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不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中YAP核质定位的影响
1
作者 戴义芹 张婧 徐建江 《中华实验眼科杂志》 北大核心 2025年第4期308-314,共7页
目的探讨不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中Yes相关蛋白(YAP)核质定位的影响。方法将永生化人角膜上皮细胞分为对照组和高渗组,常规培养1 d后高渗组细胞采用450 mOsM渗透压的氯化钠溶液处理1 h,对照组不做特殊处理。采用4种不同的... 目的探讨不同固定剂对高渗状态下角膜上皮细胞中Yes相关蛋白(YAP)核质定位的影响。方法将永生化人角膜上皮细胞分为对照组和高渗组,常规培养1 d后高渗组细胞采用450 mOsM渗透压的氯化钠溶液处理1 h,对照组不做特殊处理。采用4种不同的固定剂(4%多聚甲醛、-20℃预冷无水乙醇、-20℃预冷甲醇丙酮1∶1混合液、Zamboni固定液)固定细胞20 min,行免疫荧光染色,观察对照组与高渗组细胞YAP在细胞内的定位变化情况。结果4%多聚甲醛固定后,角膜上皮细胞形态较好,对照组与高渗组细胞中YAP主要集中在细胞核内,对照组与高渗组细胞核内YAP平均荧光强度比较,差异无统计学意义(t=1.803,P=0.121);无水乙醇固定后角膜上皮细胞呈现一定程度的皱缩变形,YAP荧光染色弥散,2个组细胞中YAP阳性信号主要定位在细胞质中。与对照组相比,高渗组角膜上皮细胞核中YAP平均荧光强度有所降低,差异无统计学意义(t=0.803,P=0.453)。甲醇丙酮1∶1混合液固定后角膜上皮细胞形态不佳,YAP主要定位在细胞质中,高渗组细胞核内YAP荧光强度较对照组有所降低,差异无统计学意义(t=1.067,P=0.327)。Zamboni固定液固定后细胞结构完整,轮廓清晰,能明显观察到不同状态下角膜上皮细胞中YAP核质转位现象。高渗组YAP平均荧光强度为197.5±34.5,明显高于对照组的62.2±10.0,差异有统计学意义(t=7.530,P<0.001)。结论在免疫荧光染色实验中,角膜上皮细胞中YAP的核质定位会受到不同固定剂处理的影响,应用Zamboni固定液比4%多聚甲醛、无水乙醇、甲醇丙酮1∶1混合液能更好地观察到高渗刺激后YAP的核移位现象。 展开更多
关键词 干眼 泪液渗透压 角膜上皮细胞 免疫荧光技术 固定剂 Yes相关蛋白核质定位
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剪切力对骨髓间充质干细胞向角膜上皮细胞方向分化的影响
2
作者 赵江涛 李冬妍 +4 位作者 李伶 汲婧 黄艳 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期432-432,共1页
目的干细胞在角膜修复中起到了重要作用,在体外生化因素或共培养等可以诱导干细胞向角膜上皮细胞方向分化,力学因素可以影响干细胞的生物学功能,本文主要研究流体剪切力对兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone marrow-derived mesenchymal st... 目的干细胞在角膜修复中起到了重要作用,在体外生化因素或共培养等可以诱导干细胞向角膜上皮细胞方向分化,力学因素可以影响干细胞的生物学功能,本文主要研究流体剪切力对兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone marrow-derived mesenchymal stem cells,RBMSCs)向角膜上皮细胞方向分化的影响。方法使用含有表皮生长因子、胰岛素、兔角膜上皮细胞培养上清液的条件培养基诱导RBMSCs向角膜上皮细胞方向分化;利用平行平板流动腔对诱导或者不诱导的RBMSCs加载5、10、15 dyn/cm^(2)流体剪切力;通过倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察剪切力对细胞形态和骨架的影响,通过RTPCR和免疫组化等检测剪切后细胞表达角膜上皮相关基因和蛋白的情况。结果剪切后的细胞表现出更加突出和伸长的肌动蛋白丝,且平行于剪切力方向排列。剪切力可以上调CK3、CK12和PAX6等角膜上皮细胞标志物的基因和蛋白表达,尤其是5 dyn/cm^(2)剪切力的作用更为显著。结论适当的剪切应力可以促进RBMSCs向角膜上皮细胞方向分化,但其机制还有待进一步的深入探究,以期为干细胞应用于角膜上皮损伤修复的治疗提供参考。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 流体剪切力 骨髓间充质干细胞 表皮生长因子 激光共聚焦显微镜 条件培养基 力学因素 免疫组化
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不同拉伸模式对人角膜上皮细胞形态及增殖、迁移的影响
3
作者 谢懿 李冬妍 +4 位作者 杜若田 肖辉 汲婧 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期434-434,共1页
