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乳品中金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫传感检测方法的研究 被引量：6
1
作者 高博 孙秀兰 +1 位作者 张银志 顾小红 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期169-172,共4页
本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ... 本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ng/mL和10～100 ng/mL,相关系数分别为0.9939和0.9926,检出限(S/N=3)为0.667 ng/mL,乳品检测回收率在84.3%～93.2%之间。该传感器特异性良好,稳定性好,可再生使用,可应用于乳品中SEB的快速检测。 展开更多
关键词 免疫传感器 金黄色葡萄球菌肠毒素B L-半胱氨酸 纳米金 交流阻抗谱
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葡萄球菌肠毒素联合热灌注化疗治疗100例恶性腹水的临床研究 被引量：4
2
作者 倪秉强 张志红 +5 位作者 罗展雄 李旌 陈日新 徐艺安 朱州 郑青平 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期14-17,共4页
目的：探讨腹腔热灌注化疗联用葡萄球菌肠毒素（staphyloentero—toxin，SE）行热灌注生物化疗对腹盆腔晚期恶性肿瘤并发腹水的增效减毒的临床治疗效果。方法：100例腹盆腔晚期恶性肿瘤并发恶性腹水的患者利用随机、前瞻的方法分为对照... 目的：探讨腹腔热灌注化疗联用葡萄球菌肠毒素（staphyloentero—toxin，SE）行热灌注生物化疗对腹盆腔晚期恶性肿瘤并发腹水的增效减毒的临床治疗效果。方法：100例腹盆腔晚期恶性肿瘤并发恶性腹水的患者利用随机、前瞻的方法分为对照组50例行热灌注化疗。治疗组50例行热灌注化疗联用SE。观察对腹水的治疗效果、生存期、细胞免疫的影响及毒副作用等。结果：治疗组、对照组的腹水有效率分别86．0％（43／50）及68．0％（34／50）（χ^2=4．574，P=0．032），其中治疗两次后治疗组腹水的全消率占该组的82．5％（33／40），对照组为58．1％（18／31）（χ^2=9．004，P=0．003）。两组总生存期无统计学显著性差异（P=0．548）。治疗组的KPS改善率为84．0％（42／50），对照组为66．0％（33／50），两组改善率相比有显著差异（χ^2=4．320，P=0．038）；治疗组患者细胞免疫的改善作用优于对照组。治疗组与对照组的Ⅱ度以上的白细胞下降的发生率分别为8．0％、24．0％，有显著性差异（χ^2=4．762，P=0．029）；同时，两组Ⅱ度以上血小板下降的发生率分别为8．0％、26．0％，有显著性差异（χ^2=5．741，P=0．017），治疗组的血小板下降发生率低于对照组。治疗组的血液毒性明显低于对照组。结论：腹腔热灌注化疗是治疗腹盆腔晚期肿瘤并发腹水的一个简单、安全、经济、有效的方法，联用SE可起到增效减毒的效果，且可减少治疗次数，可提高患者的生存质量。 展开更多
关键词 恶性肿瘤 恶性腹水 腹腔热灌注化疗 葡萄球菌肠毒素
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重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定金黄色葡萄球菌肠毒素A融合基因上的应用 被引量：4
3
作者 易平勇 余海 +2 位作者 马文学 孙文均 姜槐 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第5期412-414,共3页
目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼... 目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼接并与 p GEM- T克隆载体连接 ,酶切和测序鉴定。结果 :成功扩增出 h PLAP- 1C末端信号肽序列 131bp和 SEA基因序列 796 bp;经测序证实 ,二段基因序列成功拼接 (90 1bp)。结论 :重叠区扩增基因拼接法能将 SEA基因与 h PL AP- 1C末端信号肽序列拼接 ,形成融合基因。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素A 碱性磷酸酶 重叠区扩增基因拼接法
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金黄色葡萄球菌肠毒素 被引量：29
4
作者 柳旭伟 葛文霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期86-90,共5页
金黄色葡萄球菌是一种重要的病原体,它产生多种类型的毒素,从而引起各种类型的疾病。金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins,SEs),是一组血清学上互不相同的热稳定肠毒素,有10个血清型。由于食入了被SEs污染的食品而主要引... 金黄色葡萄球菌是一种重要的病原体,它产生多种类型的毒素,从而引起各种类型的疾病。金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins,SEs),是一组血清学上互不相同的热稳定肠毒素,有10个血清型。由于食入了被SEs污染的食品而主要引起肠胃炎,此外,SEs还是一种强的超抗原,它可以刺激非特异性T细胞增殖。SEs各型之间有着相似的结构和功能。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素 致病性 肠毒素检测
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金黄色葡萄球菌肠毒素及移动基因元件研究进展 被引量：11
5
作者 王琼 唐俊妮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第3期241-246,共6页
