蔗糖梯度离心纯化人类中期染色体

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作者 施家琦 唐冬生 夏家辉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期25-26,共2页

蔗糖梯度离心纯化人类中期染色体①施家琦唐冬生夏家辉（湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室，长沙４１００７８）ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＭｅｔａｐｈａｓｅＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｂｙＳｕｃｒｏｓｅＧｒａｄｉｅ... 蔗糖梯度离心纯化人类中期染色体①施家琦唐冬生夏家辉（湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室，长沙４１００７８）ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＭｅｔａｐｈａｓｅＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｂｙＳｕｃｒｏｓｅＧｒａｄｉｅｎｔＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎＳ... 展开更多

关键词 细胞学技术 染色体 纯化 人类 蔗糖梯度离心

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TGEV细胞培养物超速离心与RT-PCR扩增的研究

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作者 蒋凤英 何锡忠 +3 位作者 王英 李春华 钱永清 邹勇 《动物医学进展》 CSCD 2007年第4期50-52,共3页

研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)细胞培养物的超速离心及鉴定方法。将TGEV的细胞培养物用饱和硫酸氨法浓缩后,用200 g/kg^500 g/kg蔗糖密度梯度离心分装,测定蛋白浓度并取峰值管进行RT-PCR,并设立15、25、35三个不同循环参数测定PCR产物vo... 研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)细胞培养物的超速离心及鉴定方法。将TGEV的细胞培养物用饱和硫酸氨法浓缩后,用200 g/kg^500 g/kg蔗糖密度梯度离心分装,测定蛋白浓度并取峰值管进行RT-PCR,并设立15、25、35三个不同循环参数测定PCR产物volume值。结果表明,在35个循环条件下第14号样品PCR产物的volume值最大,表明该样品病毒核酸的含量最大,由此推算病毒粒子主要集中在360 g/kg^380 g/kg蔗糖区带处,这与理论值相符,证明猪传染性胃肠炎病毒经密度区带离心后,利用PCR产物量确定目的病毒区带效果显著。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 蔗糖密度梯度离心 RT-PCR

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细胞体积介导的力学响应相分离蛋白质研究

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作者 李一伟 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期100-100,共1页

目标生命通过细胞内的相分离过程调控信号转导、基因表达等。相分离蛋白质极易受到细胞内微环境的影响,且多数相分离蛋白质可能表现成力学响应特征。基于此,本工作研究相分离蛋白质的广谱力学响应特质。更进一步的,是否可以发现更多种... 目标生命通过细胞内的相分离过程调控信号转导、基因表达等。相分离蛋白质极易受到细胞内微环境的影响,且多数相分离蛋白质可能表现成力学响应特征。基于此,本工作研究相分离蛋白质的广谱力学响应特质。更进一步的,是否可以发现更多种类的力学响应相分离蛋白质。方法 本研究创造性地利用细胞体积挤压,促使细胞内水分外流,造成细胞内蛋白质浓度的升高和分子拥挤程度增加。细胞内正在相分离的蛋白质,或者在相分离条件边缘的蛋白质,感受到物理调控因子的影响,也将必然改变其相分离程度。为了高效捕获到相分离程度发生微弱变化的蛋白质,项目团队结合蔗糖密度梯度离心技术和定量质谱技术,将在细胞体积挤压(1 min)前后发生寡聚程度变化的蛋白质进行组学水平的高通量鉴定,所鉴定出的蛋白质即为候选相分离蛋白质。结果 鉴定了1 454种内源相分离蛋白质,以及522种未报道的相分离蛋白质。更重要的,发现了1 215种力学响应的内源性相分离蛋白质。结论 细胞内的相分离蛋白质存在广谱的力学感受和响应行为,且由相分离蛋白质组成的无膜细胞器同样具有力学感受与响应能力。 展开更多

关键词 蔗糖密度梯度离心 细胞体积 质谱技术 力学响应 分离程度 信号转导 分离蛋白质 分离条件

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检测对虾白斑综合症病毒（WSSV）与宿主细胞结合的荧光素标记法

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作者 冯书营 黄倢 张仕璀 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期98-101,共4页