目的生理状态下,角膜受到眼压及其产生的拉伸力作用。当疾病或外力引起角膜所受拉伸力改变,可能影响角膜上皮细胞间连接,破坏上皮结构完整性及其屏障功能。已有研究表明,角膜细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,但具体机制尚不清楚。因此... 目的生理状态下,角膜受到眼压及其产生的拉伸力作用。当疾病或外力引起角膜所受拉伸力改变,可能影响角膜上皮细胞间连接,破坏上皮结构完整性及其屏障功能。已有研究表明,角膜细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,但具体机制尚不清楚。因此,本工作拟通过研究不同拉伸模式对角膜上皮细胞相关功能的影响及其机制,为构建体外角膜近生理力学加载模型和探究角膜上皮细胞在力学刺激下的响应机制提供依据。方法以0.1 Hz频率、5%幅度对人角膜上皮细胞分别加载单轴拉伸、等轴拉伸12 h。通过光学显微镜观察细胞形态,利用CCK-8、划痕实验检测细胞增殖与迁移能力,采用免疫荧光染色对细胞骨架、力学相关通路蛋白YAP的表达进行检测。结果与等轴拉伸相比,单轴拉伸作用下人角膜上皮细胞面积更大,骨架荧光强度更高,应力纤维数量增多,细胞的增殖与迁移速度显著降低,YAP荧光强度和核质比显著增高。结论人角膜上皮细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,与等轴拉伸相比,单轴拉伸增大了细胞面积、促进应力纤维形成,抑制细胞增殖与迁移;YAP可能参与其中的调控。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 角膜细胞 力学刺激 应力纤维 拉伸力 单轴拉伸 核质比 屏障功能
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渗透压对角膜上皮细胞迁移、增殖及相关分子表达的影响
4
作者 李冬妍 杜若田 +3 位作者 谢懿 汲婧 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期429-429,共1页
目的角膜表面的泪液渗透压构成眼表重要力学微环境,其异常改变会对角膜上皮的损伤修复产生重要影响。本工作拟通过研究渗透压对角膜上皮细胞迁移和增殖的影响,及损伤修复过程中起关键作用的黏附分子表达以及力敏感转录因子YAP相关通路... 目的角膜表面的泪液渗透压构成眼表重要力学微环境,其异常改变会对角膜上皮的损伤修复产生重要影响。本工作拟通过研究渗透压对角膜上皮细胞迁移和增殖的影响,及损伤修复过程中起关键作用的黏附分子表达以及力敏感转录因子YAP相关通路的变化,探究渗透压影响角膜上皮损伤修复的机制。方法通过添加不同浓度葡萄糖溶液建立人角膜上皮细胞系的高渗、等渗、低渗培养体系。使用划痕法观察24 h内细胞迁移能力,CCK-8法检测48h内细胞增殖功能,通过免疫荧光染色观察1 h时细胞皮质骨架变化、钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布变化。结果与等渗组的角膜上皮细胞相比,高渗组细胞的划痕愈合速度显著减慢,增殖实验OD值显著降低,皮质骨架的荧光强度在细胞膜侧显著增强,分布更集中,钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布无明显差异;而低渗组细胞的划痕愈合速度显著加快,增殖实验OD值无明显差异,皮质骨架的荧光强度无明显变化,分布更分散,钙黏蛋白的荧光强度显著升高,呈现点状分布,YAP的荧光强度显著升高,核质比显著增大。结论渗透压会影响角膜上皮细胞的迁移和增殖、改变细胞骨架排列以及钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布,可能是其影响角膜上皮损伤修复的机制之一。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 钙黏蛋白 渗透压 核质比 细胞骨架 免疫荧光染色 荧光强度 损伤修复
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正常人眼角膜上皮细胞的原子力显微镜观察 被引量：10
5
作者 蔡小芳 杨筱曦 +1 位作者 蔡继业 邓华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期881-885,共5页
应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM... 应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM形貌图可知,细胞呈长梭形,膜表面布满颗粒状物质,由AFM附带软件IP2.1的线分析及面分析功能,得到细胞膜表面结构的几何参数,包括高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Meant Ht。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,可得出细胞膜的粘弹力、硬度和杨氏模量。AFM能对人眼角膜上皮细胞表面的超微结构清晰地成像并提供更多更确切的表面信息,从另一层面增加对眼角膜上皮细胞的认识。 展开更多
关键词 原子力显微镜 人眼角膜上皮细胞 形貌 粘弹力 硬度 杨氏模量
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去势雄性小鼠泪膜功能异常及角膜上皮细胞超微结构改变 被引量：7
6
作者 黎黎 王双梅 +1 位作者 郑璇 康前雁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期103-107,共5页
