一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建 被引量：8

1

作者 郭爱华 刘志锋 +3 位作者 孙学刚 李海玉 邓鹏 姜勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页

目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、... 目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定正确,再经蛋白透析、过滤处理。将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中,用荧光显微镜观察。结果重组质粒pET14b-His-TAT融合表达载体和pET14b-His-TAT-EGFP重组载体经酶切、DNA测序鉴定证实构建成功。表达纯化出了高纯度His-TAT-EGFP融合蛋白并具有较高细胞内转导活性。结论成功改建pET14b-His-TAT-Flag重组载体,正确构建pET14b-His-TAT-EGFP载体,His-TAT-EGFP融合蛋白高效表达,并具有明确的细胞内转导活性。 展开更多

关键词 HIV-1反式激活因子 蛋白质转导结构域 融合蛋白 细胞内转导

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带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运 被引量：8

2

作者 梁英民 孙强 +7 位作者 蒋姗姗 陈萍 王冀姝 李荣 周鹏 王键 黄红艳 韩骅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期574-578,共5页

HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .... HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 . 展开更多

关键词 蛋白转导结构域 BCR/ABL 慢性粒细胞白血病 基因表达 癌蛋白

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蛋白质转导结构域的跨血脑屏障药物递送 被引量：6

3

作者 周建平 孙曼霁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1401-1405,共5页

药物递送入脑的主要障碍是血脑屏障,为克服血脑屏障,目前主要采取神经外科手术、增加分子脂溶性、通过内源性血脑屏障转运载体的递送策略。PTD介导跨血脑屏障药物递送是近来出现的新技术,可以方便、高效地使各种分子通过外周血、腹腔等... 药物递送入脑的主要障碍是血脑屏障,为克服血脑屏障,目前主要采取神经外科手术、增加分子脂溶性、通过内源性血脑屏障转运载体的递送策略。PTD介导跨血脑屏障药物递送是近来出现的新技术,可以方便、高效地使各种分子通过外周血、腹腔等途径,跨越血脑屏障进入脊髓、脑组织细胞。PTD递送快捷、简单、安全,为中枢神经系统疾病的治疗提供了新的研究思路。 展开更多

关键词 蛋白质转导结构域 血脑屏障 药物递送

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TAT蛋白转导结构域介导融合蛋白在小鼠活体的跨膜递送作用 被引量：1

4

作者 刘树滔 何火聪 +3 位作者 陈菁 傅蓉 潘剑茹 饶平凡 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第6期463-466,I0003,I0004,共6页

目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这... 目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这两种含TAT的融合蛋白及作为对照的融合蛋白GST-GFP,一定时间作用后取体内器官和皮肤做冷冻切片,荧光显微镜检测这些融合蛋白的跨膜递送情况;并对分别融合在C端或者N端的TAT介导GFP在活体动物体内和皮肤的跨膜递送作用进行对比。结果腹腔注射实验结果表明,TAT可以介导不经过蛋白质的变性处理的融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT跨膜递送进入到小鼠的心脏、肝、肾、脾和肺,甚至脑组织;其中GST-GFP-TAT跨膜递送效率比GST-TAT-GFP更高。结构模拟分析提示GST-GFP-TAT与GST-TAT-GFP中的TAT的暴露情况不同可能是造成两种蛋白跨膜递送活性差异的重要因素。皮肤实验的结果则表明TAT不仅介导融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT进入小鼠表皮,而且使其进入小鼠皮肤的真皮层。结论 TAT可以跨膜递送不经过变性处理的融合蛋白进入小鼠皮肤和体内,递送效率可能与TAT的暴露程度相关;这些结果为在蛋白质疗法方面应用TAT提供了进一步的理论依据。 展开更多

关键词 TAT蛋白转导结构域 融合蛋白 跨膜递送 皮肤 器官

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分泌型TAT蛋白转导结构域基因通用真核表达载体的构建及表达

5

作者 王锦之 陈巨星 +3 位作者 杨忠 周宇荀 马昱澍 魏东芝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期435-436,441,共3页

