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云南省库蠓源蓝舌病病毒16型的分离鉴定
1
作者 付嘉佳 李富祥 +4 位作者 王金萍 何于雯 谢佳芮 高华峰 李小兵 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期37-43,共7页
为了解云南省部分地区库蠓源蓝舌病病毒(BTV)流行情况,本试验于2023年7—10月分别从云南省昆明市宜良县和保山市龙陵县采集昆虫样品进行种属鉴定和虫媒病毒分离鉴定。基于昆虫的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行BLAST序列... 为了解云南省部分地区库蠓源蓝舌病病毒(BTV)流行情况,本试验于2023年7—10月分别从云南省昆明市宜良县和保山市龙陵县采集昆虫样品进行种属鉴定和虫媒病毒分离鉴定。基于昆虫的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行BLAST序列比对和种属鉴定。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测、病毒分离培养、间接免疫荧光试验和病毒毒价测定对所获得的虫媒病毒进行分离和鉴定,以及遗传进化分析。结果显示,采集的昆虫样品分别属于尖音库蚊、隐匿库蠓、拜氏铗蠓和蠓科。其中,采自云南省保山市龙陵县的样品RT-PCR检测结果为BTV阳性,经BHK-21细胞连续传代培养,得到1株BTV分离株;间接免疫荧光试验结果显示,分离株能与BTV-16标准阳性血清发生特异性反应,初步确定该分离株为BTV-16,将其命名为YNLL-BTV16-2023,其毒价为10-5.1/0.1 mL。遗传进化分析结果显示,分离株VP2基因序列与2株日本分离株基因序列(GenBank登录号:LC586239.1和AB686220.1)核苷酸同源性最高,分别为97.20%和96.87%,VP3基因序列与中国云南省分离株VP3基因序列(GenBank登录号:MG564322.1)核苷酸同源性为99.26%,VP5基因序列与日本分离株(GenBank登录号:AB686236.1)核苷酸同源性为97.77%,VP7基因序列与2株中国分离株(GenBank登录号:AF172831.1和KT002584.1)核苷酸同源性均为98.80%。结果表明,云南省保山市龙陵县边境地区存在BTV-16毒株,该血清型病毒可通过隐匿库蠓携带。本试验为云南省边境地区BTV及其传播媒介的分布提供参考。 展开更多
关键词 隐匿库蠓 蓝舌病病毒16型(btv-16) 分离和鉴定 遗传进化分析
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基于泛素-蛋白酶体系统的蓝舌病病毒对视黄酸诱导基因I信号传导的调控
2
作者 鲁丹枫 张振兴 +2 位作者 李占鸿 朱沛 李卓然 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第5期637-648,共12页
【目的】视黄酸诱导基因I(Retinoic acid inducible gene I,RIG-I)泛素化修饰链上第48位赖氨酸(Lysine,Lys)残基连接的多泛素链能够调控RIG-I蛋白的稳定性,以防止RIG-I信号和宿主抗病毒反应的过度激活。本研究旨在探讨蓝舌病病毒(Blueto... 【目的】视黄酸诱导基因I(Retinoic acid inducible gene I,RIG-I)泛素化修饰链上第48位赖氨酸(Lysine,Lys)残基连接的多泛素链能够调控RIG-I蛋白的稳定性,以防止RIG-I信号和宿主抗病毒反应的过度激活。本研究旨在探讨蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)是否也通过影响RIG-I的泛素化修饰调控其信号传导而利于自身增殖。【方法】以BTV感染永生化绵羊肺动脉血管内皮(Sheep pulmonary artery endothelium,SPAE)细胞,分别利用蛋白酶体抑制剂MG-132和去泛素化酶(Deubiquitinase,DUB)抑制剂PR-619处理细胞,通过RTqPCR分别检测环指蛋白125(Ring finger protein 125,RNF125)、泛素特异性蛋白酶4(Ubiquitin-specific protease4,USP4)、RIG-I、干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)和干扰素α(Interferonα,IFN-α)的转录水平以及BTV基因组拷贝数;利用免疫印迹(Western blotting)和ELISA检测以上蛋白的表达水平;采用免疫荧光(Immunofluorescence)检测IRF3核转移水平。【结果】BTV感染上调RNF125、RIG-I、IRF3和IFN-α的转录和表达水平,转录水平上调1.20~8.68倍,表达水平上调0.06~3.94倍;USP4的转录水平轻微上调,但表达水平下调。蛋白酶体抑制剂MG-132显著抑制BTV诱导的RIG-I降解,并导致IRF3细胞核转移率在感染后24 h(24 hour post-infection,24 hpi)和48 hpi较未处理对应组别分别上升9.67和8.66个百分点,IFN-α表达水平在48 hpi上调至未处理对应组别的2.18倍,BTV基因组拷贝数在24和48 hpi分别降低至未处理对应组别的74%和85%。DUB抑制剂PR-619处理明显促进RIG-I降解,IRF3细胞核转移率在24和48 hpi较未处理对应组别分别下降8.00和16.67个百分点,IFN-α表达水平在24 hpi下调至未处理对应组别的56.50%,BTV基因组拷贝数在24和48 hpi分别增加至未处理对应组别的1.93和1.49倍。【结论】BTV利用泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system)调控宿主RIG-I信号传导而利于自身增殖。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 视黄酸诱导基因I 泛素化修饰 蛋白酶体 降解