背景体内雄性激素水平的下降对睑板腺与泪腺上皮细胞的分泌功能产生不利影响，导致泪膜质与量的异常，但与泪膜稳定性密切相关的黏蛋白层是否受雄激素水平下降的影响尚不清楚。目的探讨去势手术对雄性小鼠泪膜功能及角膜上皮细胞超微结... 背景体内雄性激素水平的下降对睑板腺与泪腺上皮细胞的分泌功能产生不利影响，导致泪膜质与量的异常，但与泪膜稳定性密切相关的黏蛋白层是否受雄激素水平下降的影响尚不清楚。目的探讨去势手术对雄性小鼠泪膜功能及角膜上皮细胞超微结构的影响。方法采用随机数字表法将56只SPF成年BALB／c雄性小鼠分为正常对照组、伪手术组、和去势术后1、2、4、6、8周组，各手术组小鼠均实施双侧睾丸摘除术，伪手术组小鼠仅切开局部组织而不摘出睾丸。分别于术前和术后1、2、4、6、8周采集各组小鼠外周血样本，采用竞争放射免疫法检测血清睾酮的质量浓度。各组小鼠干眼功能相关检查包括采用酚红棉线法检测泪液分泌功能，检测泪膜破裂时间（BUT）及角膜荧光素染色评分。根据分组于相应时间点颈椎脱臼法处死各组小鼠后收集其角膜组织，透射电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构的变化。结果正常对照组、伪手术组血清睾酮质量浓度分别为（573．87±6．74）ng/μl和（579．74±8．24）ng/μl，组间差异无统计学意义（t=1．432，P=0．251），但各手术组小鼠血清睾酮质量浓度均为0ng/μl。正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量分别为（5．26±0．99）、（4．89±0．56）、（4．62±0．83）、（4．28±0．63）、（3．36±0．56）、（2．60±0．27）和（2．08±0．35）mm／5min，其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠BUT分别为（68．33±12．86）、（62．47±3．75）、（58．67±10．03）、（47．17±7．64）、（39．51±3．39）、（32．67±3．88）和（31．00±2．36）s，其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液BUT较正常对照组均明显缩短，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；小鼠角膜荧光素染色评分随术后时间的延长逐渐增加。透射电子显微镜下可见手术组小鼠角膜上皮细胞微绒毛数量减少、变短和肿胀，细胞间桥粒连接分离。结论去势小鼠血清雄激素水平骤降，小鼠泪液量分泌减少，泪膜稳定性下降，角膜上皮细胞结构损坏，与人类干眼的临床表现吻合。 展开更多
关键词 雄激素 角膜上皮细胞 干眼 泪膜 超微结构 睾丸切除术 动物模型 BALB/c小鼠
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各类滴眼剂对角膜上皮细胞的毒性—组织培养法研究 被引量：12
7
作者 张泺 邱良秀 沈远平 《眼科新进展》 CAS 1999年第3期158-161,共4页
目的观察各类滴眼剂对人角膜上皮细胞的毒性，以便提供临床上对药物的评估。方法应用组织培养的方法，观察３０种滴眼剂的毒性。结果氯霉素（ｐＨ６．７）、庆大霉素（ｐＨ５．１）、磺胺类、喹诺酮类、咪唑类药物、地卡因、氧氰化汞等... 目的观察各类滴眼剂对人角膜上皮细胞的毒性，以便提供临床上对药物的评估。方法应用组织培养的方法，观察３０种滴眼剂的毒性。结果氯霉素（ｐＨ６．７）、庆大霉素（ｐＨ５．１）、磺胺类、喹诺酮类、咪唑类药物、地卡因、氧氰化汞等毒性较大。皮质类固醇的晚期毒性明显。结论我们认为滴眼剂的毒性与主药、防腐剂和溶剂的毒性有关，特别是ｐＨ值。为此我们要注意配方的科学性，妥善的存放和合理的用药。 展开更多
关键词 滴眼剂 毒性 角膜上皮细胞
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HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调 被引量：4
8
作者 张晓玲 陈剑 +2 位作者 姚敏 刘小勇 周清 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期880-884,共5页
目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-... 目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。 展开更多
关键词 缺氧 小发夹RNA 自发永生化人角膜上皮细胞 缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子 色素上皮生长因子
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表皮生长因子对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用 被引量：4
9
作者 杨瑞彪 王德文 +5 位作者 高亚兵 张建 张振声 刘玉福 彭瑞云 邵立功 《眼科研究》 CSCD 1998年第2期87-89,共3页
目的探讨不同浓度的表皮生长因子（ＥＧＦ）对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞，通过ＭＴＴ方法，检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的ＥＧＦ浓度（１～２５０ｎｇ／ｍｌ）分为８组；而... 目的探讨不同浓度的表皮生长因子（ＥＧＦ）对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞，通过ＭＴＴ方法，检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的ＥＧＦ浓度（１～２５０ｎｇ／ｍｌ）分为８组；而培养角膜上皮细胞的ＥＧＦ浓度（４～１０００ｎｇ／ｍｌ）分为１０组。结果ＥＧＦ浓度在３２ｎｇ／ｍｌ时，促晶状体上皮细胞的增生作用最强，与无血清组比较差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。促角膜上皮细胞增生的最佳浓度为１６ｎｇ／ｍｌ，与无血清组比较差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论上述结果为今后在细胞和分子水平上研究白内障和角膜伤口愈合的发生规律及其机制提供实验资料。 展开更多
