与蛋白的互作特异性。其次,截短3′UTR探究RNA与蛋白的互作区域,最后利用Co-IP探究宿主互作蛋白与病毒蛋白的互作关系。结果发现与3′UTR互作结合的蛋白多为核仁蛋白,其中以DEAD-box RNA解旋酶蛋白家族的Ddx18蛋白作为重点研究对象。通过构建该蛋白的真核表达载体,利用RNA pull down、RIP,以及EMSA证实Ddx18确实与3′UTR负链互作。转录出截短的3′UTR负链RNA,利用RNA pull down试验得出Ddx18与3′UTR负链的互作不依赖poly(U),且不与截短后的SL1和SL2互作。利用Co-IP试验证明2C病毒蛋白能与Ddx18蛋白互作。综上,3′UTR与Ddx18蛋白的互作可能基于RNA的空间结构,而2C病毒蛋白与Ddx18蛋白结合,提示2C可能间接结合3′UTR而共同形成复制复合物参与到FMDV的复制中。通过筛选与3′UTR负链互作的宿主蛋白,为进一步探究FMDV复制相关机制从而研究相关药物靶点奠定实验基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 3′非编码rna负链 互作宿主蛋白 Ddx18 2C

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非节段负链RNA病毒作为疫苗载体研究进展

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作者 颜新敏 张强 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期71-74,共4页

负链RAN病毒的反向遗传系统建立以后,非节段负链RNA病毒作为疫苗载体的研究取得了重要进展。文章从病毒载体的构建策略、插入基因在载体中的位置、插入片段的大小、数量以及外源基因的表达对载体的毒性作用进行了综述;对外源糖蛋白整合... 负链RAN病毒的反向遗传系统建立以后,非节段负链RNA病毒作为疫苗载体的研究取得了重要进展。文章从病毒载体的构建策略、插入基因在载体中的位置、插入片段的大小、数量以及外源基因的表达对载体的毒性作用进行了综述;对外源糖蛋白整合到病毒粒子上对载体的影响,通过不同的方法和途径来提高载体疫苗的免疫效果方面进行阐述。 展开更多

关键词 非节段负链rna病毒 病毒疫苗 载体

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负链RNA病毒的反向遗传技术 被引量：5

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作者 曾江勇 郭建宏 刘在新 《动物医学进展》 CSCD 2006年第9期35-39,共5页

反向遗传技术是一种新的分子生物学技术,它在深入研究负链RNA病毒基因组结构和功能,探寻其基因组复制、转录和研发新型基因工程疫苗上发挥着重要的作用。文章介绍了分节与不分节负链RNA病毒的复制机理和特征,论述了反向遗传学在研究这... 反向遗传技术是一种新的分子生物学技术,它在深入研究负链RNA病毒基因组结构和功能,探寻其基因组复制、转录和研发新型基因工程疫苗上发挥着重要的作用。文章介绍了分节与不分节负链RNA病毒的复制机理和特征,论述了反向遗传学在研究这些病毒上的策略、最新研究进展及其主要影响拯救效率的因素,进一步涉及了负链RNA病毒载体及其重组病毒的研究动态。因此,通过反向遗传学,人们将更加了解负链RNA病毒,为科学利用和有效控制该病毒奠定基础。 展开更多

关键词 反向遗传学 负链rna病毒 病毒载体

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负链RNA病毒反基因操作技术发展之启示 被引量：1

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作者 李光玉 白雪帆 +1 位作者 潘蕾 王全楚 《医学与哲学》 2003年第7期49-51,共3页

关键词 负链rna病毒 反基因操作技术 研究方法 分子生物学

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链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA 被引量：2

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作者 王继华 信爱国 +5 位作者 朱明旺 苗海生 胡骑 廖德芳 李乐 李华春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期130-133,144,共5页

旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒... 旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 链特异性RT-PCR 复制中间体 负链rna 感染

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动物病毒基因重组疫苗的研究现状

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作者 王启水 马林 《山东畜牧兽医》 2003年第3期46-47,共2页

关键词 动物病毒基因重组疫苗 研究现状 DNA病毒载体疫苗 负链rna病毒重组疫苗 正链rna病毒重组疫苗 DNA疫苗

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反向遗传学技术及在RNA病毒研究中的应用 被引量：6

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作者 张英 李莉 +2 位作者 李旭 韩松 鲁会军 《动物医学进展》 CSCD 2008年第3期60-63,共4页

RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种... RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。自20世纪70年代后期第一例RNA病毒感染性克隆构建成功以来,RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这在很大程度上归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立。文章介绍了反向遗传学技术的基本特点、技术方法及其在正、负链RNA病毒的基因功能、致病机制及新型病毒载体等方面的研究及应用情况。 展开更多

关键词 反向遗传学技术 正链rna病毒 负链rna病毒 感染性克隆

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VR-2332菌株猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗功效的相关研究

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作者 张玲妮 李岑岑(译) +6 位作者 iseki h kawashima k tung n inui k ikezawa m shibahara t yamakawa m 《猪业科学》 2017年第8期38-39,共2页

自20世纪80年代后期出现以来,猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）已经在大多数养猪国家流行起来.PRRS的病原体是PRRS病毒（PRRSV）,它是单股正链RNA病毒.2006年,中国出现了导致所有年龄的猪高热和死亡的高致病性PRRS（HP-PRRS）.高毒性2型PRRS... 自20世纪80年代后期出现以来,猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）已经在大多数养猪国家流行起来.PRRS的病原体是PRRS病毒（PRRSV）,它是单股正链RNA病毒.2006年,中国出现了导致所有年龄的猪高热和死亡的高致病性PRRS（HP-PRRS）.高毒性2型PRRSV已被检测到,并鉴定了非结构蛋白2（nsp2）中常见的缺失位点.HP-PRRS由具有共同遗传特征的病毒引起,现在已经迅速蔓延到东南亚各国.在这里,我们以无特定病原体（SPF）仔猪作为试验对象,通过评估临床特征,血清、唾液和器官中的病毒载体及肉眼和微观病变来评估越南2010年分离株的体内致病力和毒力以及Ingel-vacPRRS MLV的有效性. 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 活疫苗 无特定病原体 正链rna病毒 功效 菌株 PRRS病毒 PRRSV

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副流感病毒5型作为疫苗载体的研究进展 被引量：1

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作者 刘子宁 汤新明 +1 位作者 梁琳 崔尚金 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期72-78,共7页

疫苗免疫是防控人类和动物疫病最经济有效的策略。以适宜的病毒、细菌等微生物或寄生虫为载体的活载体疫苗具有安全性高、能激发宿主多类型免疫应答、不需要佐剂等优势,是目前疫苗研究领域的热点之一。其中,以病毒为疫苗载体的研究最为... 疫苗免疫是防控人类和动物疫病最经济有效的策略。以适宜的病毒、细菌等微生物或寄生虫为载体的活载体疫苗具有安全性高、能激发宿主多类型免疫应答、不需要佐剂等优势,是目前疫苗研究领域的热点之一。其中,以病毒为疫苗载体的研究最为广泛,技术也最为成熟,并且已有许多商品化的重组病毒载体疫苗。副流感病毒5型(Parainfluenza virus type 5,PIV5)为单负链RNA病毒,感染宿主范围广,单独感染一般不引起临床症状,致病性低。 展开更多

关键词 副流感病毒 疫苗载体 免疫应答 动物疫病 活载体疫苗 负链rna病毒 病毒载体疫苗 疫苗研究

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塞内加尔病毒特异性重组分析揭示了塞尼卡病毒聚合酶保真性与病毒重组发生的相关性 被引量：11

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作者 Li C Wang H Shi J 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期I0003-I0003,共1页

塞尼卡病毒(SVA)是一种新出现的感染猪并可导致仔猪死亡的病毒。最近的研究显示,SVA在猪体内可发生重组,表明了重组在SVA进化过程中的重要性。越来越多的研究表明,病毒聚合酶保真性的改变能显著降低病毒的毒力,而且病毒聚合酶也是影响... 塞尼卡病毒(SVA)是一种新出现的感染猪并可导致仔猪死亡的病毒。最近的研究显示,SVA在猪体内可发生重组,表明了重组在SVA进化过程中的重要性。越来越多的研究表明,病毒聚合酶保真性的改变能显著降低病毒的毒力,而且病毒聚合酶也是影响病毒重组的主要因素。因此,通过提高病毒聚合酶的保真性获得重组缺陷病毒株、不但具有重要的理论价值,作为可使减毒株更加安全的技术手段、也具有疫苗开发的应用价值。由于微RNA病毒科的病毒均具有高度的变异性和复杂性,通过提升病毒聚合酶的保真性、结合其它减毒策略,可获得足够安全和有效的减毒活疫苗候选毒株。 展开更多

