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血管生成抑制素Endostatin研究新进展 被引量:16
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作者 贺祥 潘卫 +1 位作者 芮耀诚 戚中田 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第1期76-78,共3页
1997年O’ Reilly从小鼠血管内皮细胞瘤中分离到一种新的20 kD具有特异抑制血管内皮细胞生长的抑制因子─—Endostatin,它对牛毛细血管内皮细胞、牛肺主动脉内皮细胞有特异的抑制增殖作用,而对非血管内皮细... 1997年O’ Reilly从小鼠血管内皮细胞瘤中分离到一种新的20 kD具有特异抑制血管内皮细胞生长的抑制因子─—Endostatin,它对牛毛细血管内皮细胞、牛肺主动脉内皮细胞有特异的抑制增殖作用,而对非血管内皮细胞系细胞如 NIH3T3,A10平滑肌细胞等则无增殖抑制作用,实验证实大肠杆菌生产的复性及未复性的Endostatin及杆状病毒生产的重组Endostatin均有抑制鸡胚血管生成的作用,而且Endostatin没有象肿瘤化疗药物那样引发肿瘤产生抗药性,其作用机理尚待进一步研究。 展开更多
关键词 ENDOSTATIN 肿瘤 血管生成抑制素
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一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素 被引量:10
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作者 李福洋 何鹏 +5 位作者 刘新平 张英起 杨静华 樊代明 药立波 fmmu.edu.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期325-327,共3页
血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostati... 血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱 .此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效 . 展开更多
关键词 血管生成抑制素 抗肿瘤转移 一步亲和层析 血浆
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血管生成抑制素canstatin的新发现 被引量:6
3
作者 李浪 冯建章 郑文岭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期862-864,共3页
AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endot... AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endothelial cell migration and proliferation and induced apoptosis, suggesting that it might be a powerful and potential therapeutic molecule for atherosclerosis,unstable angina and tumor. 展开更多
关键词 血管生成抑制素 CANSTATIN 血管生成因子 血管内皮 动脉粥样硬化
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人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
4
作者 卢文菊 罗进贤 李文清 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期88-91,共4页
将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA... 将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA2)中获得高效表达.表达产物以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.2%.利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体。 展开更多
关键词 血管生成抑制素 基因表达 肿瘤 免疫疗法
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培养条件对含血管生成抑制素工程菌生长和表达的影响及乙酸的控制作用 被引量:3
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作者 周涟 罗进贤 +2 位作者 张添元 孙慈煌 陈宏 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期55-57,61,共4页
血管生成抑制素是新近发现的一种血管生成抑制因子。摸索了含人血管生成抑制素基因的大肠杆菌E .coli工程菌的培养条件 ,确定了合适的宿主菌、培养基及培养的pH ,发现适当的提高pH ,能有效减少代谢副产物乙酸的抑制作用。
关键词 大肠杆菌E.coli 血管生成抑制素 培养条件 乙酸
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血管生成抑素的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 王若宁 刘玲玲 +1 位作者 张一鸣 陈丙莺 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期10-12,共3页
目的 :在原核系统中表达并纯化人血管生成抑素 (angiostatin) ,制备鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。方法 :设计引物扩增angiostatin的cDNA ,然后亚克隆入原核表达载体pQE ,并转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化 ,再用纯化的人血管生... 目的 :在原核系统中表达并纯化人血管生成抑素 (angiostatin) ,制备鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。方法 :设计引物扩增angiostatin的cDNA ,然后亚克隆入原核表达载体pQE ,并转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化 ,再用纯化的人血管生成抑素免疫小鼠并制备多抗。结果 :通过重组质粒酶切和测序分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆 ,转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化成功 ,再利用纯化的人血管生成抑素制备成功鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。结论 :表达产物及多克隆抗体为下阶段深入研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 血管生成因子 血管生成抑制素 原核表达 多克隆抗体 制备
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人血管生成抑制因子canstatin原核表达载体的构建及表达 被引量:1
7
作者 侯卫红 袁保梅 +4 位作者 王天云 柴玉荣 侯桂琴 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期51-54,共4页