采用蔗糖梯度离心方法提取对虾的白斑综合症病毒(WSSV)，用荧光素对病毒进行标记。标记的病毒同原代培养的日本对虾组织细胞进行结合试验。在4℃结合1h，洗板去除未结合的病毒成分后，在荧光显微镜下可观察到培养的血细胞和鳃细胞带有... 采用蔗糖梯度离心方法提取对虾的白斑综合症病毒(WSSV)，用荧光素对病毒进行标记。标记的病毒同原代培养的日本对虾组织细胞进行结合试验。在4℃结合1h，洗板去除未结合的病毒成分后，在荧光显微镜下可观察到培养的血细胞和鳃细胞带有绿色荧光，而肌肉细胞和卵巢细胞没有荧光产生，荧光的产生说明病毒与细胞已经结合。该方法与过去所用的方法相比，具有操作简便、快速、直观、消耗试剂少、比较经济等优点，可成为研究白斑综合症病毒和细胞结合的一种新方法。 展开更多

关键词 日本对虾 白斑综合症病毒 荧光素标记 细胞培养 蔗糖梯度离心方法

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抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

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作者 何伏秋 蒋虹 +4 位作者 徐新明 张永蓉 秦川 马兰华 吴小闲 《中国比较医学杂志》 CAS 1992年第Z1期24-24,共1页

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法（IFA）检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体（McAb）C<sub>4&... 以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法（IFA）检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体（McAb）C₄和C₁₅。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C₄ 展开更多

关键词 杂交瘤细胞株 SRV-1 蔗糖梯度离心 单克隆抗体 小鼠脾细胞 骨髓瘤细胞 间接免疫荧光法 小鼠腹腔 琼脂免疫双扩散 纯化抗原

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伪狂犬病毒(PRV)间接ELISA试验 被引量：1

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作者 张苗苗 唐桂佳 《中国畜禽种业》 2016年第1期70-71,共2页

将PRVHB98株接种IB细胞,通过超声波破碎后利用蔗糖梯度离心纯化病毒作为ELISA抗原,配以HRP标记的酶标记物、TMB显色液、终止液组成PRV间接ELISA。对PRV间接ELISA各操作步骤进行试验,通过试验数据,确定ELISA的最佳操作方法。

关键词 猪 PRV ELISA 蔗糖梯度离心 试验

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以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA 被引量：3

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作者 郭东伟 佘茂云 +4 位作者 李连城 陈耀峰 陈明 徐兆师 马有志 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1920-1923,共4页

为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体... 为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切、透析,获得HMW DNA。经检测,来自200条根尖(10个胶块)的HMW DNA的浓度约为4～20ng/μL,而连接、转化后的BAC克隆平均插入片段超过100kb。证明该法适用于提取HMW DNA以构建BAC文库。 展开更多

关键词 高分子量DNA 蔗糖密度梯度离心 细胞周期同步化 染色体流式分选 BAC

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甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析 被引量：4

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作者 刘杨 赵向绒 +2 位作者 郭春艳 胡军 余鹏博 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期897-900,共4页

目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取... 目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 蔗糖密度梯度超速离心 免疫原性

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Ⅰ型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立 被引量：4

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作者 孙凤萍 高骏 +2 位作者 胡建华 王胜昌 高诚 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期70-73,共4页

采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异... 采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒感染提供了一条方便的途径。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎 间接ELISA 蔗糖密度梯度离心

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海洋管藻目绿藻刺松藻光系统Ⅰ复合物的分离 被引量：1

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作者 陈敏 李爱芬 周百成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期858-861,共4页

采用TritonX 10 0蔗糖密度梯度离心法 ,从管藻目绿藻刺松藻中分离到三种不同形式的光系统Ⅰ (PSⅠ )复合物 .区带Ⅲ富含PSⅠ核心复合物 (CCⅠ ) ,叶绿素 (Chl)a/b >2 0 ,在温和的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)中只显示一条PSⅠ中心复合... 采用TritonX 10 0蔗糖密度梯度离心法 ,从管藻目绿藻刺松藻中分离到三种不同形式的光系统Ⅰ (PSⅠ )复合物 .区带Ⅲ富含PSⅠ核心复合物 (CCⅠ ) ,叶绿素 (Chl)a/b >2 0 ,在温和的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)中只显示一条PSⅠ中心复合物CPⅠ条带 .区带Ⅳ和Ⅴ在 436和 6 74nm、 46 7和 6 5 0nm以及 5 40nm的吸收表明 ,含有Chla、b及管藻黄素和管藻素 ,Chla/b比值分别为 3 2 3和 2 4.经PAGE检测 ,有CPⅠ和CPⅠa两种PSⅠ色素蛋白复合物带 ,因此区带Ⅳ和Ⅴ是由CCⅠ和含量不等的捕光复合物LHCⅠ构成的PSⅠ颗粒 .区带Ⅲ只有 6 6和 5 6ku两种核心多肽 ;区带Ⅳ和Ⅴ除了 6 6、 5 6ku多肽以外 ,还有 4种分子质量为 2 5 ,2 6 ,2 6 2和2 7 5ku的LHCⅠ多肽 .室温荧光光谱显示 ,分离物中的各种光合色素之间保持着良好的能量传递关系 ,由Chlb及管藻黄素和管藻素吸收的能量都可以传递给Chla. 展开更多

