昆虫细胞中的不同表达效率载体的元件优化及构建

1

作者 王金武 徐一夫 +3 位作者 赵亚琦 薛霆 宋柳 郭华荣 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期63-71,共9页

为了构建昆虫细胞高效表达载体,本文深入探讨了昆虫Sf9细胞中,3种不同种属来源的病毒早期启动子(OpIE2、P2和CMV)、2种荧光报告基因(EGFP和TagBFP)和2种转录终止子(SV40-pA和OpIE2-pA)的12种不同组合方式对所构建的表达质粒表达效率的... 为了构建昆虫细胞高效表达载体,本文深入探讨了昆虫Sf9细胞中,3种不同种属来源的病毒早期启动子(OpIE2、P2和CMV)、2种荧光报告基因(EGFP和TagBFP)和2种转录终止子(SV40-pA和OpIE2-pA)的12种不同组合方式对所构建的表达质粒表达效率的影响。研究结果发现,上述3种表达元件本身都可对表达质粒的表达效率产生严重影响,其中启动子的影响效果尤为突出,而且三者之间的搭配要慎重,否则可能导致载体表达效率的显著降低。结果表明:在Sf9细胞中,OpIE2-EGFP-OpIE2-pA组合展现出最高的表达效率;启动子活性方面,OpIE2启动子的活性最高,P2次之,CMV最差;EGFP的荧光信号明显高于TagBFP的荧光信号;OpIE2-pA的转录终止活性高于SV40-pA;双启动子(OpIE2-P2)驱动的表达质粒的转染结果表明,P2启动子的存在可抑制OpIE2启动子的活性。本结果可为昆虫细胞高效表达载体的构建提供重要参考。 展开更多

关键词 SF9细胞 表达质粒 表达效率 启动子 报告基因 转录终止子

在线阅读 下载PDF 职称材料

外源基因在耻垢分枝杆菌中表达效率的研究 被引量：5

2

作者 程继忠 皇甫永穆 海涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第3期249-253,共5页

将外源基因———日本血吸虫 2 6K抗原 (Schistosomajaponicum 2 6Kantigen ,Sj2 6GST)基因克隆到大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒 pBCG 2 0 0 0中 ,构建四个不同的表达载体 ,研究了它们在耻垢分枝杆菌中的表达效率 .首先将含人结核杆菌热休... 将外源基因———日本血吸虫 2 6K抗原 (Schistosomajaponicum 2 6Kantigen ,Sj2 6GST)基因克隆到大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒 pBCG 2 0 0 0中 ,构建四个不同的表达载体 ,研究了它们在耻垢分枝杆菌中的表达效率 .首先将含人结核杆菌热休克蛋白 70 (heatshockprotein ,hsp70 )启动子的质粒pMT 70用NcoⅠ切 ,进行两种不同的修饰 ,得到不同的SD序列 ,将Sj2 6GST基因克隆进去 ;再将含hsp70启动子和Sj2 6GST的基因片段克隆到 pBCG 2 0 0 0中 ,筛选出不同SD序列、不同方向和不同拷贝数的分枝杆菌表达载体四个 .所表达的天然重组Sj2 6GST在SDS PAGE上分子质量为 2 6ku处可见明显的表达蛋白带 .通过薄层扫描分析 ,发现表达质粒中 ,双拷贝启动子 外源基因组合表达效率最高 ,是单拷贝组合的 1 6倍 .而不同的克隆方向和不同的SD序列 (两者相差 3个碱基 )对表达效率的影响不明显 . 展开更多

