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多囊体生物发生和蛋白质分拣——ESCRT、Vps4、Ubiquitination一个都不能少 被引量：9
1
作者 夏恒传 张春霞 +6 位作者 冯凡 袁弋 周阳 刘晓勇 朱克明 姚勤 陈克平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第2期103-117,共15页
多囊体(multivesicular body,MVB)是由晚期内吞体的限制膜内陷出芽而形成的动态的亚细胞结构,是真核细胞重要的膜和蛋白质运输与分拣中心,并与信号转导、胞质分裂、基因沉默、自噬、蛋白质的质量控制、病毒出芽等密切相关.多囊体生物发... 多囊体(multivesicular body,MVB)是由晚期内吞体的限制膜内陷出芽而形成的动态的亚细胞结构,是真核细胞重要的膜和蛋白质运输与分拣中心,并与信号转导、胞质分裂、基因沉默、自噬、蛋白质的质量控制、病毒出芽等密切相关.多囊体生物发生涉及20多种囊泡分拣蛋白(Vps),最重要的是在内吞体膜上形成的4种内吞体运输分拣复合物(ESCRT 0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)和Vps4.ESCRT 0与包涵素在内吞体膜上形成微域并富集泛素化的货物蛋白.ESCRTⅠ和Ⅱ诱导MVB囊泡出芽、促进囊泡形成并分拣货物蛋白到囊泡中.ESCRTⅢ收缩及剪切芽颈,完成最后的膜脱落过程.Vps4解离ESCRT以循环利用.泛素化及泛素化蛋白也能修饰或调控ESCRT的定位及功能.这些研究表明,泛素化蛋白、ESCRT和Vps4在内吞体膜上的相继协同作用是驱动紧密偶联的多囊体生物发生及蛋白质分拣的主要力量.本文以蛋白质-蛋白质相互作用为主,综述了ESCRT复合物及Vps4多聚体的组装机制、相互作用、生理功能以及泛素化蛋白和泛素化对ESCRT的调控,并对下一步研究进行了展望. 展开更多
关键词 多囊体 内吞体运输分拣复合物 囊泡分拣蛋白 泛素化 腔内囊泡 出芽 膜脱落
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p-ERK下调分拣蛋白表达对非酒精性脂肪肝大鼠肝损伤的机制研究 被引量：4
2
作者 蔺文燕 田利民 +4 位作者 狄宝山 余静 牛想娥 张琦 刘静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期680-687,共8页
目的:基于磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)下调分拣蛋白(sortilin)表达,分别从动物和细胞水平探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝损伤的形成机制。方法:40只8周龄雄性Wistar大鼠,适应性喂养1周后,随机分为:对照(control)组(n=10)、... 目的:基于磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)下调分拣蛋白(sortilin)表达,分别从动物和细胞水平探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝损伤的形成机制。方法:40只8周龄雄性Wistar大鼠,适应性喂养1周后,随机分为:对照(control)组(n=10)、高脂饮食(HFD)组(n=10)、PD98059组(n=10)和HFD+PD98059组(n=10);control组和PD98059组给予普通饲料喂养,HFD组和HFD+PD98059组给予高脂饲料喂养,PD98059组和HFD+PD98059组给予PD98059腹腔注射。喂养6周后处死大鼠,采集血清,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的水平;分离肝脏,计算肝脏指数;苏木精-伊红(HE)染色检测肝脏组织的病理形态学改变;免疫组化检测蛋白的表达;六胺银染色观察肝窦基底膜的病理特征;ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。同时,提取control组大鼠原代肝窦内皮细胞(LSECs),anti-CD31鉴定LSECs,油红O染色观察LSECs脂质沉积,流式细胞术检测LSECs的凋亡,RT-qPCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测相关蛋白的表达。结果:sortilin表达在LSECs上,ox-LDL增加了LSECs脂滴的沉积和细胞的凋亡(P<0.05);ox-LDL作用下sorti⁃lin的表达下调,抑制p-ERK(PD98059)后,sortilin表达显著升高。HFD诱导的NAFLD大鼠体重、血脂、肝功能和肝脏指数显著升高(P<0.05),炎症因子IL-6和TNF-α的释放显著增多,PD98059干预可逆转上述指标的变化(P<0.05)。结论:PD98059干预后,sortilin表达上调且p-ERK、TNF-α和IL-6的表达下调,同时NAFLD大鼠肝脏损伤、脂质蓄积、脂肪变性、炎症反应和细胞凋亡显著减轻。 展开更多
关键词 分拣蛋白 肝窦内皮细胞 非酒精性脂肪性肝病 p-ERK信号通路 细胞凋亡
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分拣蛋白受体1基因多态位点rs1133174与中国汉族遗忘型轻度认知损伤风险的关联研究 被引量：2
3
