视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述

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作者 谢小雷 江佩欣 +3 位作者 张敬鸿 莫骏健 吴可凡 曾康逸 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期114-119,共6页

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1... 视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1 PRDM2基因 代谢 肥胖 肿瘤 信号通路

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MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征及关键蛋白

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作者 盖鑫冉 徐佳爱 +3 位作者 车虹昱 王祥 杨春华 齐东来 《眼科新进展》 北大核心 2025年第3期190-195,共6页

目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WER... 目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WERI-Rb-1细胞系从中国科学院上海细胞库获得,作为成熟RB对照组(WERI-Rb-1组);未经处理的人正常视网膜组织作为对照组。将细胞按照每孔1×10~4个细胞接种于24孔板,在显微镜下观察细胞形态并采集图像;在接种后第4、8、12天进行细胞计数。使用免疫荧光染色检测各组细胞增殖标记物Ki67和视锥细胞标记物L/M opsin的表达;采用qRT-PCR检测各组细胞中MYCN、CCNB1、CDK1、SYK和RXRγ的表达情况;通过蛋白质组学分析各组细胞间蛋白表达谱差异并筛选关键调控基因;采用慢病毒敲低OTX2表达后检测各组细胞的生长增殖能力。结果 生长曲线显示,在体外培养第12天,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞数量分别为(59.17±4.01)×10~4个、(85.14±4.54)×10~4个、(100.73±1.99)×10~4个(均为P<0.05)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组Ki67和L/M opsin阳性细胞率均增加(均为P<0.001)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的MYCN mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.001),CCNB1和CDK1 mRNA相对表达量亦均升高(均为P<0.01)。与对照组相比,T-MYCN Y1组细胞的SYK mRNA相对表达量无明显变化(P>0.05),RXRγ mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的SYK、RXRγ mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.05)。GO富集分析显示这些差异蛋白富集到蛋白质复合体组装和线粒体等通路;KEGG富集分析显示这些差异蛋白富集到碳代谢、代谢途径和脂肪酸降解等通路。蛋白质组学和Western blot分析结果均显示,OTX2在WERI-Rb-1组细胞中表达水平最高,其次为T-MYCN Y2组细胞,T-MYCN Y1组细胞最低。qRT-PCR结果显示,在T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞中,与空载对照组相比,OTX2敲低组的OTX2 mRNA相对表达量均下降(均为P<0.05);细胞生长曲线显示,在三组细胞中敲低OTX2后,细胞的生长增殖能力均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论 MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中,细胞逐渐呈现出与WERI-Rb-1细胞类似的视网膜母细胞瘤特征;OTX2在MYCN扩增或高表达RB的生长增殖中发挥重要作用,靶向OTX2可能成为治疗RB新的研究方向。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 MYCN WERI-Rb-1 蛋白质组学 OTX2

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细胞周期素D1、视网膜母细胞瘤样蛋白2及微小染色体维持蛋白7在肝细胞癌中的表达及对预后的意义 被引量：14

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作者 刘娟 殷飞 姚树坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期304-309,共6页

目的:研究细胞周期素D1(cyclin D1)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(RBL2/p130)及微小染色体维持蛋白7(MCM7)在肝细胞癌(以下简称肝癌)中的表达及对预后诊断的意义。方法:用免疫组织化学法检测44例肝癌组织、26例癌旁硬化肝组织及18例正常肝组... 目的:研究细胞周期素D1(cyclin D1)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(RBL2/p130)及微小染色体维持蛋白7(MCM7)在肝细胞癌(以下简称肝癌)中的表达及对预后诊断的意义。方法:用免疫组织化学法检测44例肝癌组织、26例癌旁硬化肝组织及18例正常肝组织中cyclin D1、RBL2/p130及MCM7的表达情况,并分析其与肝癌患者临床参数间的关系。结果:肝癌组织中cyclin D1和MCM7的阳性表达率分别是68.2%和72.7%,显著高于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01);RBL2/p130的阳性表达率为34.1%,显著低于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01),MCM7与cyclin D1的表达呈正相关(r=0.349,P<0.05),与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.421,P<0.01);cyclin D1与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.435,P<0.01)。Cyclin D1及MCM7的表达与肿瘤包膜的完整性、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关,RBL2/p130的表达与有无门脉癌栓、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关(P<0.05)。MCM7还与肿瘤大小及甲胎蛋白(AFP)值的大小有关。多因素分析显示肿瘤大小、MCM7及cyclin D1与肝癌预后相关(P<0.05)。MCM7及cyclin D1阳性表达的患者、RBL2/p130阴性表达的患者预后差(P<0.05)。结论:Cyclin D1、RBL2/p130和MCM7的异常表达在肝癌形成过程中发挥了重要作用。监测其在肝癌中的表达情况将有助于判断肝癌患者的预后。 展开更多

