牛奶β-乳球蛋白质实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：12

1

作者 贾敏 张银志 +1 位作者 张亦凡 孙秀兰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期605-612,共8页

建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备... 建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备质粒标准品并测序鉴定,10倍梯度稀释含有β-乳球蛋白质基因的重组质粒,进行实时荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,检测该方法的特异性、稳定性、灵敏性,同时将建立的方法用于10种市售食品的检测。成功建立了β-乳球蛋白质的实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线的Ct值与模板浓度在3.18×103~3.18×107copies范围内线性关系良好,R2值为0.997 8;检测灵敏度高（318 copies/μL）;特异性强,对羊奶、豆浆DNA均无扩增反应;稳定性好,组内、组间的变异系数均在5%以内。对10种食品牛奶过敏原的检测结果与标签相符。表明所建立的实时荧光定量PCR方法可应用于食品中牛奶过敏原β-乳球蛋白质的检测并可推广到其它过敏原的检测。 展开更多

关键词 牛奶过敏原质 β-乳球蛋白质 Taqman实时荧光定量PCR法 检测

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实时荧光定量PCR法快速测定水中微囊藻 被引量：1

2

作者 李继影 吴昕贤 +2 位作者 徐恒省 刘孟宇 景明 《环境监测管理与技术》 2013年第6期47-51,共5页

以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time PCR法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温... 以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time PCR法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以重组质粒pMD-18T-16S为标准品,检测区间为1.1×102copies/mL～1.1×108copies/mL,所得标准曲线符合制备实时定量PCR标准曲线的要求,对标准品进行测定,方法检出限为11 copies/mL。用该标准曲线对实验室培养获得的铜绿微囊藻DNA样品进行定量检测,与显微镜计数结果基本一致。 展开更多

关键词 微囊藻 实时荧光定量PCR法 16S RRNA 水质

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实时荧光定量PCR法测定禽蛋中沙门氏菌 被引量：5

3

作者 张波 汪永信 《现代农业科技》 2012年第10期333-335,337,共4页

为建立禽蛋中沙门氏菌的荧光PCR法检测方法,根据invA基因序列设计实时荧光定量PCR引物和探针,常规方法提取菌体DNA,以55℃为退火温度进行荧光PCR扩增,并进行方法学考察。结果表明:阳性对照品和沙门氏菌为模板的样品有明显扩增曲线,其他... 为建立禽蛋中沙门氏菌的荧光PCR法检测方法,根据invA基因序列设计实时荧光定量PCR引物和探针,常规方法提取菌体DNA,以55℃为退火温度进行荧光PCR扩增,并进行方法学考察。结果表明:阳性对照品和沙门氏菌为模板的样品有明显扩增曲线,其他菌株为模板的样品无扩增曲线,特异性、灵敏度和重现性考察提示实时荧光定量PCR方法符合检测方法学要求。实时荧光定量PCR法的应用,提高了禽蛋制品中沙门氏菌检测的灵敏度、缩短了检测时间、简化了检测流程。 展开更多

关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应法 沙门氏菌 禽蛋

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猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：4

4

作者 王伟 邹月红 +6 位作者 李雪松 陈欣 郎越坤 田华斌 符芳 李曦 李集临 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期104-107,共4页

为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法... 为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法。试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ型(BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性。本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 Shimen毒株 SYBRGreen-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR

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不同地域益智品质差异化相关基因相对表达量分析

5

作者 刘嘉褀 贾玉平 +2 位作者 瞿云苹 罗凡 潘坤 《热带农业科学》 2025年第5期1-8,共8页

萜类和黄酮类是药用植物益智果实中的主要药效成分,本课题组前期研究筛选出了其代表性成分圆柚酮和山奈酚生物合成相关的一些基因。为了进一步明确造成地域间这2种物质含量差异显著的相关候选基因,本研究通过实时荧光定量PCR法,对上述... 萜类和黄酮类是药用植物益智果实中的主要药效成分,本课题组前期研究筛选出了其代表性成分圆柚酮和山奈酚生物合成相关的一些基因。为了进一步明确造成地域间这2种物质含量差异显著的相关候选基因,本研究通过实时荧光定量PCR法,对上述相关基因进行定量分析,比较不同地域益智样本中的相对含量差异,筛选出表达量变化与圆柚酮和山奈酚含量相一致的基因作为关键候选基因。结果表明,涉及益智圆柚酮和山奈酚生物合成的相关基因分别为Cluster-27812.24310和Cluster-27812.43619,其表达量在不同地域间存在显著差异,尤其是Cluster-27812.24310的表达量与圆柚酮的含量相一致,因此认为其是圆柚酮生物合成的正向调控基因。本研究结果可为后续研究造成益智品质差异的相关基因功能及其分子机制提供参考。 展开更多

关键词 益智 圆柚酮 山奈酚 候选基因 荧光实时定量法

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BRAF V600突变非小细胞肺癌临床病理特征分析

6

作者 郭雨 王晓敏 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第6期759-764,共6页

目的探讨BRAF V600突变非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床病理学特征。方法收集2069例NSCLC样本,使用实时荧光定量PCR法检测BRAF、EGFR、KRAS、HER2、MET基因突变和ALK、ROS1、RET基因融合状态。采用免疫组化法检测... 目的探讨BRAF V600突变非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床病理学特征。方法收集2069例NSCLC样本,使用实时荧光定量PCR法检测BRAF、EGFR、KRAS、HER2、MET基因突变和ALK、ROS1、RET基因融合状态。采用免疫组化法检测PD-L1蛋白表达。分析BRAF V600突变阳性与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、PD-L1蛋白表达、病理学类型、分化程度等临床病理特征的关系。结果在2069例NSCLC样本中,合计检出BRAF V600突变43例(2.08%),其中女性27例,男性16例,中位年龄64岁(范围47~81岁)。41例BRAF V600突变NSCLC患者的病理类型是腺癌,2例为大细胞癌。有15例患者接受手术治疗,其中4例(26.7%)伴有微乳头成分。临床TNM分期:Ⅰ+Ⅱ期13例,Ⅲ+Ⅳ期30例。BRAF V600突变和EGFR基因双突变者3例。BRAF V600突变者中PD-L1阳性率≥1%者占63.6%(7/11)。NSCLC组织中BRAF V600突变与患者性别、吸烟史、组织学亚型相关。BRAF V600突变患者中有17例患者接受化疗,7例接受BRAF靶向治疗。生存分析显示,BRAF靶向治疗患者的中位无进展生存期长于化疗患者,但差异无统计学意义(13个月vs 11个月,P=0.197)。结论女性、无吸烟史、组织学亚型为实体型和腺泡型的NSCLC患者有更高的BRAF V600突变率。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 BRAF 实时荧光定量PCR法 临床病理特征

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实验室2种检测小儿巨细胞病毒方法的比较 被引量：2

7

作者 李娇 马洪刚 单风平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期100-103,共4页

比较胶体金法和实时定量PCR法对小儿巨细胞病毒IgM抗体水平检测的敏感性及准确率。收集临床上243例小儿的血液标本,分别采用实时荧光定量PCR法和胶体金法检测这243例患者外周血巨细胞病毒IgM抗体水平,并对这2种检测方法的阳性率和敏感... 比较胶体金法和实时定量PCR法对小儿巨细胞病毒IgM抗体水平检测的敏感性及准确率。收集临床上243例小儿的血液标本,分别采用实时荧光定量PCR法和胶体金法检测这243例患者外周血巨细胞病毒IgM抗体水平,并对这2种检测方法的阳性率和敏感性进行比较分析。实时荧光定量PCR法阳性率为11.93%,胶体金法为6.58%,2者差异有统计学意义(P<0.01)。在HCMV-DNA检测阳性患者中,IgM抗体阳性组HCMV-DNA拷贝数显著高于阴性组(P<0.01),比较这2种检测方法的敏感性,实时荧光定量PCR法的敏感性为72.5%,胶体金法的敏感性为40%,两者差距有统计学意义(P<0.01)。实时荧光定量PCR法与胶体金法相比,对巨细胞病毒IgM抗体检测具有较高的敏感性和准确率,值得临床推广应用。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR法 胶体金法 巨细胞病毒IgM抗体