目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析。方法:依照编码TATPTD11肽及所引入的BamHI酶识别序列和增强性绿色荧光蛋白N端7个氨基酸的碱基序列合成了3条引物,以egfp基因为模... 目的:构建一个全新的分泌型TAT蛋白转导结构域基因哺乳动物细胞融合表达载体并对融合蛋白的表达进行分析。方法:依照编码TATPTD11肽及所引入的BamHI酶识别序列和增强性绿色荧光蛋白N端7个氨基酸的碱基序列合成了3条引物,以egfp基因为模板通过依次3轮PCR扩增得到tategfp融合基因,该基因片段以SfiI和HindⅢ双酶切后插入哺乳动物细胞表达载体pSectagA,构建成重组载体pSecTATmegfp,BamHI单酶切后该载体自连,即得到可通用的真核表达载体pSecTATm,重组质粒pSecTATmegfp转染HEK293细胞,融合蛋白的表达用Westernblot分析。结果:酶切及测序证实表达载体pSecTATm构建成功,Westernblot表明TATEGFP融合蛋白在HEK293细胞中获得表达并分泌到细胞培养液中。结论:成功地构建了分泌型TAT蛋白转导结构域基因的哺乳动物细胞融合表达载体,为更充分发挥TAT蛋白转导结构域在蛋白质功能及疾病治疗研究中的应用打下了基础。 展开更多

关键词 TAT蛋白转导结构域 载体构建 增强性绿色荧光蛋白 WESTEM BLOT

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Toll样受体与核苷酸结合寡聚化结构域蛋白在防御反应中的相互作用 被引量：3

6

作者 胡巢凤 陆大祥 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期233-235,共3页

哺乳动物具有两个微生物识别系统,一个系统是由Toll样受体(TLRs)的膜结合受体家族组成;另一个系统是由位于胞浆的核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族组成。入侵机体的微生物可能通过不同抗原激活多个模式识别受体,导致免疫反应的产生... 哺乳动物具有两个微生物识别系统,一个系统是由Toll样受体(TLRs)的膜结合受体家族组成;另一个系统是由位于胞浆的核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族组成。入侵机体的微生物可能通过不同抗原激活多个模式识别受体,导致免疫反应的产生。本文将对TLRs及NODs信号通路在防御反应中的相互作用进行综述。 展开更多

关键词 核苷酸结合寡聚化结构域蛋白 TOLL样受体 免疫 信号转导

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快速构建蛋白质结构域克隆库的方法 被引量：1

7

作者 马素参 黄海明 +3 位作者 彭隽敏 俞强 任瑞宝 高友鹤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期537-541,共5页

对蛋白质组学的研究有许多不同的切入方法 .从研究的生物学意义和可行性考虑 ,提出从蛋白结构域入手进行蛋白质组学研究 .SH2 (Srchomology 2 )结构域是细胞信号转导中重要的元件之一 ,人SH2结构域共有约 12 0种 ,对其进行研究将深刻揭... 对蛋白质组学的研究有许多不同的切入方法 .从研究的生物学意义和可行性考虑 ,提出从蛋白结构域入手进行蛋白质组学研究 .SH2 (Srchomology 2 )结构域是细胞信号转导中重要的元件之一 ,人SH2结构域共有约 12 0种 ,对其进行研究将深刻揭示细胞信号转导的规律 .为了得到人所有的SH2结构域序列及克隆 ,首先在公共数据库里检索出了人所有的SH2结构域序列 ,利用国际上现有的共享资源IMAGE(IntegratedMolecularAnalysisofGenomesandTheirExpression)克隆为PCR模板 ,解决了从cDNA文库中难以克隆低丰度结构域的问题 .利用有方向性的TOPO克隆技术提高克隆效率 ,从而快速高效地构建了包括 6 0个SH2结构域的克隆库 .克隆库可以方便地转换到GATEWAY系统具有各种用途的载体上 。 展开更多

关键词 蛋白质结构域 克隆库 结构域蛋白质组学 SH2结构域 细胞信号转导

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分泌型PTD4-Apoptin融合蛋白诱导HepG2细胞凋亡 被引量：1

8

作者 陈庆 杨辰苏 +3 位作者 陈虎 陈道达 龙跃平 郑海 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期137-141,共5页