关键词 分枝杆菌 表达效率 外源基因 疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

高温和红光诱导的鱼腥藻7120短藻丝体中TNF-α基因表达效率的提高 被引量：4

3

作者 欧阳叶新 施定基 +3 位作者 钟晖 梁承邺 李振甲 胡鸿钧 《武汉植物学研究》 CSCD 2003年第4期301-307,共7页

目前解决外源基因在蓝藻中低效表达的主要策略是改进供体DNA元件。这项工作尝试改变受体系统生理状态,研究对外源基因表达效率的影响。以前已经报道用高温(45℃)和红光处理鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC7120)可以诱导其形成短藻丝体,这里... 目前解决外源基因在蓝藻中低效表达的主要策略是改进供体DNA元件。这项工作尝试改变受体系统生理状态,研究对外源基因表达效率的影响。以前已经报道用高温(45℃)和红光处理鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC7120)可以诱导其形成短藻丝体,这里报道以此作为受体细胞,将构建的含重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的穿梭表达载体pKT-TNF通过三亲接合转移法进行转化。红光和高温诱导形成的短藻丝体中,TNF-α基因接合转移效率为在正常营养藻丝中的5～6倍,Southern杂交结果证明pKT-TNF已在受体细胞中复制。Western印迹表明TNF-α基因已在受体系统中表达,放射免疫测定结果显示在短藻丝体中的表达效率提高到在正常营养藻丝中的4～5倍。这可能为提高外源基因在丝状蓝藻中的表达效率提供了一条新途径。此外,研究还分析了人TNF-α基因密码子使用偏向性对在鱼腥藻7120中表达效率的影响。 展开更多

关键词 人肿瘤坏死因子α基因 红光 高温 接合转移效率 表达效率 鱼腥藻7120

在线阅读 下载PDF 职称材料

真核细胞表达质粒pCMV4增强hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力 被引量：4

4

作者 赵欣荣 李大金 +1 位作者 蔡立荣 孙晓溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期228-230,共3页

目的 :比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。 方法 :分别构建pcD NA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,并转染真核细胞瞬时表达系统COS 7细胞 ,以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、... 目的 :比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。 方法 :分别构建pcD NA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,并转染真核细胞瞬时表达系统COS 7细胞 ,以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3质粒。对 6周龄BLAB C小鼠行DNA免疫。于末次免疫后 6周采血 ,用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。 结果 :对COS 7体外表达效率分析 ,由pCMV4介导的hCGβ C3d3表达效率明显高于pcDNA3。动物DNA免疫结果 ,pCMV4 hCGβ C3d3刺激动物机体产生的免疫应答强度及免疫效果显著高于pcDNA3 hCGβ C3d3。 结论 :pCMV4真核表达质粒hCGβ C3d3体外表达效率及动物DNA免疫效力均显著高于pcDNA3真核表达质粒。 展开更多

关键词 pCMV4-hCGβ-C3d3 pcDNA3-hCGβ-C3d3 表达效率 免疫效力 DNA免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究 被引量：1

5

作者 周辉 李文桂 叶艳菊 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期977-980,共4页

目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率。方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物... 目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率。方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95重组质粒;电穿孔转化A(tLBA4404),抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。用IPTG分别诱导rAt0、1、3、5、7、9、11和13h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质。结果:471bpEg95基因克隆成功。经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95成功转入A(tLBA4404)。用Bio-Rad Quantity one分析系统分析,表达产物分子质量(Mr)约为16.5kD,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达效率为约占LBA4404菌体总蛋白的20%。结论:成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,且能在A(tLBA4404)中表达,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 重组质粒pBI-Eg95 根癌农杆菌 构建 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

肝细胞靶向基因药物分子构形和表达效率的研究

6

作者 卢放根 刘小伟 +2 位作者 欧阳春晖 羊东晔 吴晓英 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期9-12,共4页

目的 :用调整肝细胞靶向基因药物分子构形的方法 ,以期提高外源转入基因在目标细胞的表达效率。方法 :加入特定辅料分子至基因药物中 ,用电镜观察其液态分子构形。在转入体外培养的人肝癌细胞株BEL 74 0 2中后 ,用ELISA方法检测基因表... 目的 :用调整肝细胞靶向基因药物分子构形的方法 ,以期提高外源转入基因在目标细胞的表达效率。方法 :加入特定辅料分子至基因药物中 ,用电镜观察其液态分子构形。在转入体外培养的人肝癌细胞株BEL 74 0 2中后 ,用ELISA方法检测基因表达产物IFN r的浓度 ,筛选最佳表达外源基因药物分子的构形。结果 :肝细胞靶向基因药物在辅料分子不同浓度中构形发生改变 ,显现出絮状、球形、串蛛状及杆状与类染色体形的混合体。筛选出了具最佳表达的杆形和类染色体混合体分子构形。该构形的药物分子在体外培养细胞中的表达显著高于脂质体转运载体携带的同一基因 ,且不需要抑制溶酶的活性。结论 :用于基因治疗的药物分子构形对其转入靶细胞的表达效率有重要的影响。杆状和类染色体复合分子构形 。 展开更多