关键词 病毒重组 聚合酶 保真性 塞内加尔 重组分 减毒活疫苗 仔猪死亡 rna病毒

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刺突蛋白三聚体是Alpha-冠状病毒亚单位疫苗的潜在候选者

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作者 SHI YUE-JUN SHI JIA-LE SUN LI-MENG 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期229-229,共1页

冠状病毒(Coronavirus,CoV)是单股、正链RNA病毒,按照系统发育分析,可分为4个属:Alpha-、Beta-、Gamma-和Delta-冠状病毒属。目前,Alpha-CoVs(HCoV-229E、HCoV-NL63)和Beta-CoVs(HCoV-HKU1、HCoV-OC43)广泛流行于人群中,感染症状较轻。S... 冠状病毒(Coronavirus,CoV)是单股、正链RNA病毒,按照系统发育分析,可分为4个属:Alpha-、Beta-、Gamma-和Delta-冠状病毒属。目前,Alpha-CoVs(HCoV-229E、HCoV-NL63)和Beta-CoVs(HCoV-HKU1、HCoV-OC43)广泛流行于人群中,感染症状较轻。SARS-CoV、SARS-CoV-2和MERSCoV属于Beta-CoVs,具有高致病性。 展开更多

关键词 亚单位疫苗 冠状病毒属 正链rna病毒 候选者 ALPHA 高致病性 系统发育分析 感染症状

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基于DNA的Semliki森林病毒复制子载体体内外高水平表达外源基因 被引量：9

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作者 余云舟 孙志伟 +1 位作者 刘志刚 俞炜源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期87-94,共8页

基于DNA的复制子载体显著地提高了复制子载体的应用范围,在体外可用于高水平表达外源基因,大规模制备重组病毒颗粒,在体内可用于复制子疫苗和基因治疗载体研究.将复制子RNA的cDNA置于RNA聚合酶Ⅱ启动子和转录终止子控制下时,基于RNA的... 基于DNA的复制子载体显著地提高了复制子载体的应用范围,在体外可用于高水平表达外源基因,大规模制备重组病毒颗粒,在体内可用于复制子疫苗和基因治疗载体研究.将复制子RNA的cDNA置于RNA聚合酶Ⅱ启动子和转录终止子控制下时,基于RNA的复制子载体可转变为基于DNA的复制子载体.当DNA载体转染细胞后,第一阶段,RNA聚合酶Ⅱ启动子在核内起始合成RNA,经过加工和修饰后运输到细胞质中,相当于复制子RNA,第二阶段,该RNA自我复制及表达外源基因,相当于病毒RNA复制循环.在成功地构建了基于DNA和RNA的双功能复制子表达载体pSCTA和辅助载体pSHCTA的基础上,为了获得高效的基于DNA的复制子载体,对其进行改进而构建了共4种不同的基于DNA的semliki森林病毒复制子,通过对表达载体和相应的辅助载体表达报告基因及对制备重组病毒颗粒的能力进行比较,获得了复制能力提高的复制子载体pSCAR和pSHCAR.该表达载体pSCAR可高水平表达外源基因,与辅助载体pSHCAR共转染可制备高滴度的重组病毒颗粒,并且也能表达抗原基因.另外,报告基因在DNA复制子载体注射的小鼠体内得到了高水平表达,并且DNA免疫小鼠后也诱导产生高滴度特异性抗体以及细胞免疫反应.结果表明,经过改造SFV复制子载体,获得了高效的基于DNA的SFV复制子载体.该复制子载体增强了原复制子载体应用能力,并有潜力作为复制子疫苗和基因治疗载体. 展开更多

关键词 semliki森林病毒 rna复制子 DNA 重组病毒颗粒 疫苗

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狂犬病毒糖蛋白研究进展 被引量：22

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作者 徐兰 郭增柱 +2 位作者 张永振 熊成龙 Zhen F.Fu 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期876-879,共4页

关键词 狂犬病毒糖蛋白 人兽共患传染病 负链rna病毒 保护性抗原 基因编码 急性传染病 病毒基因 结构基因

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人肿瘤特异抗原MAGE-3基因疫苗的构建和表达 被引量：5

