犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析 被引量：11

1

作者 鞠会艳 乔军 +2 位作者 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期112-120,共9页

根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白... 根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白基因全长1989bp,预测编码662个氨基酸,F蛋白氨基酸序列中含有5个潜在的N-联糖基化位点。聚类分析提示,CDVLP株是一株与CDV强毒株亲源关系很近的毒株。用DNAstar软件对CDVLP株和Onderstepoort弱毒株N蛋白和F蛋白进行了疏水性及抗原表位预测分析。抗原表位差异提示CDVLP毒株N和F蛋白的免疫原性可能要优于Onderstepoort弱毒株。在分子水平上阐明了CDVLP株的N和F蛋白基因更适合作为构建基因疫苗和重组活载体疫苗的目的基因。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒小熊猫株 核蛋白和融合蛋白基因 克隆 序列分析

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蜘蛛杀虫肽与Bt-Toxin C肽融合蛋白基因转入棉花的研究 被引量：9

2

作者 郑树松 安成才 +1 位作者 李启任 陈章良 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期348-351,共4页

通过农杆菌介导法将蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白C肽的融合蛋白基因导入了陆地棉(GossypiumhirsutumL.)栽培品种中棉所10号,并获得大量小苗。小苗经GUS染色和PCR检测,证明蜘蛛杀虫肽基因已经转入到转化植株的基因组内,检测阳性率分别为27.1%和6... 通过农杆菌介导法将蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白C肽的融合蛋白基因导入了陆地棉(GossypiumhirsutumL.)栽培品种中棉所10号,并获得大量小苗。小苗经GUS染色和PCR检测,证明蜘蛛杀虫肽基因已经转入到转化植株的基因组内,检测阳性率分别为27.1%和60.42%。 展开更多

关键词 融合蛋白基因 棉花 蜘蛛杀虫肽 遗传转化 植株再生 Bt毒蛋白C肽

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新城疫病毒鹌鹑分离株融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4

3

作者 郭鑫 曹殿军 +4 位作者 闵平 闫丽辉 刘培欣 房海 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期430-435,共6页

本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒（QNDV／89）为研究对象，用反转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）对QNDV／89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后，采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷... 本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒（QNDV／89）为研究对象，用反转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）对QNDV／89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后，采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，并推导出相应氨基酸序列。QNDV／89株F基因全长1662bp，单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽，其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117，是NDV强毒株所特有的序列结构，这与其生物学特性及致病性实验结果是相一致的。序列分析结果表明，QNDV／89株与F48E9株的核苷酸同源率高达99.22％，氨基酸的同源率为98.37％;而与弱毒株LaSota的核苷酸同源率为88.93％，氨基酸的同源率为90.42％。本研究首次报道了流行于我国鹌鹑中的新城疫强毒融合蛋白基因序列，并与其它新城疫病毒进行了同源性比较，证明QNDV／89株核苷酸的变异引起了其蛋白质二级结构的部分改变。 展开更多

关键词 新城疫病毒 鹌鹑 分离株 融合蛋白基因 克隆

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花粉介导法将TaPHR1∷GFP融合蛋白基因导入玉米 被引量：6

4

作者 王秀红 白建荣 +3 位作者 孙毅 刘惠民 史向远 任志强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1732-1737,共6页

利用超声波辅助花粉介导基因转化法,将小麦耐低磷调控基因TaPHR1和GFP构建成的融合蛋白基因(TaPHR1∷GFP)导入3个玉米自交系郑58、昌7-2和PH6WC中.结果表明:3个自交系的转化效果存在基因型差异,郑58是很好的转化受体材料,平均结籽穗率... 利用超声波辅助花粉介导基因转化法,将小麦耐低磷调控基因TaPHR1和GFP构建成的融合蛋白基因(TaPHR1∷GFP)导入3个玉米自交系郑58、昌7-2和PH6WC中.结果表明:3个自交系的转化效果存在基因型差异,郑58是很好的转化受体材料,平均结籽穗率、每穗平均结籽数、BASTA除草剂抗性和转基因植株PCR阳性率均优于昌7-2和PH6W;对T1代植株进行Southern杂交表明,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因已整合到玉米基因组中;RT-PCR结果显示,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因得到有效转录;通过对发芽籽粒进行GFP荧光观察表明,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因得到了表达. 展开更多