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运动对2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因表达的影响 被引量：6

8

作者 吴军发 吴毅 +3 位作者 胡永善 孙莉敏 姜从玉 苏兵 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期116-120,共5页

目的 :研究运动对 2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因 (obesegene ,obgene)表达水平的影响 ,在基因转录水平上探讨 2型糖尿病大鼠obmRNA表达水平的变化 ,以及运动改变 2型糖尿病大鼠obmRNA表达的机制。方法 :4 0只自发发病的 2型糖尿病模... 目的 :研究运动对 2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因 (obesegene ,obgene)表达水平的影响 ,在基因转录水平上探讨 2型糖尿病大鼠obmRNA表达水平的变化 ,以及运动改变 2型糖尿病大鼠obmRNA表达的机制。方法 :4 0只自发发病的 2型糖尿病模型 :OLETF大鼠分成 4组 ,分别为基础饲料非运动组、基础饲料运动组、高脂饲料非运动组和高脂饲料运动组 ;15只LETO大鼠(与OLETF大鼠同系 ,但不同株 ,系不发病对照组 )用基础饲料饲养 ,随机分为两组 :非运动组和运动组 ,分别进行 9周的运动和高脂饮食干预 ,9周后用实时荧光定量RT -PCR法检测每只大鼠腹膜后脂肪组织obmRNA的表达水平。结果 :基础饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 4 0 2 4× 10 6 ± 5 4 67× 10 5/ μgRNA和 1 2 5 8× 10 6 ± 3 862× 10 5/ μgRNA ;高脂饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数为 4 832×10 6 ± 1 0 34× 10 6 / μgRNA和 1 5 74× 10 6 ± 6 783× 10 5/ μgRNA ;而基础饲料饲养的LETO大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 1 979× 10 6 ± 6 4 77× 10 5/ μgRNA和 1 82 4×10 6 ± 4 0 89× 10 5/ μgRNA。OLETF大鼠脂肪组织obmRNA表达水平运动? 展开更多

关键词 2型糖尿病 肥胖基因 基因表达 运动 实时荧光定量RT-PCR法 动物实验

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黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤组织p53 mRNA表达的影响 被引量：8

9

作者 韦世秀 刘成军 +2 位作者 桑国优 李牡艳 吴华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期948-951,共4页

目的探讨黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为3组,分别给予生理盐水、顺铂30 mg.m-2、黄芪注射液10.40 mg.(g.d)-1,经腹腔注射给药4 wk后处死CNE2荷瘤裸鼠,... 目的探讨黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为3组,分别给予生理盐水、顺铂30 mg.m-2、黄芪注射液10.40 mg.(g.d)-1,经腹腔注射给药4 wk后处死CNE2荷瘤裸鼠,测量瘤体积,取瘤体称重,计算抑瘤率和相对肿瘤增值率;采用实时荧光定量PCR法的相对定量法检测黄芪注射液对各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA表达的影响。结果生理盐水组、顺铂组、黄芪注射液组的移植瘤瘤体积分别为(1.51±0.25)cm3、(0.91±0.35)cm3、(1.04±0.51)cm3,与生理盐水组相比,顺铂组和黄芪注射液组的瘤体积小(P<0.01,P<0.05);顺铂组、黄芪注射液组对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为72.12%、39.90%;相对肿瘤增殖率分别为50%、60%。经实时荧光定量PCR法测定,与生理盐水组相比,各组裸鼠移植瘤组织中p53 mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用,但尚不能认为黄芪注射液可影响移植瘤组织中p53 mRNA的表达。 展开更多

关键词 黄芪注射液 抗肿瘤 裸鼠 CNE2 P53基因 实时荧光定量PCR法

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龙眼生长素应答因子基因克隆及其在体胚中的表达分析 被引量：7

10

作者 李惠华 赖钟雄 +1 位作者 苏明华 林玉玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2383-2389,共7页