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作者 倪兵 李燕秋 +3 位作者 王莉 唐艳 周伟 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1133-1136,共4页

目的　克隆肿瘤特异性共享抗原mage 3基因 ,制备基于α 病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法　用RT PCR方法从黑色素瘤细胞系LB3 73中制备mage 3基因 ,以含α 病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体 ,构建重组DNA... 目的　克隆肿瘤特异性共享抗原mage 3基因 ,制备基于α 病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法　用RT PCR方法从黑色素瘤细胞系LB3 73中制备mage 3基因 ,以含α 病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体 ,构建重组DNA疫苗。重组子用载体中的T7和T3启动子序列为测序引物进行自动测序。再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化 2 93细胞 ,用免疫印迹法和免疫组化法鉴定转化细胞中mage 3蛋白的表达。结果　正确构建了mage 3 pSMART2a重组质粒 ,并且在转化此质粒的 2 93细胞中检测出了mage 3蛋白的表达。结论　此重组mage 3 pSMART2a质粒可以作为肿瘤特异的DNA疫苗 ,可进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及相关免疫学效应研究。 展开更多

关键词 肿瘤特异抗原 MAGE-3基因 基因克隆 α-病毒复制酶 高效黑色素瘤特异性基因疫苗 基因治疗 逆转录-聚合酶链反应 重组DNA疫苗

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汉坦病毒基因分型及其分子流行病学研究进展 被引量：10

15

作者 杨占清 俞守义 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期252-255,共4页

关键词 分子流行病学研究 病毒基因分型 汉坦病毒肺综合征 负链rna病毒 肾综合征出血热 汉坦病毒属 rna多聚酶 布尼亚病毒 病毒基因组 rna依赖 G1和G2 病毒糖蛋白 衣壳蛋白 人类感染

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鸡新城疫病毒分子生物学特性及检测方法研究进展 被引量：2

16

作者 王青 张改平 +6 位作者 赵森林 王选年 胡建和 王自良 杨苏珍 鲁晓翠 肖治军 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第5期114-116,共3页

关键词 鸡新城疫病毒 分子生物学特性 负链rna病毒 检测 败血性传染病 rna聚合酶 副黏病毒 分子结构

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狐源性犬瘟热病毒抗血清的制备及其初步应用 被引量：2

17

作者 谭婷婷 张立恒 +3 位作者 刘志平 侯志军 张段玲 张彦龙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第7期73-74,共2页

关键词 犬瘟热病毒 抗血清 银黑狐 应用 制备 临床治疗试验 特种经济动物 负链rna病毒

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博尔纳病病毒持续感染的原因及意义 被引量：3

18

作者 刘庆军 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期992-994,共3页

关键词 博尔纳病病毒 病毒持续感染 病毒感染性疾病 负链rna病毒 禽流感病毒 暴发流行 病毒脑炎 西尼罗河

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牛副流感病毒3型诊断方法研究进展 被引量：2

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作者 徐威 吴文学 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第1期54-56,共3页

牛副流感病毒3型（BPIV-3）是单股负链RNA病毒目、副黏病毒科、副黏病毒亚科、呼吸道病毒属的成员，是引起牛呼吸道疾病综合征（BRDC）的重要病毒性病原之一。1959年Reisinger等在美国首次从牛体分离到此种病毒，随后世界许多国家都从... 牛副流感病毒3型（BPIV-3）是单股负链RNA病毒目、副黏病毒科、副黏病毒亚科、呼吸道病毒属的成员，是引起牛呼吸道疾病综合征（BRDC）的重要病毒性病原之一。1959年Reisinger等在美国首次从牛体分离到此种病毒，随后世界许多国家都从牛羊身上分离出该病毒，我国内蒙古、黑龙江、山东、新疆等地普遍流行。 展开更多

关键词 副流感病毒 牛体 诊断方法 呼吸道疾病综合征 负链rna病毒 副黏病毒 病毒性病原 内蒙古

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禽流感病毒免疫研究进展 被引量：5

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作者 信爱国 宋学林 高华峰 《上海畜牧兽医通讯》 2006年第1期16-18,共3页

关键词 禽流感病毒 免疫研究 负链rna病毒 A型流感病毒 自然宿主 病毒感染 野生水禽 哺乳动物 正粘病毒科 virus

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