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利拉鲁肽对老年2型糖尿病肥胖患者血清趋化素、血清成纤维细胞生长因子-21及内脂素水平影响分析 被引量：4
1
作者 刘凌琳 章陈晨 熊玮 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2018年第5期119-123,共5页
目的分析利拉鲁肽对老年2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)肥胖患者血清趋化素、血清成纤维细胞生长因子-21(serum fibroblast growth factor-21,FGF-21)及内脂素水平的影响。方法选取2016年4月至2017年5月本院收治的84例口服... 目的分析利拉鲁肽对老年2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)肥胖患者血清趋化素、血清成纤维细胞生长因子-21(serum fibroblast growth factor-21,FGF-21)及内脂素水平的影响。方法选取2016年4月至2017年5月本院收治的84例口服降糖药治疗效果不佳的老年T2DM肥胖患者纳入治疗组,同时选取年龄匹配的健康志愿者及单纯T2DM患者各84例分别纳入对照组和单纯T2DM组,记录三组研究对象治疗前及治疗组患者采用利拉鲁肽治疗20周后体重、血压、腰围、臀围等指标,计算体质指数(body mass index,BMI)、腰臀比、血清趋化素、FGF-21、内脂素水平变化,分析血清趋化素、FGF-21、内脂素水平与代谢指标之间的相关性。结果治疗组患者治疗前体重、腰围、臀围、BMI、腰臀比、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、收缩压、舒张压、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,Hb A1c)、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment insulin resistance index,HOMA-IR)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、血清趋化素、FGF-21及内脂素水平均显著高于对照组和单纯T2DM组(P<0.05),胰岛β细胞功能(Homeostasis model assessment-IR-β,HOMA-β)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平均显著低于对照组和单纯T2DM组(P<0.05)。治疗组患者治疗后体重、BMI、腰围、腰臀比、FPG、SBP、DBP、Hb A1c、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、血清趋化素、内脂素及FGF-21水平均显著低于治疗前(P<0.05),HOMA-β和HDL-C水平均显著高于治疗前(P<0.05),治疗前后臀围变化不明显(P>0.05)。治疗组患者血清趋化素、FGF-21、内脂素水平与、FPG、Hb A1c、HOMA-IR及TG水平均呈正相关(P<0.05)。HOMA-IR和TG为影响血清趋化素、FGF-21、内脂素的独立危险因素。结论利拉鲁肽能够降低老年T2DM肥胖患者血清趋化素、FGF-21及内脂素水平,有效控制血糖水平,改善肥胖患者内脏脂肪堆积。 展开更多
关键词 2型糖尿病 血清趋化素 血清成纤维细胞生长因子-21 内脂素 利拉鲁肽
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鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用 被引量：18
2
作者 姜媛媛 刘铭瑶 +3 位作者 任桂萍 王文飞 刘晓民 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期157-164,共8页
成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导... 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 糖尿病 糖代谢 3T3-L1
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2型糖尿病肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21水平及其临床价值研究 被引量：11
3
作者 张楠 姜天 +2 位作者 孙莉 代芳 章秋 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2018年第5期521-525,共5页
目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2D... 目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2DM患者213例,根据BMI分为T2DM肥胖超重组(BMI≥24.0 kg/m^2,127例)和T2DM非肥胖超重组(BMI<24.0 kg/m^2,86例),另选取同期本院体检健康者为健康对照组(114例)。记录受试者血压、BMI、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR及FGF21水平。结果各组舒张压、体质量、BMI、TG、HDL-C、LDL-C、Hb A1c、FBG、FINS、HOMA-IR比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM非肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组,T2DM肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组、T2DM非肥胖超重组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,T2DM肥胖超重组FGF21水平与BMI、FINS、HOMA-IR呈正相关(rs=0.312、0.311、0.243,P<0.05)。多元线性回归分析显示,BMI[b=3.654,95%CI(1.543,5.764)]、FINS[b=1.310,95%CI(0.537,2.082)]是T2DM肥胖超重组FGF21水平的影响因素(P<0.05)。结论 T2DM肥胖或超重患者血清FGF21水平升高,且与BMI、胰岛素抵抗等因素有关;FGF21可能用于预测糖尿病、肥胖的发生,并成为治疗糖尿病、肥胖的新一代药物。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 肥胖症 成纤维细胞生长因子21 体脂肪率 胰岛素抵抗
