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利用PCR技术直接鉴定苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型的快速方法 被引量:3
1
作者 刘子铎 林黎阳 +2 位作者 孙明 陈亚华 喻子牛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期5-8,共4页
根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解,释放出DNA的原理,利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物,对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽... 根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解,释放出DNA的原理,利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物,对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因型。本文对本室筛选天然菌株和苏云金芽孢杆菌克隆菌株分别进行了cryl基因的PCR分析。表明,该法结果可靠快速易行,在方法学上,为苏云金芽孢杆菌菌株鉴定、新菌株的筛选和基因型分析提供了极大的方便。 展开更多
关键词 微生物农药 苏云金杆菌 晶体蛋白 基因型
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的研究进展 被引量:3
2
作者 宋金柱 杨谦 赵敏 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期66-67,共2页
从Bt基因的分类、结构和特性、杀虫机理、在农业上的应用及昆虫对Bt产生抗性的机制等方面进行了论述。
关键词 苏云釜芽孢杆菌 晶体蛋白 克隆
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因工程研究进展 被引量:6
3
作者 聂智毅 黄俊生 《华南热带农业大学学报》 2005年第2期35-40,共6页
概述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的结构、功能及其基因分类,综述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因工程研究及应用。
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 基因工程
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白研究及应用概述 被引量:3
4
作者 薛欢 《江苏林业科技》 2016年第2期39-43,共5页
作为应用最广最有效的细菌杀虫剂,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在形成芽孢时可产生具有杀虫活性的杀虫晶体蛋白(ICPs)。迄今为止,ICP已有近800种,对鳞翅目、双翅目、同翅目、膜翅目、鞘翅目、蜱螨目等害虫都具有特异性的毒... 作为应用最广最有效的细菌杀虫剂,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在形成芽孢时可产生具有杀虫活性的杀虫晶体蛋白(ICPs)。迄今为止,ICP已有近800种,对鳞翅目、双翅目、同翅目、膜翅目、鞘翅目、蜱螨目等害虫都具有特异性的毒杀作用。该文概述了ICP的结构、功能及基因分类,以及其基因工程研究及应用,为Bt杀虫蛋白的推广应用及其定向改造提供参考。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 结构 功能 转Bt植物
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1 Ab22的克隆与表达
5
作者 伍金元 冯纪年 张兴 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第1期151-154,共4页
【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加... 【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点。用全长基因PCR产物粘端定向克隆的方法,从苏云金芽孢杆菌S249菌株中扩增到1个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白cry1Ab型基因cry1Ab22,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌TB1,进行诱导表达,并对表达产物的杀虫活性进行检测。【结果】cry1Ab22基因长度约为3.5 kb;其与已知的cry1Ab3型基因同源性最高,所编码的蛋白质存在5个氨基酸差异。cry1Ab22基因已在GenBank中登录,登录号为EU220269,并被Bt毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ab22。SDS-PAGE电泳结果表明,cry1Ab22基因表达了170 ku左右的融合蛋白。cry1Ab22蛋白对小菜蛾(Plutella xylostella)的LC50为225.1μg/mL。【结论】S249菌株含有新型的cry1Ab基因,且该基因表达的蛋白具有较强的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因cry1Ab22 生物活性
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宿主中肠对苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白的防御反应
6
作者 李思睿 杨焱超 +1 位作者 吴国星 王泽宇 《中国生物防治学报》 北大核心 2025年第2期492-500,共9页
苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis是一种对多种农业害虫、线虫具有特异性杀虫活性的病原微生物,主要通过产生杀虫蛋白破坏靶标害虫中肠上皮细胞,造成细胞内渗透压失衡,最终导致害虫死亡。中肠上皮细胞是昆虫内部和外部环境之间的... 苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis是一种对多种农业害虫、线虫具有特异性杀虫活性的病原微生物,主要通过产生杀虫蛋白破坏靶标害虫中肠上皮细胞,造成细胞内渗透压失衡,最终导致害虫死亡。中肠上皮细胞是昆虫内部和外部环境之间的保护性屏障,它能够有效阻止病原微生物及其产生的杀虫蛋白对昆虫造成的不利影响,在防御病原微生物方面发挥着关键作用。当苏云金芽胞杆菌及其产生的杀虫蛋白作用于靶标害虫中肠时,中肠上皮细胞防御反应也会被激活以维持上皮细胞结构的完整性,从而降低杀虫蛋白对自身的损伤。这些中肠防御反应的产生显著影响了苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白对靶标害虫的杀虫活性,甚至导致靶标害虫产生抗性。因此,本文将以靶标害虫-苏云金芽胞杆菌为模型,讨论苏云金芽胞杆菌诱导的靶标害虫上皮细胞防御机制,包括中肠上皮细胞囊泡运输、自噬、细胞凋亡、细胞脱落与再生等防御反应及上皮细胞内防御信号通路等,以期为提高苏云金芽胞杆菌杀虫作用,延缓靶标抗性的研究提供理论支撑。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 蛋白 中肠细胞 防御反应 线
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苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白作用机制的研究进展 被引量:13
7
作者 刘子铎 喻子牛 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期207-213,共7页