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免疫共沉淀联合质谱技术筛选蓝舌病病毒NS4蛋白的互作蛋白
3
作者 马鲜平 陈玉娟 +8 位作者 罗世美 卓晓静 杨义彬 刘祎毅 蔡旭研 唐艺匀 陈畅昶 魏小蓉 易华山 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期779-789,共11页
[目的]筛选蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)NS4蛋白颉颃干扰素(interferon, IFN)信号通路的内源性互作蛋白,以便进一步研究NS4抑制IFN信号转导的作用机制。[方法]在前期仙台病毒(Sendai virus, SeV)诱导IFN信号通路基因表达研究基础... [目的]筛选蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)NS4蛋白颉颃干扰素(interferon, IFN)信号通路的内源性互作蛋白,以便进一步研究NS4抑制IFN信号转导的作用机制。[方法]在前期仙台病毒(Sendai virus, SeV)诱导IFN信号通路基因表达研究基础上,利用免疫共沉淀方法从转染NS4融合eGFP标签表达载体pcDNA3.1-NS4-eGFP和pcDNA3.1-eGFP空载体的HEK-293T细胞中钓取NS4互作蛋白,对免疫沉淀物进行SDS-PAGE分析,免疫共沉淀洗脱液进行质谱鉴定及生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测候选蛋白的编码基因表达特征。[结果]通过免疫共沉淀及质谱鉴定分析和数据库比对,共获得189个差异表达蛋白。生物信息学分析结果显示,候选蛋白主要参与蛋白转录、翻译、病毒感染及免疫调控。亚细胞定位分析结果显示,差异表达蛋白主要定位于细胞核、细胞质以及胞质-胞核,筛选出4个与BTV NS4蛋白存在互作的候选蛋白:多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、细胞周期依赖性蛋白激酶9(CDK9)、N-端豆蔻酰化酶1(NMT1)和Y盒结合蛋白1(YBX1)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,SeV刺激72 h后,试验组PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9基因mRNA表达量均显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01)。[结论]BTV NS4蛋白颉颃IFN信号通路与PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9蛋白表达上调有关,本试验结果为进一步研究BTV NS4蛋白颉颃宿主天然免疫应答的分子机制提供靶标参考。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒(btv) 免疫共沉淀 质谱分析 NS4蛋白
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羊蓝舌病的诊断与防治
4
作者 成大荣 《农家致富》 2025年第13期38-39,共2页
蓝舌病是由蓝舌病病毒引起反刍动物感染的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征,主要侵害绵羊。一、病原特性蓝舌病病毒属呼肠孤病毒科环状病毒属成员,可在干燥血清或血液中长期存活,也可存活于腐败的血液... 蓝舌病是由蓝舌病病毒引起反刍动物感染的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征,主要侵害绵羊。一、病原特性蓝舌病病毒属呼肠孤病毒科环状病毒属成员,可在干燥血清或血液中长期存活,也可存活于腐败的血液中,病毒在康复动物体内能存活4个月左右;对乙醚、氯仿和0.1%去氧胆酸钠有一定抵抗力;在50%甘油中于室温下可保存多年;3%福尔马林、2%过氧乙酸和70%乙醇可使其灭活. 展开更多
关键词 溃疡性炎症 呼肠孤病毒科 传染病 蓝舌病
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中国2012—2022年羊群中蓝舌病毒流行的Meta分析 被引量：4
5
作者 高辉 方敏 +7 位作者 姜玲玲 马耀玉 刘强 张刚 牛小霞 王璞 李勇 张思浓 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期706-717,共12页
旨在系统评价和分析我国2012—2022年羊群中蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染状况,为我国羊群BTV防控提供理论依据。通过检索2012—2022年中国知网(CNKI)、万方、维普、PubMed和ScienceDirect 5个数据库中对中国羊群BTV流行情况研究... 旨在系统评价和分析我国2012—2022年羊群中蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染状况,为我国羊群BTV防控提供理论依据。通过检索2012—2022年中国知网(CNKI)、万方、维普、PubMed和ScienceDirect 5个数据库中对中国羊群BTV流行情况研究的文献并进行Meta分析。检索并筛选后共纳入Meta分析的有28篇文献,涉及样本总数为38226头羊,其中9109头羊为BTV阳性。分析显示,我国羊群中BTV的整体流行率为23.8%(95%CI:23.4,24.3),其中绵羊流行率为29.4%(95%CI:14.7,44.1),山羊流行率为25.1%(95%CI:18.6,31.7)。我国各省/市间比较发现,重庆市流行率最高,为34.6%(95%CI:32.0,37.1),其次为云南省和内蒙古自治区。亚组分析发现,我国5大区域BTV流行率存在显著地区差异(P=0.011),中国东部、南部、西部、北部及中部地区流行率分别为6.1%(95%CI:4.3,7.9)、33.8%(95%CI:29.5,38.1)、21.7%(95%CI:17.1,26.2)、21.0%(95%CI:8.3,33.6)及26.6%(95%CI:24.3,28.8)。同时,检测方式和气候类型也是我国羊群中BTV流行的风险因子(P<0.05)。上述分析结果提示,我国羊群中BTV流行率较高并且分布广泛,有必要持续对我国BTV的感染状况进行监测并采取适当的预防措施。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 蓝舌病 羊 流行率 META分析
