赤魟软骨血管生成抑制因子的分离纯化 被引量：9

1

作者 余新威 钱晓 +2 位作者 王婕妤 罗红宇 吴常文 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期113-118,共6页

确定了制备高纯度赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化工艺，并通过胶原酶模型、CAM模型验证其生物学活性。正交实验确定了赤魟软骨组织抽提的最佳条件，抽提产率可达0．84％。丙酮分级沉淀对抽提产物进行粗分离，25～35％的丙酮分级产物的... 确定了制备高纯度赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化工艺，并通过胶原酶模型、CAM模型验证其生物学活性。正交实验确定了赤魟软骨组织抽提的最佳条件，抽提产率可达0．84％。丙酮分级沉淀对抽提产物进行粗分离，25～35％的丙酮分级产物的CAM血管生成抑制率达85％。优化离子交换层析、凝胶过滤、反相层析的条件，可进一步有效的获得高纯度的赤魟软骨血管生成抑制因子-Ⅰ（DCAIF-Ⅰ）。SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色显示为一条带，分子量为62kDa。活性验证结果表明，DCAIF-Ⅰ对胶原酶具有一定的抑制活性，抑制率为36．3％，对CAM血管生成的抑制活性具有一定的剂量依赖关系。 展开更多

关键词 赤魟 血管生成抑制因子 纯化 胶原酶 鸡胚绒毛尿囊膜

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重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定 被引量：2

2

作者 官孝群 王跃祥 +2 位作者 莫炜 吴良成 宋后燕 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-4,共4页

目的　分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法　通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计... 目的　分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法　通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计数 ;孵化 7d的鸡胚加r K4K5后继续孵育 72h ,观察新生血管生成 ;已经接种人SPC Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠 (Balb/c ,nu/nu) ,瘤旁注射r K4K5继续饲养 ,观察肿瘤生长变化。结果　r K4K5抑制BCE细胞增殖 ,48～ 72h作用明显 ;r K4K5处理的CAM组中直径小于 5 0 μm的小血管明显减少 ;高剂量r K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组 ,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论　r K4K5能够抑制BCE细胞增殖 ,抑制鸡胚CAM新生血管生成 ,抑制实验性人SPC Al肺腺癌生长。 展开更多

关键词 重组血管生成抑制因子 r-K4K5 分离 纯化 鉴定 肺腺癌

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人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达 被引量：1

3

作者 单志新 林秋雄 +5 位作者 余细勇 刘媛 符永恒 谭虹虹 郑猛 林曙光 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B06期4-6,共3页

[目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有 生物活性的canstatin。[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatin cDNA,并定向克隆入真核表达载 体pSeeTag2C中... [目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有 生物活性的canstatin。[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatin cDNA,并定向克隆入真核表达载 体pSeeTag2C中。用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞。培养48 h后,对转化的COS7细胞行PCR 和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用。[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中 扩增出canstatin cDNA片段。测序结果显示,克隆的canstatin cDNA长684 bp,序列与文献报道一致。从pSecTag2C-canstatin转 化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Westem-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34 kDa的 canstatin表达。MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖。[结论] 构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin。 展开更多

关键词 人脐静脉血管内皮细胞 真核表达 COS7细胞 人血 血管生成抑制因子 扩增 增殖 定向克隆 DNA 脂质体转染法

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肿瘤血管生成抑制因子Arresten基因克隆及其对烟草的转化 被引量：1

4

作者 李红民 郝瑞文 +1 位作者 郝建国 贾敬芬 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期86-90,共5页