关键词 晶状体上皮细胞 角膜上皮细胞 表皮生长因子 细胞增生 白内障 角膜伤口愈合
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层粘连蛋白对体外角膜上皮细胞凋亡的保护 被引量：13
10
作者 吴静 徐锦堂 《眼科研究》 CAS CSCD 2000年第2期112-113,共2页
目的　观察层粘连蛋白 (LN)对离体角膜上皮细胞存亡的影响 ,以寻找预防角膜上皮细胞凋亡的途径。方法　应用流式细胞仪 (FACStarplus)检测凋亡细胞的亚 2倍体DNA的方法 ,对基础培养的、与LN共育的以及阻断LN受体后的兔角膜上皮细胞的凋... 目的　观察层粘连蛋白 (LN)对离体角膜上皮细胞存亡的影响 ,以寻找预防角膜上皮细胞凋亡的途径。方法　应用流式细胞仪 (FACStarplus)检测凋亡细胞的亚 2倍体DNA的方法 ,对基础培养的、与LN共育的以及阻断LN受体后的兔角膜上皮细胞的凋亡情况进行了对比观察及分析。结果　基础培养的第 6代角膜上皮细胞出现明显的细胞凋亡 ;与LN共育的角膜上皮细胞凋亡不明显 ;阻断LN受体后 ,角膜上皮细胞出现显著的凋亡现象。结论　LN对离体培养的角膜上皮细胞的凋亡有保护作用。 展开更多
关键词 层粘连蛋白 角膜上皮细胞 细胞凋亡
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细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达的影响 被引量：5
11
作者 秦勤 晋秀明 瞿佳 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第7期637-643,共7页
目的通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角... 目的通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用。方法通过RT-PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLRmRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg.L-1、10μg.L-1、100μg.L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10μg.L-1LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg.L-1、10×103μg.L-1、100×103μg.L-1)进行干预,并检测TLRmRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达。结果 TLR1-TLR10mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6高表达。LPS能增加细胞TLRmRNA的表达,且当LPS为10μg.L-1时,TLRmRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加。加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLRmRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加。免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致。结论 LPS能改变角膜上皮细胞TLRmRNA的表达,提示上皮细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCEC中TLR的表达,即轻度促进LPS刺激的HCEC中TLR的表达,在细菌侵袭角膜的早期,糖皮质激素可能具有一定的免疫促进作用。 展开更多
关键词 TOLL样受体 角膜上皮细胞 细菌脂多糖 糖皮质激素 细胞因子
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改良兔角膜上皮细胞原代培养及纯化的方法 被引量：3
12
作者 石妍 杨帆 +1 位作者 葛红岩 刘平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第7期612-615,共4页