关键词 基因治疗 肝细胞 肝脏 表达效率 靶向基因 药物分子构形

在线阅读 下载PDF 职称材料

PEPCK不同启动子调控报告基因表达效率的比较

7

作者 王学斌 冯洁 +2 位作者 杨玉琴 谢建云 陈国宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期225-228,共4页

目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中... 目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中,将重组质粒转染到肝脏细胞系和脂肪细胞系,以非脂肪或肝脏细胞系做对照,比较PEPCK驱动荧光素酶表达效率。结果通过酶切鉴定及基因测序,证明pGL4.26-PEPCK-Luc2荧光素酶表达质粒构建成功,且能够在体外表达荧光素酶。结论两种同片段的PEPCK启动子在各细胞系中的表达效率差异无显著性。 展开更多

关键词 重组质粒 表达效率 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

导入ORF提高好热菌基因在大肠杆菌中的表达效率

8

作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第12期9-9,共1页

东京水产大学食品生产科助手石田真已、东京工业大学生命理工学部大岛泰郎等发现用大肠杆菌表达从好热菌中克隆的基因时,一旦在基因上游的近处导入短的转录开读框(ORF),可明显提高表达效率。石田等在5月10～11日京都召开的第5届日本蛋... 东京水产大学食品生产科助手石田真已、东京工业大学生命理工学部大岛泰郎等发现用大肠杆菌表达从好热菌中克隆的基因时,一旦在基因上游的近处导入短的转录开读框(ORF),可明显提高表达效率。石田等在5月10～11日京都召开的第5届日本蛋白工程学会年会上发表。从好热菌Thermus thermophilus 中克隆的基因有很多,但是在大肠杆菌内几乎都没有表达。 展开更多

关键词 ORF 表达效率 读框 蛋白工程 THERMOPHILUS 东京工业大学 RNA 田真 举祷 偶然形

在线阅读 下载PDF 职称材料

组成型启动子P_(ldh)对乳酸菌表达系统外源基因表达的影响研究

9

作者 刘芯孜 赵海渊 +7 位作者 鞠宁 陈莹 王梓 孟伟静 李佳璇 姜艳平 崔文 王晓娜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2937-2947,共11页

旨在利用AmpR(氨苄青霉素抗性)报告基因表达系统,构建不同数量乳酸菌组成型启动子P_(ldh)串联、启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统,分别检测AmpR报告基因转录水平、蛋白表达量并评价AMPR酶活性,从而筛选出稳定... 旨在利用AmpR(氨苄青霉素抗性)报告基因表达系统,构建不同数量乳酸菌组成型启动子P_(ldh)串联、启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统,分别检测AmpR报告基因转录水平、蛋白表达量并评价AMPR酶活性,从而筛选出稳定且强表达的组成型多启动子表达系统,为乳酸菌活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。对P_(ldh)启动子进行生物信息学分析,构建不同数量启动子P_(ldh)串联的重组乳酸菌以及启动子与外源基因AmpR不同顺序重组乳酸菌。通过实时荧光定量PCR、Western blot、间接ELISA检测以及氨苄青霉素活菌筛选试验综合评估不同表达系统中外源基因表达的强弱。PCR结果显示重组乳酸菌成功扩增出600、900、2300和2300 bp的P_(ldh)-P_(ldh)、P_(ldh)-P_(ldh)-P_(ldh)、P_(ldh)-AmpR-P_(ldh)-AmpR和P_(ldh)-P_(ldh)-AmpR-AmpR目的片段;Western blot结果显示重组菌均可表达AMPR蛋白,目的蛋白大小均约为28 ku。间接ELISA、荧光定量PCR和AMPR酶活性检测结果均显示,在不同数量启动子P_(ldh)串联乳酸菌表达载体系统中,三启动子驱动AmpR报告基因表达的效率显著高于双启动子(P<0.05),三启动子、双启动子驱动AmpR报告基因表达的效率均极显著高于单启动子(P<0.01),且均极显著高于对照菌pPG-Ampr/HLJ-27(P<0.01);在启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统中,重组菌pPG-P_(ldh)-P_(ldh)-Ampr-Ampr/HLJ-27驱动AmpR报告基因表达的效率极显著高于重组菌pPG-P_(ldh)-Ampr-P_(ldh)-Ampr/HLJ-27(P<0.01)。本研究利用AmpR报告基因成功构建了5种组成型多启动子P_(ldh)乳酸菌表达系统,结果显示在不同数量启动子P_(ldh)串联驱动单外源蛋白载体系统中,启动子调控转录进而驱动外源基因表达量与启动子数量呈正相关;在双启动子驱动双外源蛋白载体系统中,连续串联两个启动子调控转录进而驱动双外源基因表达效率显著高于两个启动子分别驱动双外源基因表达效率;以上数据为乳酸菌表达载体对外源蛋白的表达效率优化提供了必要的依据。 展开更多