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人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化 被引量：7
4
作者 王会岩 田海山 +6 位作者 赵宏鑫 张耀方 万晓姗 邵明龙 杨苹 肖业臣 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期81-85,共5页
目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接... 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 pET-20b 小泛素相关修饰蛋白质类
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成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响 被引量：3
5
作者 刘敏 孔祥鑫 +3 位作者 杨苹 陈玉斌 李校堃 王会岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期477-481,I0001,共6页
目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离... 目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达。结果:MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高(P<0.01),CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5mg.L-1FGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低(P<0.01),CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论:FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 非酒精性脂肪肝病 医用脂肪乳注射液
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MicroRNA-99b-5p通过抑制成纤维细胞生长因子21表达促进心肌细胞肥大 被引量：4
6
作者 陈丽文 郭晶 +5 位作者 陈泽润 朱杰宁 徐金东 郭惠明 单志新 王晟 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期192-202,共11页
【目的】研究微小RNA microRNA-99b-5p(miR-99b-5p)对心肌细胞肥大表型的调节作用及机制。【方法】实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人心肌组织(包括健康对照者、心力衰竭患者心肌组织)以及横向主动脉缩窄(TAC)手术小鼠心肌中miR-99b-5p的... 【目的】研究微小RNA microRNA-99b-5p(miR-99b-5p)对心肌细胞肥大表型的调节作用及机制。【方法】实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人心肌组织(包括健康对照者、心力衰竭患者心肌组织)以及横向主动脉缩窄(TAC)手术小鼠心肌中miR-99b-5p的表达水平。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理原代乳小鼠心肌细胞(NMVCs)后,利用鬼笔环肽染色呈现心肌细胞大小,RT-qPCR检测miR-99b-5p表达水平。利用RT-qPCR及蛋白质免疫印迹法检测转染miR-99b-5p mimic对NMVCs中肥大相关基因及成纤维细胞生长因子21(Fgf21)表达的影响。双萤光素酶报告实验验证miR-99b-5p与Fgf21基因3′端非翻译区(3’UTR)的结合作用。利用腺病毒介导在NMVCs中过表达Fgf21及超氧化物歧化酶2(Sod2),并利用小干扰RNA(siRNA)敲低NMVCs中Fgf21和Sod2表达,研究Fgf21/Sod2轴是否介导miR-99b-5p对心肌细胞肥大表型的调节作用。【结果】MiR-99b-5p在心衰患者心肌组织、TAC术后的小鼠心肌组织及在AngⅡ处理的心肌细胞中均表达上调(P<0.01)。MiR-99b-5p可促进NMVCs中与肥大相关基因的表达(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证实miR-99b-5p与Fgf21基因的3’UTR存在结合作用,并且miR 99b-5p可抑制Fgf21及其下游基因Sod2表达(P<0.05)。在NMVCs中过表达Fgf21或Sod2均可有效逆转miR 99b-5p的促心肌细胞肥大作用(P<0.05)。【结论】MiR-99b-5p在肥厚心肌中表达增加,并通过Fgf21/Sod2轴发挥促进心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌细胞肥大 微小RNA-99-5p 成纤维细胞生长因子21
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肥胖合并黑棘皮病患者胰岛素分泌特征与血清成纤维细胞生长因子21的相关性 被引量：3
7
作者 黄玥晔 王兴纯 +2 位作者 陈佳奇 李妍 曲伸 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期167-172,共6页
