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重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化 被引量:3
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作者 田顺立 郑春阳 《安徽农业科学》 CAS 2018年第33期71-74,共4页
[目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化。[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化。使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMOKGF... [目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化。[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化。使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMOKGF(ΔN23)和Fh8-SUMO融合的Fh8-SUMO-KGF(ΔN23),并测试不同表达温度(37、23℃)对KGF(ΔN23)表达结果的影响。[结果]在BL21(DE3)菌株中,37℃表达时KGF(ΔN23),SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)的表达量都较高,其中可溶性蛋白表达量KGF(ΔN23)<SUMO-KGF(ΔN23)<Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)。降低诱导温度为23℃后,3种KGF的表达量都显著降低,但是可溶性蛋白的占比显著提高,均接近100%。[结论]降低诱导温度能够促进KGF的可溶性表达,但是总蛋白的表达水平显著下降;与可溶性标签蛋白融合表达能够提高KGF在37℃表达时可溶性蛋白占比,其中融合Fh8-SUMO标签的KGF表达量和可溶性蛋白占比较高。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子(kgf) 原核表达系统 密码子优化 融合表达 标签蛋白
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重组人角质细胞生长因子2对辽宁绒山羊血清KGF-2浓度的影响 被引量:1
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作者 孙亚波 朱延旭 +5 位作者 冀红芹 贾富勃 王春艳 吉尚雷 全治国 刘媛缘 《现代畜牧兽医》 2022年第6期11-17,共7页
研究旨在探讨不同处理方式给药后羊血清角质细胞生长因子2 (KGF-2)的浓度变化趋势,为重组人角质细胞生长因子2 (rhKGF-2)调控羊绒生长筛选合适的处理方法和剂量提供参考。试验选择24只5~7月龄、体重为(25.76±1.94) kg的辽宁绒山羊... 研究旨在探讨不同处理方式给药后羊血清角质细胞生长因子2 (KGF-2)的浓度变化趋势,为重组人角质细胞生长因子2 (rhKGF-2)调控羊绒生长筛选合适的处理方法和剂量提供参考。试验选择24只5~7月龄、体重为(25.76±1.94) kg的辽宁绒山羊,公、母各半,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1只羊。以皮下注射方式,试验1组注射rhKGF-2胶原蛋白溶液,试验2组注射rhKGF-2温敏感凝胶溶液,试验3组注射rhKGF-2生理盐水溶液,试验4组为对照组,不做rhKGF-2处理。共设3个试验周期,每个周期18 d;依次设置低、中、高(10、20、30μg/kg)等3个剂量,每个周期开始时一次性注射18 d用量;研究不同给药方式和剂量对注射后血清KGF-2浓度变化的影响,探讨适宜的给药方式和剂量。结果显示:以胶原蛋白溶液和温敏感凝胶溶液形式皮下注射rhKGF-2后,血清KGF-2浓度先增加后降低,呈近似抛物线形式变化;以生理盐水溶液形式给药后,血清KGF-2浓度迅速升高达到峰值后断崖式直线下降。随着处理剂量增加,3个试验组血清KGF-2浓度峰值出现的时间均向后延迟,KGF-2高浓度维持时间延长;在30μg/kg的剂量时,试验1组的上述两个时间参数为90和426 h,试验2组为138和426 h,试验3组为42和138 h。对于同一种处理方式,剂量增加可使血清KGF-2浓度绝对值增加。研究表明,通过外源供给方式给绒山羊补充KGF-2,增加供给剂量能够提高血清KGF-2绝对浓度、延迟峰值出现时间、延长高浓度维持时间;以胶原蛋白溶液和温敏感凝胶的方式补充KGF-2效果相近,但考虑到可操作性,以前者的效果更好。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子2 辽宁绒山羊 重组人角质细胞生长因子2
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角质细胞生长因子2对细胞生长、移行及创伤愈合的作用 被引量:10
3
作者 陈霞 胡炜 +4 位作者 魏万贵 沈雁 陈燕 杨胜利 龚毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期854-862,共9页
角质细胞生长因子2(KGF-2)是成纤维细胞生长因子超家族的一员,由间质细胞合成并分泌,能特异促进上皮细胞增殖、分化与迁移,对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用.通过PCR从人的肾组织cDNA文库中克隆分离获得了KGF-2的cDNA,表... 角质细胞生长因子2(KGF-2)是成纤维细胞生长因子超家族的一员,由间质细胞合成并分泌,能特异促进上皮细胞增殖、分化与迁移,对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用.通过PCR从人的肾组织cDNA文库中克隆分离获得了KGF-2的cDNA,表明该因子在成人肾中有表达.采用大肠杆菌表达并纯化重组蛋白用于生物学功能研究的结果显示:KGF-2在体外不仅能够促进角质细胞的生长和增殖,而且对其凋亡具有抑制作用,还对细胞的移行具有影响.在动物实验中,KGF-2能促进皮肤切除产生的伤口愈合,提示该蛋白质可以作为创伤治疗或辅助用药的候选分子. 展开更多