关键词 光系统Ⅰ复合物 蔗糖密度梯度离心 多肽 刺松藻 绿藻 分离

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Filipin对人脐静脉内皮细胞小凹蛋白-1作用的研究 被引量：1

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作者 罗小林 梁霄 +4 位作者 赵慧 王静 吴玲玲 钟华 何芳 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第3期337-339,共3页

为探讨filipin对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中小凹蛋白-1(Cav-1)的亚细胞定位影响,为进一步研究Cav-1作用机制提供理论依据。培养2～4代HUVECs随机分为:对照组;filipin处理组;采用Na_2CO_3蔗糖密度梯度离心法提取HUVECs中含caveolae的膜... 为探讨filipin对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中小凹蛋白-1(Cav-1)的亚细胞定位影响,为进一步研究Cav-1作用机制提供理论依据。培养2～4代HUVECs随机分为:对照组;filipin处理组;采用Na_2CO_3蔗糖密度梯度离心法提取HUVECs中含caveolae的膜碎片,Western blot技术鉴定Caveolae和检测Cav-1蛋白表达。结果显示,与Control组比较,filipin处理组caveolae区Cav-1表达减弱(P<0.05)。由此可知,Cav-1富集于HUVECs的caveolae,filipin可抑制Cav-1在小凹的表达。 展开更多

关键词 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 蔗糖密度梯度离心

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小凹蛋白-1和细胞外钙敏感受体在人脐静脉内皮细胞小凹共定位研究 被引量：1

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作者 龚艳 胡清华 +3 位作者 钟华 梁霄 罗小林 何芳 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第3期305-308,共4页

前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HU... 前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HUVECs中Cav-1与CaR的亚细胞定位,可为进一步机制研究提供理论依据。以3~4代HU-VECs随机分为2组:(1)对照组;(2)甲基-β-环糊精(MβCD)处理组,分别采用蔗糖密度梯度离心和Western blot技术提取含小凹膜碎片和检测Cav-1和CaR蛋白的表达。结果显示,(1)MβCD处理组HUVECs细胞中Cav-1和CaR蛋白的表达与对照组相比无差异(P>0.05)。(2)MβCD处理组小凹区Cav-1和CaR蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。由此可知,Cav-1和CaR蛋白共定位于HUVECs的小凹区,MβCD可抑制两者在小凹的共定位。 展开更多

关键词 蔗糖密度梯度离心 甲基-β-环糊精 小凹蛋白-1 细胞外钙敏感受体

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从烟草悬浮细胞中分离液泡前体的方法研究 被引量：1

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作者 莫蓓莘 姜里文 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2005年第2期109-112,共4页

通过跟踪含有液泡前体特异标记物的组分, 利用细胞壁酶水解胞壁制造原生质体, 并用真针头挤压的方法裂解细胞, 用蔗糖密度梯度离心的方法分离液泡前体. 通过相差显微镜观察, 发现所分离的液泡前体保持完整的结构. 利用不同细胞器的标记... 通过跟踪含有液泡前体特异标记物的组分, 利用细胞壁酶水解胞壁制造原生质体, 并用真针头挤压的方法裂解细胞, 用蔗糖密度梯度离心的方法分离液泡前体. 通过相差显微镜观察, 发现所分离的液泡前体保持完整的结构. 利用不同细胞器的标记物抗体进行免疫标记检测, 证明所纯化的液泡前体不含其他细胞器, 具有较高的纯度. 展开更多

关键词 前体 液泡 分离 悬浮细胞 蔗糖密度梯度离心 烟草 显微镜观察 原生质体 免疫标记 标记物 细胞器 酶水解 细胞壁

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鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定 被引量：2

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作者 陈萍 王红宁 +3 位作者 陈俊杰 胡慧琼 周生 余祖华 《湖北农业科学》 北大核心 2005年第3期94-95,103,共3页