金黄色葡萄球菌肠毒素是一种热源性的超抗原。食用被肠毒素污染的食物能够引起食物中毒,导致恶心、呕吐、腹痛有时伴随腹泻。本文综述了肠毒素的分类命名、理化性质、以及编码不同肠毒素的基因在移动基因元件中的存在情况。这些移动基... 金黄色葡萄球菌肠毒素是一种热源性的超抗原。食用被肠毒素污染的食物能够引起食物中毒,导致恶心、呕吐、腹痛有时伴随腹泻。本文综述了肠毒素的分类命名、理化性质、以及编码不同肠毒素的基因在移动基因元件中的存在情况。这些移动基因元件在金黄色葡萄球菌毒力传播和进化过程中起着至关重要的作用,了解它们对于金黄色葡萄球菌流行病学溯源以及理解毒力机制具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 葡萄球菌肠毒素 理化性质 移动基因元件
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葡萄球菌肠毒素A脂质体诱导人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞分泌细胞因子的实验研究 被引量：4
6
作者 李志宇 薛华 +1 位作者 何生 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 2004年第12期1076-1078,1082,共4页
目的 :研究脂质体包裹的葡萄球菌肠毒素A(SEA)是否仍然具有游离SEA刺激淋巴细胞分泌细胞因子的能力。　方法 :从 5例原发性肝癌患者癌组织中分离培养肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) ,分别以葡萄球菌肠毒素A脂质体(L SEA)、游离葡萄球菌肠毒素A(... 目的 :研究脂质体包裹的葡萄球菌肠毒素A(SEA)是否仍然具有游离SEA刺激淋巴细胞分泌细胞因子的能力。　方法 :从 5例原发性肝癌患者癌组织中分离培养肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) ,分别以葡萄球菌肠毒素A脂质体(L SEA)、游离葡萄球菌肠毒素A(SEA)和白细胞介素 2 (IL 2 )刺激后 ,以ELISA法检测其产生的细胞因子肿瘤坏死因子 α(TNF α)和γ干扰素 (IFN γ)的浓度。　结果 :除第 4天L SEA刺激组IFN γ水平低于SEA刺激组 (P <0 .0 5 )外 ,此两组的细胞因子分泌无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而且都高于IL 2组 (P <0 .0 5 )。　结论 :L 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 脂质体 肿瘤浸润淋巴细胞 肿瘤坏死因子 干扰素
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葡萄球菌肠毒素A基因原核表达系统的构建及其表达产物的鉴定 被引量：2
7
作者 徐水凌 毛亚飞 +2 位作者 张梅光 罗冬娇 严杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期163-167,共5页
目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-S... 目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-SEA-E.coliBL21DE3。采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA。采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值。采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用。结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100%。rSEA表达量约为细菌总蛋白的25%。rSEA对Vero细胞的TCIC50为3.14μg。1.0-20.0mg/L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0-20.0mg/LrSEA作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论:成功地构建了rSEA原核表达系统。rSEA仍然具有生物学活性。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEA突变体的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 基因表达 原核表达 HEPG2细胞 HELA细胞 Veto细胞
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及鉴定 被引量：3
8
作者 张琨 张月娟 万一 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期69-73,共5页
为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),... 为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),并在E.coil BL21(DE3)中得到有效表达,表达量达65.8%;采用Ni柱亲和层析和DEAE阴离子层析两步纯化得到纯度为95.2%的SEB,Western-blot和SEB免疫层析快速检测试纸条检测显示所纯化的重组SEB具有SEB的抗原性,可用于SEB快速检测试纸的应用研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素B 原核表达 纯化 免疫层析快速检测
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热诱导潜在食物中毒威胁源重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素去折叠及聚合过程 被引量：2
9
作者 刘骥 田万帆 +3 位作者 唐俊妮 陈娟 赵燕英 于基成 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第21期32-45,共14页
