GTF-PAc融合防龋DNA疫苗的研究(Ⅰ)携带GLU基因片段的真核表达质粒pGLU的构建 被引量：6

1

作者 贾荣 樊明文 +3 位作者 边专 张平 陈智 杜民权 《口腔医学纵横》 CSCD 2001年第1期5-8,共4页

目的 :将变形链球菌葡糖基转移酶GTF I的编码葡聚糖结合区 (GLU)的序列克隆到真核载体 pCI中 ,为构建GTF PAc融合防龋DNA疫苗做准备。方法 :用PCR的方法扩增含gtfB基因的重组质粒 pYNB13的GLU区序列 ;将载体 pCI和GLU扩增片段分别酶切 ... 目的 :将变形链球菌葡糖基转移酶GTF I的编码葡聚糖结合区 (GLU)的序列克隆到真核载体 pCI中 ,为构建GTF PAc融合防龋DNA疫苗做准备。方法 :用PCR的方法扩增含gtfB基因的重组质粒 pYNB13的GLU区序列 ;将载体 pCI和GLU扩增片段分别酶切 ,体外连接 ,构建成真核表达质粒pGLU ,酶切电泳鉴定。 结果 :PCR获得了glu目的片段 ,质粒 pGLU含有 glu目的片段。 结论 :构建出了含有gtfB基因重要抗原决定簇区的真核表达质粒 展开更多

关键词 GTF基因 dna疫苗 GLU片段 龋齿 预防 GTF-PAC 真核表达质粒

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靶向融合防龋DNA疫苗研究（Ⅰ）-编码人CTLA4胞外区基因的质粒pGCTLA的构建 被引量：1

2

作者 樊明文 郭继华 +4 位作者 边专 贾荣 陈智 彭彬 范兵 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第3期228-228,共1页

关键词 靶向融合 防龋dna疫苗 基因编码 CTLA4胞外区基因 质粒pGCTLA 免疫效能

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用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定 被引量：3

3

作者 黄冬 陈普成 +4 位作者 刘兵 唐猛 柳金雄 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期257-261,共5页

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因... 为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。 展开更多

关键词 dna疫苗 双价表达质粒 EGFP

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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达基因疫苗的免疫对断奶仔猪某些代谢物浓度的影响 被引量：4

4

作者 舒邓群 陈荣达 +2 位作者 茆达干 吴志敏 杨利国 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期693-696,共4页

选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪，随机分为4组，每组10头，公母各半。其中1组为对照组。2～4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pCM—CSF＋pcS／2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度... 选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪，随机分为4组，每组10头，公母各半。其中1组为对照组。2～4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pCM—CSF＋pcS／2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度的影响。结果显示。对照组和pcS／2SS基因疫苗免疫组仔猪血浆葡萄糖浓度没有明显变化，pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组呈现下降的趋势。融合表达质粒pGM—CSF／SS的免疫则可提高血浆葡萄糖的浓度；血浆游离脂肪酸的分泌水平各免疫组间无明显差异；血浆尿素氮的浓度pGM—CSF／SS免疫组有上升的趋势。在第2周、4周和6周血浆尿素氮的浓度高于其它3个组（P〉0．05）。pcS／2SS免疫组则随免疫时间的延长而逐渐下降。对照组和pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组一直保持比较平稳的态势。结果表明。GM—CSF提高了SS基因疫苗的免疫效果。pGM—CSF／SS要优于pGM—CSF＋pcS／2SS共同免疫。 展开更多

关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 生长抑素 融合表达质粒dna疫苗 代谢物

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T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中的基因及蛋白表达 被引量：1

5

作者 张明智 李继昌 +2 位作者 姜祖光 陈长英 乐晓萍 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第3期280-283,共4页

目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为 pcDNA3．l组、pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．1/TCR Vβ8＋IL－2组、pcDNA3．l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧... 目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为 pcDNA3．l组、pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．1/TCR Vβ8＋IL－2组、pcDNA3．l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。接种疫苗后 5 d,用 RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达。接种疫苗后 7 d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达。结果:pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．l/TCR Vβ8＋IL－2组、pcDNA3．l/TCR Vβ8+CpG＋脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3．1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达。结论:T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物。 展开更多

关键词 T淋巴瘤 TCR 独特型 重组质粒 dna疫苗 基因表达 动物实验

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用于DNA疫苗的质粒大规模纯化研究进展

6

作者 汪洋 易力 王红宁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期51-53,共3页

关键词 质粒表达载体 dna疫苗 质粒dna 纯化 规模生产技术 转染细胞 基因克隆 动物体内

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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

7

作者 倪君丽 刘欣超 +7 位作者 孙栋 方肆云 王定爱 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 顾有方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5159-5172,共14页

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其... 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 多表位重组质粒 真核表达 dna疫苗

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表达H7N9AIVHA基因的DNA疫苗有望商品化应用

8

《中国家禽》 北大核心 2014年第14期69-69,共1页

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈华兰课题组根据A／Anhui／1／2013（H7N9）株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成，克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7，将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH... 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈华兰课题组根据A／Anhui／1／2013（H7N9）株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成，克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7，将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH7单次或加强免疫3周龄SPF鸡； 展开更多