目的研究分泌型的含蛋白质转导结构域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融合基因经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达和分泌后,对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法构建PTD4-Apop-tin融合基因的pSecTag2分泌型真核表达载... 目的研究分泌型的含蛋白质转导结构域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融合基因经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达和分泌后,对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法构建PTD4-Apop-tin融合基因的pSecTag2分泌型真核表达载体,并采用脂质体介导将其转染入HUVEC细胞,Western blot检测PTD4-Apoptin融合蛋白的表达及分泌,转染48h后收集培养上清作为条件培养液,用于HepG2、L02细胞培养,共培养24h后,采用Western blot检测细胞内和核内Apoptin的含量,流式细胞术检测细胞凋亡。结果瞬时转染pSecTag2-PTD4-Apoptin的HUVEC细胞可表达及分泌PTD4-Apoptin融合蛋白,其培养上清中的PTD4-Apoptin融合蛋白可有效进入HepG2和L02细胞,并可在HepG2细胞核内聚积,显著诱导HepG2细胞凋亡达47.4%(P<0.001),而对L02细胞无此效应。结论 HUVEC细胞表达分泌的PTD4-Apoptin融合蛋白可显著诱导邻近HepG2细胞凋亡,而对L02正常肝细胞无损伤。 展开更多

关键词 蛋白质转导结构域 凋亡素 肝癌

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PTD-ABD融合蛋白对髓系白血病细胞的增殖和凋亡的影响 被引量：1

9

作者 康志杰 闫金松 +5 位作者 崔嵩 李国辉 黄斯勇 梁亮 尹郸丹 梁英民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期417-421,共5页

目的研究癌基因BCR/ABL C末端肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD)蛋白对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法构建含有ABD基因的重组表达载体,应用蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)将蛋白转入白血病细胞内,应用West... 目的研究癌基因BCR/ABL C末端肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD)蛋白对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法构建含有ABD基因的重组表达载体,应用蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)将蛋白转入白血病细胞内,应用Western blot与免疫荧光法确定蛋白是否进入白血病细胞,然后分别应用流式细胞仪及MTT法检测融合蛋白对白血病细胞凋亡及增殖的影响。结果成功构建PTD-ABD融合表达载体,获得高纯度PTD-ABD融合蛋白。同时构建PTD表达载体并获得高纯度表达蛋白。将PTD、PTD-ABD蛋白与白血病细胞K562、HL60共培养,Western blot与免疫荧光法确定PTD、PTD-ABD蛋白成功进入细胞内。与阴性对照比较,PTD-ABD蛋白能显著抑制HL60细胞的生长,并且对HL60细胞的凋亡具有明显的促进作用,差异具有统计学意义(P<0.05),但对K562细胞的增殖及凋亡无影响(P>0.05);PTD蛋白对K562、HL60细胞的增殖及凋亡无影响,与阴性对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论PTD转导的ABD蛋白抑制HL60细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 BCR ABL融合蛋白 肌动蛋白结合域 蛋白转导结构域 K562细胞 HL60细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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PH结构域的结构和功能研究进展 被引量：1

10

作者 王吉村 药立波 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期245-249,共5页

ＰＨ结构域是一种存在于多种信号转导蛋白和细胞骨架蛋白中的大约由１２０个氨基酸组成的功能性区域．不同蛋白质中的ＰＨ结构域在一级结构上的同源性并不很高，但其空间结构中肽链主链的折叠方式基本相同，而主要差别存在于其中的三个... ＰＨ结构域是一种存在于多种信号转导蛋白和细胞骨架蛋白中的大约由１２０个氨基酸组成的功能性区域．不同蛋白质中的ＰＨ结构域在一级结构上的同源性并不很高，但其空间结构中肽链主链的折叠方式基本相同，而主要差别存在于其中的三个可变环上，含有这些环的侧面带有正电荷，被认为可能是其配体的结合部位．目前已知的配体有Ｇ蛋白βγ亚单位（Ｇβγ）、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和磷脂酰肌醇衍生物（ＰＩＰ２或ＩＰ３），所以ＰＨ结构域可能介导信号蛋白与这些分子间的相互作用，参与细胞信号转导网络的构成． 展开更多

关键词 PH结构域 信号转导 蛋白激酶C G蛋白 结构 功能

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TAT-Smad7-HA融合蛋白的表达及其转导活性验证

11

作者 刘波 张恒术 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2198-2202,共5页

目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA... 目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA重组原核表达载体,IPTG诱导表达后经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的片段回收和FITC标记后,将FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白作用于体外培养的人原代KFB以观察其转导活性。结果成功构建了TAT-Smad7-HA融合蛋白的原核表达载体pTAT-Smad7-HA,目的蛋白在诱导后获得了高效表达(占菌体总蛋白的25%以上),并成功进行了纯化(纯度达95%以上)、脱盐柱脱盐、Western blot验证、硫氧环蛋白切除及FITC标记,得到相对分子质量约为50×103的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并进一步在体外培养的人KFB细胞中证实了其高转导活性。结论本实验获得了高纯度的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并验证了其在KFB中的高转导活性。 展开更多