目的探讨肥胖合并黑棘皮病患者中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与胰岛素分泌特征的关系。方法选取肥胖合并黑棘皮病患者38例和单纯性肥胖患者35例,以及年龄匹配的正常对照组20例。分别检测各组炎症指标(游离脂肪酸、尿酸、C-... 目的探讨肥胖合并黑棘皮病患者中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与胰岛素分泌特征的关系。方法选取肥胖合并黑棘皮病患者38例和单纯性肥胖患者35例,以及年龄匹配的正常对照组20例。分别检测各组炎症指标(游离脂肪酸、尿酸、C-反应蛋白)、糖脂代谢指标和胰岛素水平,并采用ELISA法测定血清FGF21水平。结果肥胖合并黑棘皮病患者组表现为高胰岛素血症和胰岛素抵抗,血清FGF21、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于其他两组(P<0.05,P<0.01),胰岛素作用指数(IAI)低于其他两组(P<0.01)。相关性分析显示肥胖患者血清FGF21水平与空腹胰岛素及HOMA-IR正相关(r=0.410,P=0.009;r=0.350,P=0.027),与IAI和体脂率呈负相关(r=-0.615,P<0.001;r=-0.554,P<0.001)。Logistic回归分析显示尿酸水平升高和FGF21升高是肥胖患者合并黑棘皮病的独立危险因素(P=0.008,P=0.020)。结论肥胖合并黑棘皮病患者在临床上表现为高胰岛素血症和高FGF21水平。FGF21升高与胰岛素抵抗明显相关,而黑棘皮病患者的糖耐量受损较无黑棘皮病的肥胖症患者低,提示FGF21的升高可能对糖代谢有一定保护作用。尿酸和FGF21升高是肥胖症患者合并黑棘皮病的独立危险因素。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 黑棘皮病 肥胖症 尿酸 胰岛素抵抗
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成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化 被引量：2
8
作者 万晓珊 赵宏鑫 +4 位作者 张耀方 张海淼 邵明龙 王会岩 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期491-495,共5页
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变... 目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 突变体 SUMO融合表达 纯化
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人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建 被引量：2
9
作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 薛萍 刘秀明 王艳芳 李营 李洪志 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第8期190-196,共7页
【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选... 【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。 展开更多
关键词 拟南芥 成纤维细胞生长因子-21 油体表达 磷酸甘露糖异构酶
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农杆菌介导的成纤维细胞生长因子-21基因转化甘蓝型油菜研究 被引量：1
10
作者 李营 庞实锋 +7 位作者 薛萍 刘秀明 付宏岐 李洪志 熊丽东 潘国庆 李海燕 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第8期124-130,共7页
【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过... 【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌LBA4404,叶盘法转化甘蓝型油菜"沪油15",并对转基因油菜进行PCR检测和Southern blot分析,最后对FGF21蛋白在转基因油菜种子中的表达的进行了Western blot分析。【结果】合成了FGF21全长基因,成功构建了含FGF21基因的植物双元表达载体p1390yoFGF21,并建立了油菜遗传转化体系。通过油菜遗传转化获得2株转基因植株,PCR扩增和Southern blot检测证实,重组FGF21基因已整合到油菜基因组中;Western blot分析检测显示,FGF21在转基因油菜种子蛋白中具有一定水平的表达量,并具有良好的抗原性。【结论】FGF21基因被成功整合到油菜基因组中,收获的T0代种子蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 甘蓝型油菜 生物反应器 转基因 农杆菌
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血清全段成纤维细胞生长因子-23在2型糖尿病肾病不同分期中的变化 被引量：3
11
作者 张宝玉 庞倩倩 +5 位作者 姜艳 王鸥 李梅 邢小平 赵冬 夏维波 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2015年第2期126-131,共6页