关键词 角质细胞生长因子2 细胞生长 细胞凋亡 细胞移行 伤口愈合 治疗应用
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重组人角质细胞生长因子-2基因克隆、表达、纯化与活性分析 被引量:13
4
作者 马雁冰 李擎 +4 位作者 谢天宏 李鸿钧 冮宏映 戴长柏 孙茂盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期761-765,共5页
从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实... 从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实现高效表达 ,表达量可达菌体总蛋白 10 %~15 % .菌体超声破碎 ,上清经CM SepharoseFF阳离子交换 ,Heparin Sepharose亲和层析 ,Superdex 75凝胶过滤层析纯化得到重组人KGF 2 ,纯度高于 95 % .生物活性分析表明 ,它能够促进成纤维细胞NIH 3T3的增殖 ,诱导鸡胚背根神经结神经轴突的生长 ,促进鸡胚尿囊膜血管生成 .研究结果表明 ,获得了 95 %纯度的具有生物学活性的重组人KGF 2 。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 基因克隆 表达 纯化 活性分析
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重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用 被引量:7
5
作者 王晓杰 周鑫 +6 位作者 田海山 马吉胜 焦悦 张睿 蔡敏倩 钱焕文 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期625-628,F0002,共5页
目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);... 目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50μL药物滴眼,每日3次。7和14d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果:碱烧伤后7和14d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性(P<0.01)。碱烧伤对照组7d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.50%。MTT检测结果显示:碱烧伤后7和14d,KGF-2组492nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。碱烧伤后7和14d,病理切片HE染色显示:对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论:外用旋滴25mg·mL-1KGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 角膜 上皮 损伤修复
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角质细胞生长因子对常染色体显性遗传型多囊肾病囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用 被引量:9
6
作者 刘沙勤 梅长林 +2 位作者 孙田美 盛茂 李林 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期871-873,共3页
目的 :观察角质细胞生长因子 (KGF)在体外对常染色体显性遗传型多囊肾病 (ADPKD)囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用并探讨其可能的作用机制。方法 :外源性给予不同浓度的 KGF(0~ 10 0 ng/ ml) ,采用 MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞术检... 目的 :观察角质细胞生长因子 (KGF)在体外对常染色体显性遗传型多囊肾病 (ADPKD)囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用并探讨其可能的作用机制。方法 :外源性给予不同浓度的 KGF(0~ 10 0 ng/ ml) ,采用 MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞术检测细胞周期 ,在电镜下观察细胞形态。结果 :KGF呈剂量、时间依赖性地促进了 ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增生 ,表现为细胞数量增多 ,S期细胞比率增高 ,细胞分裂活跃 ,增生的细胞形态尤其是细胞核较正常体积增大。结论 :KGF可显著刺激 ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增殖 ,提示 KGF可能参与 ADPKD肾囊肿的形成和发展。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 常染色体显性遗传型多囊肾病 囊肿衬里上皮细胞 细胞增殖
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角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究 被引量:6
7
作者 魏美荣 李国菊 +2 位作者 张达 颜世果 戚向敏 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期565-568,共4页