关键词 原核表达 TAT蛋白转导结构域 瘢痕疙瘩 人Smad7蛋白 TGF-Β/SMAD信号通路

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TRIM蛋白参与天然免疫信号转导的研究进展 被引量：4

12

作者 王翠辉 那雷 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期166-170,共5页

天然免疫系统是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。天然免疫对病原微生物最直接的杀灭和清除作用是通过天然免疫分子和吞噬细胞实现的[1]。病原微生物所特有的能够被天然免疫细胞识别的靶分子称为病原相关分子模式（Pathogen associa... 天然免疫系统是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。天然免疫对病原微生物最直接的杀灭和清除作用是通过天然免疫分子和吞噬细胞实现的[1]。病原微生物所特有的能够被天然免疫细胞识别的靶分子称为病原相关分子模式（Pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,宿主细胞通过模式识别受体（Pattern recognition receptors, 展开更多

关键词 TRIM蛋白 第一道防线 病原微生物 信号转导 模式识别受体 细胞识别 Pathogen 结构域 免疫分子 信号通路

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转接蛋白是免疫信号转导中的重要调节子 被引量：2

13

作者 王秀丽 李大金 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期239-240,242,共3页

关键词 蛋白酪氨酸激酶 脂质 信号转导 免疫 SH3 调节 结构域 蛋白分子 酶活性 相互作用

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支架蛋白——信号转导的调节器

14

作者 裴广盈 徐扬 +1 位作者 逄越 李庆伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期988-991,1001,共5页

细胞的生长、运动、分化以及死亡,是通过各种功能不同的信号分子,凭借复杂的信号网络,在时间与空间上进行精确的相互协调与整合来完成。为建立高效的信号网络,细胞已演变出一组特殊的组织蛋白——支架蛋白。越来越多的研究表明,支架蛋... 细胞的生长、运动、分化以及死亡,是通过各种功能不同的信号分子,凭借复杂的信号网络,在时间与空间上进行精确的相互协调与整合来完成。为建立高效的信号网络,细胞已演变出一组特殊的组织蛋白——支架蛋白。越来越多的研究表明,支架蛋白在细胞的信号级联反应中起到了重要作用。它不仅参与相关信号分子的装配,对胞内信号通路的精密调节也发挥了核心作用。 展开更多

关键词 支架蛋白 信号转导 胞内信号通路 级联反应 信号分子 结构域 细胞骨架 信号网络 高等哺乳动物 组织蛋白

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TAT-EGFP融合蛋白表达载体的构建及表达 被引量：1

15

作者 王海珍 许予明 +3 位作者 赵莘瑜 陈奎生 李惠翔 张云汉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期461-463,共3页

目的构建TAT-EGFP原核表达载体,在E.coliBL21中高效表达并纯化。方法人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT重组质粒,再连接绿色荧光蛋白(EGFP)基因,组成pET28a-TAT-EGFP重组表达子。转化大肠杆菌,IPTG诱... 目的构建TAT-EGFP原核表达载体,在E.coliBL21中高效表达并纯化。方法人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a后得到pET28a-TAT重组质粒,再连接绿色荧光蛋白(EGFP)基因,组成pET28a-TAT-EGFP重组表达子。转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达。表达产物用十二烷基硫钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,组氨酸亲和层析柱纯化融合蛋白。结果及结论成功地构建了TAT-EGFP融合蛋白的原核表达载体,在诱导后获得了高效表达并纯化,为进一步研究TAT的蛋白转导作用奠定了基础。 展开更多

关键词 TAT 蛋白转导结构域 融合蛋白

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TAM受体信号转导通路与肿瘤发生发展关系研究进展 被引量：3

16

作者 陈秋莉 徐元宏 李涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1874-1877,共4页

TAM最初是由LOREN C.SKOW发现,其定位于小鼠7号性染色体上,与哺乳动物的性功能有关。在1991年发现了TAM受体亚家族的第一个成员AXL,随后在1994年先后发现了Tyro3和Mer有相同的结构域。TAM受体广泛表达于多种血液系统及上皮细胞中,

关键词 TAM受体 亚家族 肿瘤血管生成 信号转导 蛋白复合物 结构域 膜脂 信号通路 细胞外基质 乳腺癌细胞系

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以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用 被引量：1

17

作者 赵智凝 王涛 +5 位作者 任君琳 张瑞 赵晶 温伟红 贾林涛 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-737,共3页