综合叙述了苏云金芽胞杆菌Bacillusthuringiensis和杀虫晶体蛋白的作用机制及在不同水平上解释这些机制的一些流行模型和有关亚分子结构的作用
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白 作用机制
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苏云金芽孢杆菌杀线虫晶体蛋白的相关基因 被引量:5
8
作者 罗兰 谢丙炎 +1 位作者 戴小枫 杨之为 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
本文从苏云金杆菌对线虫活性的发现、编码毒蛋白的基因、毒蛋白的种类大小及苏云金杆菌对线虫的作用机理 4个方面进行了综述 。
关键词 苏云金芽孢杆菌 基因型 线蛋白 作用机理
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苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株杀虫晶体蛋白基因分析
9
作者 杜立新 董明 +5 位作者 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期194-197,共4页
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株... 苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130~150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 PCR-RFLP 克隆 活性
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苏云金芽孢杆菌BtC008杀虫晶体蛋白基因鉴定、克隆及杀虫活性分析 被引量:4
10
作者 刘金环 薛静 +3 位作者 宋福平 檀建新 张杰 黄大昉 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期22-26,共5页
苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和一种新的cry1类基因,SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达,在分子水平说明了该菌株高... 苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和一种新的cry1类基因,SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达,在分子水平说明了该菌株高毒力的原因。在此基础上克隆了1种cry1Ab类杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalproteins,ICPs)基因,并被Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ab20。序列分析显示该基因所编码蛋白与已知的Cry1Ab13有1个氨基酸不同。将cry1Ab基因毒性片段(1.95kb)插入表达载体pET-21b,转化EscherichiacoliRosetta(DE3)菌株,表达的包涵体蛋白对小菜蛾和棉铃虫幼虫具有杀虫活性,LC50分别为100.74μg/mL和29.87μg/mL,进一步明确了Cry1Ab20蛋白的杀虫活性区。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 BtC008 Cry1Ab20 活性
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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白研究进展 被引量:24
11
作者 彭琦 周子珊 张杰 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期712-722,共11页
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt),属于蜡样芽胞杆菌族,芽胞杆菌属的革兰氏阳性细菌,与其它芽胞杆菌的区别是在形成芽胞的同时,伴随有杀虫晶体蛋白(Cry蛋白)的产生。Cry蛋白对鳞翅目、鞘翅目、膜翅目和双翅目等多种害虫... 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt),属于蜡样芽胞杆菌族,芽胞杆菌属的革兰氏阳性细菌,与其它芽胞杆菌的区别是在形成芽胞的同时,伴随有杀虫晶体蛋白(Cry蛋白)的产生。Cry蛋白对鳞翅目、鞘翅目、膜翅目和双翅目等多种害虫具有特异的杀虫作用,因此,Cry蛋白以微生物杀虫剂或转Bt基因植物的形式而被广泛应用于害虫生物防治中。本文从Bt菌株的发掘、cry基因的转录调控机制、Cry蛋白的结构功能及作用机制等方面进行综述,为Bt杀虫蛋白的推广应用、Bt蛋白的定向改造和构建高效广谱的工程菌提供参考。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白 转录调控 作用机制
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苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展 被引量:5
12
作者 谭芙蓉 王利刚 +2 位作者 王金斌 蒋玲曦 唐雪明 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期135-139,共5页
介绍了苏云金芽胞杆菌的一般特性、分类鉴定与分布以及其杀虫晶体蛋白基因的分类、在苏云金芽胞杆菌中的定位及鉴定方法,并对苏云金芽胞杆菌及其基因资源的应用前景作了展望。
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因 分类 鉴定 分布
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苏云金杆菌4.0718质粒上杀虫晶体蛋白基因的PCR分析 被引量:4
13
作者 夏立秋 张何 +2 位作者 刘全兰 陈宇 莫湘涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第2期35-37,46,共4页
苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的c... 苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的cryI类型基因进行阵列比较 ,根据其高度保守区域设计了 1对通用引物 ,对cryI类型基因的扩增产物为 2 77bp左右的片段 ,用此引物对Bacillusthuringiensis 4.0 718的 4种不同质粒进行了PCR分析 ,发现质粒P1,P2 ,P3扩增阳性 ,都产生了 2 77bp的扩增片段 ,而质粒P4没有扩增产物 ,这为进一步的基因定位打下了基础。 展开更多
关键词 苏云金杆菌4.0718 质粒 晶体蛋白 PCR分析 cryⅠ基因
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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构与功能研究进展 被引量:4
14
作者 邵宗泽 刘子铎 喻子牛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期476-480,共5页
苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成 .结构域Ⅰ位于肽链的N端 ,为一组由 6~ 7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束 ,参与了细胞膜的穿孔 ;结构域Ⅱ位于肽链的中间 ,... 苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成 .结构域Ⅰ位于肽链的N端 ,为一组由 6~ 7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束 ,参与了细胞膜的穿孔 ;结构域Ⅱ位于肽链的中间 ,为三组以“希腊钥匙” (Greekkey)拓扑结构连接在一起的反平行的 β折叠片层 ,其顶端的突环参与了毒素与受体蛋白的结合 ;位于C端的结构域Ⅲ是由两组反平行的 β折叠片层组成的夹心结构 ,以 β果酱卷 (jellyroll)拓扑结构排列 。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白 结构域 功能
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转苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫水稻的GUS和PCR辅助选择 被引量:2
15
作者 蔡平钟 宁素华 +6 位作者 向跃武 张志雄 钟万芳 吴洁 阎文昭 张志勇 何俊蓉 《西南农业学报》 CSCD 2001年第4期1-4,共4页
报道了转基因抗虫水稻克螟稻 1号 (Ts 9)与非转基因恢复系川恢 94 9、H97810 17及保持系 2 12B等杂交F3 代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果 ,Ts 9与非转基因川恢 94 9、H97810 17杂交F3 代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性... 报道了转基因抗虫水稻克螟稻 1号 (Ts 9)与非转基因恢复系川恢 94 9、H97810 17及保持系 2 12B等杂交F3 代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果 ,Ts 9与非转基因川恢 94 9、H97810 17杂交F3 代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性植株的分离比约为 2∶1。用设计合成的一对引物进行PCR扩增的结果 ,大部分GUS检测呈阳性的植株及一个保持系 2 12B与Ts 9杂交F3 代植株获得了大小约 12 0 0bp的PCR产物 ,即cryIA (b)基因片段。试验结果表明PCR是比GUS叶片染色法更为灵敏、准确、方便的检测方法。 展开更多
关键词 转基因 水稻 GUS PCR 螟稻1号 苏云金杆菌 晶体蛋白基因
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苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及特征分析 被引量:2
16
作者 钟万芳 蔡平钟 +1 位作者 阎文昭 裴炎 《西南农业学报》 CSCD 2004年第1期38-40,共3页
苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillusthuringiensissubsp.sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3 6kb的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在AB... 苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillusthuringiensissubsp.sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3 6kb的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABIPRISM377自动测序仪上对其5′及3′端进行部分测序,结果表明其核苷酸序列与cry1A基因高度同源。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白基因 序列分析 克隆
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对夜蛾科幼虫高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株及其晶体蛋白特性 被引量:9
17
作者 蒋冬花 邓日强 +1 位作者 庞义龙 綮新 《中国生物防治》 CSCD 1997年第2期82-85,共4页
本文对自德国土壤中分离的8株苏云金芽孢杆菌进行毒力测定和晶体蛋白特性的研究。生物测定结果表明,8株Bt中除S21-1、S21-13对甜菜夜蛾无毒性外,对夜蛾科的4种供试昆虫均有很高的毒效,48小时校正死亡率高达80%... 本文对自德国土壤中分离的8株苏云金芽孢杆菌进行毒力测定和晶体蛋白特性的研究。生物测定结果表明,8株Bt中除S21-1、S21-13对甜菜夜蛾无毒性外,对夜蛾科的4种供试昆虫均有很高的毒效,48小时校正死亡率高达80%~100%;扫描电镜观察和SDS-PAGE晶体蛋白电泳结果可知,S11-6和S21-132个菌株只有一种菱形晶体和一条相应的135KDa主带,其余6个菌株均有菱形和方形两种晶体,以及两条相应的135KDa和65KDa主带。另对晶体的特性与其毒力的关系进行了讨论。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 毒力测定
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苏云金杆菌杀虫晶体蛋白作用机制的研究进展 被引量:4
18
作者 余健秀 余榕捷 庞义 《昆虫天敌》 CSCD 1998年第4期180-186,共7页
自本世纪60年代以来,由于化学农药引起的环境污染、害虫普遍产生抗药性等原因,生物防治越来越受到人们的重视。在现有的各种生物防治策略中,研究和利用微生物杀虫剂发展很快,最突出的方法是利用苏云金杆菌(Bacilusthu... 自本世纪60年代以来,由于化学农药引起的环境污染、害虫普遍产生抗药性等原因,生物防治越来越受到人们的重视。在现有的各种生物防治策略中,研究和利用微生物杀虫剂发展很快,最突出的方法是利用苏云金杆菌(Bacilusthuringiensis,Bt)进行防... 展开更多
关键词 苏云金杆菌 晶体蛋白 作用机制
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苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7杀虫晶体蛋白多样性分析 被引量:1
19
作者 沙莉 章淘 +2 位作者 黄张敏 黄志鹏 关雄 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第5期516-520,共5页
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa... 分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株. 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 PCR-RFLP CRY基因 晶体蛋白 肽段指纹图谱
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转苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫植物的研究进展与商品化 被引量:10
20
作者 张宏宇 李中奎 喻子牛 《生物技术通报》 CAS CSCD 1997年第3期13-15,共3页
本文综述了转ICPs基因植物从ICPs在植物中低表达,具杀虫效应到高表达而进行田间应用试验的研究进展及转ICPs抗虫植物的商品化现状。
关键词 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白 研究进展 商品化 转基因抗植物
全文增补中
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