目的改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率。方法采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方... 目的改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率。方法采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方法对细胞进行鉴定。结果兔全角膜24h贴壁,48h后即可见有细胞自角膜缘爬出,5d后细胞大量爬出可见成纤维细胞和角膜上皮细胞共存,界限明显;角膜上皮细胞复层生长。在界限融合前刮除成纤维细胞,角膜上皮细胞继续旺盛生长,10d后达到融合。兔角膜上皮细胞传至第4代后细胞体积明显变大,传至第5代,细胞衰老、凋亡。兔角膜上皮细胞免疫组织化学显示PCK单克隆抗体阳性。结论改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法简单、经济、有效,并可获得具有良好生物学特性的角膜上皮细胞,为角膜及角膜疾病的研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 全角膜 原代细胞培养 纯化 兔
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Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及意义 被引量：2
13
作者 陈梨萍 李科 +3 位作者 郑振优 宋绪华 李雷 赵楠楠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期1731-1734,共4页
目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人W... 目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人Wnt1蛋白,一组不加入重组人Wnt1蛋白作为对照,于不同时间点(6、24、48和72 h)各取一个T25培养瓶的细胞,计算各组角膜上皮细胞总数并采用Western blot方法检测角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:对照组Cyclin D1蛋白的表达在0~48 h内随着时间的延长呈现逐步降低的趋势,在48 h达到最低状态,在72 h有所提高。加入Wnt1后6 h,25 ng/m L组未检测到Cyclin D1蛋白表达,50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达有所提高。在24,48和72 h时间点,25 ng/m L组和50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达均提高,48 h达到最高峰,72 h有所回落。添加Wnt1后与对照组比较,25 ng/m L组及50 ng/m L组角膜上皮细胞生长速度均加快,但在6、24及48 h时间点差异无显著性,在72 h差异有显著性。结论:Wnt1蛋白的刺激可在一定时间范围内增强人角膜上皮细胞Cy-clin D1的表达,且与Wnt1蛋白量呈正相关。Cyclin D1的表达强弱,在角膜上皮损伤修复及其细胞增殖分化过程中可能起重要作用。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 人角膜上皮细胞 角膜 Wntl
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不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响 被引量：3
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作者 刘晶 白浪 +3 位作者 苏亚茹 于健 孟婷 陈敏婷 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第8期705-708,共4页
目的研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响。方法原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L^(-1)组、30 mg·L^(-1)组、80... 目的研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响。方法原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L^(-1)组、30 mg·L^(-1)组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L^(-1)),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量。结果与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,10 mg·L^(-1)组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg·L^(-1)组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg·L^(-1)组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12 h组(2.94±0.46、2.23±0.50)TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关。 展开更多
关键词 肽聚糖 TOLL样受体家族 角膜上皮细胞 感染性角膜炎
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角膜上皮细胞基底膜的研究进展 被引量：7
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作者 竺向佳 戴锦晖 褚仁远 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第6期469-472,共4页