目的研究不同浓度角质细胞生长因子(KGF)对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法将不同浓度的KGF(对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·... 目的研究不同浓度角质细胞生长因子(KGF)对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法将不同浓度的KGF(对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·mL-1)分别加入体外培养的口腔黏膜上皮细胞,培养12、24、48 h后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光实时定量检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果 1)实验组较对照组细胞贴壁明显,且48 h时实验3组细胞核仁明显。2)培养48 h时,4组之间的细胞凋亡率、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均有统计学差异,随着KGF浓度的增加,细胞凋亡率和Bax mRNA表达逐渐降低,Bcl-2 mRNA表达逐渐升高(P<0.05)。结论 KGF可通过上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 细胞凋亡 口腔黏膜上皮细胞
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重组人角质细胞生长因子-2对实验秃毛大鼠的毛发再生作用 被引量:9
8
作者 王泽 黄鹏煌 +3 位作者 赵海洋 李海燕 田海山 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1741-1746,共6页
目的建立实验秃毛大鼠模型,研究重组人角质细胞生长因子-2(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)对实验秃毛大鼠的毛发再生作用。方法对大鼠背部以脱毛膏拔毛,随机分为7个组,即正常对照组、5%米诺地尔组、aFGF组、r... 目的建立实验秃毛大鼠模型,研究重组人角质细胞生长因子-2(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)对实验秃毛大鼠的毛发再生作用。方法对大鼠背部以脱毛膏拔毛,随机分为7个组,即正常对照组、5%米诺地尔组、aFGF组、rhKGF2高、中、低剂量组、0.9%生理盐水组。造模次日皮肤涂抹给药,以给药第1、5、9、14天为观察时间点,记录实验大鼠的体重、实验区毛长、实验区毛发生长状况。于第14天处死实验大鼠,取实验区皮肤进行组织病理学检查。结果体重方面:在第1、5、9、14天,与正常对照组相比,各组差异无显著性(P>0.05);毛长方面:与0.9%生理盐水组相比,在第5、9天,rhKGF2高、中剂量组存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。在第14天,高、中、低剂量组差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.05);毛重方面:在第14天,与0.9%生理盐水组相比,各组(正常对照组除外)差异有显著性(P<0.01);病理检查结果显示:rhKGF2具有促进实验秃毛大鼠毛囊新生与成熟的作用。结论 rh-KGF2具有促进实验秃毛大鼠毛发再生的作用。rhKGF2具有很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 重组人角质细胞生长因子-2 秃毛大鼠 毛发再生作用 毛囊 临床应用
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生长因子、胰岛素、PHA对表皮角质细胞增殖的影响 被引量:5
9
作者 曹启栋 金曙雯 +1 位作者 许伟石 史济湘 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1997年第S1期16-19,共4页
应用~3H-胸腺嘧啶核苷参入法,测定可溶性生长因子(EGF、PDGF、TGF-β)等对体外培养人表皮角质细胞(EKC)增殖的影响。结果发现EGF在1~5ng/ml时,EKC增殖迅速;浓度再升高时,EKC的CPM值增加趋向平缓。胰岛素可促使EKC增殖;当与... 应用~3H-胸腺嘧啶核苷参入法,测定可溶性生长因子(EGF、PDGF、TGF-β)等对体外培养人表皮角质细胞(EKC)增殖的影响。结果发现EGF在1~5ng/ml时,EKC增殖迅速;浓度再升高时,EKC的CPM值增加趋向平缓。胰岛素可促使EKC增殖;当与EGF合用时,增殖呈明显的协同作用。EGF与PDGF和(或)TGF-β配伍时,代表细胞增殖的CPM值增量不明显,甚至下降。PHA在低浓度时可促进EKC增殖,高浓度时抑制,呈典型的剂量-效应曲线;PHA与EGF配伍,EKC增殖反应表现出一些复杂而有规律的变化。结果提示:1.可溶性生长因子确能促进体外培养EKC的增殖。2.EGF对EKC的增殖作用可受其他生长因子、胰岛素等外来因素的介入而发生改变。 展开更多
关键词 表皮角质细胞 增殖 可溶性生长因子 胰岛素 植物血凝素
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ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用 被引量:5
10
作者 高丽昌 李婷婷 +4 位作者 李富勇 唐禄 李海燕 王晓杰 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1405-1408,共4页
目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western b... 目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1~100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 ERK1/2 PERK1/2 信号通路 角膜基质细胞 细胞增殖
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乳糖诱导角质细胞生长因子-2在大肠杆菌中的表达 被引量:3
11
作者 田海山 唐禄 +5 位作者 王晓杰 王会岩 刘笑菊 冯秀萍 王一 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期262-266,共5页