关键词 dna疫苗 HA基因 商品化 真核表达重组质粒 中国农业科学院 应用 免疫保护 SPF鸡

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IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达 被引量：9

9

作者 陈红梅 白雪帆 +4 位作者 黄长形 洪沙 王平忠 韦三华 王九平 《医学研究生学报》 CAS 2004年第1期12-14,17,共4页

目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。　方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回... 目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。　方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回收后克隆到中间 pGEM TEasyTA克隆载体 ,得到合适的酶切位点后 ,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中 ,得到真核重组载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc。然后用脂质体法转染SP2 / 0细胞。　结果 :对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析 ,证明连接正确 ;经ELISA检测证实 ,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。　结论 :成功构建了真核表达载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在SP2 / 0细胞中有效表达。 展开更多

关键词 IL-2/Fc融合基因 基因表达 真核细胞 乙型肝炎病毒 dna疫苗 真核表达载体

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弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建 被引量：10

10

作者 吴昆 陈晓光 +1 位作者 李华 支国舟 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第7期620-623,共4页

目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构... 目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR　I、Not　I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 ROP2基因 体外扩增 真核表达重组质粒 dna疫苗

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癌胚抗原与IL-2真核双表达质粒的构建及体外表达 被引量：4

11

作者 王中川 傅传刚 +2 位作者 王庆敏 车文良 戴建新 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期193-196,共4页

目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗... 目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗体夹心法检测CEA和IL 2的表达。结果 :核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确 ,质粒上所接入的CEA和IL 2的碱基序列与标准序列的同源性分别为 99.8%和 99.9%。该双表达质粒在体外转染细胞内后可表达CEA和IL 2分子。结论 :实验所构建的 pIRES CEA IL 2双表达质粒能在体外同时表达CEA和IL 2分子 ,说明本质粒具有在细胞水平同时表达两种生物大分子的活性 。 展开更多

关键词 dna疫苗 癌胚抗原 共表达质粒 白细胞介素2 CEA IL-2

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DNA疫苗体内转染方法 被引量：1

12

作者 邓斌 余东游 +1 位作者 李卫芬 毛翔飞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期87-88,共2页

关键词 dna疫苗 动物体内 转染 基因工程疫苗 质粒表达载体 抗原基因 基因插入 体内表达

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插入IL-2基因优化HBV DNA疫苗的研究 被引量：1

13

作者 罗红雨 杨旭 苏先狮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期301-304,共4页

目的：观察IL-2基因的插入对DNA疫苗免疫效应的影响，探讨优化DNA疫苗设计、提高DNA疫苗兔疫效应的途径。方法：采用PCR产物直接克隆和重组DNA技术构建了人IL-2和HBsAg融合基因的真核表达载体pcDNA3．1+-S/IL-2，通过脂质体基因转移技... 目的：观察IL-2基因的插入对DNA疫苗免疫效应的影响，探讨优化DNA疫苗设计、提高DNA疫苗兔疫效应的途径。方法：采用PCR产物直接克隆和重组DNA技术构建了人IL-2和HBsAg融合基因的真核表达载体pcDNA3．1+-S/IL-2，通过脂质体基因转移技术导入Cos-7细胞中检测其瞬间表达，并经肌肉注射免疫C57Bl/6小鼠，以检测和比较它们的细胞和体液免疫应答。结果：通过酶切、PCR及测序证实已正确完整地插入 IL-2基因，成功构建了 pcDNA3．1+-S/IL-2重组质粒。体外转染Cos-7后可见基因的表达和分泌，pcDNA3．1+-S/IL-2可以提高免疫小鼠的抗 HBs抗体滴度和脾淋巴细胞诱生的IL-2的生物活性水平，增加 HBsAg特异性的脾淋巴细胞增殖指数。结论：IL-2和 HBsAg基因的融合表达对 DNA疫苗的免疫反应起协同和增强作用，提示IL-2基因插入可能是增强DNA疫苗的免疫效应的可行途径。 展开更多

关键词 dna疫苗 IL-2 融合基因 质粒 优化 免疫效应 HBV感染 乙型肝炎

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Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果 被引量：5

14

作者 张革 汪华侨 +4 位作者 邹俊涛 李国营 袁群芳 林贤 姚志彬 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-376,共6页

【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.... 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。 展开更多

关键词 多价dna疫苗 体液免疫 COS-7细胞 pcdna3.1 ELISA法检测 Western BALB/C鼠 linker 真核表达质粒 BLOT检测 免疫组织化学 抗体平均滴度 基因片段 加强免疫 转基因鼠 AΒ42 PCR技术 信号肽序列 转基因动物 老年性痴呆 基因合成