关键词 细胞周期蛋白D1 视网膜母细胞瘤样蛋白质 微小染色体维持蛋白质 肝肿瘤

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DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖 被引量：1

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作者 高亚莉 罗小玲 +3 位作者 孟婷 朱敏娟 田渼雯 陆晓和 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1239-1245,共7页

目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT... 目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05)。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05)。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05)。结论在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 DNMT1蛋白 MEG3基因 DNA甲基化

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Cdt1和Mcm6在视网膜母细胞瘤中的表达和意义 被引量：2

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作者 吴星 宋志刚 +1 位作者 尹东芳 李朝辉 《海南医学院学报》 CAS 2015年第6期862-864,共3页

目的:探讨Cdc10依赖性转录因子1(Cdt1)和微小染色体维持蛋白6(Mcm6)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法:应用免疫组织化学方法对26例Rb常规石蜡标本中Cdt1和Mcm6的表达进行检测,分析二者与肿瘤分化... 目的:探讨Cdc10依赖性转录因子1(Cdt1)和微小染色体维持蛋白6(Mcm6)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法:应用免疫组织化学方法对26例Rb常规石蜡标本中Cdt1和Mcm6的表达进行检测,分析二者与肿瘤分化程度及视神经浸润的关系。结果:Cdt1和Mcm6在所有Rb中呈阳性表达,在瘤旁正常视网膜中不表达;二者在未分化组中的表达高于分化组,差异有统计学意义(P<0.01);在视神经浸润组中Cdt1的表达低于未浸润组差异有统计学意义(P<0.05);Mcm6的表达与视神经浸润不相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Cdt1和Mcm6与Rb的分化程度有关,Cdt1与视神经浸润有关。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 Cdc10依赖性转录因子1 微小染色体维持蛋白6

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Cyclin D1、p16及Rb在视网膜母细胞瘤中的表达及其相关性 被引量：1

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作者 胡军 赖巧红 项楠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期747-750,共4页

目的探讨Cyclin D1、p16、Rb在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测Cyclin D1、p16及Rb在46例常规石蜡包埋的视网膜母细胞瘤标本中的表达,并在生物学行为及分化程度不同的视... 目的探讨Cyclin D1、p16、Rb在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测Cyclin D1、p16及Rb在46例常规石蜡包埋的视网膜母细胞瘤标本中的表达,并在生物学行为及分化程度不同的视网膜母细胞瘤之间进行比较。结果正常视网膜组织与视网膜母细胞瘤组织中CyclinD1、p16及Rb蛋白表达差异有极显著性意义(P<0.01);视网膜母细胞瘤中,Rb与p16、Cyclin D1表达之间无明显相关性(P>0.05);p16表达率在生物学行为不同的视网膜母细胞瘤之间差异显著,30例视神经未浸润组视网膜母细胞瘤的p16阳性表达率明显高于16例视神经浸润组(P<0.05);Rb及p16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而下降,分化组与未分化组视网膜母细胞瘤中Rb及p16蛋白表达率差异有极显著性意义(P<0.01)。结论p16、Rb、Cyclin D1在视网膜母细胞瘤发生发展中起着重要作用。Cyclin D1的过表达与p16和Rb的表达缺失或失活是视网膜母细胞瘤发生的重要分子事件,p16蛋白失表达可能与其视神经浸润能力有关,Rb及p16蛋白失表达则与其分化程度相关。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 细胞周期蛋白D1 P16 RB