关键词 乳酸菌表达系统 组成型启动子P_(ldh) 启动子活性 外源基因表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

Wankel泵效率表达与换算方法研究

10

作者 刘衍顺 张霄 +3 位作者 周政 李相辉 邓泽城 傅强 《工程科学与技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期239-247,共9页

Wankel泵是一种基于莱洛三角形的新型回转式容积泵,可同时输出较高的流量和压力,具有较好的输送性能。关于Wankel泵的效率表达及换算理论的研究仍较少,难以通过试验室内模型泵的水力试验指导应用中原型泵的设计与生产。因此,本文提出一... Wankel泵是一种基于莱洛三角形的新型回转式容积泵,可同时输出较高的流量和压力,具有较好的输送性能。关于Wankel泵的效率表达及换算理论的研究仍较少,难以通过试验室内模型泵的水力试验指导应用中原型泵的设计与生产。因此,本文提出一种基于分项参数换算法的Wankel泵效率表达与换算方法。首先,分析Wankel泵的基本构成及工作原理,根据Wankel泵的缸体型线建立转子顶点的运动轨迹、速度以及加速度计算公式。其次,基于能量守恒推导Wankel泵的扬程计算方程,并分析原型泵和模型泵在相似工况下流量和扬程的相似关系。随后,基于Wankel泵的结构特点,构建泵的机械损失、水力损失和容积损失的表达式,通过分析表达式的构成,提取各损失的损失系数,并基于流量和扬程的相似关系分析各损失系数的相似换算方法。根据损失和效率之间的换算关系,建立Wankel泵总效率表达式及相似换算公式。最后,搭建Wankel泵水力试验系统,开展不同型号、不同转速Wankel泵的水力性能测试试验,采用MATLAB遗传算法对总效率表达式进行拟合分析,并依据相似工况对相似换算公式进行验证。结果表明:在不同转速下Wankel泵总效率表达式的拟合优度均大于0.80,在相似工况下相似换算公式预测结果的平均误差小于5%,泵总效率表达式及相似换算公式均具有较高的准确性。所提方法可用于预测不同转速和扬程下Wankel泵的效率性能,为Wankel泵的设计与研发提供指导。 展开更多

关键词 Wankel泵 效率表达 相似换算 相似工况

在线阅读 下载PDF 职称材料

地方公共品:三种需求表达机制效率的实证分析 被引量：5

11

作者 刘楠楠 《地方财政研究》 北大核心 2015年第3期36-44,共9页

居民公共品需求表达渠道不通畅,是我国当前地方公共品供给有效性严重不足的主要原因。"用手投票"、"用脚投票"和人口迁移是地方公共品需求表达的三个基本途径。实证分析表明,有待提高的农村居民素质、孱弱组织行动... 居民公共品需求表达渠道不通畅,是我国当前地方公共品供给有效性严重不足的主要原因。"用手投票"、"用脚投票"和人口迁移是地方公共品需求表达的三个基本途径。实证分析表明,有待提高的农村居民素质、孱弱组织行动能力以及落后管理手段,是影响"一事一议"直接需求表达效率的重要因素。选民较低的参与度和我国传统的"自上而下"供给体制,导致居民通过基层选举来表达对公共品需求的渠道不通畅。居民在"用手投票"表达公共品需求效率低下的情况下,直接通过"用脚投票"或是人口迁移,成为首要选择。 展开更多

