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VIM-2型金属β内酰胺酶的序列分析、原核表达及纯化被引量：1: 1; 作者林孟娴王佩芬 +1 位作者蔡应木钱元恕《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第3期168-171,共4页; 目的对铜绿假单胞菌所产blaVIM-2进行基因重组表达及纯化。方法以产blaVIM-2铜绿假单胞菌总基因组DNA为模板,PCR扩增blaVIM-2,将其克隆入pUCm-T载体后测定该核苷酸序列,再将blaVIM-2克隆入表达载体pET-41b(+),然后在大肠埃希菌BL21(DE3... 展开更多; 关键词 VIM-2型金属β内酰胺酶克隆原核表达及纯化铜绿假单胞菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蔗DELLA蛋白GAI基因的蛋白表达及纯化: 2; 作者方金兰柴哲 +1 位作者陈保善张木清《中国糖料》 2020年第1期1-5,共5页; 赤霉素是开花植物生长发育过程中一个重要的激素,调控种子萌发、茎伸长、叶片扩张、花器官发育,参与各种生物胁迫等多种途径;DELLA蛋白是赤霉素信号途径的抑制因子,DELLA蛋白通过与其他蛋白互作进行相关调控。为研究甘蔗蛋白调控机制,... 展开更多; 关键词甘蔗 DELLA蛋白 ScGAI基因蛋白表达及纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测被引量：4: 3; 作者李菁林彤 +4 位作者高闪电丛国正独军政邵军军常惠芸《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5248-5250,共3页; [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3... 展开更多; 关键词 A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1 表达及纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定: 4; 作者张星亮彭熹 +2 位作者邓翔刘扬崔香淑《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期283-290,共8页; 为明确植物光合作用中镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基形成复合物CHLI-CHLD这一重要过程的机制,首先需要获得可溶性CHLI和CHLD蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌BL21(D... 展开更多; 关键词 CHLI CHLD 原核表达及纯化蛋白复合物; 在线阅读下载PDF 职称材料

粗糙脉孢菌ERG-11蛋白抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备被引量：2: 5; 作者刘雁霞李少杰樊振川《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期216-222,共7页; 构建p ET-28a(+)-ERG-11重组质粒,表达6×His-ERG-11融合蛋白,制备ERG-11多克隆抗体。采用PCR技术扩增目的片段,插入p ET-28a(+)原核表达载体,并转入E.coli BL21(DE3)感受态表达融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化及分子筛纯化后免疫新西... 展开更多; 关键词粗超脉孢菌ERG-11基因克隆蛋白表达及纯化多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名VIM-2型金属β内酰胺酶的序列分析、原核表达及纯化被引量：1: 1; 作者林孟娴王佩芬蔡应木钱元恕; 机构汕头大学医学院药理教研室汕头大学医学院第一附属医院检验科; 出处《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第3期168-171,共4页; 基金国家自然科学基金(编号:30472109) 广东省自然科学基金(编号:34616) 汕头大学研究与发展基金(编号:L00010); 文摘目的对铜绿假单胞菌所产blaVIM-2进行基因重组表达及纯化。方法以产blaVIM-2铜绿假单胞菌总基因组DNA为模板,PCR扩增blaVIM-2,将其克隆入pUCm-T载体后测定该核苷酸序列,再将blaVIM-2克隆入表达载体pET-41b(+),然后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,表达产物再过Ni-NTA柱纯化。结果PCR扩增出大小为801bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,蛋白分子质量大约为56000u。结论对VIM-2金属酶的成功表达及纯化为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定了基础。; 关键词 VIM-2型金属β内酰胺酶克隆原核表达及纯化铜绿假单胞菌; Keywords VIM-2 metallo-β-lactamase Clone, Prokaryotic expression and purification Pseudomonas aeruginosa; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蔗DELLA蛋白GAI基因的蛋白表达及纯化: 2; 作者方金兰柴哲陈保善张木清; 机构广西大学生命科学与技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西生物学重点实验室; 出处《中国糖料》 2020年第1期1-5,共5页; 基金国家自然科学基金“机械收获甘蔗品种的表型组学分析及其选育”(3166100105) 广西重大科技项目“甘蔗关键共性技术的研发与产业化示范”(桂科AD17129002)联合资助; 文摘赤霉素是开花植物生长发育过程中一个重要的激素,调控种子萌发、茎伸长、叶片扩张、花器官发育,参与各种生物胁迫等多种途径;DELLA蛋白是赤霉素信号途径的抑制因子,DELLA蛋白通过与其他蛋白互作进行相关调控。为研究甘蔗蛋白调控机制,本研究利用原核表达技术体外诱导进行表达。结果表明,ScGAI蛋白全长不表达,但ScGAI-C在pET-28a(+MBP)中能够有效表达,大量诱导蛋白表达后经镍柱纯化,Western blot分析验证ScGAI蛋白被成功诱导出来。