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Hsp70和Bag-1在视网膜母细胞瘤组织芯片中的表达

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作者 王国平 梁小琼 王丹玲 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第1期69-69,共1页

关键词 热休克蛋白70(Hsp70) 视网膜母细胞瘤 BAG-1 组织芯片 免疫组织化学法 凋亡相关因子 发病机制 表达情况 多功能 国内外

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慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响及机制研究 被引量：3

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作者 苏杰 马春梅 +3 位作者 邵宏超 杨馥宇 刘岩 葛嫣然 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期27-31,共5页

目的探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究。方法取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病... 目的探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究。方法取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系。按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组。用qRT-PCR检测miR-34a的表达,采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性。采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverin,MDC)试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率,利用透射电子显微镜观察自噬超微结构。结果 miR-34a转染结果显示,转染miR-34a组miR-34a的相对表达量(2. 04±0. 46)显著高于阴性对照组(1. 03±0. 21)(P <0. 05),共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量(0. 42±0. 08)显著低于转染HMGB1组(1. 08±0. 16),差异有统计学意义(P <0. 05)。Caspase3活性测试显示,转染miR-34a组Caspase3活性(10. 75±2. 87)明显高于阴性对照组(3. 48±0. 74),转染HMGB1组Caspase3活性(2. 46±0. 94)低于共转染miR-34a+HMGB1组(6. 21±1. 74),差异有统计学意义(P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,转染miR-34a组MDC阳性率(56. 94%)明显高于阴性对照组(2. 15%),共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率(43. 11%)明显高于转染HMGB1组(10. 32%)(P <0. 05)。透射电子显微镜观察自噬超微结构显示,阴性对照组无明显改变,共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构,转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构。结论 miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡,其机制可能为抑制HMGB1的表达。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 自噬 高迁移率族蛋白1 MIR-34A

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甲状腺肿瘤中细胞周期蛋白D1、pRb的表达 被引量：2

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作者 李春蕊 张木勋 +2 位作者 刘文励 金之欣 高凌 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期712-713,共2页

应用免疫组织化学染色法检测甲状腺肿瘤中细胞周期蛋白 (Cyclin D1)、视网膜母细胞瘤蛋白 (p Rb)的表达水平。结果发现在 115例组织切片中 ,甲状腺癌组与非毒性甲状腺肿、桥本甲状腺炎、滤泡性腺瘤及正常甲状腺组织组的 Cyclin D1、p R... 应用免疫组织化学染色法检测甲状腺肿瘤中细胞周期蛋白 (Cyclin D1)、视网膜母细胞瘤蛋白 (p Rb)的表达水平。结果发现在 115例组织切片中 ,甲状腺癌组与非毒性甲状腺肿、桥本甲状腺炎、滤泡性腺瘤及正常甲状腺组织组的 Cyclin D1、p Rb表达率比较具有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;乳头状癌组 Cyclin D1的表达率与滤泡性癌组比较具有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,p Rb的表达无差异性 ;甲状腺癌不同的分期比较 , 期中 Cyclin D1的表达水平与 、 、 期比较具有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,p Rb的表达无差异性。提示 :Cyclin D1、p Rb表达水平的检测可作为判断甲状腺肿瘤良恶性有价值的参考指标 ;同时 Cyclin 展开更多

关键词 表达 PRB 细胞周期蛋白D1 视网膜母细胞瘤蛋白 甲状腺肿瘤 免疫组织化学

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ZDHHC12在胶质母细胞瘤中通过YAP1调控肿瘤特性

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作者 张起翔 尤永平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期527-534,共8页