目的研究2型糖尿病肾病（DN）不同临床分期患者血清全段成纤维细胞生长因子-23（iFGF-23）水平的变化,探讨2型糖尿病患者血清iFGF-23水平、尿微量白蛋白排泄率（UAER）和肾功能变化的相关性。方法选取2型糖尿病患者共119例,根据尿微量... 目的研究2型糖尿病肾病（DN）不同临床分期患者血清全段成纤维细胞生长因子-23（iFGF-23）水平的变化,探讨2型糖尿病患者血清iFGF-23水平、尿微量白蛋白排泄率（UAER）和肾功能变化的相关性。方法选取2型糖尿病患者共119例,根据尿微量白蛋白排泄率分为4组：尿微量白蛋白排泄率正常组（DM1组,8°UAER〈20μg/min,血清肌酐水平正常）30例;微量白蛋白尿组（DM2组,8°UAER20~200μg/min,血清肌酐水平正常）30例;临床蛋白尿组（DM3组,8°UAER〉200μg/min,血清肌酐水平正常）28例;尿毒症血液透析组（DM4组）31例。正常对照组（N组）29例。收集受试者基本资料,空腹静脉采血测血糖、血脂,肝、肾功能,全段甲状旁腺激素（iPTH）,血清iFGF-23,DM1组、DM2组、DM3组留取8h尿检测8°UAER。所有资料应用SPSS22.0软件包进行统计学分析。结果DM4组血清iFGF-23为558.93（168.65~2333.5）pg/mL水平显著高于其他组（P〈0.001）,但其他各组间差异无统计学意义。血清iFGF-23水平和肾小球滤过率（eGFR）呈负相关,与血清肌酐（Scr）,尿素氮（BUN）,葡萄糖（GLU）,血磷（P）,碱性磷酸酶（ALP）,iPTH呈正相关。结论糖尿病肾病晚期血清iFGF-23水平显著升高,血清iFGF-23水平与血磷、血清肌酐、尿素氮和iPTH呈正相关,与eGFR水平显著负相关。提示iFGF-23不能作为DN早期的生化标志物。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 2型糖尿病 血清全段成纤维细胞生长因子-23
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聚乙二醇修饰的成纤维细胞生长因子-21的降血糖作用
12
作者 叶贤龙 赵景壮 +4 位作者 任桂萍 于丹 刘铭瑶 于引航 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第4期374-385,共12页
成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的一员.现有大量研究表明,FGF-21是除胰岛素以外的一种新的血糖调节因子,有望成为治疗2型糖尿病的新型药物.然而,FGF-21在动物体内稳定性较差,半衰期较短,严重影响了其在临床上的应用.为解决这... 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的一员.现有大量研究表明,FGF-21是除胰岛素以外的一种新的血糖调节因子,有望成为治疗2型糖尿病的新型药物.然而,FGF-21在动物体内稳定性较差,半衰期较短,严重影响了其在临床上的应用.为解决这些问题,本实验采用分子质量为20 ku的单甲氧基聚乙二醇-丙醛(mPEG-ALD)对鼠源FGF-21(mFGF-21)进行N端定点修饰,以改善mFGF-21的性质(如提高体内半衰期、降低免疫原性等).本文研究了反应pH、反应时间、蛋白质浓度及反应物之间的质量比对mFGF-21与聚乙二醇(PEG)合成反应的影响.采用Capto Q阴离子交换层析或Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化聚乙二醇化mFGF-21(PEG-mFGF-21),并最终确定了mFGF-21聚乙二醇修饰的反应条件和分离PEG-mFGF-21的纯化工艺.随后分别进行了PEG-mFGF-21的理化性质(大小、纯度和体外稳定性)、免疫原性、体内半衰期、体外葡萄糖吸收活性及体内降糖活性的研究.体外稳定性实验结果显示,mFGF-21经PEG修饰后温度稳定性和抗蛋白酶水解稳定性都显著提高.间接ELISA方法检测血清中mFGF-21抗体水平及目标蛋白含量的结果表明,PEG修饰mFGF-21可明显降低其免疫原性,延长体内半衰期.HepG2细胞的葡萄糖吸收实验结果发现,PEG-mFGF-21的细胞活性并没有下降,反而随着刺激细胞时间的延长,经PEG-mFGF-21刺激的细胞葡萄糖吸收显著高于mFGF-21刺激的细胞葡萄糖吸收.2型糖尿病db/db小鼠短期血糖调控实验结果表明,mFGF-21降糖速度快于PEG-mFGF-21,但其持续时间较PEG-mFGF-21短;长期血糖调控实验结果显示,PEG-mFGF-21长期降糖效果优于mFGF-21,作用持续时间长,并且PEG-mFGF-21在停药后控制血糖的能力也高于mFGF-21.综上所述可知,mFGF-21的PEG修饰在不影响其体外生物活性的前提下,能够提高mFGF-21的物理稳定性和抵抗蛋白酶水解的能力、降低免疫原性、增加体内稳定性、延长mFGF-21在动物体内降血糖作用的效果和时间.本实验为FGF-21化学修饰提供了重要的技术平台,对以后FGF-21的临床应用具有非常重要的意义. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21) 聚乙二醇化 分离纯化 稳定性 免疫原性 2型糖尿病 葡萄糖吸收
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乳糖诱导成纤维细胞生长因子-21在大肠杆菌中的表达
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作者 王会岩 尹彬彬 +5 位作者 明盛金 李俊 宋莹 王蕾 尹维笳 蔡建辉 《安徽农业科学》 CAS 2012年第30期14636-14638,共3页
[目的]研究用乳糖作为诱导剂诱导成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor 21,FGF21)基因重组蛋白的表达,以探讨其工程化生产的可能性。[方法]对影响重组表达产物的乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度等进行比较,并以I... [目的]研究用乳糖作为诱导剂诱导成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor 21,FGF21)基因重组蛋白的表达,以探讨其工程化生产的可能性。[方法]对影响重组表达产物的乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度等进行比较,并以IPTG诱导作为对照,确定最佳的乳糖诱导条件。[结果]对于重组目的蛋白,乳糖可以起到很好的诱导效果,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。其最佳表达条件为:在A600为0.8～1.0时,加入乳糖至终浓度为0.5 g/L,在35℃下诱导6 h。[结论]乳糖可诱导FGF21基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了试验数据和借鉴。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 乳糖诱导 大肠杆菌