以龙眼胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR结合RACE法克隆生长素应答因子基因(auxin response fac-tor,即DL-ARF1),运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR法研究其在龙眼体细胞胚胎发生过程中的表达。结果表明:DL-ARF1基... 以龙眼胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR结合RACE法克隆生长素应答因子基因(auxin response fac-tor,即DL-ARF1),运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR法研究其在龙眼体细胞胚胎发生过程中的表达。结果表明:DL-ARF1基因的mRNA全长序列为2 695bp(GenBank登录号GQ923778),包含2 046bp开放阅读框,163bp 5′非编码区(5′UTR),486bp 3′非编码区(3′UTR);推定的氨基酸序列含681个氨基酸,与其它植物ARF基因相似性达40%～81%。DL-ARF1基因可能属于转录抑制因子,在龙眼体胚的各阶段均有表达,整个变化趋势呈双峰形,在胚性愈伤Ⅱ(Stage 2)中的表达量最高。 展开更多

关键词 龙眼 胚性愈伤组织 生长素应答因子(ARF) 基因克隆 序列分析 实时荧光定量PCR法

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乳腺癌组织中神经营养因子Neuritin的表达及其临床意义 被引量：5

11

作者 曹健 王瑞 侯进 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期799-803,F0003,共6页

目的:观察神经营养因子Neuritin蛋白和mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集74例乳腺癌组织标本和12例正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学和Western blotting法检测标本中Neu... 目的:观察神经营养因子Neuritin蛋白和mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集74例乳腺癌组织标本和12例正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学和Western blotting法检测标本中Neuritin蛋白的阳性表达率和表达水平,利用RT-PCR法检测标本中Neuritin mRNA的表达水平。结果:Neuritin蛋白在正常乳腺组织中阳性表达率为25%,在乳腺癌组织中阳性表达率为70.62%,乳腺癌组织中Neuritin蛋白阳性表达率高于正常乳腺组织(P<0.05),且其在乳腺癌肿瘤细胞中定位于细胞核和细胞质。Neuritin蛋白的阳性表达率与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和ER/PR/HER2高阳性率有关联(P<0.05)。与正常乳腺组织比较,Ⅰ-Ⅱ期及Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织中Neuritin蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01);与Ⅰ-Ⅱ期乳腺癌组织比较,Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织中Neuritin蛋白和mRNA表达水平亦升高(P<0.05)。结论:Neuritin可能是促进乳腺癌发生发展的一个重要基因,也可能是治疗乳腺癌的关键靶向分子。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 神经生长因子 NEURITIN 实时荧光定量PCR法

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人体端粒长度分布特点及变化 被引量：2

12

作者 叶兴 贺子强 +3 位作者 邓鹏飞 魏毓 周建明 黄河浪 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期945-949,共5页

目的:通过分析比较不同年龄人群的端粒相对长度,探索端粒长度改变与年龄的关系,为老年医学问题的深入研究提供数据和参考。方法:采用随机抽样的方法,从数家医院健康体检人群中抽取20岁以上者作为研究对象,收集其外周血白细胞作为检测标... 目的:通过分析比较不同年龄人群的端粒相对长度,探索端粒长度改变与年龄的关系,为老年医学问题的深入研究提供数据和参考。方法:采用随机抽样的方法,从数家医院健康体检人群中抽取20岁以上者作为研究对象,收集其外周血白细胞作为检测标本。采用实时荧光定量PCR法进行端粒相对长度检测,分析年龄与端粒长度改变的关系。结果:共取样本1 022个,不同年龄组的相对端粒长度的差异有统计学意义(F=21.492,P<0.001),端粒长度与年龄呈负相关(r=–0.325,P<0.001),两者之间的回归方程为:y=–0.008x+1.772(P<0.001)。结论:健康人外周血白细胞端粒长度在各年龄段人群间有差异,且端粒长度随年龄增加逐渐缩短。 展开更多

关键词 端粒 年龄 性别 实时荧光定量PCR法 老年医学

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hTERT mRNA与p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达 被引量：2

13

作者 冼磊 周华富 +3 位作者 张兴华 薛邦德 郭建极 冯旭 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第9期1005-1008,共4页