背景和目的:胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是目前常见的恶性脑部肿瘤之一,但GBM相关发病机制仍不完全清楚。本研究旨在分析锌指DHHC结构域蛋白(zinc finger DHHC domain-containing protein,ZDHHC)12对Yes相关蛋白1(Yes-associated pr... 背景和目的:胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是目前常见的恶性脑部肿瘤之一,但GBM相关发病机制仍不完全清楚。本研究旨在分析锌指DHHC结构域蛋白(zinc finger DHHC domain-containing protein,ZDHHC)12对Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)的调控,以及ZDHHC12/YAP1轴对GBM肿瘤特性的调控。方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库以及基因型-组织表达(Genotype-Tissue Expression,GTEx)数据库中分析ZDHHC12分别在正常脑组织及GBM中的表达情况,运用蛋白质印迹法(Western blot)以及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测,分析在U87、U251以及人正常星形胶质细胞(NHA)的mRNA表达及蛋白水平。在U87和U251两种GBM细胞系中通过设计的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低ZDHHC12,并验证YAP1蛋白水平的变化。通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)验证内源性及外源性ZDHHC12及YAP1的相互关系。通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、细胞平板克隆形成实验、划痕实验分析GBM细胞敲低ZDHHC12后在增殖及迁移能力上发生的改变。检测在敲低ZDHHC12后GBM细胞系中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物变化。分析ZDHHC12对GBM患者预后的影响。并检测在不同组织样本中ZDHHC12和YAP1蛋白水平。结果:TCGA数据库及GTEx数据库分析结果显示,ZDHHC12在GBM中的表达量明显高于正常脑组织(P<0.01),GBM细胞系中ZDHHC12的mRNA表达及蛋白水平高于NHA细胞系。U87和U251两组GBM细胞系中ZDHHC12的敲低会引起YAP1蛋白水平的降低。Co-IP实验验证了ZDHHC12及YAP1蛋白的相互关系。敲低ZDHHC12的表达能够显著抑制GBM细胞的增殖和迁移能力,差异有统计学意义(P<0.05)。ZDHHC12的敲低也可以引起EMT相关标志物的改变。YAP1的回复可以逆转敲低ZDHHC12所引起的GBM肿瘤特性变化。TCGA数据库中,ZDHHC12的表达也与GBM患者的预后密切相关。在组织中ZDHHC12的表达也与YAP1表达呈高度正相关。结论:ZDHHC12在GBM中高表达且与YAP1呈正相关,ZDHHC12/YAP1轴可以调控GBM相关肿瘤特性。 展开更多

关键词 胶质母细胞瘤 锌指DHHC结构域蛋白12 Yes相关蛋白1 上皮-间质转化

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人脑胶质瘤细胞株中RIZ1基因启动子甲基化状态的研究 被引量：1

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作者 张晨冉 吴小军 +5 位作者 胡刘华 贺华 蒋磊 胡国汉 丁学华 卢亦成 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期288-292,共5页

目的:检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中成视网膜细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(retinoblastoma protein-interacting zinc finger gene1,RIZ1)基因启动子区的甲基化状态,进一步认识RIZ1在胶质瘤发病机制中的作用。方法:应用甲基化特异性... 目的:检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中成视网膜细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(retinoblastoma protein-interacting zinc finger gene1,RIZ1)基因启动子区的甲基化状态,进一步认识RIZ1在胶质瘤发病机制中的作用。方法:应用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株U87、U251、A172和T98中RIZ1基因启动子区的甲基化水平,其中U87细胞发生甲基化,被选为后续实验对象。RT-PCR检测U87细胞经5-Aza-CdR处理前后RIZ1 mRNA表达量的变化,MTT检测5-Aza-CdR对U87细胞生长增殖的影响。结果:4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中U87和U251细胞中检测到RIZ1基因启动子区域发生甲基化;U87细胞经5-Aza-CdR处理后其RIZ1 mRNA的表达量上调;MTT法检测显示5-Aza-CdR能抑制U87的生长增殖,且与5-Aza-CdR的浓度和作用时间呈负相关。结论:RIZ1基因启动子高甲基化是人脑成胶质细胞瘤细胞株中RIZ1基因表达下调的重要机制。 展开更多