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人成纤维细胞生长因子-21单克隆抗体的制备及抗原表位的确定 被引量：2
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作者 郝智超 徐黎明 +3 位作者 白银 王琪 王文飞 李德山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期834-837,共4页
目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子（hFGF）-21单克隆抗体（mAb）, 通过细菌展示确定该mAb的抗原表位。方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原, 间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株; 用FITC标记该mAb, 并克隆hFGF-21的不同... 目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子（hFGF）-21单克隆抗体（mAb）, 通过细菌展示确定该mAb的抗原表位。方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原, 间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株; 用FITC标记该mAb, 并克隆hFGF-21的不同片段到展示载体Apex上, 通过流式细胞仪筛选其抗原表位。结果 成功筛选出1株抗hFGF-21抗体的细胞株, 其分泌抗体重链的亚型为IgG 2b, 轻链为Kappa链; 该杂交瘤细胞株腹水的效价为1∶4.096×10^6; 传30代及液氮中保存3个月, 该细胞株能稳定分泌抗hFGF-21 mAb, 且效价稳定; Western blot法检测证明该抗体与人FGF-21有很好的特异性; 该mAb与小鼠FGF-21有交叉反应; 通过流式细胞仪对抗原表位的筛选, 该mAb可与hFGF-21下游的第107-121个氨基酸反应。结论 成功的制备出特异性、高稳定性的小鼠抗hFGF-21 mAb, 确定了该mAb的抗原表位在第107～121位氨基酸。 展开更多
关键词 人成纤维细胞生长因子-21 单克隆抗体 细菌展示 流式细胞术
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重组人成纤维细胞生长因子-20的原核表达、生物学活性鉴定及抗血清制备 被引量：1
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作者 姜治国 殷正丰 +3 位作者 钱海华 康晓燕 罗祥基 李瑾 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期950-952,共3页
目的：表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20（rhFGF-20），并制备rhFGF-20抗血清。方法：应用RT—PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA，将其克隆到pET24a中，在大肠杆菌中诱导表达，经NTA—Ni^2＋-琼脂糖亲和层析... 目的：表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20（rhFGF-20），并制备rhFGF-20抗血清。方法：应用RT—PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA，将其克隆到pET24a中，在大肠杆菌中诱导表达，经NTA—Ni^2＋-琼脂糖亲和层析纯化，应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞增殖试验进行分析鉴定，并免疫新西兰雄性白兔制备多克隆抗体，免疫双扩散法测定抗体效价。结果：构建的pET24aFGF-20能在大肠杆菌中高表达；诱导表达的rhFGF-20蛋白主要存在于包含体中，经包含体溶解、Ni^2＋-NTAHis—Bind Resins亲和层析后，纯化产物呈单一条带；细胞增殖试验显示其能促进成纤维细胞生长，并具有剂量依赖性（浓度为50～5000ng／ml）；制备的抗血清效价为1：32，可与hFGF20产生免疫反应。结论：大肠杆菌表达的rhFGF-20蛋白具有刺激成纤维细胞增殖的活性，制备的抗血清具有特异性。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-20 原核表达 免疫血清
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血清成纤维细胞生长因子21水平与糖尿病周围神经病变的相关性研究 被引量：14
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作者 李勇 齐丽翠 +2 位作者 张然 杨琦雯 陈树春 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2021年第33期4229-4233,共5页