关键词 地方公共品 用手投票 用脚投票 表达机制效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

多房棘球绦虫pBCG-Em14-3-3重组质粒的构建及其在BCG中的表达 被引量：15

12

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1111-1114,共4页

目的构建多房棘球绦虫重组质粒pBCG-Em14-3-3,并转化BCG进行表达。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Em14-3-3抗原编码基因;将该扩增产物定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG,构建重组质粒pBCG-Em14-3-3;电穿孔... 目的构建多房棘球绦虫重组质粒pBCG-Em14-3-3,并转化BCG进行表达。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Em14-3-3抗原编码基因;将该扩增产物定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG,构建重组质粒pBCG-Em14-3-3;电穿孔法转化BCG,构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3。免疫印迹分析pBCG-Em14-3-3的表达产物。结果RT-PCR成功扩增出779bp的Em14-3-3抗原编码基因;双酶切证实Em14-3-3抗原编码基因成功插入pBCG中;PCR证实rBCG-Em14-3-3构建成功;免疫印迹分析发现pBCG-Em14-3-3的表达产物在相对分子质量(Mr)约为27×103处有明显的目的蛋白表达条带,且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论成功构建了多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组pBCG-Em 14—3—3 BCG 构建 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用毕赤酵母表达蚕丝丝素蛋白典型肽段的研究 被引量：1

13

作者 田保中 王建南 +2 位作者 陆长德 李明忠 白伦 《丝绸》 CAS 北大核心 2006年第6期20-23,共4页

设计并克隆了一个以源于蚕丝丝素蛋白结晶区的序列为GAGAGS(GlyAlaGlyAlaGlySer)的典型肽段为基本框架的基因,并导入毕赤酵母(Pichiapastoris)X33内进行了表达。研究表明,在X33酵母里可以正确表达目的蛋白Bmf31D1-8,而且获得了0.202g/L... 设计并克隆了一个以源于蚕丝丝素蛋白结晶区的序列为GAGAGS(GlyAlaGlyAlaGlySer)的典型肽段为基本框架的基因,并导入毕赤酵母(Pichiapastoris)X33内进行了表达。研究表明,在X33酵母里可以正确表达目的蛋白Bmf31D1-8,而且获得了0.202g/L的表达效率。 展开更多

关键词 毕赤酵母 蚕丝丝素蛋白 GAGASGS 肽段表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕丝素结晶区高度重复多肽[GAGAGA]_(16)和[GAGAGS]_(16)的融合蛋白优化表达 被引量：2

14

作者 王建南 白伦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期569-575,共7页

为了给深入研究家蚕丝素结晶区的典型肽段结构提供素材,对设计的GST-tag家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGA]16和[GAGAGS]16的融合蛋白KGA、KGS进行了表达条件优化试验。结果表明,pGEX-KGA和pGEX-KGS表达载体能够有效表达家蚕丝素结晶区的2... 为了给深入研究家蚕丝素结晶区的典型肽段结构提供素材,对设计的GST-tag家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGA]16和[GAGAGS]16的融合蛋白KGA、KGS进行了表达条件优化试验。结果表明,pGEX-KGA和pGEX-KGS表达载体能够有效表达家蚕丝素结晶区的2种典型多肽,KGA和KGS的最佳表达诱导剂IPTG的浓度分别为1.4mmol/L、1.0 mmol/L,诱导时间为5 h。在此优化条件下,KGA和KGS在大肠杆菌（E.coli）中的表达量分别达75 mg/L、110 mg/L。诱导起始时大肠杆菌的菌密度（OD600为0.4-3.0）对2种融合蛋白的表达效率没有显著影响。 展开更多

关键词 家蚕 丝素结晶区 典型肽段 大肠杆菌 GST亲和层析 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGY]16和[GAGAGV]16的融合蛋白优化表达 被引量：1

15

作者 王建南 白伦 李明忠 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期175-180,共6页

家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGY]16、[GAGAGV]16的GST融合蛋白KGY和KGV是深入研究家蚕丝素结晶区典型多肽聚集态结构的素材。对这2种融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行优化试验的结果表明,表达载体pGEX-KGY和pGEX-KGV能够有效表达家... 家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGY]16、[GAGAGV]16的GST融合蛋白KGY和KGV是深入研究家蚕丝素结晶区典型多肽聚集态结构的素材。对这2种融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行优化试验的结果表明,表达载体pGEX-KGY和pGEX-KGV能够有效表达家蚕丝素结晶区的这2种典型多肽。KGY和KGV的最佳诱导表达条件:IPTG浓度分别为0.2 mmol/L和1.0 mmol/L,诱导时间分别为5 h和4 h。在此条件下,2种融合蛋白在大肠杆菌中的表达量分别达115 mg/L和90 mg/L左右。诱导起始时大肠杆菌的菌密度(OD600为0.4～3.0)对2种融合蛋白的表达效率没有显著影响。 展开更多

关键词 家蚕 丝素结晶区 典型肽段 表达载体 诱导剂浓度 诱导时间 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