关键词 胶质瘤 成视网膜细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1 甲基化

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ZEB1上调神经细胞黏附分子促进胶质瘤细胞侵袭与转移 被引量：3

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作者 邱惠思 吴华振 +5 位作者 王馨 汤锐明 潘辉林 宋慧胜 李志英 冯正富 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期559-564,共6页

胶质瘤是一种较为常见的颅内恶性肿瘤,其侵袭转移能力强,影响临床疗效。探讨胶质瘤发生侵袭转移的分子机制,寻找新的靶点干预胶质瘤侵袭转移是目前亟待解决的重大课题。我们前期研究中发现,神经细胞黏附分子(neuronal cell adhesion mol... 胶质瘤是一种较为常见的颅内恶性肿瘤,其侵袭转移能力强,影响临床疗效。探讨胶质瘤发生侵袭转移的分子机制,寻找新的靶点干预胶质瘤侵袭转移是目前亟待解决的重大课题。我们前期研究中发现,神经细胞黏附分子(neuronal cell adhesion molecule,NRCAM)在各种胶质瘤细胞中的表达量均显著高于其在人正常星形胶质细胞(NHA)中的表达量(NRCAM在胶质瘤A172和T98G中的表达量分别是其在NHA中的2. 15和17. 63倍);且根据人类蛋白质组学数据库信息及qRT-PCR结果证实,NRCAM在胶质瘤组织中的表达量也显著高于其在正常组织中的表达。Kaplan-Meier分析提示,高表达的NRCAM与胶质瘤患者较差的预后正相关。在此基础上,通过生物信息学预测的方法结合双荧光素酶报告基因实验证实,转录因子锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)能够增加NRCAM启动子活性,上调NRCAM mRNA和蛋白质水平的表达量。通过Transwell实验证实,在过表达ZEB1的胶质瘤细胞A172中,沉默NRCAM将抑制该细胞的侵袭能力。而在敲低ZEB1的胶质瘤细胞T98G中,过表达NRCAM将增加该细胞的侵袭能力。总之,NRCAM在胶质瘤中显著高表达且与患者较差的预后正相关。ZEB1转录上调NRCAM来增加胶质瘤细胞侵袭能力。 展开更多

关键词 神经细胞黏附分子 锌指E盒结合蛋白1 侵袭与转移 胶质瘤

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MiR-429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制 被引量：3

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作者 陈亮宇 刘丽波 +6 位作者 李新星 喻博 洪杨 郑健 于奇 薛一雪 刘云会 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期769-774,共6页

目的研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine LTX试剂将pre-mi R-429质粒以及anti-miR-429质粒(sh RNA质粒载体)稳定转染人U87胶质瘤细胞,real-time PCR验证转染... 目的研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine LTX试剂将pre-mi R-429质粒以及anti-miR-429质粒(sh RNA质粒载体)稳定转染人U87胶质瘤细胞,real-time PCR验证转染效率后,应用CCK-8检测增殖能力的变化;使用Transwell小室法检测人U87胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的变化;应用real-time PCR和Western blot检测E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)m RNA和蛋白表达含量变化;将ZEB1分别转染至U87胶质瘤细胞或miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用Transwell小室检测mi RNA-429和ZEB1分别过表达或二者双过表达对人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与对照组比较,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力;显著降低了ZEB1在人U87胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达水平;ZEB1过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力;并且ZEB1过表达有效阻断了mi R-429抑制U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论 mi R-429能够通过抑制ZEB1降低人U87胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 miR-429 E盒结合锌指蛋白1 人U87胶质瘤细胞 增殖 迁移 侵袭

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miR-34a-5p对颞叶癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及其机制

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作者 李佳芮 杨振林 +2 位作者 高帆 郭晶晶 李今子 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期939-947,共9页