通过鸡胚接种盲传,从重庆某地疑似鸡肾型传染性支气管炎的发病鸡群中,分离到一株病毒,该病毒能导致鸡胚出现侏儒胚。用此病毒回归10日龄雏鸡,可使试验鸡出现典型的花斑肾。尿囊液毒穴36～48h雪经差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化,... 通过鸡胚接种盲传,从重庆某地疑似鸡肾型传染性支气管炎的发病鸡群中,分离到一株病毒,该病毒能导致鸡胚出现侏儒胚。用此病毒回归10日龄雏鸡,可使试验鸡出现典型的花斑肾。尿囊液毒穴36～48h雪经差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心纯化,在电镜下能观察到典型的冠状病毒形态,病毒粒子直径为80～120nm,有囊膜、纤突。应用反转录-聚合酶链式反应穴RT-PCR雪技术扩增出了该病毒的特异性基因M和N,这从分子水平进一步证实引起鸡群死亡的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。 展开更多

关键词 鸡肾型传染性支气管炎病毒 分离鉴定 鸡传染性支气管炎病毒 蔗糖密度梯度离心 聚合酶链式反应 特异性基因 鸡胚接种 发病鸡群 10日龄 差速离心 病毒形态 粒子直径 分子水平 不连续 尿囊液 反转录 雏鸡 花斑

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三种方法检测口蹄疫146S抗原含量及抗原稳定性的比较研究 被引量：2

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作者 杨生海 柴静 +6 位作者 郭建荣 王富强 刘西兰 董金杰 张军 翟国元 张勇 《中国兽药杂志》 2020年第6期33-41,共9页

为比较三种口蹄疫146S抗原含量检测方法,分别用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦Cary 100紫外分光光度计定量法、蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法及高效液相体积排阻色谱法三种检测方法,对口蹄疫灭活抗原中的146S含量进行检... 为比较三种口蹄疫146S抗原含量检测方法,分别用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦Cary 100紫外分光光度计定量法、蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法及高效液相体积排阻色谱法三种检测方法,对口蹄疫灭活抗原中的146S含量进行检测,对三种检测方法的数据进行统计分析。将口蹄疫A型抗原和O型抗原各一株分别4℃放置12个月以及反复多次冷冻处理;口蹄疫抗原用全能核酸酶处理,然后用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法检测处理前后的146S抗原含量变化。结果显示,三种检测方法的检测数值相关性极显著,呈正相关性;4℃放置12个月后的抗原含量没有变化,而反复多次冷冻处理后的抗原含量降解非常多;全能核酸酶处理后的抗原含杂蛋白少。本研究表明,基于临床需求,蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法更适合口蹄疫抗原检测;口蹄疫抗原适合于4℃保存;全能核酸酶能有效去除杂蛋白干扰,提高色谱纯化效率。 展开更多

关键词 蔗糖密度梯度离心 口蹄疫146S 安捷伦Cary 100紫外分光光度计 安捷伦1260液相色谱仪 高效体积排阻色谱 全能核酸酶

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乙脑病毒猪源分离株CSF.XZ-2D感染BHK-21细胞毒的浓缩及纯化

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作者 滕蔓 冯丽丽 +6 位作者 罗俊 樊剑鸣 王方雨 郅玉宝 李秀杰 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第12期117-120,139,共5页

研究了日本流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）猪源分离株CSF.XZ-2D感染的BHK-21细胞培养物中JEV的浓缩及纯化方法,对浓缩及纯化后的病毒TCID_（50）效价分别进行测定。结果表明,经差速离心后病毒液在4℃条件下分别... 研究了日本流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）猪源分离株CSF.XZ-2D感染的BHK-21细胞培养物中JEV的浓缩及纯化方法,对浓缩及纯化后的病毒TCID_（50）效价分别进行测定。结果表明,经差速离心后病毒液在4℃条件下分别以30 000 r/min、40 000 r/min、50 000r/min、60 000 r/min超速离心3 h,其中50 000 r/min超速离心可将绝大部分JEV病毒粒子充分沉淀至离心管底部,浓缩效果最佳;病毒沉淀用PBS重悬后进行不连续蔗糖密度梯度离心,病毒粒子主要集中在35%~50%的区带蔗糖层。 展开更多

关键词 乙脑病毒 BHK-21细胞 蔗糖密度梯度离心 浓缩 纯化

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胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量研究

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作者 王蓉 牛刚 +1 位作者 张少娟 贺大林 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期680-683,共4页