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蓝舌病病毒VP7抗原在重组杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
6
作者 王乃福 刘志玲 +4 位作者 吴冬雪 孙雨 孙航 宋晓晖 张海滨 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第5期31-36,共6页
本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化... 本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原,为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pFastBacHTA载体上,并构建相应的重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac,转染sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达制备蓝舌病病毒VP7抗原。结果显示,重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac转染sf9昆虫细胞并连续盲传5代后,成功获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株,并成功表达纯化出VP7蛋白,大小约为43 kDa,蛋白纯度约为94%;VP7重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。综上,重组VP7蛋白能够与BTV阳性血清呈现特异性反应,具有良好的反应原性,蛋白纯度高,并且具有病毒蛋白的生物学活性,将其作为诊断抗原,后期可用于开发系列免疫学抗体诊断检测技术。 展开更多
关键词 蓝舌病 重组VP7抗原 杆状病毒 真核表达 蛋白鉴定
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蓝舌病病毒感染对绵羊微血管内皮细胞中Ⅰ型干扰素应答的影响
7
作者 罗世美 陈韵伊 +7 位作者 李其沙 周艳梅 胡雪柔 李铭悦 魏子昱 李芳 马鲜平 易华山 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5631-5640,共10页
蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒,而绵羊微血管内皮细胞(sheep lung microvascular endothelial cells,SLMECs)构成肺半选择性屏障,为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。本... 蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒,而绵羊微血管内皮细胞(sheep lung microvascular endothelial cells,SLMECs)构成肺半选择性屏障,为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。本研究通过BTV噬斑试验以感染复数(MOI)为1的BTV诱导18、24、36 h的SLMECs,通过实时荧光定量PCR分析干扰素相关通路基因mRNA表达特征,以及Western blot分析MDA5、TRAF3、RIG-I和TBK1蛋白表达。结果表明,在诱导36 h时,干扰素信号通路基因mRNA表达的变化最明显,RIG-I、MDA5、IKKε、IFN-β、TBK 1和TRAF 6基因mRNA上调表达,差异极显著;而IFN-α、VISA、USP 18基因mRNA下调表达,差异极显著;在蛋白水平上MDA5、TBK1、RIG-I和TRAF3蛋白都上调表达。本研究发现BTV可感染SLMECs诱导Ⅰ型干扰素免疫应答,为进一步分析IFN-I信号通路的激活在抗BTV感染天然免疫应答中的作用机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 Ⅰ型干扰素 绵羊肺微血管内皮细胞
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蓝舌病病毒(BTV)单克隆抗体研究一报——杂交瘤细胞系的建立
8
作者 张开礼 吴德兴 +4 位作者 李志华 胡玉玲 李根 彭克高 张念祖 《云南畜牧兽医》 1989年第4期34-36,共3页
蓝舌病病毒(Bluetongue Virus)属呼肠孤病毒科(Reovividae)、环状病毒属(Orbivirus),蓝舌病毒亚群(Subgroup)的成员。目前已发现有24个血清型。在通常的群特异性定性检测中,该病毒各型之间,以及与其相关的病毒(如鹿流行性出血病病毒(Epi... 蓝舌病病毒(Bluetongue Virus)属呼肠孤病毒科(Reovividae)、环状病毒属(Orbivirus),蓝舌病毒亚群(Subgroup)的成员。目前已发现有24个血清型。在通常的群特异性定性检测中,该病毒各型之间,以及与其相关的病毒(如鹿流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus),茨城病毒(Ibaraki Virus)) 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 btv 茨城病 环状病毒属 呼肠孤病毒科 杂交瘤细胞系 单克隆抗体 定性检测 型特异性 血清型