肿瘤血管生成抑制因子Arresten是人Ⅳ型胶原蛋白α1链羧基末端NC1结构域多肽片段,可抑制新血管生成。研究拟实现该基因对烟草细胞的转化,为进一步利用植物细胞表达该蛋白奠定基础。①采用RT-PCR法从人胎盘组织克隆Arresten基因cDNA,克... 肿瘤血管生成抑制因子Arresten是人Ⅳ型胶原蛋白α1链羧基末端NC1结构域多肽片段,可抑制新血管生成。研究拟实现该基因对烟草细胞的转化,为进一步利用植物细胞表达该蛋白奠定基础。①采用RT-PCR法从人胎盘组织克隆Arresten基因cDNA,克隆产物经酶切后定向插入到植物双元表达载体pCAMBIA1301的NcoⅠ和BstEⅡ位点之间,构建成含有目的基因的植物表达载体pCA,经PCR、限制性内切酶检测及序列测定正确后,转化根癌农杆菌LBA4404,获得携带目的基因的重组农杆菌。②采用叶盘转化法,以重组农杆菌转化烟草。在hygromy cin选择压力下获得烟草转化不定芽和完整植株,经PCR检测初步证实,Arresten基因已导入烟草基因组中。该研究首次将Arresten基因导入高等植物基因组中,为避免利用原核细胞或动物细胞表达Arresten的潜在问题,以及进一步利用植物进行该基因的大规模廉价表达奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤血管生成抑制因子 Arresten基因 植物表达载体 转化 烟草

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血管生成抑制因子与肿瘤治疗 被引量：1

5

作者 张峰 王小林 《介入放射学杂志》 CSCD 2002年第4期311-313,共3页

关键词 血管他丁 肿瘤血管形成 内皮他丁 分子机制 血管生成抑制因子 肿瘤治疗

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血管生成抑制因子canstatin与肿瘤的关系

6

作者 马百坤 郭利利 +2 位作者 方蓉 史利宁 武建国 《医学研究生学报》 CAS 2003年第12期943-944,共2页

Canstatin为Ⅳ型胶原α2 链双链片段的内源性蛋白 ,作为特异性的血管生成抑制因子 ,能抑制内皮细胞 (EC)增生、迁移并有抑制EC形成血管等功能 ,有望成为抑制肿瘤生长的新途径。作者对canstatin的发现。

关键词 血管生成抑制因子 CANSTATIN 肿瘤

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基因重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子的发酵条件优化

7

作者 吴欢 陈先金 +3 位作者 李观贵 姚晟 徐丽慧 谢秋玲 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期314-318,共5页

采用三角摇瓶来优化基因工程菌表达重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子(SCAIF)的最佳发酵条件,并以此为基础在Biotop CF-10L自动控制发酵罐进行发酵培养.基因工程菌BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)诱导表达SCAIF蛋白的最佳摇瓶培养条件是:接种量为2%... 采用三角摇瓶来优化基因工程菌表达重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子(SCAIF)的最佳发酵条件,并以此为基础在Biotop CF-10L自动控制发酵罐进行发酵培养.基因工程菌BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)诱导表达SCAIF蛋白的最佳摇瓶培养条件是:接种量为2%、装液量为75 mL/500 mL、加入IPTG的诱导时间为培养2 h后、IPTG浓度为0.25 mmol/L、诱导时间为2 h.BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)菌种在Biotop CF-10L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到10 L发酵培养基中,设定pH7.0,温度37℃,培养4 h后,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,诱导2 h后终止发酵.发酵罐中获得的菌体量为10.2 g/L,蛋白表达率为25%左右. 展开更多

关键词 鲨鱼软骨血管生成抑制因子 发酵条件 优化

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过表达血管生成抑制蛋白1对人结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量：2

8

作者 高卫峰 张春泽 +3 位作者 张庆怀 孙静 苏延军 张伟华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期121-127,共7页