关键词 玉米自交系 花粉介导转基因法 TaPHR1∷GFP融合蛋白基因 GFP(绿色荧光蛋白)

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新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析 被引量：5

5

作者 曹殿军 苑纯秀 +3 位作者 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期103-106,共4页

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列... 通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。Ｆ基因全长为１６６２个ｂｐ，单一的开放阅读框编码５５３个氨基酸的多肽。Ｆ蛋白的疏水构型有三个强疏水区；其裂解位点的氨基酸序列为１１２Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－１１６Ｒ－１１７Ｆ；Ｆ蛋白上共有１２个Ｃｙｓ残基位点和五个潜在糖基化位点。 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 核苷酸序列

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水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：3

6

作者 苏凤艳 宗春苗 +2 位作者 王卓聪 丁庆东 王全凯 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期21-24,共4页

以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F。序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、00-2601株、ONP株、PDV-2株... 以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F。序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、00-2601株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%9、5.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%。抗原指数分析表明分离株与疫苗ONP株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异。 展开更多

关键词 水貂 犬瘟热病毒 融合蛋白基因 克隆 序列分析

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水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达 被引量：3

7

作者 杨宇峰 周建 +2 位作者 耿旭 董亚芳 吴自荣 《华东师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期102-105,共4页

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的... 水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果. 展开更多

关键词 RGD序列 重组水蛭素 枯草芽孢杆菌 融合蛋白基因 基因克隆 抗血小板聚集 纤维蛋白原 血栓性疾病 凝血酶抑制剂 分离纯化

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表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：3

8

作者 鞠会艳 高玉伟 +1 位作者 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期89-96,共8页

利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPol... 利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变。电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72ku。在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 融合蛋白基因 重组腺病毒

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ATF-PAI2CD融合蛋白基因在毕赤酵母中克隆、表达和鉴定 被引量：2

9

作者 王霞 侯敏 +4 位作者 孙兴会 张宇清 李平 谭理 朱运松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期61-66,共6页

为了克隆尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)的氨基末端片段与纤溶酶原激活剂抑制物 2型(PAI 2 )突变体所构成的融合蛋白基因 ,并在Pichiapastoris中表达 ,应用PCR获得了人ATF PAI2CD融合蛋白基因cDNA(简称ATF PAI2CD) ,将其克隆到酵母表达载... 为了克隆尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)的氨基末端片段与纤溶酶原激活剂抑制物 2型(PAI 2 )突变体所构成的融合蛋白基因 ,并在Pichiapastoris中表达 ,应用PCR获得了人ATF PAI2CD融合蛋白基因cDNA(简称ATF PAI2CD) ,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K ,获得融合基因表达质粒pZWY ATF PAI2CD .该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,然后用甲醇诱导表达 .工程菌用摇瓶发酵 ,表达产物ATF PAI2CD占培养液中总蛋白 5 0 %以上 .经硫酸铵沉淀、分子筛和离子交换层析纯化得到的目标表达产物纯度达 95 % .Western印迹检测具有PAI 2与uPA的免疫原性 ,经牛奶板法检测具有纤溶抑制活性 .经流式细胞仪 (FCM )检测 ,能与肿瘤细胞特异性结合 .结果表明 ,ATF PAI2CD融合蛋白成功地在毕赤酵母中表达 ,且具有抑制uPA及与肿瘤细胞表面uPAR特异性结合的双重功能 .提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景 . 展开更多

关键词 ATF-PAI2CD 融合蛋白基因 毕赤酵母 克隆 表达 鉴定 尿激酶型纤溶酶原激活物

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小反刍兽疫病毒融合蛋白基因的克隆、序列分析及表达 被引量：2