作者 张丽俐 刘晓伟 +4 位作者 王百灵 朱建中 张峰 程灶火 金春慧 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期358-360,共3页
目的 ：探讨分拣蛋白受体1（sortilin-related receptor 1,SORL1）基因rs1133174多态性位点与遗忘型轻度认知损伤（amnestic mild cognitive impairment,a MCI）风险的相关性。方法 ：募集了63例a MCI患者和179例正常健康对照,利用连接... 目的 ：探讨分拣蛋白受体1（sortilin-related receptor 1,SORL1）基因rs1133174多态性位点与遗忘型轻度认知损伤（amnestic mild cognitive impairment,a MCI）风险的相关性。方法 ：募集了63例a MCI患者和179例正常健康对照,利用连接酶检测-聚合酶链反应（LDR-PCR）方法对SORL1基因多态性位点rs1133174进行基因分型,比较等位基因和基因型与a MCI发病风险的关系。结果：a MCI组中SORL1基因rs1133174等位基因G的频率显著高于正常对照组（OR=2.221,95%CI=1.396~3.533,P=0.000 6）。Logistic回归分析显示G等位基因携带者患病风险较非携带者增加（GG＋GA vs.AA,OR=2.713,95%CI=1.495~4.918,P=0.000 5）。此外,分层分析发现多态性位点rs1133174可能是独立的风险因素。结论 ：SORL1基因rs1133174多态性位点与中国汉族人群a MCI风险相关。 展开更多
关键词 分拣蛋白受体1基因 轻度认知损伤 单核苷酸多态性 中国汉族
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基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化
4
作者 李爽 李尧华 +4 位作者 叶懿文 李昕 于顺 杨慧 陈彪 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第6期798-801,共4页
目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法... 目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法纯化基因重组蛋白。结果 PCR扩增产物为358 bp,其ATG和TGA之间的结构与人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp区完全一致。基因重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达,其表达产物存在于包涵体组分中。纯化的基因重组蛋白在SDS-PAGE中表现为单一条带,表观分子量约为13 000。结论人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp片段在原核细胞中大量表达,纯化后的基因重组蛋白可尝试用于抗体的制备。 展开更多
关键词 含L(DLR类)A重复分拣蛋白相关受体 基因重组蛋白 阿尔茨海默病
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ARF-GEF基因家族的研究进展 被引量：8
5
作者 刘士平 王璐 +1 位作者 薛艳红 寿惠霞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期982-992,共11页
ARF-GEFs是小G蛋白ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)的鸟苷酸交换因子(Guanine-nucleotide exchange factor,GEF),在所有真核生物中,大型ARF-GEF都是高度保守的。它在生物体的膜泡分拣和蛋白运输中发挥着重要作用,近年来关... ARF-GEFs是小G蛋白ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)的鸟苷酸交换因子(Guanine-nucleotide exchange factor,GEF),在所有真核生物中,大型ARF-GEF都是高度保守的。它在生物体的膜泡分拣和蛋白运输中发挥着重要作用,近年来关于ARF-GEFs的蛋白结构、亚细胞定位和相关功能的报道很多,它已成为细胞生物学领域的一大研究热点。文章主要介绍了大型ARF-GEF的蛋白结构和在不同物种中的分布,阐述了该基因家族在酵母、人和拟南芥中的相关进展,并对其调控机理进行了小结。 展开更多
关键词 ARF-GEF 蛋白分拣 小泡运输 高尔基体 发育
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固本健脑法对老年性痴呆模型大鼠SorLA、VPS35的影响 被引量：3
6
作者 李瑞 胡玉萍 +3 位作者 李婧 袁德培 谭爱华 王平 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第6期1319-1322,共4页