目的:研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。方法:分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的... 目的:研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。方法:分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的乳糖诱导条件。结果:对于重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到良好效果,以乳糖为诱导剂的A600值较IPTG高,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。以终浓度为10g.L-1乳糖在33℃下诱导6h,可以达到良好的诱导效果,并且具有较好的可溶性和促细胞生长活性。结论:乳糖可替代IPTG诱导角质细胞生长因子基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了良好的实验依据。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 乳糖诱导 IPTG
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角质细胞生长因子对无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长与分泌CA125的影响 被引量:3
12
作者 程湘 王欣 +6 位作者 成娅 陈波洁 刘萍 王智 林桂兰 杨合荣 王惠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期247-250,共4页
目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)对离体培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长和分泌CA125的影响。方法体外培养无排卵型功血子宫内膜上皮细胞,加入不同浓度的KGF作用后,微量噻唑蓝分析法检测细胞量,了解... 目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)对离体培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长和分泌CA125的影响。方法体外培养无排卵型功血子宫内膜上皮细胞,加入不同浓度的KGF作用后,微量噻唑蓝分析法检测细胞量,了解生长情况,磁酶免法测定CA125分泌,分析两者之间的相关性,并与培养的正常子宫内膜上皮细胞进行比较。结果无排卵型功血子宫内膜上皮细胞与正常子宫内膜上皮细胞的外观特征相似;CK19免疫组化染色结果为无排卵型功血子宫内膜上皮细胞的细胞质被染成棕黄色。②不同浓度的KGF作用体外培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞后,细胞增生明显,但增生程度不如正常子宫内膜上皮细胞(P<0.05)。③不同浓度KGF作用后两组子宫内膜上皮细胞的CA125浓度均升高,无排卵型功血子宫内膜上皮细胞的增高程度明显低于正常子宫内膜上皮细胞(P<0.05)。④正常和功血的子宫内膜上皮细胞中二者的吸光度值与细胞培养上清液中的CA125浓度有显著的相关性,两者的相关系数分别为0.681和0.885(P<0.05)。结论KGF对体外培养的无排卵型功血子宫内膜上皮细胞有促进生长和分泌CA125的作用,但促进作用的程度不如正常子宫内膜上皮细胞,提示无排卵型功血子宫内膜上皮细胞存在与正常子宫内膜上皮细胞不同的生长机制和功能,可能参与无排卵型功血的发病。 展开更多
关键词 无排卵型功血 子宫内膜上皮细胞 角质细胞生长因子 CAL25
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人角质细胞生长因子的植物表达载体构建 被引量:3
13
作者 苏勇波 邵寒娟 +2 位作者 沈明山 王鸣刚 陈亮 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期25-28,共4页
人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子.以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1.应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaM... 人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子.以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1.应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaMV35S 启动子和 NOS 终止子后克隆至植物表达质粒 pBI 1301. 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 植物表达载体 重叠延伸法
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重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化 被引量:3
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作者 邓林 刘孝菊 +5 位作者 龚守良 王会岩 田海山 王晓杰 马吉胜 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页
目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2... 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。 展开更多
关键词 高效表达 重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化