目的:探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)对颞叶癫痫大鼠海马组织中神经元凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:52只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组,每组13只。采用PONEMAH 6.X实验动物遥测平台... 目的:探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)对颞叶癫痫大鼠海马组织中神经元凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:52只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组,每组13只。采用PONEMAH 6.X实验动物遥测平台记录各组大鼠脑电图,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平,HE染色观察各组大鼠海马组织形态表现,TUNEL法检测各组大鼠海马神经元凋亡率,免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(p-Rb)和E2F转录因子1(E2F1)蛋白表达水平。结果:对照组大鼠无异常表现;模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组大鼠出现不同程度流口水、颤抖、血泪、凝视和咀嚼震颤,随后点头眨眼,最后有前肢痉挛、直立及跌倒。与对照组比较,模型组大鼠癫痫发作总时间明显延长(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠癫痫发作总时间缩短(P<0.01);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠癫痫发作总时间延长(P<0.01)。RT-qPCR法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高(P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组细胞排列紊乱;与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组细胞排列整齐;与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组细胞形态不规整。TUNEL染色,与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马CA1区神经元凋亡率降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高(P<0.05)。免疫组织化学法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织CA1区中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:颞叶癫痫大鼠海马组织中miR-34a-5p表达上调,神经元凋亡率升高,抑制miR-34a-5p表达能减少海马神经元凋亡,其机制可能与miR-34a-5p调控海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达有关。 展开更多

关键词 微小RNA-34a-5p 癫痫 细胞凋亡 细胞周期蛋白依赖性激酶6 磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 E2F转录因子1

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RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究 被引量：1

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作者 陈蕾 于大海 +3 位作者 闭似嫦 卿海云 施强 孙莹 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第3期240-243,共4页

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生... 目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P<0.05);小鼠RB1CC1mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似,RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1) 口腔鳞状细胞癌 人 小鼠

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RB1-C磷酸化位点突变体与Sedlin的共定位研究 被引量：1

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作者 潘林鑫 徐涛 +1 位作者 范礼斌 钱成 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第6期839-844,共6页

目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PC... 目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PCR技术分别扩增出pcDNA3.1-FLAG-RB1-C-S788A、S795A、S807A、T811A、T821A、T826A共6个突变体,并对各位点进行测序。分别将以上突变体单独转染至HEK 293T、COS7细胞中,利用Western blot和免疫荧光(IF)技术观察其蛋白表达和细胞定位情况;分别将以上突变体及Sedlin共同转染至COS7细胞中,利用IF技术观察二者在细胞内的共定位情况,并与野生型RB1-C的结果进行比较分析。结果测序结果显示RB1-C的6个磷酸化位点均突变成功,并能够在真核细胞内正常表达,且与野生型RB1-C的细胞定位基本一致,即主要定位在细胞核内。与野生型RB1-C相比,RB1-C-S788A、S795A、T821A、T826A与Sedlin的共定位未发生改变,即主要共定位在细胞核内;但RB1-C-S807A、T811A与Sedlin的共定位发生了显著变化,除了共定位于细胞核外,在细胞质中也存在共定位现象。结论RB1-C磷酸化位点突变体成功构建并表达,其中S807A、T811A两个磷酸化位点的突变能够显著改变RB1-C与Sedlin在细胞中共定位区域,表明它们是RB1-C和Sedlin结合的关键位点之一,为进一步研究RB1-C和Sedlin的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤蛋白1 磷酸化 迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白 共定位

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miR-34a对人脂肪间充质干细胞成骨向分化的调控 被引量：2

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作者 王亮 钟武 陈睦虎 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期675-679,708,共6页