角膜上皮细胞基底膜是一层很薄的组织,它的结构与其他部位的基底膜既有相似之处,也有独特的地方,在角膜创伤修复中有着重要的作用。基底膜组织的破坏会导致一系列棘手的角膜病变,而近来对角膜上皮细胞基底膜的研究使我们在这些病变的治... 角膜上皮细胞基底膜是一层很薄的组织,它的结构与其他部位的基底膜既有相似之处,也有独特的地方,在角膜创伤修复中有着重要的作用。基底膜组织的破坏会导致一系列棘手的角膜病变,而近来对角膜上皮细胞基底膜的研究使我们在这些病变的治疗方面有了新的入手点。就近年来角膜上皮细胞基底膜的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞基底膜 基质金属蛋白酶 角膜上皮下雾状混浊
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血管内皮生长因子在羊膜为载体培养的角膜上皮细胞中的表达 被引量：2
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作者 李瑾 傅瑶 +2 位作者 贾仁兵 邵春益 范先群 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1305-1308,共4页
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在羊膜为载体培养的角膜上皮细胞中的表达情况。方法体外羊膜为载体培养大鼠角膜上皮细胞(羊膜载体组),以无载体培养的角膜上皮细胞为对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组细胞VEGF mRNA表达,酶... 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在羊膜为载体培养的角膜上皮细胞中的表达情况。方法体外羊膜为载体培养大鼠角膜上皮细胞(羊膜载体组),以无载体培养的角膜上皮细胞为对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组细胞VEGF mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组细胞VEGF蛋白表达。结果羊膜载体组角膜上皮细胞VEGF mRNA含量为0.66±0.08,蛋白表达量为1 605.22±196.08;对照组角膜上皮细胞VEGF mRNA含量为0.83±0.10,蛋白表达量为1 614.39±142.43;两组细胞VEGF表达水平无显著差异。结论羊膜载体不能有效抑制角膜上皮细胞VEGF的表达。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 角膜上皮细胞 羊膜
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羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞增殖的影响 被引量：11
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作者 廖琼 刘翔 《眼科新进展》 CAS 2004年第4期264-265,共2页
目的　为角膜上皮损伤修复寻找新的有效方法。方法　运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆上清液在不同浓度及不同时相点 ,对兔角膜上皮细胞增殖的影响。运用活细胞计数方法检测兔角膜上皮细胞在不同羊膜匀浆上清液及不同时相点时的细胞活力。... 目的　为角膜上皮损伤修复寻找新的有效方法。方法　运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆上清液在不同浓度及不同时相点 ,对兔角膜上皮细胞增殖的影响。运用活细胞计数方法检测兔角膜上皮细胞在不同羊膜匀浆上清液及不同时相点时的细胞活力。结果　羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞生长有促进作用 ,并呈剂量依赖性。结论　羊膜匀浆上清液可能能够应用于临床 ,促角膜上皮细胞修复。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 羊膜匀浆 细胞培养 兔
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非甾体抗炎药与皮质类固醇抑制角膜上皮细胞增殖的实验研究 被引量：4
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作者 杜之渝 吴宁玲 王娟 《眼科新进展》 CAS 2004年第3期188-190,共3页