目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并... 目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并将其克隆人含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体，以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞，用间接免疫荧光、细胞计数等方法，检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响。结果：成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3基因真核表达载体pCMV—e23sFv-R9-casp3，瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv—R9-casp3蛋白，但SGC-7901细胞生长受到明显抑制，细胞形态发生改变，出现核浓缩等凋亡特征；而HeLa细胞生长未受抑制，细胞形态无明显变化。结论：以分泌形式表达的嵌合蛋白，其HER2抗体部分能够介导靶向识别，R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液，活性caspase-3能高效杀伤细胞。 展开更多

关键词 寡聚精氨酸 蛋白质转导结构域 嵌合基因 靶向治疗

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GAI/RGA蛋白家族的研究进展 被引量：3

18

作者 李巍 萧浪涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期39-42,共4页

赤霉素(GAs)通过同细胞膜上的受体结合,经过一系列信号分子传递从而调节植物的生长发育。在已发现的植物GA信号传递分子中,有一类重要的组成元件—GAI/RGA家族蛋白,不仅作用于植物的种子萌发、茎的伸长和花的发育等许多方面,而且在GA信... 赤霉素(GAs)通过同细胞膜上的受体结合,经过一系列信号分子传递从而调节植物的生长发育。在已发现的植物GA信号传递分子中,有一类重要的组成元件—GAI/RGA家族蛋白,不仅作用于植物的种子萌发、茎的伸长和花的发育等许多方面,而且在GA信号转导途径与其他植物激素信号转导途径的相互作用中起着非常重要的作用。最近几年,对GAI/RGA家族蛋白的研究取得了惊人的进展。现就GAI/RGA家族蛋白的结构、在GA信号转导中的作用、在植物生长发育中的作用以及在激素相互关系中的作用等方面进行综述。 展开更多

关键词 赤霉素 GAI/RGA蛋白家族 保守结构域 信号转导 植物生长发育

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PTD-BDNF融合基因克隆、表达和纯化 被引量：1

19

作者 裴明军 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期21-23,共3页

构建含蛋白转导结构域(PTD)与脑源性神经营养因子(BDNF)融合基因的质粒,并在大肠肝菌中表达。用PCR扩增PTD-BDNF融合基因,经DNA测序无误后插入表达质粒pJW2构建质粒pJPB,转化大肠杆菌并进行PTD-BDNF蛋白的诱导表达和纯化。结果DNA序列... 构建含蛋白转导结构域(PTD)与脑源性神经营养因子(BDNF)融合基因的质粒,并在大肠肝菌中表达。用PCR扩增PTD-BDNF融合基因,经DNA测序无误后插入表达质粒pJW2构建质粒pJPB,转化大肠杆菌并进行PTD-BDNF蛋白的诱导表达和纯化。结果DNA序列分析表明构建含有PTD-BDTF融合基因的质粒与设计相同,PTD-BDNF融合蛋白在大肠杆菌中获得表达并进一步纯化。 展开更多

关键词 蛋白转导结构域 脑源性神经营养因子 血脑屏障

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PTD-Cry3Aa原核融合表达产物对甘薯小象甲的活性研究 被引量：2

20

作者 邱道寿 刘晓津 《生物灾害科学》 2012年第4期347-351,共5页

为探讨TAT PTD对苏云金杆菌鞘翅目特效基因CryAa是否具有协同作用,本试验在实现了融合基因TAT PTD-Cry3Aa大肠杆菌原核表达的基础上,以甘薯小象甲为生测对象测定了原核表达产物PTD-Cry3Aa与Cry3Aa的毒力。结果表明,用大肠杆菌表达的Cry3... 为探讨TAT PTD对苏云金杆菌鞘翅目特效基因CryAa是否具有协同作用,本试验在实现了融合基因TAT PTD-Cry3Aa大肠杆菌原核表达的基础上,以甘薯小象甲为生测对象测定了原核表达产物PTD-Cry3Aa与Cry3Aa的毒力。结果表明,用大肠杆菌表达的Cry3A和PTD-Cry3Aa包涵体初提物均对甘薯小象甲成虫和幼虫有杀虫活性,且表现出一定毒力增效作用,对成虫的增效倍数为2.01倍,对幼虫的增效作用更加明显,达到3.19倍。这一研究结果对于甘薯小象甲的生物防治研究以及转基因抗虫甘薯的研究具有重要的指导作用。 展开更多

关键词 Cry3Aa 蛋白转导结构域(ptd) 甘薯小象甲

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