背景与目的端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16参与多种肿瘤的发生发展。本研究旨在探讨端粒酶逆转录酶和p16在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和免疫组化SP法检测117例非小细胞肺癌组织及癌旁组织,21例肺良性... 背景与目的端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16参与多种肿瘤的发生发展。本研究旨在探讨端粒酶逆转录酶和p16在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和免疫组化SP法检测117例非小细胞肺癌组织及癌旁组织,21例肺良性疾病组织中端粒酶逆转录酶和p16的表达情况。结果hTERT mRNA在非小细胞肺癌组织的表达量为2.937±0.836,明显高于正常肺组织2.042±0.378(t=-5.242,P<0.01);肺良性疾病中p16蛋白表达率为85.7%,高于癌组织中的47.9%,差异有统计学意义(P=0.004)。hTERT mRNA表达与非小细胞肺癌病理类型具有统计学意义(P<0.05),p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、淋巴结转移及细胞分化程度具有统计学意义(P<0.05)。hTERT mRNA与p16蛋白表达存在相关性(P<0.05)。结论hTERT mRNA表达对非小细胞肺癌诊断具有潜在临床价值,端粒酶逆转录酶和p16蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。 展开更多

关键词 肺肿瘤 实时荧光定量RT-PCR法 端粒酶逆转录酶 P16蛋白

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龙眼14-3-3基因及其启动子的克隆以及在体胚发生过程中的表达分析 被引量：2

14

作者 蔡英卿 赖钟雄 +3 位作者 陈义挺 林玉玲 张妙霞 李惠华 《热带作物学报》 CSCD 2011年第5期845-853,共9页

分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织14-3-3基因,并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。采用RT-PCR结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的cDNA全长序列和DNA序列,采用TAIL-PCR法,获得龙眼胚性愈伤组织14-... 分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织14-3-3基因,并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。采用RT-PCR结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的cDNA全长序列和DNA序列,采用TAIL-PCR法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的启动子DNA序列,运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达。结果表明:经克隆得到龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因786 bp的cDNA全长序列(GenBank检索号为GU573765),该cDNA开放阅读框推定的氨基酸序列(含261个氨基酸)与其它植物14-3-3具有较高同源性;该基因的DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为1 859 bp,包含3个内含子,内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则;该基因的启动子DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为910 bp;该基因在龙眼体胚各阶段均有表达,其中在松散型胚性愈伤组织阶段和心形胚及鱼雷形胚阶段呈现高表达,整个变化趋势呈"倒S"状。 展开更多

关键词 龙眼胚性愈伤组织 14—3—3基因 克隆 序列分析 实时荧光定量PCR法

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甲状腺乳头状癌组织中炎性因子的表达及其临床意义 被引量：3

15

作者 孙勤暖 李冬梅 +1 位作者 于慧玲 马洪喜 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1261-1265,1338,共6页

目的:探讨甲状腺乳头状癌组织中炎性因子的表达及其与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系,为指导临床用药和判断预后奠定实验基础。方法:选取穿刺确诊为甲状腺乳头状癌的74例住院患者作为实验组,另选同期26名体检健康者作为正常对照组。... 目的:探讨甲状腺乳头状癌组织中炎性因子的表达及其与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系,为指导临床用药和判断预后奠定实验基础。方法:选取穿刺确诊为甲状腺乳头状癌的74例住院患者作为实验组,另选同期26名体检健康者作为正常对照组。2组受试者均空腹抽取静脉血,实验组患者于术后留取癌组织、癌旁正常组织(距癌组织2cm)及术后7d再次空腹抽取静脉血。采用酶联免疫法检测血清、癌旁正常组织及癌组织中白细胞介素1α(IL-1α)、IL-1β和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达水平;采用实时荧光定量法和免疫组织化学方法检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁正常组织中IL-1α、IL-1β和COX-2的mRNA和蛋白表达水平;分析IL-1α、IL-1β和COX-2表达与甲状腺乳头状癌的临床分期、病理类型及有无淋巴结转移的关系。结果:实验组患者血清中IL-1α、IL-1β和COX-2的蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.01);甲状腺乳头状癌患者癌组织中IL-1α、IL-1β和COX-2的蛋白表达水平、蛋白阳性表达强度及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。在甲状腺乳头状癌组织中IL-1α与IL-1β、IL-1α与COX-2、IL-1β与COX-2均呈正相关关系(r=0.64,P=0.035;r=0.71,P=0.042;r=0.69,P=0.038)。结论:甲状腺乳头状癌组织中IL-1α、IL-1β和COX-2表达水平上调,提示炎性因子参与甲状腺乳头状癌浸润和转移,其应用有望成为新的肿瘤治疗策略和手段。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状肿瘤 免疫组织化学 酶联免疫法 实时荧光定量法 白细胞介素1Α 白细胞介素1Β 环氧合酶-2 INTERLEUKIN 1α INTERLEUKIN 1β CYCLOOXYGENASE-2