目的 :构建国人血管生成抑制因子canstatin的原核表达载体并在大肠杆菌BL2 1中表达canstatin重组蛋白。方法 :用Trizol试剂提取人肝脏组织总RNA ,通过RT -PCR扩增canstatin的cDNA ,克隆到pMD1 8-T载体中并进行序列分析。将canstatincDN... 目的 :构建国人血管生成抑制因子canstatin的原核表达载体并在大肠杆菌BL2 1中表达canstatin重组蛋白。方法 :用Trizol试剂提取人肝脏组织总RNA ,通过RT -PCR扩增canstatin的cDNA ,克隆到pMD1 8-T载体中并进行序列分析。将canstatincDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中 ,而后在大肠杆菌BL2 1中经IPTG诱导表达。结果 :canstatincDNA克隆入质粒pET30a(+)获得了重组表达载体pET30a(+) /Cans,canstatin的cDNA长度为 6 84bp ,编码 2 2 7个氨基酸。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+) /Cans在大肠杆菌BL2 1中的表达量约占菌体总蛋白量的 35 %。结论 :原核表达载体pET30a(+) /hCans在大肠杆菌BL2 展开更多
关键词 CANSTATIN CDNA克隆 血管生成抑制素 RT—PCR 原核表达
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血管抑制素功能结构域K1与PKA底物磷酸化基序的融合表达及磷酸化标记
8
作者 李福洋 何鹏 +3 位作者 刘新平 苏成芝 杨静华 药立波 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第4期448-451,共4页
通过 RT- PCR,从人肝组织中扩增出血管形成抑制素 ( angiostatin) c DNA的 K1片段 ,经DNA序列分析证实其正确性 ;将 K1与 GST融合并带上 1 7个氨基酸的 PKA底物磷酸化基序 ,IPTG诱导表达 ,以还原型谷胱甘肽偶联的琼脂糖凝胶亲合层析直... 通过 RT- PCR,从人肝组织中扩增出血管形成抑制素 ( angiostatin) c DNA的 K1片段 ,经DNA序列分析证实其正确性 ;将 K1与 GST融合并带上 1 7个氨基酸的 PKA底物磷酸化基序 ,IPTG诱导表达 ,以还原型谷胱甘肽偶联的琼脂糖凝胶亲合层析直接从细菌裂解上清中纯化融合蛋白 ;以 PKA催化单位将 3 2 P通过磷酸化作用标记至纯化的蛋白 ,再用凝血酶切去 GST,进行SDS- PAGE.放射自显影结果显示 ,GSTag- K1和 Tag- K1分别在 40 k D和 1 7k D处有信号强而特异的显影条带 ,表明带有磷酸化序列的蛋白能够被 展开更多
关键词 血管生成抑制素 蛋白标记 融合表达 PKA 抗肿瘤
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人纤溶酶原K1-3区基因在大肠杆菌中的表达 被引量:5
9
作者 陆幸妍 盛节 +1 位作者 张添元 罗进贤 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期63-65,共3页
将人纤溶酶原kringle 1- 3 (K1- 3)基因插入融合表达载体pET - 17b ,获得重组质粒pET -K13 ,转化E coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下 ,人纤溶酶原K1- 3基因在E coliBL2 1(DE3,pET -K13)中获得高效融合表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4% ,表... 将人纤溶酶原kringle 1- 3 (K1- 3)基因插入融合表达载体pET - 17b ,获得重组质粒pET -K13 ,转化E coliBL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下 ,人纤溶酶原K1- 3基因在E coliBL2 1(DE3,pET -K13)中获得高效融合表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4% ,表达产物以包涵体存在 ,Westernblot证明重组蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性 . 展开更多
关键词 人纤溶酶原K1-3 基因表达 大肠杆菌 WESTERN BLOT 肿瘤 血管生成抑制素
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人纤溶酶原Kringle 5基因的克隆、表达及产物纯化和性质鉴定 被引量:3
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作者 陈浩 陈于红 +2 位作者 张菁 刘建宁 朱德煦 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期218-222,共5页
根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达... 根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在 .包涵体经过体外变复性 ,SP SepharoseFF离子交换柱一步纯化 ,15%SDS PAGE鉴定考染一条带 ,纯度达 95%以上 .所得到的目标蛋白能明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生 . 展开更多
关键词 血管生成抑制素 KRINGLE5 包涵体 人纤溶酶原基因 克隆 表达 纯化 鉴定 肿瘤治疗
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小鼠canstatin及其N端片段在大肠杆菌BL21中的表达 被引量:2
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作者 侯卫红 王天云 +4 位作者 柴玉荣 袁保梅 侯桂琴 王建民 薛乐勋 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期658-662,共5页
以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT PCR扩增小鼠canstatin及其N端片段基因,克隆到pMD18 T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatin及其N端片段基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,分别构建表达质粒pET/Can和pET/Can N,转化大肠杆菌BL... 以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT PCR扩增小鼠canstatin及其N端片段基因,克隆到pMD18 T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatin及其N端片段基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,分别构建表达质粒pET/Can和pET/Can N,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果表明:小鼠canstatin的cDNA长度为684bp,编码227个氨基酸,与已知的人canstatincDNA同源性为89%,氨基酸的同源性为96%。小鼠canstatinN端片段(1 95aa)与人的同源性为100%。IPTG诱导原核表达载体pET/Can和pET/Can N在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白量的35%和18%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。文中报道的小鼠canstatin及其N端片段核苷酸序列已收入GenBank,接受号分别为:AY375463和AY502946。 展开更多
关键词 CANSTATIN 血管生成抑制素 RT-PCR CDNA克隆
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