目的　探讨非甾体抗炎药对角膜上皮细胞体外增殖的抑制作用。方法　选用原代及传代兔角膜上皮细胞 ,实验组中加入含不同浓度双氯芬酸钠、安贺拉 (酮咯酸氨丁三醇 )、地塞米松及洁霉素的培养液 ,对照组加入等量空白培养液 ,采用四甲基偶... 目的　探讨非甾体抗炎药对角膜上皮细胞体外增殖的抑制作用。方法　选用原代及传代兔角膜上皮细胞 ,实验组中加入含不同浓度双氯芬酸钠、安贺拉 (酮咯酸氨丁三醇 )、地塞米松及洁霉素的培养液 ,对照组加入等量空白培养液 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制 ,计算出抑制率并进行比较。结果　双氯芬酸钠、安贺拉 (酮咯酸氨丁三醇 )、地塞米松及洁霉素对角膜上皮细胞增殖均有抑制作用。双氯芬酸钠与安贺拉 3个对应浓度的比较中 ,2 4h时双氯芬酸钠抑制率分别为 6 1 4 %、4 2 1%及 0 ,安贺拉组均为 0 ;4 8h时双氯芬酸钠抑制率分别为 81.0 %、70 .2 %、4 7.6 % ,安贺拉抑制率分别为 38.1%、31.0 %和 0 ;72h时双氯芬酸钠抑制率分别为 95 .0 %、95 .0 %、5 4 .0 % ,安贺拉抑制率分别为 5 9.1%、4 7.2 %和 33.2 % .在双氯芬酸钠与地塞米松及洁霉素的原液浓度比较中 ,2 4、4 8、72h时双氯芬酸钠抑制率分别为 93.0 %、94 .0 %、96 .0 % ,洁霉素为 2 4 .6 %、5 1.2 %、79.1% ,地塞米松为 4 5 .6 %、6 9.0 %、80 .0 % .在双氯芬酸钠与地塞米松及洁霉素的二分之一原液浓度比较中 ,2 4、4 8、72h时双氯芬酸钠抑制率分别为 6 8 4 %、91 7%、95 0 % ,洁霉素为12 3%、2 6 2 %、4 9 0 % ,地塞米松? 展开更多
关键词 非甾体抗炎药 角膜上皮细胞 抑制
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人间充质干细胞横向诱导分化为角膜上皮细胞及角膜缘干细胞的体外研究 被引量：8
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作者 易敬林 杨海军 《眼科新进展》 CAS 2008年第7期505-510,共6页
目的探讨人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外向角膜上皮细胞及角膜缘干细胞横向分化的可能性。方法从成人骨髓中分离培养出具有MSCs特性的细胞，经过5次传代培养纯化后使用以下5种培养基对MSCs进行诱导分化：1组... 目的探讨人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外向角膜上皮细胞及角膜缘干细胞横向分化的可能性。方法从成人骨髓中分离培养出具有MSCs特性的细胞，经过5次传代培养纯化后使用以下5种培养基对MSCs进行诱导分化：1组：DMEM／F12、体积分数10％FBS；2组：DMEM／F12、体积分数10％FBS、5μg·L^-1表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）；3组：DMEM／F12、体积分数10％FBS、10μg·L^-1EGF；4组：DMEM／F12、体积分数10％FBS、15μg·L^-1EGF；5组：DMEM／F12、体积分数10％FBS、体积分数50％条件培养基、10μg·L^-1EGF。其中第1组为对照组，使用的培养基为培养MSCs的培养基。各组细胞培养30d后，取出细胞爬片进行AE1、AK5和P63的免疫组化染色。结果从成人骨髓中分离培养出的细胞绝大部分具有MSCs的特性。各诱导分化组的细胞经过AE1染色后计算的细胞诱导转化率分别为：0、（5．28±0．90）％、（15．65±1．65）％、（27．35±2．36）％、（15．53±1．61）％，第2、3、4组着色细胞的数量和着色深度递增，第5诱导分化组的染色情况和第3组相近．对照组染色为阴性。各组AE5染色均为均匀淡染。各组P63染色均为阴性。结论5～15μg·L^-1EGF能诱导MSCs横向分化为角膜上皮细胞，而且在此浓度范围内EGF的诱导作用随浓度升高逐渐增强。用成人角膜缘干细胞的培养液制成的体积分数50％条件培养基对诱导MSCs横向分化为角膜上皮细胞无明显促进作用，本实验方法不能将MSCs诱导分化为角膜缘干细胞。 展开更多
关键词 间充质干细胞 角膜上皮细胞 角膜缘干细胞 诱导分化
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高渗透压对人角膜上皮细胞MMP-9的上调作用 被引量：2
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作者 宋秀君 张晓融 +2 位作者 卞小芸 吕伟 阎志鹏 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第6期611-613,共3页
目的评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性.方法在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞,然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol/L的NaCl,使培养液渗透压达到400～500 mOsm,运用酶图法和EL... 目的评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性.方法在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞,然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol/L的NaCl,使培养液渗透压达到400～500 mOsm,运用酶图法和ELISA法测定加入高渗剂24 h后的培养液中MMP-9的质量浓度.结果不同渗透压组MMP-9的质量浓度有显著差异,培养液渗透压越高,MMP-9的质量浓度也就越高.结论高渗透压反应性刺激人角膜上皮细胞MMP-9的表达和产物.证实了眼表高渗透压是干眼症导致眼表面炎症的发病机制. 展开更多
关键词 高渗透压 基质金属蛋白酶-9 人角膜上皮细胞
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