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羊蓝舌病的诊断及其综合防控
9
作者 唐成 《畜牧兽医科技信息》 2025年第3期136-138,共3页
羊蓝舌病是一种传染性疾病,主要发生在夏秋湿热季节,绵羊和1岁左右的小羊易感,整体感染率和死亡率较高。该病由蓝舌病病毒引起,病毒通过库蠓叮咬携带病毒的羊后传播给健康羊,也可以通过直接接触传播。除绵羊外,其他反刍类牲畜也可能被... 羊蓝舌病是一种传染性疾病,主要发生在夏秋湿热季节,绵羊和1岁左右的小羊易感,整体感染率和死亡率较高。该病由蓝舌病病毒引起,病毒通过库蠓叮咬携带病毒的羊后传播给健康羊,也可以通过直接接触传播。除绵羊外,其他反刍类牲畜也可能被感染。感染后病羊发热,厌食,口腔、舌部、鼻部、蹄部会出现明显溃疡,随着病情的发展,皮肤出现丘疹和坏死,可能引发心脏、肺部、肠道等病变,严重时可导致死亡,病死率最高可达90%。因此,应重视羊蓝舌病的诊断与综合防控工作,以降低感染率,确保养殖的经济效益。 展开更多
关键词 羊蓝舌病 羊蓝舌病诊断 蓝舌病病毒
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羊蓝舌病的流行病学特征与防控策略
10
作者 李占领 《北方牧业》 2025年第2期33-33,共1页
羊蓝舌病作为一种由蓝舌病病毒诱发的非直接接触性传染疾病,主要侵扰绵羊、山羊等反刍类动物。此病广泛分布于全球多个地域,尤其在温带及热带区域更为频发。疫情的蔓延对畜牧业经济构成了重大威胁,故而,深入探究其流行病学特点并制定高... 羊蓝舌病作为一种由蓝舌病病毒诱发的非直接接触性传染疾病,主要侵扰绵羊、山羊等反刍类动物。此病广泛分布于全球多个地域,尤其在温带及热带区域更为频发。疫情的蔓延对畜牧业经济构成了重大威胁,故而,深入探究其流行病学特点并制定高效防控措施极为必要。 展开更多
关键词 羊蓝舌病 蓝舌病病毒 非直接接触性传染
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蓝舌病病毒BTV-1型的分离鉴定 被引量：7
11
作者 肖雷 孟锦昕 +6 位作者 李楠 高林 何于雯 杨恒 胡骑 李华春 朱建波 《上海畜牧兽医通讯》 2014年第4期5-7,共3页
蓝舌病（BT）是由蓝舌病病毒（BTV）通过吸血昆虫一库蠓叮咬传播，感染牛羊等反刍动物的一种非接触性传染病，分布于热带、亚热带和温带地区。
关键词 蓝舌病病毒 分离鉴定 接触性传染病 吸血昆虫 反刍动物 温带地区 亚热带 牛羊
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蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定 被引量：12
12
作者 吕敏娜 杨恒 +8 位作者 孙铭飞 李娟 林栩慧 张健騑 廖申权 戚南山 吴彩艳 李华春 陈琴苓 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1281-1287,共7页
为监测广东省蓝舌病流行状况,2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品,检测虫媒病病原,对经RTPCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝,研磨后离心取上清转接C6/36细胞和BHK-21细胞,出现CPE,RT-PCR检... 为监测广东省蓝舌病流行状况,2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品,检测虫媒病病原,对经RTPCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝,研磨后离心取上清转接C6/36细胞和BHK-21细胞,出现CPE,RT-PCR检测蓝舌病病毒的VP7基因并进行序列比对,电镜观察病毒粒子,证实分离到蓝舌病病毒,命名为GD/ST2014。进一步扩增VP2基因,进行系统发育树分析,以及血清中和试验,表明此分离株为血清型7型。这是国内首次报道牛源蓝舌病病毒血清型7型的分离鉴定。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 分离 鉴定 血清型 序列分析
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蓝舌病病毒一步RT-PCR检测方法的建立 被引量：3
13
作者 冯瑜菲 赵国辉 +4 位作者 徐青元 杨涛 孙恩成 李俊平 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期712-714,共3页
为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异... 为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异性反应,而对茨城病毒（IBAV）、中山病毒（CV）和赤羽病病毒（AKAV）无交叉反应,具有良好的特异性;最低检出量为102 TCID50/mL.此外,该方法能有效的从羊的抗凝血样品中检测出BTV核酸.本研究所建立的一步RT-PCR检测方法可以用于BTV的快速检测及流行病学调查. 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 分子诊断 BLUETONGUE VIRUS (btv)
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云南省师宗县蓝舌病病毒的分离及鉴定 被引量：15
14
作者 肖雷 孟锦昕 +6 位作者 李楠 高林 何于雯 杨恒 胡骑 李华春 朱建波 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第4期1-6,共6页