背景成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种多效内分泌代谢调节因子,可通过抑制氧化应激和炎性反应促进小鼠周围神经轴突和髓鞘的再生。然而有关人体中FGF21与糖尿病周围神经病变(DPN)的相关性研究甚少,且作用机制尚不明确。目的探讨血清FG... 背景成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一种多效内分泌代谢调节因子,可通过抑制氧化应激和炎性反应促进小鼠周围神经轴突和髓鞘的再生。然而有关人体中FGF21与糖尿病周围神经病变(DPN)的相关性研究甚少,且作用机制尚不明确。目的探讨血清FGF21水平与DPN的相关性。方法选取2019年11月至2020年11月于河北省人民医院就诊的200例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,根据是否合并DPN将其分为糖尿病周围神经病变组(DPN组)109例和非糖尿病周围神经病变组(NDPN组)91例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组患者血清FGF21水平并收集其临床资料。采用Pearson相关分析和Spearman秩相关分析探究血清FGF21水平与各指标的相关性,二元Logistic回归分析探究T2DM患者发生DPN的影响因素。结果 DPN组血清FGF21水平高于NDPN组(P<0.05)。相关性分析结果显示,T2DM患者FGF21与空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关(r=0.184、r=0.156、rs=0.164、r=0.175,P<0.05),与超氧化物歧化酶(SOD)呈负相关(r=-0.189,P<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,糖尿病病程〔OR=1.499,95%CI(1.085,1.935)〕、MDA〔OR=1.242,95%CI(1.062,1.452)〕、TNF-α〔OR=1.036,95%CI(1.012,1.060)〕和FGF21〔OR=1.007,95%CI(1.002,1.012)〕是T2DM患者发生DPN的独立影响因素(P<0.05)。结论 FGF21是T2DM患者发生DPN的独立影响因素,其可通过调节糖代谢、抑制氧化应激和炎性反应对DPN的发生产生影响。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 糖尿病周围神经病变 成纤维细胞生长因子21 超氧化物歧化酶 丙二醛 肿瘤坏死因子Α
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碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制因子-1在肺癌患者血清中的水平差异及其相关性研究 被引量：2
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作者 赵真庆 王永勇 +1 位作者 戴磊 陈铭伍 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2014年第12期76-79,共4页
目的探讨肺癌患者血清中碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的水平与肿瘤特征的相关性。方法回顾性分析本院肿瘤内科2010年8月至2013年3月收治的42例肺癌患者(肺癌组)的临床资... 目的探讨肺癌患者血清中碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的水平与肿瘤特征的相关性。方法回顾性分析本院肿瘤内科2010年8月至2013年3月收治的42例肺癌患者(肺癌组)的临床资料,选择同期体检健康者60例作为对照组。观察并比较两组研究对象的b FGF、MMP-9、TIMP-1水平。分析肺癌患者血清b FGF、MMP-9、TIMP-1水平与肿瘤特征间的相关性。结果肺癌组患者血清b FGF、MMP-9、TIMP-1水平均显著高于对照组(P<0.05)。小细胞肺癌患者与非小细胞癌患者血清b FGF、MMP-9、TIMP-1水平比较差异均无显著性(P>0.05)。Ⅰ和Ⅱ期肺癌患者b FGF、MMP-9、TIMP-1水平显著低于Ⅲ和Ⅳ期患者(P<0.05)。淋巴结转移N1和N2期肺癌患者b FGF、MMP-9、TIMP-1水平显著低于N3期患者(P<0.05)。肺癌组患者血清b FGF与MMP-9水平具有显著相关性(r=0.552,P=0.000),b FGF与TIMP-1水平无相关性(r=0.074,P=0.640),TIMP-1与MMP-9水平具有显著相关性(r=0.514,P=0.001)。结论肺癌患者的血清b FGF、MMP-9、TIMP-1水平高于正常人群,提示其可作为肺癌血清肿瘤标志物之一,对肺癌的诊断有一定帮助。 展开更多
关键词 肺癌 碱性成纤维细胞生长因子 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶抑制因子-1
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成纤维细胞生长因子21对1型糖尿病动物模型的肝糖代谢影响及机制研究 被引量：15
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作者 孙国鹏 叶贤龙 +2 位作者 任桂萍 李晋南 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第10期953-960,共8页
成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改... 成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改良传统造模方法,诱导小鼠缓慢产生糖耐量异常,研究FGF-21对此类模型的糖代谢影响及肝糖代谢机制.通过检测FGF-21短期注射和长期注射后模型动物血糖的变化,研究FGF-21在模型动物上对血糖的调控效果.采用实时定量PCR检测FGF-21对模型动物肝脏中葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、4 mRNA的表达影响.利用蒽酮法检测模型动物肝脏中糖原合成量.实验结果显示,FGF-21能够调节1型糖尿病动物的血糖水平,并呈剂量依赖性.同时,首次在1型糖尿病动物模型上证实了低剂量FGF-21(0.125 mg/kg)与胰岛素的协同作用效果优于相同剂量FGF-21和胰岛素单独注射的效果.治疗结果表明,FGF-21能够维持1型糖尿病动物模型血糖在正常范围,效果优于胰岛素.实时定量PCR结果发现,与胰岛素上调GLUT4 mRNA表达量不同的是,FGF-21作用动物模型8周后,GLUT1 mRNA表达量显著提高,长期的FGF-21与胰岛素协同注射使GLUT1、4 mRNA表达量同时显著提高.长期FGF-21与胰岛素协同注射组和高剂量FGF-21注射均可显著提高模型动物肝糖原的合成.结果表明,FGF-21促进动物模型糖代谢机制与增加GLUT1表达、增加糖原合成作用有关.为临床应用FGF-21治疗1型糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了理论依据. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 迟发性1型糖尿病动物模型 糖代谢 胰岛素协同作用 糖尿病治疗药物