目的探讨miR-34a对人脂肪间充质干细胞(hASCs)成骨分化中相关蛋白的表达及相关作用机制。方法从西南医科大学附属医院接受选择性抽脂手术或其他腹部手术的捐赠者获得脂肪组织,并分离培养hASCs。分别使用miR-34a模拟物、抑制剂和阴性对... 目的探讨miR-34a对人脂肪间充质干细胞(hASCs)成骨分化中相关蛋白的表达及相关作用机制。方法从西南医科大学附属医院接受选择性抽脂手术或其他腹部手术的捐赠者获得脂肪组织,并分离培养hASCs。分别使用miR-34a模拟物、抑制剂和阴性对照转染hASCs,并通过逆转录-聚合酶链反应检测miR-34a在hASCs成骨分化各时间点的表达,Western blot检测成骨细胞中RBP2、RNUX2、P27蛋白表达情况,用双荧光素酶报告基因测定系统测定海肾和萤火虫萤光素酶活性。结果与阴性对照组相比,在转染第0、4、8、12天,miR-34a模拟物组的细胞miR-34a表达水平显著升高(P<0.05),而miR-34a抑制剂组显著降低(P<0.05)。miR-34a模拟物组RBP2蛋白表达降低,而miR-34a抑制剂表达增加。双荧光素酶报告测定证实RBP2是miR-34a的直接靶标。此外,miR-34a模拟物组RUNX2和P27蛋白表达上调,而miR-34a抑制剂表达下调。结论 miR-34a在hASCs成骨分化中起促进作用,并可能通过靶向RBP2起作用。 展开更多

关键词 MIR-34A 人脂肪间充质干细胞 成骨分化 视网膜母细胞瘤结合蛋白2 RUNX2

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抑制泛素羧基末端水解酶L1对小鼠心肌纤维化的影响 被引量：1

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作者 龚峥 马礼坤 +2 位作者 叶青 周俊岭 孔祥勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期520-526,共7页

目的探讨泛素羧基末端水解酶L1在小鼠心肌纤维化发生发展中可能的分子机制。方法雄性小鼠(每组6只)皮下植入缓释泵持续灌注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),并给小鼠腹腔注射UCHL1特异性抑制剂LDN57444。14 d后检测小鼠心脏功能变化,天狼猩红染色... 目的探讨泛素羧基末端水解酶L1在小鼠心肌纤维化发生发展中可能的分子机制。方法雄性小鼠(每组6只)皮下植入缓释泵持续灌注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),并给小鼠腹腔注射UCHL1特异性抑制剂LDN57444。14 d后检测小鼠心脏功能变化,天狼猩红染色方法检测小鼠心肌纤维化程度。分离纯化小鼠心肌成纤维细胞,随机分为3组:对照组(细胞+培养基)、P组(细胞+培养基+PDGF-DD)、PL组(细胞+培养基+PDGF-DD+LDN57444),荧光定量PCR检测mRNA表达水平,蛋白印迹法检测蛋白表达水平。结果动物实验中与对照组比较,Ang Ⅱ灌注2周后小鼠收缩压升高,心脏机构功能发生改变,应用UCHL1特异抑制剂LDN57444处理后可抑制Ang Ⅱ诱导的这些作用,天狼猩红染色心肌纤维化程度降低。qRT-PCR法显示PL组中Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平低于P组,P、PL组中UCH-L1的mRNA表达水平高于对照组。Western blot法显示P组中PDGFRβ/p-PDGFRβ、UCH-L1、pRb/Rb、ColⅠ的蛋白表达水平均高于对照组,PL组中PDGFRβ/p-PDGFRβ、ColⅠ、pRB/RB的蛋白表达量低于P组。染色质免疫共沉淀检测显示NF-κB蛋白调控下游UCH-L1基因转录。结论UCHL1参与调控小鼠的心脏成纤维细胞增殖,机制可能是通过PI3K、AKT和NF-κB信号轴通路调节UCH-L1表达,UCH-L1调控下游Rb蛋白的表达,通过调控细胞周期,抑制UCH-L1可减轻小鼠心肌纤维化。 展开更多

关键词 心肌纤维化 泛素羧基末端水解酶L1 核因子ΚB 视网膜母细胞瘤肿瘤抑制蛋白

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