热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光... 热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光谱、荧光光谱、变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳监测重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素(recombinant staphylococcal enterotoxin M,rSEM)热诱导变性过程。结果表明,在低于40℃时,rSEM具有富含α-螺旋(17%)、β-折叠(32%)、转角(21%)的天然折叠态结构,分子表面唯一的121号色氨酸残基位于β-掌型结构域中相对疏水的环境中。随着温度从42℃升高到55℃,rSEM二级结构中减少的α-螺旋含量被增加的β-折叠/转角含量所弥补,蛋白质分子之间聚集状态未发生明显改变,最大荧光发射波长明显蓝移,同时350 nm和340 nm波长处的荧光强度比表现出反S型曲线,说明42~55℃温和加热可导致另一种形式的rSEM折叠中间态(intermediate state,IS)形成。在55~90℃温度范围内,rSEM二级结构基本维持稳定。与此同时,当加热温度从65℃升高至80℃时,350 nm与340 nm波长处的荧光发射强度比并未显示出蛋白处于完全变性状态,说明在加热过程中rSEM二级结构基本维持稳定,而三级结构具有较大动态变化的可能性,这可能与β-掌型结构域可以通过诱导契合结合具有不同构象的主要组织性相容复合体等位基因产物有关系。此外,在70℃乃至更高的温度,rSEM的聚集程度明显增加并且在90℃时达到最大。综上,rSEM中间态形成、聚合体产生以及稳定的β-折叠/转角结构是该蛋白在高温下依然保持热稳定性的基础。通过对rSEM热诱导去折叠过程的研究有助于阐明rSEM耐热机理,未来利用该方法对其他各类金葡菌肠毒素热失活机制进行类似研究将利于食品安全性生产工艺过程的改善。 展开更多
关键词 M型金黄色葡萄球菌肠毒素 圆二色光谱 荧光光谱 变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳 热失活
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葡萄球菌肠毒素A脂质体不良反应的初步研究 被引量：3
10
作者 李志宇 苏敏 +1 位作者 何生 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 2004年第4期322-324,共3页
目的 :观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxinA ,SEA)脂质体的不良反应。　 方法 :　用逆相蒸发法制备SEA脂质体 (L SEA) ,静脉注射L SEA ,用ELISA法检测小鼠血浆中细胞因子肿瘤坏死因子 α(TNF α)、γ 干扰素 (IFN γ)的水... 目的 :观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcalenterotoxinA ,SEA)脂质体的不良反应。　 方法 :　用逆相蒸发法制备SEA脂质体 (L SEA) ,静脉注射L SEA ,用ELISA法检测小鼠血浆中细胞因子肿瘤坏死因子 α(TNF α)、γ 干扰素 (IFN γ)的水平 ,并观察L SEA对新西兰大白兔血压、呼吸及体温的影响。　结果 :L SEA组小鼠血浆中细胞因子水平较游离SEA组显著降低 ,对新西兰大白兔血压、呼吸及体温的影响也明显低于游离SEA组。结论 :L SEA可以显著降低SEA的不良反应 ,其机制可能是L SEA能减少血浆中细胞因子的产生。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 脂质体 细胞因子
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应用ELISA和ELFA定量检测牛奶中葡萄球菌肠毒素A方法的建立 被引量：2
11
作者 沈菊泉 欧杰 +4 位作者 林露 陈敏 王婧 胡洁云 严维凌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期42-46,共5页
探讨了Tecra SEs SET(ELISA法)和Vidas SET2(ELFA法)两种葡萄球菌肠毒素定性检测试剂盒用于定量检测牛奶中葡萄球菌肠毒素A(SEA)的可行性。根据GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的要求,对两种方法应用于定量检测时的... 探讨了Tecra SEs SET(ELISA法)和Vidas SET2(ELFA法)两种葡萄球菌肠毒素定性检测试剂盒用于定量检测牛奶中葡萄球菌肠毒素A(SEA)的可行性。根据GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的要求,对两种方法应用于定量检测时的检出限、校正曲线范围、相关系数和加标回收率指标进行了分析比较。实验结果显示,Tecra SEs SET对牛奶中SEA的检出限为0.79 ng/mL,校正曲线范围为0.79~10 ng/mL,相关系数r=0.997,SEA加标浓度为0.80、2.5和10 ng/mL时的回收率分别为110%、81%和100%。Vidas SET2的检出限为0.09 ng/mL,校正曲线范围为0.09~1.0 ng/mL,相关系数r=0.998,SEA加标浓度为0.1、0.25和1.0 ng/mL时的回收率分别为90%、95%和104%。上述结果结合对阳性样品的检测表明:这两种定性检测试剂盒能满足牛奶中SEA定量检测的要求。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 定量检测 酶联免疫 酶联荧光
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植物血凝素与金色葡萄球菌肠毒素刺激人外周血单个核细胞的比较研究 被引量：2
12
作者 龚超群 郜世隽 +1 位作者 蔡继业 黄飞程 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期442-448,共7页
比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共... 比较了植物血凝素(PHA)与金色葡萄球菌肠毒素(SEA)对外周血单个核细胞(PBMCs)的刺激效果。取健康人外周静脉血,分离得到PBMCs,分别加入PHA及SEA进行刺激并孵育12 h,利用原子力显微镜和倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,利用量子点联合共聚焦显微镜观察活化后细胞膜表面CD3、CD69的分布情况,利用流式细胞术检测淋巴细胞活化早期细胞分化抗原CD69分子表达的变化情况。结果显示,丝裂原PHA刺激的淋巴细胞大多成群聚集,而超抗原SEA刺激的淋巴细胞大多呈分散状,且二者形态有明显差异;两组活化后淋巴细胞的体积均大于静息组,且活化过程中发生极化作用,迁移淋巴细胞,形成膜突起;丝裂原和超抗原刺激淋巴细胞12 h后,使淋巴细胞表达CD69抗原分子,但在量表达上存在差异性(PHA:39.5%±8.7%;SEA:8.3%±1.8%),抗原分子CD3和CD69在膜表面呈不均匀分布,且SEA活化后的T淋巴细胞表面受体CD3和CD69分子在空间上形成了微结构域;外周单个核细胞中其它非T细胞在丝裂原或者超抗原的刺激下也能表达活化抗原分子CD69。 展开更多