10

作者 倪伟 才学鹏 +3 位作者 乔军 孟庆玲 陈创夫 任艳 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第1期35-39,共5页

根据GenBank报道的小反刍兽疫病毒（PPRV）融合蛋白（F）基因序列,用特异性引物对PPRV疫苗株F蛋白基因进行了RT-PCR扩增,并将其克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明：F基因ORF全长1641 bp,编码546个氨基酸;推导的氨基酸序列中第1~18... 根据GenBank报道的小反刍兽疫病毒（PPRV）融合蛋白（F）基因序列,用特异性引物对PPRV疫苗株F蛋白基因进行了RT-PCR扩增,并将其克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明：F基因ORF全长1641 bp,编码546个氨基酸;推导的氨基酸序列中第1~18位氨基酸构成信号肽序列,第488~510氨基酸为跨膜区。构建原核表达载体pETF1和pETF2,转化E.coliBL21（DE3）,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blotting的分析结果表明,F1和F2基因在大肠杆菌中均获得了表达,且均具有良好的反应原性。用Ni-NTA试剂盒纯化F1和F2重组蛋白,为研发检测PPRV特异性抗体的诊断试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 融合蛋白基因 克隆 原核表达

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犬瘟热病毒蓝狐分离株融合蛋白基因的序列分析 被引量：1

11

作者 苏凤艳 丁庆东 +3 位作者 宗春苗 王卓聪 王春雨 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期764-767,782,共5页

根据已发表的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)Onderstepoort株序列设计1对引物,RT-PCR法扩增出约1 000 bp的融合蛋白基因片段,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pMD18-T载体。序列分析表明CDV蓝狐分离株F蛋白基因片段由1 044 bp... 根据已发表的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)Onderstepoort株序列设计1对引物,RT-PCR法扩增出约1 000 bp的融合蛋白基因片段,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pMD18-T载体。序列分析表明CDV蓝狐分离株F蛋白基因片段由1 044 bp组成,编码348个氨基酸,与其它CDV25259株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、5804P株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.5%、94.1%、94.7%、94.2%、94.2%、97.6%和94.9%;氨基酸序列的同源性分别为98.6%、97.1%、98.0%、98.0%、98.3%、97.7%和98.6%;与其它CDV毒株相比,蓝狐分离株存在核苷酸缺失突变(1 030位～1 038位)和氨基酸缺失突变(344位～348位)。 展开更多

关键词 蓝狐 犬瘟热病毒 融合蛋白基因 序列分析

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新城疫病毒中国株F_(48)E_9融合蛋白基因序列分析 被引量：1

12

作者 陈金顶 廖明 辛朝安 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期75-77,共3页

该研究经全自动序列测定 ,获得了新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)基因 1 838bp的cDNA核苷酸序列 ,并推导出编码 5 49个残基的氨基酸序列 序列分析表明 ,该序列中有 6个潜在的糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,裂解位点区氨基酸序列... 该研究经全自动序列测定 ,获得了新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)基因 1 838bp的cDNA核苷酸序列 ,并推导出编码 5 49个残基的氨基酸序列 序列分析表明 ,该序列中有 6个潜在的糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,裂解位点区氨基酸序列为Arg Arg Gln Arg Arg Phe 同源性分析表明 ,新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)氨基酸序列与国外发表的其他新城疫病毒株F蛋白相比 ,同源性在 96 .1 7%～ 92 .1 6 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析

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鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：2

13

作者 王忠田 王新卫 +1 位作者 陈溥言 申秀琴 《河南畜牧兽医》 2000年第8期6-8,共3页

根据NDVNL株的F基因序列，自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符，大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后，克隆到融合表达载... 根据NDVNL株的F基因序列，自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符，大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后，克隆到融合表达载体pThioHisB中，并转化到大肠杆菌Top10内，利用AMP抗性筛选阳性重组子，并用PCR及双酶切鉴定克隆成功，用IPTG化学诱导表达了F基因。经SDS－PAGE电泳分析，结果在分子量约为35KD处可见到表达的蛋白条带。这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符。说明外源片段插入正确表达成功。用HRP标记的兔抗鸡抗体与该条带进行Western－Blot检测，该条带呈阳性反应。进一步证实表达正确。通过蛋白灰度扫描显示表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20％。 展开更多