; 关键词甘蔗 DELLA蛋白 ScGAI基因蛋白表达及纯化; Keywords sugarcane DELLA protein ScGAI gene protein expression and purification; 分类号 S566.1 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测被引量：4: 3; 作者李菁林彤高闪电丛国正独军政邵军军常惠芸; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疾病病原生物学国家重点开放实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5248-5250,共3页; 基金国家科技支撑计划(2006BAD06A14) 转基因重大专项(2008ZX08011-004); 文摘 [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化。[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应。[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础。; 关键词 A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1 表达及纯化; Keywords A-type FMDV Structural protein VP1 Expression and purification; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定: 4; 作者张星亮彭熹邓翔刘扬崔香淑; 机构广东医学院附属医院儿科中国农业大学农业生物技术国家重点实验室延边大学医学部护理学院; 出处《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期283-290,共8页; 基金国家自然科学青年基金项目(31300602) 广东省自然科学基金项目(S2013040012902) 吉林省卫生厅基金项目(2013082); 文摘为明确植物光合作用中镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基形成复合物CHLI-CHLD这一重要过程的机制,首先需要获得可溶性CHLI和CHLD蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。通过Ni琼脂糖树脂(Ni sepharose 6 Fast Flow)和谷胱甘肽琼脂糖树脂(Glutathionsepharose 4 Fast Flow)亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和TEV酶切试验验证目标蛋白。采用GST-Pulldown试验鉴定CHLI与CHLD的相互作用。通过凝胶过滤层析和SDSPAGE测定复合体中CHLI与CHLD蛋白的比例。结果表明:成功构建了截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒p ET-28a-CHLI(13-357),p ET-28a-CHLD(20-676)及p GEX-4T-2-CHLD(20-767);在18℃,0.2mmol·L-1 IPTG条件下诱导16h后,成功获得了可溶性的CHLI(13-357),CHLD(20-676)和GST-CHLD(20-676)重组表达蛋白;CHLI与CHLD存在直接相互作用且需要Mg2+和ATP;稳定复合体CHLI-CHLD的亚基比例为1∶1。综上表明原核表达及纯化镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基蛋白,在Mg2+和ATP存在的条件下通过凝胶过滤层析可获得1∶1的稳定复合体CHLI-CHLD。; 关键词 CHLI CHLD 原核表达及纯化蛋白复合物; Keywords CHLI CHLD prokaryotic expression and purification protein complex; 分类号 S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名粗糙脉孢菌ERG-11蛋白抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备被引量：2: 5; 作者刘雁霞李少杰樊振川; 机构天津科技大学大健康生物技术研究所天津市大健康生物技术国际联合研究中心天津科技大学食品工程与生物技术学院中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期216-222,共7页; 基金国际遗传工程与生物技术中心联合研究项目(CRP/CHN15-01); 文摘构建p ET-28a(+)-ERG-11重组质粒,表达6×His-ERG-11融合蛋白,制备ERG-11多克隆抗体。采用PCR技术扩增目的片段,插入p ET-28a(+)原核表达载体,并转入E.coli BL21(DE3)感受态表达融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化及分子筛纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,取血清后,采用间接ELISA法和Western blot法检测多克隆抗体的效价及特异性。成功构建了p ET-28a(+)-ERG-11表达载体,SDS-PAGE电泳显示成功诱导出以包涵体形式存在的6×His-ERG-11融合蛋白,两步纯化后得到纯度较高的抗原,间接ELISA法显示制备的多克隆抗体效价达到1∶512 000,Western blot显示具有较高特异性。成功实现了粗超脉孢菌ERG-11蛋白的原核表达,制备出一支兔抗粗超脉孢菌ERG-11的多克隆抗体。; 关键词粗超脉孢菌ERG-11基因克隆蛋白表达及纯化多克隆抗体; Keywords Neurospora crassa ERG-11 cloning protein expression and purification polyclonal antibody; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	VIM-2型金属β内酰胺酶的序列分析、原核表达及纯化	林孟娴王佩芬蔡应木钱元恕	《中国感染与化疗杂志》 CAS	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	甘蔗DELLA蛋白GAI基因的蛋白表达及纯化	方金兰柴哲陈保善张木清	《中国糖料》	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测	李菁林彤高闪电丛国正独军政邵军军常惠芸	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2010	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定	张星亮彭熹邓翔刘扬崔香淑	《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	粗糙脉孢菌ERG-11蛋白抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备	刘雁霞李少杰樊振川	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料