目的:探讨过表达血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1,VASH1)对人结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:包装慢病毒并感染人结直肠癌SW680、SW620细胞以构建过表达VASH1的细胞系,以未经感染的细胞为对照;qPCR实验和WB实验检测VASH1的过表... 目的:探讨过表达血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1,VASH1)对人结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:包装慢病毒并感染人结直肠癌SW680、SW620细胞以构建过表达VASH1的细胞系,以未经感染的细胞为对照;qPCR实验和WB实验检测VASH1的过表达效果,小管形成实验、CCK-8实验、软琼脂克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验检测过表达VASH1在体外对细胞的微血管形成、增殖、克隆形成以及迁移能力的影响,NOD-SCID小鼠皮下成瘤实验检测过表达VASH1对SW620细胞移植瘤的体内生长和肺转移的影响。结果:成功构建过表达VASH1的SW480和SW620细胞。体外实验表明,与对照组相比,过表达VASH1的结直肠癌细胞的微血管形成能力、增殖能力、克隆形成能力以及迁移能力均显著降低(均P<0.05)。体内实验表明,与对照组相比,过表达VASH1的SW620细胞NOD-SCID小鼠皮下移植瘤的生长速度以及肺转移能力也明显降低(均P<0.05)。结论:过表达VASH1能够抑制人结直肠癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 结直肠癌 血管生成抑制因子1 微血管形成 增殖 转移

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融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用 被引量：1

9

作者 宗英 王梁华 +4 位作者 孙铭娟 董晓毅 王燕 陆国才 焦炳华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期336-341,共6页

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL... 目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。 展开更多

关键词 高分子量激肽原 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 血管生成抑制因子 胰腺肿瘤细胞

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腺病毒介导的重组Tum5基因对生理状态下脐静脉血管内皮细胞生物学行为的抑制作用 被引量：1

10

作者 贾育蓉 杨伟 +2 位作者 张红 张琰 孙靖 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期677-682,共6页

背景肿瘤抑素是迄今发现活性最强的内源性血管生成抑制因子，对病理性新生血管形成有明显抑制作用。Tum5片段为肿瘤抑素的抗血管生成活性片断。目的研究腺病毒介导的Tum5重组基因过表达对生理状态下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增生、迁... 背景肿瘤抑素是迄今发现活性最强的内源性血管生成抑制因子，对病理性新生血管形成有明显抑制作用。Tum5片段为肿瘤抑素的抗血管生成活性片断。目的研究腺病毒介导的Tum5重组基因过表达对生理状态下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增生、迁移及管腔形成的影响。方法构建表达绿色荧光蛋白的空载体腺病毒（rAd—GFP）和携带重组几m5基因的腺病毒载体（rAd—Tum5）。将HUVECs分为正常对照组、空载体组（rAd-GFP组）和Tum5基因组（rAd-GFP—Tum5组）。将rAd—GFP和rAd—Tum5病毒颗粒（1×10^10／m1）各20μl分别加入rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组培养液以感染培养的细胞48h，倒置荧光显微镜下观察各组细胞中GFP的表达，并计算病毒的感染效率；采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测各组细胞在波长为450nm处的吸光度（A）值并计算细胞增生率；采用Transwell小室实验测定各组的迁移细胞数目；采用基质胶（Matrigel）实验检测各组细胞的管腔形成数；采用人血管内皮生长因子（VEGF）ELISA试剂盒检测细胞感染后24、48和72h各组细胞培养上清液中VEGF质量浓度。结果倒置荧光显微镜下可见rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组HUVECs中呈绿色荧光，rAd—GFP组和tad—GFP—Tum5组的感染效率分别为55．13％和50．31％。细胞感染后24h和48h，正常对照组、rAd—GFP组和rAd-GFP—Tum5组细胞增生率比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）；细胞感染后72h，rAd-GFP—Tum5组细胞增生率明显低于正常对照组和rAd—GFP组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。细胞感染后48h，正常对照组、rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组迁移细胞数分别为（2260．25±930．44）、（2370．00±441．06）和（723．75±363．80）个，总体比较差异有统计学意义（F=8．524，P=0．008），rAd—GFP—Tum5组迁移细胞数量较正常对照组和rAd—GFP组均明显减少，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。正常对照组、rAd—GFP组和rAd-GFP—Tum5组平均每张图片中管腔形成数目分别为（95．67±5．86）、（88．00±4．58）和（20．67±3．51）个，总体比较差异有统计学意义（F=226．498，P〈0．01），其中rAd—GFP—Tum5组细胞管腔形成数量较正常对照组和rAd—GFP组明显减少，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。细胞感染后24、48和72h，各组细胞培养上清液中VEGF蛋白质量浓度总体比较差异均有统计学意义（F分组 =73．260，P〈0．01；F时间=73．477，P〈0．01）；其中感染后48h和72h，rAd—GFP-Tum5组VEGF质量浓度均明显低于rAd—GFP组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论腺病毒介导的重组Tum5基因的过表达可抑制生理状态下HUVECs的增生、迁移及管腔形成，这可能与Tum5下调VEGF在细胞上清液中的含量有关。 展开更多