目的:探讨固本健脑法干预老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制。方法:12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ1-42制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,Morris水... 目的:探讨固本健脑法干预老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制。方法:12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ1-42制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆能力,Westen Blot检测SorlA、VPS35、APP的表达,ELISA法检测Aβ1-42的表达。结果:通过大鼠双侧海马注射Aβ1-42,可诱导出大鼠AD样学习记忆能力减退模型。水迷宫检测显示固本健脑液中剂量能改善大鼠学习记忆能力。Westen Blot显示固本健脑液高剂量能提高海马区SorlA的表达量。ELISA显示给药后各给药组Aβ1-42含量降低,固本健脑液高剂量Aβ1-42含量最低。结论:固本健脑法可通过影响SorLA、VPS35的表达,影响APP的转运,减少Aβ1-42的生成,加速Aβ1-42的清除。 展开更多
关键词 固本健脑法 老年性痴呆 分拣蛋白相关受体1 囊泡结合蛋白35 淀粉样前体蛋白
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SORL1基因敲除小鼠可作为散发性阿尔茨海默病模型 被引量：2
7
作者 林芳波 刘鑫 +3 位作者 谢婧雯 罗静 奉夏露 侯德仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期289-295,共7页
目的通过与正常小鼠、淀粉样前体蛋白(APP)/PSE1双转基因小鼠行为学和病理学的比较,证明SORL1敲除小鼠可作为1种散发性阿尔茨海默病模型。方法 Crispr/Case9技术对小鼠受精卵SORL1基因进行编辑,通过检测小鼠DNA序列和Western blot检测SO... 目的通过与正常小鼠、淀粉样前体蛋白(APP)/PSE1双转基因小鼠行为学和病理学的比较,证明SORL1敲除小鼠可作为1种散发性阿尔茨海默病模型。方法 Crispr/Case9技术对小鼠受精卵SORL1基因进行编辑,通过检测小鼠DNA序列和Western blot检测SORL1等方法筛选和鉴定SORL1-/-小鼠。实验分为对照组、SORL1-/-组、APP/PSE1组。Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力、免疫组化和Western blot分别检测小鼠脑组织中APP、β淀粉样蛋白的表达。结果 SORL1-/-小鼠的DNA测序结果是两条染色体SORL1基因CAAT碱基缺失,而正常小鼠SORL1基因无CAAT碱基的缺失;Western blot检测SORL1-/-组小鼠脑组织无SOLR1表达。在Morris水迷宫的定位航行实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均逃避潜伏期均明显延长(P<0.05),SORL1-/-组和APP/PSE1组比较,小鼠的平均逃避潜伏期差异无统计学意义(P>0.05);在Morris水迷宫的空间探索实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均穿越平台次数均减少(P<0.05),SORL1-/-组和APP/PSE1组比较,小鼠平均穿越平台次数差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和Western blot检测结果均显示SORL1-/-组小鼠脑组织中APP和Aβ表达明显较对照组多,SORL1-/-组与APP/PSE1组脑组织的APP和β淀粉样蛋白表达差异无统计学意义。结论SORL1-/-小鼠可出现APP/PSE1小鼠相似的行为学和病理学的改变,可作为一种散发性阿尔茨海默病模型。 展开更多
关键词 分拣蛋白相关受体1 基因敲除 散发性老年痴呆 小鼠模型
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敲低SORL1表达构建模拟阿尔茨海默病的细胞模型 被引量：2
8
作者 罗静 赵艳 +3 位作者 谢婧雯 刘鑫 林芳波 侯德仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期8-13,共6页
目的通过比较分拣蛋白相关受体1(SORL1)敲低细胞模型和传统的阿尔茨海默病(AD)细胞模型在细胞活力、细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β表达的变化,构建一种模拟AD的细胞模型。方法(1)传统的AD细胞模型的构建:用Aβ25-35诱导N2a细胞并通过检测... 目的通过比较分拣蛋白相关受体1(SORL1)敲低细胞模型和传统的阿尔茨海默病(AD)细胞模型在细胞活力、细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β表达的变化,构建一种模拟AD的细胞模型。方法(1)传统的AD细胞模型的构建:用Aβ25-35诱导N2a细胞并通过检测细胞活力确定最佳的AD细胞模型。(2)SORL1敲低细胞模型的构建:RNA干扰慢病毒载体及空病毒载体分别转染给N2a细胞,采用q RT—PCR和Western blot检测和鉴定细胞内SORL1转染的成功。(3)实验分组:对照组:未经干预的野生型N2a细胞;AD组:用Aβ25-35诱导的N2a细胞;空白组:用慢病毒空载体转染的N2a细胞;SORL1敲低组:SORL1-sh RNA慢病毒载体转染的N2a细胞。