关键词 鸡新城疫融合蛋白基因 聚合酶链式反应 原核表达 SDS-PAGE WESTERN-BLOT

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鸡新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及进化分析

14

作者 栾慎顺 魏玉荣 +2 位作者 张敏 金苗苗 沈国顺 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期782-785,共4页

根据GeneBank中报道的NDV融合蛋白基因（F）序列，设计了一对特异性引物，用该引物对NDVLN—SN株进行了RT—PCR扩增；将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM—T连接得到重组质粒pGEM—F，用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp，编码55... 根据GeneBank中报道的NDV融合蛋白基因（F）序列，设计了一对特异性引物，用该引物对NDVLN—SN株进行了RT—PCR扩增；将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM—T连接得到重组质粒pGEM—F，用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp，编码553个氨基酸；将LN—SN毒株与GeneBank中已报道的NDV毒株进行比较，F基因核苷酸序列的同源性在83．4％～99．9％之间，推导的F蛋白氨基酸序列的同源性在88．4％-99．8％之间。 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 克隆 序列分析

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GST-hBLyS融合蛋白基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

15

作者 张志方 张春艳 +2 位作者 付涌水 林学颜 潘敬运 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期72-75,共4页

根据hBLyS (humanBlymphocytestimulator)基因序列设计合成特异性引物 ,用RT_PCR从人外周血淋巴细胞扩增出 85 8bp的hBLyS基因 ,并将其插入到融合蛋白原核表达载体 pGEX_4T_1中 ,得到重组表达质粒pGEX_4T_1/hBLyS。把此重组质粒转化大... 根据hBLyS (humanBlymphocytestimulator)基因序列设计合成特异性引物 ,用RT_PCR从人外周血淋巴细胞扩增出 85 8bp的hBLyS基因 ,并将其插入到融合蛋白原核表达载体 pGEX_4T_1中 ,得到重组表达质粒pGEX_4T_1/hBLyS。把此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,经用IPTG诱导 ,表达出了GST_hBLyS融合蛋白。 展开更多

关键词 GST-hBTLyS融合蛋白基因 大肠杆菌 人BLyS 基因表达 肿瘤坏死因子 自身免疫性疾病 重组质粒

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新城疫病毒分离株融合蛋白基因的遗传变异分析

16

作者 魏玉荣 刘丽娜 +1 位作者 沈国顺 吴高峰 《畜禽业》 2006年第1期22-25,共4页

根据GenBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对所分离的LN-SN株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码553个氨基... 根据GenBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对所分离的LN-SN株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码553个氨基酸;将LN-SN毒株与GenBank中已报道的NDV毒株进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在83.1%～98.9%之间,推导的F蛋白氨基酸序列的同源性在88.1%～99.5%之间。 展开更多

关键词 新城疲病毒 融合蛋白基因 遗传变异

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鸡新城疫病毒B_(95)株融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：2

17

作者 苗儒 赵林立 +3 位作者 金晓 于丽萍 哈斯阿古拉 陈燕军 《当代畜禽养殖业》 2000年第6期23-25,共3页

以鸡新城疫病毒(NDV)澳大利亚布里斯班分离株R_(95)的基因组RNA为模板,运用RT—PCR技术扩增其融合蛋白(F_0)基因的cDNA。将扩增的F基因克隆到质粒PUC_(19)中,转化入大肠杆菌JM109中,经AIX平板筛选,PCR等方法鉴定出F基因的阳性重组质粒,... 以鸡新城疫病毒(NDV)澳大利亚布里斯班分离株R_(95)的基因组RNA为模板,运用RT—PCR技术扩增其融合蛋白(F_0)基因的cDNA。将扩增的F基因克隆到质粒PUC_(19)中,转化入大肠杆菌JM109中,经AIX平板筛选,PCR等方法鉴定出F基因的阳性重组质粒,同时测定了F基因5’端709个核苷酸及3’端768个核苷酸的序列。对相应的氨基酸序列的研究表明,B_(95)株属弱毒株,含有F_0中保守的疏水功能区和可糖基化位点,B_(95)与强毒株F_(48)E_8株、Miyadera株和中等毒力的Beaudette C株的氨基本酸序列抽源性在90%左右。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒 融合蛋白基因 基因克隆 基因序列