关键词 植物血凝素 金色葡萄球菌肠毒素 外周血单个核细胞 激光共聚焦显微镜 原子力显微镜 流式细胞分析仪 量子点
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抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备 被引量：1
13
作者 孙元杰 李永明 +5 位作者 张葵 魏玉英 宋朝君 周幸春 金伯泉 杨琨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期403-406,共4页
目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细... 目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段;然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中;转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化。采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析。结果成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸。PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功。转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白。经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90%以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性。结论成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体。 展开更多
关键词 B型葡萄球菌肠毒素 重链和轻链可变区基因 单链抗体 原核表达 ELISA WESTERN BLOT
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葡萄球菌肠毒素B突变体(K172E)的制备和抗肿瘤活性分析 被引量：1
14
作者 邓小红 郑玉玲 +2 位作者 郁枫 宁保安 姜永强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期360-362,共3页
目的 :制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)突变体 ,观察其抗肿瘤活性变化。方法 :将诱导表达的SEB突变体重组蛋白包涵体进行变性复性和分离纯化 ,并对其肿瘤抑制活性与野生型SEB进行比较。观察突变体蛋白的抑瘤效果。结果 :建立了可行的包涵... 目的 :制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)突变体 ,观察其抗肿瘤活性变化。方法 :将诱导表达的SEB突变体重组蛋白包涵体进行变性复性和分离纯化 ,并对其肿瘤抑制活性与野生型SEB进行比较。观察突变体蛋白的抑瘤效果。结果 :建立了可行的包涵体复性条件和纯化方法 ,获得的突变体蛋白具有明显的抗肿瘤作用 ,其抑瘤活性比野生型SEB至少高 10倍。结论 :获得的突变体SEB K172E的抗肿瘤效果经体外实验证实优于野生型SEB 。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 突变体 复性 抗肿瘤活性
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葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究 被引量：1
15
作者 毛亚飞 徐水凌 +1 位作者 罗冬娇 严杰 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-558,共6页
构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SE... 构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础． 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B SEB基因/克隆 原核表达系统/构建 重组蛋白/表达 细胞毒性 淋巴细胞/增殖 肿瘤细胞/抑制
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膜种类及前处理方式对原奶中葡萄球菌肠毒素层析试纸条检测的影响 被引量：1
16
作者 林松 何艳玲 +4 位作者 王丽哲 赵瑜 袁飞 杨海荣 陈颖 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期157-159,165,共4页
对用于原料奶中葡萄球菌A、B、C型肠毒素现场快速检测的免疫层析试纸条进行了初步研究。研究内容主要包括层析膜和原奶预处理方法的选择及优化,通过实验,最终选择了型号为HF09002的层析膜,采用了2倍稀释的样品预处理方法,研制所得的3种... 对用于原料奶中葡萄球菌A、B、C型肠毒素现场快速检测的免疫层析试纸条进行了初步研究。研究内容主要包括层析膜和原奶预处理方法的选择及优化,通过实验,最终选择了型号为HF09002的层析膜,采用了2倍稀释的样品预处理方法,研制所得的3种免疫层析试纸条分别检测原奶中SEA的灵敏度为10 ng/mL,SEB的灵敏度为4 ng/mL,SEC的灵敏度为8 ng/mL,与3 MTM TecraTM微孔板法检测结果相比无显著性差异。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A B C 原料奶 横向侧流免疫检测