(4)MTT测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量。结果(1)AD组与对照组比较、SORL1敲低组与空白组比较、AD组和SORL1敲低组的细胞活力均降低、细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义(P<0.05);AD组与SORL1敲低组比较、对照组与空白组比较,细胞活力和细胞凋亡率均无差异(P>0.05)。(2)AD组与对照组比较、SORL1敲低组与空白组比较,AD组和SORL1敲低组的TNF-α和IL-1β含量均增加,差异有统计学意义(P<0.05);AD组与SORL1敲低组比较、对照组与空白组比较,TNF-α和IL-1β含量均无差异(P>0.05)。结论敲低N2a细胞SORL1的表达可能构建一种类似于Aβ诱导的AD细胞模型。 展开更多
关键词 分拣蛋白相关受体1 阿尔茨海默病 N2A细胞 转染
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重症肌无力患者肌细胞中LRP4胞内区与SNX17的相互作用 被引量：2
9
作者 安颖 吕杰 +8 位作者 张迎娜 高峰 张婧 方华 李倩如 杜英 张清勇 王金兰 张运克 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期129-134,共6页
目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)和分拣微管连接蛋白17(SNX17)在重症肌无力(MG)患者肌细胞中相互作用关系。方法:分别构建原核表达载体p ET30a-LRP4胞内区和真核表达载体p EASY-Blunt M2-SNX17,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表... 目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)和分拣微管连接蛋白17(SNX17)在重症肌无力(MG)患者肌细胞中相互作用关系。方法:分别构建原核表达载体p ET30a-LRP4胞内区和真核表达载体p EASY-Blunt M2-SNX17,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达相对分子质量约为17 800的His-LRP4胞内区,在HEK293T细胞中诱导表达相对分子质量约为53 000的Myc-SNX17。利用抗Myc单克隆抗体磁珠与抗His单克隆抗体磁珠进行双向免疫共沉淀(Co-IP),以验证LRP4、SNX17两种蛋白分子是否存在相互作用。结果:成功构建了原核表达载体pE T30a-LRP4胞内区和真核表达载体pE ASY-Blunt M2-SNX17;抗Myc单克隆抗体磁珠与His-LRP4混合后不发生共沉淀,如再与Myc-SNX17混合则可发生共沉淀;抗His单克隆抗体磁珠与Myc-SNX17混合后不发生共沉淀,再与His-LRP4胞内区混合可发生共沉淀。结论:原核表达的LRP4胞内区蛋白与真核表达的SNX17体外可发生直接结合。 展开更多
关键词 低密度脂蛋白受体相关蛋白4 分拣微管连接蛋白17 重症肌无力 免疫共沉淀
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实验性自身免疫性重症肌无力大鼠多肌群SNX17基因的表达 被引量：1
10
作者 张艳停 吕杰 +9 位作者 赵雪 张迎娜 方华 李倩如 杜英 张清勇 杨俊红 张运克 高峰 李昕 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第6期715-719,共5页
目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠多肌群分拣微管连接蛋白17(SNX17)的表达特点。方法:采用主动免疫法构建EAMG大鼠模型(EAMG组)并进行评估,以正常大鼠作对照(正常对照组),利用荧光定量PCR和Western blot检测2组大鼠胸锁... 目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠多肌群分拣微管连接蛋白17(SNX17)的表达特点。方法:采用主动免疫法构建EAMG大鼠模型(EAMG组)并进行评估,以正常大鼠作对照(正常对照组),利用荧光定量PCR和Western blot检测2组大鼠胸锁乳突肌、膈肌、咬肌、心肌、肋间肌、前肢肌、腓肠肌和眼肌等8组肌群中SNX17、nAChR mRNA和蛋白含量变化。结果:成功构建了EAMG大鼠模型。与正常对照组相比,EAMG组大鼠心肌、肋间肌中SNX17 mRNA的表达升高(P <0. 05),膈肌中SNX17 mRNA的表达降低(P <0. 05);胸锁乳突肌、腓肠肌和眼肌中nAChR mRNA的表达降低(P <0. 05),心肌中n AChR mRNA的表达升高(P <0. 05);咬肌、心肌和腓肠肌中SNX17蛋白含量升高(P <0. 05),胸锁乳突肌、膈肌中降低(P <0. 05)。EAMG组腓肠肌中SNX17 mRNA与nAChR mRNA的表达呈负相关(r=-0. 773,P=0. 035),而在心肌中呈正相关(r=0. 947,P=0. 012)。结论:SNX17可能是神经肌肉接头处的关键蛋白。 展开更多
关键词 分拣微管连接蛋白17 主动免疫 实验性自身免疫性重症肌无力 神经肌肉接头 大鼠
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