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碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1复合骨髓间充质干细胞对大鼠退变椎间盘的修复作用 被引量：16
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作者 江潮 李大鹏 +4 位作者 张志坚 束浩明 胡浪 李正南 黄永辉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期456-465,共10页
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)以温敏性壳聚糖(TCH)为载体对大鼠退变椎间盘的修复作用。方法针刺法建立SD大鼠椎间盘退变模型,4周后核磁共振下观察退变效果。体外培养B... 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)以温敏性壳聚糖(TCH)为载体对大鼠退变椎间盘的修复作用。方法针刺法建立SD大鼠椎间盘退变模型,4周后核磁共振下观察退变效果。体外培养BMSCs,并用含增强型绿色荧光蛋白的腺病毒转染使带有增强型绿色荧光蛋白基因,作荧光标记。将椎间盘退变的SD大鼠分成4组,实验组A组使用b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶移植入退变的椎间盘中,B组和C组分别使用BMSCs+TCH凝胶和b FGF+TGF-β1+TCH凝胶,对照组D组使用PBS缓冲液。继续培养4周后核磁共振观察各组椎间盘的修复情况。HE、Masson染色、组织病理学观察各组椎间盘结构。逆转录PCR,Western blot检测各组髓核蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9、Ⅰ型胶原的表达。结果移植注射的BMSCs能在椎间盘中生长,呈类髓核分化。核磁共振结果显示:A组髓核信号明显高于其他3组,B组高于C组,D组髓核信号最低,硬脊膜受压,脊髓呈串珠状改变,各组间Pfirrmann分级结果差异有统计学意义(P<0.05)。HE、Masson染色显示:A组椎间盘结构完整,髓核细胞数量优于其他3组,髓核和纤维环界限清楚,B组髓核数量多于C组,B组纤维环未见断裂,而C组可见断裂的纤维环,D组髓核细胞被杂乱的纤维组织取代。逆转录PCR、Western blot显示:A组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9的表达最高,B组优于C组,D组表达最低(P<0.05)。而Ⅰ型胶原的表达在4组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植的BMSCs在退变椎间盘中能够存活,呈类髓核分化。b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体对退变的椎间盘具有明显修复作用。BMSCs+TCH凝胶治疗退变椎间盘的效果优于b FGF+TGF-β1+TCH凝胶但低于b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 转化生长因子-Β1 骨髓间充质干细胞 温敏性壳聚糖 腺病毒 椎间盘退变
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骨形态发生蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子在异位和原位成骨中的作用 被引量：13
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作者 王磊 章燕 +2 位作者 游素兰 谭鸾君 黄远亮 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期420-424,共5页
目的通过骨髓基质细胞(BMSCs)的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通... 目的通过骨髓基质细胞(BMSCs)的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通过甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定细胞增殖水平,通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性观察细胞的分化情况。将BMSCs与多孔磷酸钙(CPC)分别在含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液中复合培养,制成复合材料,一部分植入裸鼠皮下,观察异位成骨情况,另一部分植入Beagle犬的种植体周围骨缺损区,经过荧光标记观察原位成骨情况。结果含有BMP-2+bFGF的培养液促进BMSCs增殖和分化的能力最强。异位成骨情况:BMP-2+bFGF组的成骨量较其他组明显增加,其新骨形成百分比为48.79%±11.31%,高于单一BMP-2组(30.71%±10.85%)和bFGF组(27.33%±9.67%)以及对照组(10.65%±6.05%)。原位成骨术后12周,BMP-2+bFGF组的矿化沉积率高于其他组,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论在促进成骨方面,BMP-2和bFGF共同作用优于单一因子。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 成骨
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