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重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达 被引量:2
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作者 薛萍 朱小静 +4 位作者 刘孝菊 李一兰 南佳 姜潮 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页
目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d2... 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84~96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3~25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞 杆状病毒系统
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他扎罗汀对角质形成细胞体外增殖及分泌转化生长因子β1的影响 被引量:4
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作者 高春芳 顾军 +1 位作者 郑茂荣 阎明 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期751-753,共3页
对正常人表皮角质形成细胞(KC)进行原代培养,通过细胞计数、细胞增殖试验(亚甲蓝染色)及ELISA方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)的含量等体外观察他扎罗汀对KC的药理作用及其对KC分泌TGF-β1含量的影响。结果新一代受体选择的维A酸药物... 对正常人表皮角质形成细胞(KC)进行原代培养,通过细胞计数、细胞增殖试验(亚甲蓝染色)及ELISA方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)的含量等体外观察他扎罗汀对KC的药理作用及其对KC分泌TGF-β1含量的影响。结果新一代受体选择的维A酸药物他扎罗汀可明显抑制KC的生长,具有时间和浓度依赖性特点;且可提升KC分泌TGF-β1的含量。由此可见,他扎罗汀可通过提升KC分泌TGF-β1的含量来进一步抑制KC的增殖。 展开更多
关键词 他扎罗汀角质形成细胞 体外增殖 转化生长因子β药理
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来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中角质细胞生长因子的表达 被引量:3
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作者 任伟慧 贾莉婷 +4 位作者 张展 李占飞 李肖甫 孙琳 朱艳玲 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第3期532-535,共4页
目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)在多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制中的作用。方法:40只雌性SD大鼠随机分为2组,PCOS组应用来曲唑诱导大鼠PCOS模型,对照组不作任何处理。阴道涂片观察大鼠动情周期变化;应用放免法测定大鼠血清促黄体生成素... 目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)在多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制中的作用。方法:40只雌性SD大鼠随机分为2组,PCOS组应用来曲唑诱导大鼠PCOS模型,对照组不作任何处理。阴道涂片观察大鼠动情周期变化;应用放免法测定大鼠血清促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)水平;取卵巢组织行HE染色和免疫组织化学SABC染色分别观察组织学变化及卵巢组织中KGF的表达。结果:P-COS组大鼠失去规律性动情周期变化,血清T、LH浓度高于对照组(P<0.05),血清P浓度低于对照组(P<0.05);PCOS组KGF在窦前卵泡膜细胞的表达明显强于对照组(P<0.05),在囊状卵泡膜细胞的表达明显弱于对照组(P<0.05)。结论:来曲唑诱导的大鼠动物模型是理想的PCOS模型;KGF与PCOS的发病密切相关。 展开更多
关键词 来曲唑 角质细胞生长因子 多囊卵巢综合征 大鼠
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重组人角质细胞生长因子-2对大鼠皮肤烫伤的治疗作用及其可能机制探讨 被引量:2
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作者 袁海虹 周薇 +4 位作者 荣征星 廖镇江 张勤 乔亮 陈红专 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第6期639-644,共6页
目的:研究重组人角质细胞生长因子-2(rh-KGF-2)对大鼠皮肤烫伤愈合的影响及其可能的作用机制。方法:建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,每天局部给药1次,连续15d,每4d测量伤口面积并计算愈合率,d16观察新生上皮面积、厚度和上皮细胞迁移距离。体... 目的:研究重组人角质细胞生长因子-2(rh-KGF-2)对大鼠皮肤烫伤愈合的影响及其可能的作用机制。方法:建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,每天局部给药1次,连续15d,每4d测量伤口面积并计算愈合率,d16观察新生上皮面积、厚度和上皮细胞迁移距离。体外培养HaCaT细胞,MTT法检测不同浓度的rhKGF-2对HaCaT细胞增殖率的影响;划痕实验检测rhKGF-2对HaCaT细胞移行的影响。结果:rh-KGF-2对大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤的愈合有明显的促进作用,使新生上皮面积、平均厚度和上皮细胞移行距离等明显增加。rhKGF-2可刺激HaCaT细胞增殖,集落形成率增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富;rhKGF-2能显著促进创伤周围细胞向创面中央移行(P<0.01)。结论:rhKGF-2能明显加快大鼠烫伤创面愈合,可能作用机理为通过促进表皮细胞增殖和移行,加速创面皮肤再上皮化。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 烫伤 HACAT细胞 增殖 移行
