不同寄主植物上芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及分析 被引量：4

1

作者 张成玲 赵永强 +3 位作者 杨冬静 孙厚俊 徐振 谢逸萍 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期37-41,共5页

为研究芜菁花叶病毒在不同寄主植物上的变异,从江苏省徐州市感病的油菜、萝卜及菠菜上分离到3个芜菁花叶病毒分离物,分别命名为XZYC、XZLB、XZBOC.经单斑分离,利用RT-PCR克隆了这3个分离物的cp基因序列,并进行了序列分析.结果表明,3个... 为研究芜菁花叶病毒在不同寄主植物上的变异,从江苏省徐州市感病的油菜、萝卜及菠菜上分离到3个芜菁花叶病毒分离物,分别命名为XZYC、XZLB、XZBOC.经单斑分离,利用RT-PCR克隆了这3个分离物的cp基因序列,并进行了序列分析.结果表明,3个分离物的cp基因大小均为867 bp,一致率较高,为99.8％ ～ 99.9％,氨基酸一致率为100.0％.所分析的分离物cp基因未发现明显重组.山东分离物之间、江苏分离物之间及江苏和山东分离物之间基因交流频繁,两地区遗传分化显著.将中国和日本的部分分离物构建系统进化树,分为4个组,日本和中国分离物Basal-BR组分离物单独成簇,本研究的3个分离物都位于Basal-BR组. 展开更多

关键词 芜菁花叶病毒 外壳蛋白 克隆 序列分析

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芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：3

2

作者 庄木 王晓武 +3 位作者 李艳双 刘玉梅 张扬勇 方智远 《中国蔬菜》 北大核心 2006年第3期6-8,共3页

将来自北京地区甘蓝和芥菜上的TuMV外壳蛋白基因片段分别克隆到pMD18-T载体中，测序并进行序列分析。结果表明：两者CP基因序列长度均为867个核苷酸，编码288个氨基酸，它们的核苷酸同源性为97．2％，氨基酸同源性为97．6％；两者与GenB... 将来自北京地区甘蓝和芥菜上的TuMV外壳蛋白基因片段分别克隆到pMD18-T载体中，测序并进行序列分析。结果表明：两者CP基因序列长度均为867个核苷酸，编码288个氨基酸，它们的核苷酸同源性为97．2％，氨基酸同源性为97．6％；两者与GenBank中的部分CP基因序列的核苷酸同源性在87．8％～97．8％之间，氨基酸同源性在91．7％～99．0％之间；分子进化树分析两者可归属World-B组。 展开更多

关键词 芜菁花叶病毒 外壳蛋白基因 序列分析

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芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

3

作者 许建平 徐平 +1 位作者 陈集双 李德葆 《浙江农业大学学报》 CSCD 1994年第4期363-368,共6页

本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白... 本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 展开更多

关键词 芜菁花叶病毒 外壳蛋白 基因表达

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芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与序列分析

4

作者 邓晓东 费小雯 +1 位作者 刘志昕 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 2000年第1期60-64,共5页

根据芜菁花叶病毒（TurnipMosaicVirus，TuMV）外壳蛋白（CP）基因序列人工合成引物，用RT法合成cDNA后，通过PCR法扩增并克隆TuMV海南分离物外壳蛋白基因。结果表明，外壳蛋白基因全长864个碱基，编码288个氨基酸。与Trembly，M．F等... 根据芜菁花叶病毒（TurnipMosaicVirus，TuMV）外壳蛋白（CP）基因序列人工合成引物，用RT法合成cDNA后，通过PCR法扩增并克隆TuMV海南分离物外壳蛋白基因。结果表明，外壳蛋白基因全长864个碱基，编码288个氨基酸。与Trembly，M．F等报道的核苷酸同源率为95．8％，氨基酸同源率为94．8％。与徐平报道的核苷酸同源率为96．3％，氨基酸同源率为95．1％。与孔令洁报道的核苷酸同源率为88％，氨基酸同源率为90．6％。将CP基因插入pET－21b多克隆位点，转入E．colt后诱导表达，聚丙烯酸胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带，Westernblot检测证明，该特异带与TuMV抗血清呈阳性反应。 展开更多