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HIF-2α、VEGF在子宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

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作者 闫文明 宝莹娜 +5 位作者 贾玉玲 郁志龙 张保祯 赵建国 孙晓革 刘秀兰 《世界中医药》 CAS 2016年第B06期1836-1837,共2页

目的探究子宫颈鳞癌组织中HIF-2α、VEGF的临床表达。方法：选择72例子宫颈鳞癌患者，收集子宫颈鳞癌组织；选择同期30例健康体检妇女，收集正常宫颈组织。再采用实时荧光定量PCR法与免疫组织化学法对各组织HIF-2α、VEGF表达进行检测... 目的探究子宫颈鳞癌组织中HIF-2α、VEGF的临床表达。方法：选择72例子宫颈鳞癌患者，收集子宫颈鳞癌组织；选择同期30例健康体检妇女，收集正常宫颈组织。再采用实时荧光定量PCR法与免疫组织化学法对各组织HIF-2α、VEGF表达进行检测。结果：观察组中HIF-2αmRNA、VEGFmRNA表达水平均显著高于对照组，P〈0．05；观察组HIF-2α与VEGFmRNA表达显著相关（r=0．783，P〈0．001）。经免疫组化检测，HIF-2α、VEGF蛋白炎性物成棕黄色颗粒，多数在胞浆内，部分在胞核与胞膜，观察组HIF-2α、VEGF阳性率均显著高于对照组，P〈0．05；HIF-2α蛋白阳性水平与VEGF阳性表达水平为正相关（r=0．509，P〈0．001）。结论：在子宫鳞癌组织中，HIF-2α及VEGF的RNA与蛋白呈高表达状态。 展开更多

关键词 HIF-2α VEGF 实时荧光定量PCR法 免疫组织化学法

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清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

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作者 袁斌 周立华 +3 位作者 徐建亚 于希忠 朱越 王爱华 《辽宁中医杂志》 CAS 2012年第4期745-748,共4页

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干... 目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。 展开更多

关键词 清肺口服液 呼吸道合胞病毒 细胞间黏附分子-1 白细胞介素-8 实时荧光定量PCR法

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中国江南地区男性雌激素受体基因多态性分布特征及连锁不平衡分析 被引量：1

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作者 朱虔兮 沈月平 +5 位作者 苗茂华 高尔生 李德昆 沈维雄 梁敏红 袁伟 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期356-360,共5页

目的探讨雌激素受体基因PvuⅡ、XbaⅠ和Codon325位点单核苷酸多态性的分布特征及连锁不平衡关系。方法应用PCR-RFLP和荧光定量PCR法对678名江南男性雌激素受体基因单核苷酸多态性进行分析。研究对象主要来自江浙城市和湖南岳阳。结果江... 目的探讨雌激素受体基因PvuⅡ、XbaⅠ和Codon325位点单核苷酸多态性的分布特征及连锁不平衡关系。方法应用PCR-RFLP和荧光定量PCR法对678名江南男性雌激素受体基因单核苷酸多态性进行分析。研究对象主要来自江浙城市和湖南岳阳。结果江浙、岳阳两组各位点基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡。PvuⅡ和Codon325位点的基因型分布在两组间存在差异,P值分别为0.012和0.011。Arlequin分析结果显示PvuⅡ和XbaⅠ两位点间存在较强的连锁不平衡(江浙:D′=0.908,岳阳:D′=0.974),但PvuⅡ或XbaⅠ与Codon325位点之间并不存在明显的连锁不平衡。结论雌激素受体基因单核苷酸多态位点的基因型存在地区差异;PvuⅡ和XbaⅠ两位点在江南男性中存在显著的连锁不平衡。 展开更多