目的通过菲律宾菌素III染色和脂质测定法,对胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的分布进行可视化与定量研究。方法利用胆固醇荧光探针菲律宾菌素Ⅲ标记稳定表达phogrin-GFP的MIN6细胞,对比细胞内游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡的分布情况。通... 目的通过菲律宾菌素III染色和脂质测定法,对胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的分布进行可视化与定量研究。方法利用胆固醇荧光探针菲律宾菌素Ⅲ标记稳定表达phogrin-GFP的MIN6细胞,对比细胞内游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡的分布情况。通过连续蔗糖密度梯度离心法分离MIN6细胞中的胰岛素分泌囊泡,应用钼酸铵分光光度法和薄层分析法分别测定生物脂膜中磷脂和游离胆固醇含量,从而得到胆固醇所占比例。结果 MIN6细胞内菲律宾菌素III标记的游离胆固醇与胰岛素分泌囊泡在胞浆中的分布一致,主要聚集在核周及细胞膜下。此外,连续蔗糖密度梯度离心法分离胰岛素分泌囊泡层中富含胆固醇,该层游离胆固醇摩尔百分比为(48.62±3.28)mol%,高于其余各层的细胞器。结论本研究首次进行了胰岛素分泌囊泡双层脂膜中胆固醇的可视化与定量测定,发现胰岛素分泌囊泡富含胆固醇,为进一步研究胆固醇对胰岛素分泌囊泡形成的影响提供了理论基础和方法学依据。 展开更多

关键词 胰岛素 分泌囊泡 胆固醇 菲律宾菌素Ⅲ 蔗糖密度梯度离心

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斑点叉尾病毒(CCV)结构蛋白的鉴定

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作者 毕鹏 吴志新 +1 位作者 苏念 李莉娟 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第21期4841-4845,共5页

采用蔗糖密度梯度离心法分离纯化斑点叉尾病毒(Channel catfish virus,CCV),利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)对得到的样品进行分析。结果共鉴定了13种结构蛋白,包含1种未报道过的结构蛋白ORF22。实验结果为进一步研... 采用蔗糖密度梯度离心法分离纯化斑点叉尾病毒(Channel catfish virus,CCV),利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)对得到的样品进行分析。结果共鉴定了13种结构蛋白,包含1种未报道过的结构蛋白ORF22。实验结果为进一步研究CCV结构蛋白的功能及蛋白质组学提供了参考。 展开更多

关键词 斑点叉尾病毒(Channel CATFISH virus CCV) 结构蛋白 蔗糖密度梯度离心 质谱

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储存mRNA在大豆胚根萌发过程的作用

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作者 莫蓓莘 黄彪 +2 位作者 刘丽 叶浩 徐晓峰 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2013年第1期84-90,共7页

为研究种子是否能完全依靠储存的mRNA或储存的蛋白质完成萌发过程,分别利用转录抑制剂α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)和制剂放线菌酮处理大豆胚根,抑制新的mRNA或新的蛋白质的合成,观察大豆胚根的萌发情况.结果发现,在转录抑制的条件下,大豆... 为研究种子是否能完全依靠储存的mRNA或储存的蛋白质完成萌发过程,分别利用转录抑制剂α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)和制剂放线菌酮处理大豆胚根,抑制新的mRNA或新的蛋白质的合成,观察大豆胚根的萌发情况.结果发现,在转录抑制的条件下,大豆胚根能够完成萌发,种子萌发后,种苗生长停止;在翻译被抑制的条件下,大豆胚根不能完成萌发.说明大豆胚根萌发能够依赖发育过程合成并贮存在干种子中的mRNA;但种苗的发育不能完全依赖储存的RNA,需要新合成的mRNA参与.大豆胚根不能依赖储存蛋白质完成萌发过程.对大豆胚根细胞内容物进行超速离心并对不同组分中mRNA含量进行定量分析发现,干种子中的mRNA主要存在于多核糖体之外的细胞结构中,而在萌发过程中,mRNA主要存在于多核糖体中.这表明干种子中的mRNA主要以储存状态存在于mRNA的储存结构中,萌发过程大部分mRNA从储存结构中转移到多核糖体中变为活跃的翻译状态.不同萌发时期多核糖体的特征曲线也体现mRNA在细胞内存在位置的这种变化. 展开更多

关键词 植物细胞生理学 贮存信使核糖核酸 大豆胚根 种子萌发 转录抑制剂 α-鹅膏蕈碱 翻译抑制剂 放线菌酮 实时定量聚合酶链式反应 蔗糖密度梯度超速离心

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H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究 被引量：4

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作者 彭成成 吴熠潇 +1 位作者 刘旭平 谭文松 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2069-2078,共10页

为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯... 为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8~32 mL范围内具有良好的线性关系(R^2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 血凝素 蔗糖密度梯度离心 纯化 SDS-PAGE 定量

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