为了解近年来云南省师宗县蓝舌病病毒流行情况，2012年在师宗县五龙乡建立了10头蓝舌病血清学阴性黄牛的监控动物群。从2012年5-10月，每周采血1次，11-12月，每月采血1次，采用C-ELISA进行血清学监测。8月开始动物血清学检测结果转阳... 为了解近年来云南省师宗县蓝舌病病毒流行情况，2012年在师宗县五龙乡建立了10头蓝舌病血清学阴性黄牛的监控动物群。从2012年5-10月，每周采血1次，11-12月，每月采血1次，采用C-ELISA进行血清学监测。8月开始动物血清学检测结果转阳性，至11月，监控动物全部转为阳性。用转阳前1周、转阳本周、转阳后2-13周的经处理的红细胞静脉接种鸡胚，收获鸡胚肝脏，用PBS悬浮捣碎的鸡胚肝脏，上清接种于C6/36细胞一代、BHK-21三代后，出现细胞病变（cytopathic effect, CPE）。采用RT-PCR方法，针对蓝舌病较为保守的血清型群特异片段VP7设计了2对引物，扩增其相应片段。结果显示，共分离到86份疑似分离物，其中67份疑似分离物细胞培养液上清经RT-PCR扩增，均扩增出1156 bp片段，初步确认为蓝舌病病毒。采用国际24个蓝舌病标准毒及24个标准阳性血清对86份疑似分离物及其对应血清进行细胞微量中和试验，67份毒株为蓝舌病病毒，与RT-PCR结果一致。通过对2份经中和试验定型为BTV-1、BTV-16分离株的VP2基因测序分析发现，BTV-1株序列与同型Y863（登录号：KC879616）参考毒株的同源性为92%，BTV-16株序列与登录号为AB686221的毒株同源性为99%。结果表明共分离到67株蓝舌病毒株，分离株主要为BTV-1、BTV-9、BTV-16三个血清型。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 分离 鉴定
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蓝舌病病毒VP7基因的原核表达 被引量：10
15
作者 宋红梅 杨涛 +5 位作者 马健男 王群 张维军 徐青元 杨增岐 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期925-928,共4页
为获得蓝舌病病毒(BTV)VP7基因的原核表达蛋白,本实验采用RT-PCR方法扩增出了血清1型BTV的VP7基因,并克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,构建了重组质粒pMAL-VP7。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.5mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳... 为获得蓝舌病病毒(BTV)VP7基因的原核表达蛋白,本实验采用RT-PCR方法扩增出了血清1型BTV的VP7基因,并克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,构建了重组质粒pMAL-VP7。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.5mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白MBP-VP7以可溶形式存在,分子质量约为90ku。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了检测BTV血清抗体的间接ELISA诊断方法,为今后进一步开展BTV诊断研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 VP7基因 原核表达
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蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 被引量：13
16
作者 王凌凤 杨涛 +7 位作者 孙恩成 耿宏伟 秦永丽 赵晶 蔡绪禹 刘霓红 李文京 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期465-470,共6页
为制备蓝舌病病毒(BTV)血清17型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究用原核表达系统部分重叠表达的两段VP2蛋白共同免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术获得杂交瘤细胞,通过以重组VP2蛋为白包被抗原的间接ELISA筛选获得2株稳... 为制备蓝舌病病毒(BTV)血清17型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究用原核表达系统部分重叠表达的两段VP2蛋白共同免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术获得杂交瘤细胞,通过以重组VP2蛋为白包被抗原的间接ELISA筛选获得2株稳定分泌抗BTV17 VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株,分别命名为3F4和4H10。Ig亚类鉴定2株MAbs均为IgG1/κ链。Western blot证明,2株MAbs均能识别重组VP2蛋白。间接免疫荧光试验表明:2株MAbs均与BTV17呈阳性反应,其中MAb 3F4与BTV1、BTV2、BTV3、BTV5、BTV8、BTV11、BTV13、BTV16、BTV23、茨城病病毒(IBAV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼肠孤病毒(RV)均呈阴性反应,但与BTV10和BTV24呈弱阳性反应。利用合成多肽对VP2抗原表位鉴定结果表明,MAb 3F4识别的抗原表位为540DPWNNR545,MAb 4H10识别的抗原表位为540DPWNNRA546。本研究结果为建立BTV17型特异性检测方法及VP2功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒血清17型 VP2 原核表达 单克隆抗体 抗原表位
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基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：6