关键词 肿瘤抑素 血管生成抑制因子 重组蛋白/药理 血管内皮细胞 增生 迁移 管腔形成 人

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血管抑素作用机制的研究进展

11

作者 刘志刚 陈芳育 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第11期1230-1232,共3页

肿瘤和血管生成的关系是较为密切的。1971年Folkman首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的观点。血管生成（Angiogenesis），即是指从已存在的血管上芽生出新的毛细血管的过程。1996年Hanahan和Folkman提出了血管生成切换的概念，认为... 肿瘤和血管生成的关系是较为密切的。1971年Folkman首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的观点。血管生成（Angiogenesis），即是指从已存在的血管上芽生出新的毛细血管的过程。1996年Hanahan和Folkman提出了血管生成切换的概念，认为血管生成因子（Angiogenic factors）和血管生成抑制因子（Angiostatic factors）共同调控血管生成。对于某一特定的解剖部位而言， 展开更多

关键词 血管抑素 血管生成因子 血管生成抑制因子 肿瘤生长 毛细血管 解剖部位

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人纤溶酶原饼环区5基因的原核表达及活性测定 被引量：6

12

作者 范彬 张英起 +4 位作者 颜真 赵宁 陈长生 药立波 苏成芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期710-714,共5页

人纤溶酶原饼环区 5 (hPgnK5 )是新的血管生成抑制因子 .PCR法改造hPgnK5基因 ,所得hPgnK5基因包括编码人纤溶酶原C4 62 到P54 4共 83个氨基酸残基 ,而且在 5′ ,3′分别引入了EcoRⅠ和BamHⅠ位点 .以pThiohisA构建hPgnK5基因原核表达载... 人纤溶酶原饼环区 5 (hPgnK5 )是新的血管生成抑制因子 .PCR法改造hPgnK5基因 ,所得hPgnK5基因包括编码人纤溶酶原C4 62 到P54 4共 83个氨基酸残基 ,而且在 5′ ,3′分别引入了EcoRⅠ和BamHⅠ位点 .以pThiohisA构建hPgnK5基因原核表达载体 ,在大肠杆菌TOP10中表达该蛋白 .通过柱层析法获得hPgnK5纯化蛋白 .免疫印迹反应表明该蛋白具有hPgnK5免疫活性 .体外实验表明 ,该蛋白具有抑制血管内皮细胞增殖活性 . 展开更多

关键词 人纤溶酶原饼环区5 血管生成抑制因子 生物活性 基因表达

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人vasostatin的克隆、表达、纯化及活性检测 被引量：4

13

作者 李永红 王军志 +1 位作者 饶春明 张翊 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期447-452,共6页

从成人肝脏cDNA文库中 ,PCR扩增得到人vasostatin基因编码区序列 ,将此序列插入原核表达载体pQE3 0进行表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)测定表明产物以包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白量的 5 0 %以上 .包涵体洗涤后溶于 8m... 从成人肝脏cDNA文库中 ,PCR扩增得到人vasostatin基因编码区序列 ,将此序列插入原核表达载体pQE3 0进行表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)测定表明产物以包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白量的 5 0 %以上 .包涵体洗涤后溶于 8mol/L尿素溶液 ,在变性条件下通过镍 氨三乙酸 (Ni NTA)金属螯合亲和层析柱进行纯化后 ,再经透析进行复性 .N端氨基酸序列、分子质量、等电点等理化指标的测定结果与理论值相符 .用内皮细胞增殖试验、内皮细胞迁移试验以及鸡胚尿囊膜血管生成试验等方法进行活性检测 ,证实复性的表达产物具有抑制内皮细胞增殖和迁移。 展开更多