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人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白抑制角质形成细胞生长因子诱导的细胞自噬 被引量:4
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作者 付广红 龚丹 万佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1517-1521,共5页
目的研究人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白对角质形成细胞生长因子(KGF)诱导的细胞自噬的影响。方法构建HPV16 E5蛋白真核表达载体p CI-neo-E5,采用LipofectamineTM2000转染至Ha Ca T人角质形成细胞,实时定量PCR检测HPV16 E5 mRNA转录... 目的研究人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白对角质形成细胞生长因子(KGF)诱导的细胞自噬的影响。方法构建HPV16 E5蛋白真核表达载体p CI-neo-E5,采用LipofectamineTM2000转染至Ha Ca T人角质形成细胞,实时定量PCR检测HPV16 E5 mRNA转录水平。转染p CI-neo-E5并以KGF刺激Ha Ca T细胞后,实时定量PCR检测自噬相关蛋白beclin 1、自噬相关基因5(ATG5)、ATG7及LC3B mRNA的水平,Western blot法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,免疫荧光技术检测LC3B的分布。结果成功构建HPV16 E5真核表达载体p CI-neo-E5并可有效表达。角质形成细胞转染p CI-neo-E5,自噬相关蛋白mRNA的水平显著降低,抑制KGF诱导的LC3BⅡ表达水平升高和LC3B的聚集。结论 HPV16 E5蛋白通过下调自噬相关蛋白的表达,抑制KGF诱导的细胞自噬。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 子宫颈癌 自噬 角质形成细胞生长因子
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不同物理和化学因素对重组人角质细胞生长因子2稳定性的影响 被引量:2
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作者 周鑫 王晓杰 +5 位作者 田海山 唐禄 焦悦 朱家楠 王莘 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期518-522,共5页
目的:研究重组人角质细胞生长因子2(rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法:rhKGF-2在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH4~9)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬... 目的:研究重组人角质细胞生长因子2(rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法:rhKGF-2在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH4~9)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、吉斐氏缓冲溶液)及反复冻融条件下分别保存,采用RP-HPLC法检测rhKGF-2纯度,同时观察外观性状。结果:-20℃、4℃分别保存时,rhKGF-2的各项性质在观察期内都无明显变化;25℃时,rhKGF-2存放28d纯度较0h(100.00%)下降至(68.20±0.14)%;40℃时,rhKGF-2存放9h纯度较0h(100.00%)下降至(4.80±0.39)%。rhKGF-2(pH6.0)在25℃条件下保存90d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.12)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.05);pH值为4.0、9.0的rhKGF-2液体在25℃条件下分别保存120h纯度较0h(100.00%)下降至(15.60±0.30)%和(67.30±0.10)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2在柠檬酸缓冲液中25℃条件下保存60d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.15)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2原液反复冻融后其纯度变化差异无显著性(P>0.05)。结论:rhKGF-2在低温和pH6.0~7.0中性条件下稳定。高温、偏酸性和偏碱性条件下均不利于rhKGF-2稳定。柠檬酸缓冲液有利于rhKGF-2稳定。反复冻融对rhKGF-2稳定性影响不明显。 展开更多
关键词 重组人角质细胞生长因子-2 纯度 稳定性
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