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家禽DNA疫苗研究进展(上) 被引量：1

15

作者 张小荣 焦新安 《中国家禽》 北大核心 2003年第24期40-42,共3页

家禽D N A 疫苗具有安全性好、稳定性好、特异性能强等特点，本文综述了D N A 疫苗的结构、接种途径与免疫应答机制、影响免疫应答的因素以及D N A 疫苗的佐剂，并对目前研究中存在的问题进行了总结，提出了切实可行的对策，具有一定的... 家禽D N A 疫苗具有安全性好、稳定性好、特异性能强等特点，本文综述了D N A 疫苗的结构、接种途径与免疫应答机制、影响免疫应答的因素以及D N A 疫苗的佐剂，并对目前研究中存在的问题进行了总结，提出了切实可行的对策，具有一定的科学性和实践性。 展开更多

关键词 家禽 dna疫苗 优越性 结构 真核表达质粒 抗原基因 接种途径 免疫应答机制 佐剂

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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2融合HBS基因重组质粒的免疫原性研究 被引量：1

16

作者 赖秀球 朱家勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期63-67,共5页

目的　构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法　 (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA... 目的　构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法　 (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA片断 ,将该片段克隆入质粒pVXORF1-HBS中HBS的上游并与之紧密相连 ,构建质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ;构建真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 以作为对照。 (2 )用上述构建的质粒及空质粒 pVXORF1免疫KM小鼠 ,以ELISA检测血清IgG抗体。 结果　 (1)筛选出的重组子为编码FCC1/HNMSP2 基因片断的重组质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS及 pVXORF1-PfMSP2 。 (2 )裸DNA尾根多点注射KM小鼠 ,显示 pVXORF1-PfMSP2 -HBS组小鼠较pVXORF1-PfMSP2 组小鼠产生抗PfMSP2 蛋白的抗体效价明显增高 ,二者比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　PfMSP2 融合HBsAg基因片段激发机体产生抗PfMSP2 抗体的能力显著增强 ,提示PfMSP2 展开更多

关键词 恶性疟原虫 裂殖子表面蛋白2 融合HBS基因 重组质粒 免疫原性 研究 dna疫苗

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DNA疫苗免疫佐剂研究进展

17

作者 尹荣兰 李昌 张乃生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第4期77-79,共3页

关键词 dna疫苗 免疫佐剂 免疫原性 免疫应答 质粒dna 真核表达 细胞免疫 体液免疫

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虾过敏DNA疫苗的设计和构建

18

作者 王进军 薛藩 《江苏农业科学》 2018年第15期34-37,共4页

通过"一珠一化合物"方法筛选虾过敏的抗原表位,加上免疫元件构建重组真核表达质粒。取对虾过敏患者的血清,纯化抗体。用所得抗体从耦联氨基酸多肽库中筛选出不同长度的多肽20个。在每个多肽前后加入免疫元件(KOZAK序列、Th-PA... 通过"一珠一化合物"方法筛选虾过敏的抗原表位,加上免疫元件构建重组真核表达质粒。取对虾过敏患者的血清,纯化抗体。用所得抗体从耦联氨基酸多肽库中筛选出不同长度的多肽20个。在每个多肽前后加入免疫元件(KOZAK序列、Th-PADRE、Cp G1、Th-P18mn、Cp G2、t PA前导序列、多肽加尾信号),根据密码子表和JCAT网站选出适宜在小鼠内表达的DNA序列。按重叠PCR的方法设计6个20 bp的核苷酸链,通过PCR获得全长片段,双酶切连接入真核表达载体,构建重组表达质粒。经测序分析,证明成功构建虾抗原表位的重组表达质粒p CIneo-TM。本研究为虾过敏抗原表位在真核系统的表达以及已建立的虾过敏小鼠动物模型奠定了良好基础,可为虾过敏的治疗提供新的方法。 展开更多

关键词 虾过敏 抗原表位 克隆 真核表达质粒 dna疫苗

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K88-ST融合基因的克隆及真核表达载体的构建

19

作者 任雪艳 包慧芳 +1 位作者 陈创夫 孔庆军 《动物科学与动物医学》 2004年第11期1-4,共4页

利用DNA重组技术,将编码K88-ST融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pCAMBIA1302中,成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105,为K88-ST基因的进一步研究奠定基础。

关键词 融合基因 真核表达载体 克隆 ST 重组表达质粒 构建 dna重组技术 植物表达载体 农杆菌 片段

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猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建

20

《中国动物保健》 2010年第1期113-113,共1页

来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室的研究人员以A，ISwine／Guangdong／LM／2004（H1N1）猪流感病毒HA基因为模板，通过RT—PCR技术扩增出HA基因，并将其克隆... 来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室的研究人员以A，ISwine／Guangdong／LM／2004（H1N1）猪流感病毒HA基因为模板，通过RT—PCR技术扩增出HA基因，并将其克隆到pCI—neo真核表达载体中，成功构建重组表达质粒pCI—HA，瞬时转染veroE6和293T细胞，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验、 展开更多

关键词 猪流感病毒 HA基因 dna疫苗 国家重点实验室 中国农业科学院 免疫过氧化物酶 真核表达载体 重组表达质粒

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