关键词 雌激素受体 实时荧光定量PCR法 分子信标 连锁不平衡

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乳腺癌中RRIG1的表达及其临床病理学意义

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作者 曹渊 张瑰红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第11期1282-1282,共1页

目的探讨维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)表达与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学PV二步法检测77例乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、10例导管原位癌和20例乳腺良性增生组织中RRIG1、雌激素受体(ER)及孕激... 目的探讨维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)表达与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学PV二步法检测77例乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、10例导管原位癌和20例乳腺良性增生组织中RRIG1、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)蛋白的表达;实时荧光定量PCR法检测76例新鲜乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、5例导管原位癌组织和20例乳腺良性增生组织RRIG1、ER及PR的mRNA表达。结果①乳腺良性增生组织和乳腺癌组织中均能检测到RRIG1 mRNA表达,导管原位癌组织和浸润性导管癌RRIG1 mRNA表达均明显低于良性增生组织(P=0.004,P=0.036)。乳腺导管原位癌和浸润性导管癌RRIG1蛋白表达阳性率均明显低于正常组织(P=0.028,P=0.029)。②乳腺浸润性导管癌组织中RRIG1 mRNA的相对表达水平在淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P=0.023);淋巴结转移组RRIG1蛋白表达显著低于无淋巴结转移组(P=0.01)。浸润性导管癌中肿瘤>5 cm的患者RRIG1 mRNA表达高于肿瘤≤5 cm患者,但差异无统计学意义(P=0.081);RRIG1 mRNA相对表达水平及蛋白表达与患者年龄、组织学分级均无关。③浸润性导管癌组织ER mRNA相对表达水平为2.9±1.2,浸润性导管癌组织中ER与RRIG1 mR-NA相对表达水平呈正相关(P=0.043);浸润性导管癌组织PR mRNA相对表达水平为3.0±2.2,与RRIG1 mRNA相对表达水平无关(P=0.057),ER、PR蛋白表达与RRIG1蛋白表达无关。结论乳腺浸润性导管癌中RRIG1 mRNA表达与乳腺癌的淋巴结转移呈负相关,提示RRIG1作为抑癌基因参与乳腺癌的浸润进展,其表达水平低下,对乳腺癌早期诊断和预后判断具有重要参考价值。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 RRIG1 免疫组织化学法 实时荧光定量PCR法

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畜牧场中磺胺类抗生素及其抗性基因的空间分布规律 被引量：4

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作者 綦峥 杨红 +2 位作者 张铁林 齐越 凌娜 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期215-222,共8页

为了解畜牧场内磺胺类抗生素及抗性基因的污染物空间分布情况、分布规律及相关性,选取某畜牧场的10 cm和50 cm深度的土壤样品共20个及5个粪便样品,分别对样品中13种磺胺类抗生素的浓度和3种磺胺类抗性基因(sul1、sul2和sul3)的丰度进行... 为了解畜牧场内磺胺类抗生素及抗性基因的污染物空间分布情况、分布规律及相关性,选取某畜牧场的10 cm和50 cm深度的土壤样品共20个及5个粪便样品,分别对样品中13种磺胺类抗生素的浓度和3种磺胺类抗性基因(sul1、sul2和sul3)的丰度进行定量分析,并用地理信息系统优化采样并对污染物空间分布进行可视化分析。结果表明,垂直浓度的空间分布规律为粪便>10 cm深度土壤>50 cm深度土壤,水平浓度的空间分布主要集中在畜牧场的东南部。3种抗性基因在10 cm和50 cm深度土层中均有检出,其基因相对丰度分布情况为10 cm深度土壤>50 cm深度土壤,且抗生素对抗性基因的表达压力相似。本研究为抗生素和抗性基因污染的精准分析和深入研究畜牧场周边环境中抗性基因的传播规律提供基础数据。 展开更多

关键词 磺胺类抗生素 抗生素抗性基因 畜牧场 液相色谱-串联质谱法 实时荧光定量PCR法

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