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作者 易华山 赵瑶 +13 位作者 马鲜平 李欢 夏宇 朱文青 刘倩如 陈思倩 曹慧贞 姚婷 高丽旭 张金阳 杨发挥 魏晓蓉 李前勇 谢远兵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3133-3140,共8页
旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主... 旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳工作浓度为1∶4000,临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1∶1600;批内和批间重复性变异系数均小于10%;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98%,阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 NS 4基因 原核表达 间接ELISA
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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立 被引量：9
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作者 耿宏伟 秦永丽 +11 位作者 李俊平 杨涛 孙恩成 刘霓红 白安斌 徐青元 王凌凤 赵晶 覃绍敏 林俊 郭怡璠 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期388-392,共5页
为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 重组VP7蛋白 群特异性单克隆抗体 竞争ELISA
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小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用 被引量：9
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作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2020年第4期1-7,共7页
旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标... 旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%~100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 蓝舌病病毒 多重荧光RT-LAMP 检测
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云南蓝舌病病毒1型毒株M6基因序列分析 被引量：8
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作者 李楠 朱建波 +5 位作者 肖雷 李乐 杨恒 孟锦昕 何于雯 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期340-347,共8页
为了解云南蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）1型M6基因流行株的遗传变异及其与国内外流行病毒的遗传进化关系,试验从细胞培养物中分别提取4株云南分离株BTV-1（Y863、SZ120169、6-12和7-12）RNA,用M6基因特异引物进行RT-PCR扩增和测... 为了解云南蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）1型M6基因流行株的遗传变异及其与国内外流行病毒的遗传进化关系,试验从细胞培养物中分别提取4株云南分离株BTV-1（Y863、SZ120169、6-12和7-12）RNA,用M6基因特异引物进行RT-PCR扩增和测序,采用生物信息学软件对获得的M6基因编码区序列进行核苷酸、氨基酸同源性比对及遗传进化分析。结果表明,分别获得4株云南分离株BTV-1 M6基因1 763bp序列;4株云南分离株BTV-1核苷酸同源性在95.2%-99.9%之间,氨基酸同源性在97.6%-99.8%之间,1979年师宗分离的Y863病毒毒株与2012年师宗（SZ120169）、2013年江城（6-12、7-12）分离的3株病毒毒株核苷酸同源性分别为95.5%、95.2%和95.2%,氨基酸同源性分别为97.6%、98.4%和98.2%,而近两年（2012、2013）分离病毒核苷酸和氨基酸同源性较高,分别在96.9%-99.9%和99.1%-99.8%之间;遗传进化分析发现,4株云南分离株BTV-1为Eastern基因群病毒,它们之间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.2%-99.9%和97.6%-99.8%;进一步分析发现4株云南分离株BTV-1与希腊及澳大利亚BTV-1型毒株亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.4%-95.6%和95.1%-99.1%,而与地中海国家（意大利、法国、阿尔及利亚、摩洛哥和突尼斯）和南非毒株关系较远,核苷酸和氨基酸同源性分别在83.8%和95.7%以下。4株云南分离株BTV-1属于Eastern基因群病毒,云南分离株BTV-1 M6基因在自然进化中发生遗传变异缓慢,该基因可以用来进行BTV-1基因群分布及毒株的地理区域来源相关的研究。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 M6基因 序列分析
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