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HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答 被引量：13

18

作者 赵平 姜春鹏 +2 位作者 赵兰娟 温新宇 戚中田 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期576-582,共7页

构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因... 构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度 ,发现融合基因DNA疫苗诱生抗体的效率明显不及单基因DNA疫苗 ,但其能诱导更强、更持久的细胞免疫应答 ,表明HBV包膜 核心蛋白融合基因DNA疫苗对于治疗慢性乙型肝炎可能比单基因DNA疫苗更为有效 . 展开更多

关键词 HBV 包膜-核心蛋白融合基因 DNA疫苗 诱导 小鼠 细胞免疫应答

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儿童早发型腓骨肌萎缩症2型21例线粒体融合蛋白2基因型和表型分析 被引量：2

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作者 吕俊兰 刘京 +5 位作者 张礼萍 李久伟 孙欣 郎志奇 丁昌红 陈春红 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2013年第2期131-135,共5页

目的分析儿童腓骨肌萎缩症2型(CMT2)线粒体融合蛋白2(MFN2)基因型与临床表型。方法纳入1998至2012年首都医科大学附属北京儿童医院临床诊断的CMT2患儿为研究对象,采用直接测序方法检测MFN2突变基因,并描述分析突变和未突变患儿的临床表... 目的分析儿童腓骨肌萎缩症2型(CMT2)线粒体融合蛋白2(MFN2)基因型与临床表型。方法纳入1998至2012年首都医科大学附属北京儿童医院临床诊断的CMT2患儿为研究对象,采用直接测序方法检测MFN2突变基因,并描述分析突变和未突变患儿的临床表型、神经电生理、实验室和病理学检查特征。结果 21例CMT2患儿进入分析。①未检出MFN2基因突变18例(男14例,女4例),起病年龄平均3.3岁。其中9例累及下肢近端和远端,7例累及四肢,2例无法行走,8例下肢近端和远端肌肉萎缩,4例可见轻微感觉障碍。MFN2基因突变3例(男2例,女1例),起病年龄1.5～8岁,1例有家族史。均可见下肢近端和远端肌肉萎缩,2例足下垂并内翻,均有感觉障碍表现。②21例运动和(或)感觉神经传导速度≥38m·s-1或波幅降低,MFN2基因突变患儿腓总神经和胫神经复合肌肉动作电位波幅较正常值的下降幅度高于未突变患儿;③10例行腓肠神经活检检查,其中MFN2基因突变1例,未检出MFN2突变9例,均符合慢性轴索神经病病理改变,电镜下可见轴索线粒体聚集排列和肿胀。结论 MFN2基因突变是CMT2的致病原因之一,携带该突变患儿多为早发型,临床表型可能重于未突变者,仍需扩大样本量进一步分析。 展开更多

关键词 腓骨肌萎缩症2型 线粒体融合蛋白2基因 临床表型 儿童

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转基因锦橙中甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因的遗传和表达稳定性研究 被引量：1

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作者 彭爱红 雷天刚 +4 位作者 许兰珍 刘小丰 何永睿 姚利晓 陈善春 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期31-35,共5页

为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2... 为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2个转基因锦橙株系在无性繁殖过程中,甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因都能稳定遗传;甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系JTH1及其无性繁殖后代之间能够稳定的表达,而在转基因锦橙株系JTH2及其无性繁殖后代之间不能稳定的表达,T0代中目的基因的相对表达量显著高于T2代. 展开更多

关键词 转基因锦橙 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 遗传稳定性 表达稳定性

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