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葡萄球菌肠毒素B突变体的免疫原性研究 被引量：2
17
作者 俞红 李雪萍 钱利生 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第6期42-44,34,共4页
目的　研究葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体的免疫原性和作为超抗原疫苗的应用前景。方法　利用小鼠动物模型 ,分别对SEB 2 3位突变体 (SEB -M2 3)和 15 0位突变体 (SEB -M 15 0 )作毒力、免疫原性和保护力试验。结果　小鼠致死性试验表明 ... 目的　研究葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体的免疫原性和作为超抗原疫苗的应用前景。方法　利用小鼠动物模型 ,分别对SEB 2 3位突变体 (SEB -M2 3)和 15 0位突变体 (SEB -M 15 0 )作毒力、免疫原性和保护力试验。结果　小鼠致死性试验表明 ,与野生型SEB (SEB -N)相比 ,SEB -M 2 3的毒力大幅度下降 ,而SEB -M15 0的毒力则未见下降。淋巴细胞增殖试验发现 ,SEB -M15 0与SEB -N相比 ,cpm掺入量相似 ,说明 15 0位突变并不影响SEB超抗原的活性 ;SEB -M2 3与SEB -N相比 ,其cpm掺入量显著下降 ,表明 2 3位突变可显著降低SEB超抗原活性。ELISA结果显示 ,以SEB -N、SEB -M 2 3、SEB-M 15 0三种蛋白免疫小鼠 ,都能诱生一定量的抗体 ,且产生的抗体水平非常接近 ,无统计学意义。主动免疫治疗和被动免疫治疗结果证明 ,SEB -M2 3蛋白免疫的小鼠能抵抗野生型SEB致死剂量的攻击 ,同时被动转移免疫小鼠的抗血清能保护接受致死剂量SEB -N的小鼠免于死亡。结论　SEB -M 2 3毒力低、免疫原性强 ,有可能成为一种很有希望的超抗原候选疫苗 ,用于某些疾病的预防。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 突变体 免疫原性 超抗原疫苗 基因突变
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基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备 被引量：1
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作者 张琨 王伟华 +4 位作者 万一 颜真 訾静 王军 高磊 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期403-407,共5页
采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试... 采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20＋0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素B 顺磁微粒 免疫层析
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葡萄球菌肠毒素B突变体的构建 被引量：2
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作者 俞红 钱利生 李雪萍 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第4期238-239,244,共3页
目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和单向免疫扩散试验分别检测表达产物和表达量。结果　获得了 3株重组菌NJM1 0 9、M2 3JM1 0 9、M1 5 0JM 1 0 9。测序表明 ,SEB N序列与已报道的天然seb完全一致 ;SEB M 2 3第 2 3位天冬酰胺密码子AAT发生定向突变 ,即由丝氨酸密码子AGT替代 (N2 3S) ;SEB M1 5 0第1 5 0位氨基酸发生非定向突变 ,由苏氨酸密码子ACT突变为丙氨酸密码子GCT(T1 5 0A)。表达SEB M1 5 0和SEB M2 3的重组细菌裂解液经SDS PAGE ,在 2 80 0 0处可见有表达条带 ,非重组菌则无。单向免疫扩散试验和蛋白浓度测定表明 ,重组菌表达目的蛋白量为 5 μg/ml培养液 ,表达量占菌体总蛋白量的 3.5 %。 结论　获得了2株能表达SEB突变体的工程菌 。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 突变体 克隆 细菌超抗原
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抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)单克隆抗体的研制及其初步鉴定(简报) 被引量：1
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作者 李恩善 肖毅 +1 位作者 董邦权 赵宁 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第3期55-56,共2页
葡萄球菌肠毒素是一组分子量为24,000—34，000的单肽链蛋白质。已知有SEA、SEB、SECs(包括SEC1，SEC2及SEC8)，SED及SEE等血清型。都能引起食物中毒。并证实SEA和SEB还具有强烈的有丝分裂原效应。对机体可产生广泛地免疫调节作用。因... 葡萄球菌肠毒素是一组分子量为24,000—34，000的单肽链蛋白质。已知有SEA、SEB、SECs(包括SEC1，SEC2及SEC8)，SED及SEE等血清型。都能引起食物中毒。并证实SEA和SEB还具有强烈的有丝分裂原效应。对机体可产生广泛地免疫调节作用。因此，建立抗SEB单抗的杂交癌细胞系具有重要的实际意义。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素 单克隆抗体 初步鉴定 简报 研制 B型 免疫调节作用 有丝分裂原 SEB SEC1 食物中毒 癌细胞系 SEA 分子量 蛋白质 血清型 SEE SED
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