关键词 人vosostatin基因 克隆 表达 纯化 活性检测 生物学活性 抗癌药物 血管生成抑制因子

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钙网蛋白122～180片段基因克隆、表达和活性分析 被引量：3

14

作者 陈宏 张添元 +1 位作者 罗进贤 胡志上 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期267-272,共6页

钙网蛋白是高等动物细胞中普遍存在的一种钙结合蛋白 ,近年发现它及其N端 1～ 180位氨基酸能抑制内皮细胞生长和血管生成 .为了寻找高效和小分子质量的血管生成抑制因子 ,用PCR技术扩增出钙网蛋白N端12 2～ 180位氨基酸的DNA序列 ,克隆... 钙网蛋白是高等动物细胞中普遍存在的一种钙结合蛋白 ,近年发现它及其N端 1～ 180位氨基酸能抑制内皮细胞生长和血管生成 .为了寻找高效和小分子质量的血管生成抑制因子 ,用PCR技术扩增出钙网蛋白N端12 2～ 180位氨基酸的DNA序列 ,克隆进原核表达载体pET 3c ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后 ,该片段以包涵体形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 35 4 % .包涵体经变性溶解、复性和初步纯化后 ,纯化产物可以抑制人脐静脉内皮细胞的生长 ,鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成和小鼠原位黑色素瘤的生长 . 展开更多

关键词 钙网蛋白 基因表达 内皮细胞 肿瘤 生长 血管 血管生成抑制因子 抗药性 毒性

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人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定 被引量：1

15

作者 杨健 王跃祥 +3 位作者 官孝群 马春姑 陶贤梅 宋后燕 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期409-413,F002,共6页

目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片... 目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果　构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论　应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。 展开更多

关键词 乳腺癌 基因治疗 重组新生血管生成抑制因子K5 基因表达 真核表达载体 构建 活性鉴定

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海洋低温溶菌酶抗肿瘤活性的初步研究 被引量：4

16

作者 张云波 孙谧 +3 位作者 蔡勤 王跃军 洪义国 郝建华 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第3期24-31,共8页

通过观察海洋低温溶菌酶对体外培养细胞株增殖的影响、对角膜诱生血管的影响、对小鼠肉瘤 S180 (实体型 )及对小鼠肝癌 HAC(实体型 )的抑制作用 ,探讨海洋低温溶菌酶抑制肿瘤生长活性。结果表明 ,该酶与蛋清溶菌酶在抑瘤作用机制上有很... 通过观察海洋低温溶菌酶对体外培养细胞株增殖的影响、对角膜诱生血管的影响、对小鼠肉瘤 S180 (实体型 )及对小鼠肝癌 HAC(实体型 )的抑制作用 ,探讨海洋低温溶菌酶抑制肿瘤生长活性。结果表明 ,该酶与蛋清溶菌酶在抑瘤作用机制上有很大区别 ,海洋低温溶菌酶具有血管生成抑制因子的活性 。 展开更多

关键词 海洋杆菌 低温溶菌酶 血管生成抑制因子 抗肿瘤活性

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鲨鱼软骨生理活性成分

17

作者 奇勇 《现代渔业信息》 2006年第11期30-30,共1页

根据目前的有关报道，鲨鱼软骨中含有多种抗肿瘤活性成分，主要包括以下三种：血管生成抑制因子；2、抗肿瘤因子；3、抗入侵因子。鲨鱼生理活性成分，目前主要应用在五个方面：

关键词 生理活性成分 鲨鱼软骨 血管生成抑制因子 抗肿瘤

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