影响大肠杆菌中外源基因表达的因素 被引量：6

16

作者 高慧 孙建义 刘明启 《上海畜牧兽医通讯》 2006年第5期64-65,共2页

关键词 外源基因表达 大肠杆菌 发酵培养 表达效率 克隆与表达 遗传背景 选择利用 目的基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

钙振荡频率协同细胞内过氧化氢优化基因表达

17

作者 朱莉萍 罗友根 +2 位作者 陈桃香 陈凤容 胡清华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1979-1979,共1页

关键词 钙振荡 基因表达 活性氧 表达效率 力学特征 意义研究 调控规律

在线阅读 下载PDF 职称材料

‘波邦’咖啡叶绿体基因组密码子使用特征研究 被引量：1

18

作者 李亚麒 李贵平 +6 位作者 李亚男 付兴飞 黄家雄 毕晓菲 喻好好 刘德欣 胡发广 《种子》 北大核心 2024年第4期27-36,共10页

本研究对小粒咖啡‘波邦’叶绿体基因组进行系统分析,探讨影响密码子使用偏性形成的因素。结果表明,‘波邦’叶绿体基因组密码子偏好性较弱,倾向于A/T结尾的密码子。ENC-GC3s绘图、PR2绘图以及中性绘图分析表明,‘波邦’密码子偏好性受... 本研究对小粒咖啡‘波邦’叶绿体基因组进行系统分析,探讨影响密码子使用偏性形成的因素。结果表明,‘波邦’叶绿体基因组密码子偏好性较弱,倾向于A/T结尾的密码子。ENC-GC3s绘图、PR2绘图以及中性绘图分析表明,‘波邦’密码子偏好性受突变影响的同时,也受自然选择等因素的影响,但自然选择起到更大的作用。进一步对应分析发现,基因表达水平、基因长度、GC含量对‘波邦’密码子偏性也有影响。密码子使用频率结果表明,拟南芥、烟草和酿酒酵母可考虑作为‘波邦’基因的表达受体系统,其中,烟草与酿酒酵母更为理想。研究表明,在‘波邦’中发现了GCT、TGT、GAT等20个高频密码子,确定了GCA、GCT、TGT等21个最优密码子。 展开更多

关键词 ‘波邦’ 小粒咖啡 叶绿体基因组 密码子偏好性 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

添加营养素提高家蚕杆状病毒生物反应器产率的试验 被引量：3

19

作者 林水中 裘智勇 +3 位作者 张志芳 崔为正 何家禄 秦俭 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第3期233-235,共3页

添食营养素提高家蚕杆状病毒生物反应器产率的研究表明 :添食营养素后 ,可显著促进家蚕的生长发育。以植酸酶为报告基因 ,低浓度的添食处理可提高家蚕杆状病毒生物反应器产率 30

关键词 营养素 杆状病毒 生物反应器 植酸酶 家蚕 生长发育 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

两种不同的转基因细胞构建体系的比较 被引量：1

20

作者 葛彦 陈永井 +3 位作者 施勤 孙建军 王勤 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期46-49,共4页

目的:比较目的基因在两种不同表达体系构建的转基因细胞上的表达,选择更好的构建体系。方法:脂质体法将重组真核细胞表达载体pcDNA3/FD-L1导入L929细胞,G418(600μg/ml)筛选抗性细胞株,同时将重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/PD-L1与辅助... 目的:比较目的基因在两种不同表达体系构建的转基因细胞上的表达,选择更好的构建体系。方法:脂质体法将重组真核细胞表达载体pcDNA3/FD-L1导入L929细胞,G418(600μg/ml)筛选抗性细胞株,同时将重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/PD-L1与辅助载体共转染293T细胞,包装病毒颗粒,其上清感染L929细胞后,经Zeocin(500μg/ml)筛选抗性细胞。流式细胞仪(FCM)检测目的蛋白在两种细胞膜上的表达。结果:两种体系对目的基因的瞬时表达无明显差别;用pcDNA3构建的转基因细胞膜上目的分子表达稳定性差,表达率低,而用pGEZ-Term构建的则目的蛋白稳定高表达,表达率近100％。结论:两种构建体系均能瞬时表达目的分子,pGEZ-Term表达体系更适于构建长期稳定表达目的基因的转基因细胞。 展开更多

关键词 真核表达 转基因细胞 表达效率

在线阅读 下载PDF 职称材料