关键词 芜菁花叶病毒 外壳蛋白基因 序列分析 表达载体

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芜菁花叶病毒杭州分离株外壳蛋白基因序列分析 被引量：2

5

作者 徐平 许建平 +1 位作者 薛朝阳 李德葆 《浙江农业大学学报》 CSCD 1994年第5期451-456,共6页

从杭州郊区分离出一个ＴｕＭＶ强毒株系，利用分子克隆和Ｓａｎｇｅｒ双脱氢测序方法分析了其外壳蛋白基因的ＤＮＡ序列．该序列与已报道的其他４种ＴｕＭＶ分离物都具有较高的同源性，最高达９７．６％，最低达８９．５％，其氨基酸序... 从杭州郊区分离出一个ＴｕＭＶ强毒株系，利用分子克隆和Ｓａｎｇｅｒ双脱氢测序方法分析了其外壳蛋白基因的ＤＮＡ序列．该序列与已报道的其他４种ＴｕＭＶ分离物都具有较高的同源性，最高达９７．６％，最低达８９．５％，其氨基酸序列的同源性更高，最高达９７．９％，最低达９４．５％。本文分析了该序列中ＡＴ和ＧＣ含量，计算了４种核苷酸在有意义链中和在密码子不同位置上的出现频率，同时还分析了该病毒外壳蛋白氨基酸遗传密码的使用频率。 展开更多

关键词 芜菁 花叶病毒 外壳蛋白 DNA

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黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用 被引量：9

6

作者 刘勇 张德咏 +2 位作者 王小平 周雪平 李德葆 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第5期361-365,共5页

根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆... 根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性. 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 克隆 检测

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云南烟草花叶病毒外壳蛋白基因的分离克隆及序列分析 被引量：6

7

作者 王芳 鄢波 +2 位作者 王玲仙 方琦 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 1999年第2期7-11,共5页

从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离，经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ；在烤烟品种红花大金元上以ＴＭＶ普通株作对照进行致病率测定，确定为强毒株系。以烟草花叶病毒（ＴＭＶ）云南强毒株系ＲＮＡ为模板，根据国外研究结... 从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离，经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ；在烤烟品种红花大金元上以ＴＭＶ普通株作对照进行致病率测定，确定为强毒株系。以烟草花叶病毒（ＴＭＶ）云南强毒株系ＲＮＡ为模板，根据国外研究结果，自行设计、合成寡核苷酸为引物，通过ＰＴ－ＰＣＲ体外扩增，得到约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段，将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α上，并进行了序列分析。分析表明，该其因含４７７个核苷酸，编码１５９个氨基酸，与国外发表的Ｕ１株系比较，核苷酸同源率为９８．１％，氨基酸同源率为９７．５％。获得了云南烟草ＴＭＶ外壳蛋白全基因片段。 展开更多

关键词 烟草花叶病毒 外壳蛋白基因 RT-PCR 克隆

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新疆加工番茄条斑坏死病原黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：19

8

作者 常波 向本春 +1 位作者 刘升学 韩盛 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第4期410-414,共5页

从表现花叶、畸形以及坏死症状的加工番茄病株上获得黄瓜花叶病毒分离物，用1对CMV CP基因引物进行RT-PCR，扩增得到了776bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物插入到克隆载体PUCm-T中转化大肠杆菌DHSa。经限制酶酶切鉴定，重组克隆中含有与... 从表现花叶、畸形以及坏死症状的加工番茄病株上获得黄瓜花叶病毒分离物，用1对CMV CP基因引物进行RT-PCR，扩增得到了776bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物插入到克隆载体PUCm-T中转化大肠杆菌DHSa。经限制酶酶切鉴定，重组克隆中含有与PCR产物大小相同的776bp的插入片段。cDNA全序列分析表明，重组克隆含1个开放阅读框架（ORF），长度为657nt，编码218个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较，所测得的CMV新疆分离物与CMV亚组Ⅰ的核苷酸同源性高达91．0％-98．9％．而与CMV亚组Ⅱ的核苷酸同源性仅在76．4％-78．2％，所测得的CMV新疆分离物与CMV亚组Ⅰ的氨基酸同源性高达94．2％-98．6％；而与CMV亚组Ⅱ的核苷酸同源性仅在79．9％～83．5％．CMV亚组Ⅰ的株系较CMV亚组Ⅱ株系同源关系更密切，所以CMV新疆分离物应该归属于CMV亚组Ⅰ。 展开更多

关键词 加工番茄 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因克隆 序列比较分析

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香蕉花叶病毒外壳蛋白基因克隆及表达载体的构建 被引量：4

9

作者 杜道林 苏杰 +3 位作者 周鹏 刘志晰 邓晓东 郑学勤 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期81-84,13,共5页

从海南大田感染香蕉花叶病的香蕉叶片 ,获得香蕉花叶病毒 ,提纯其 RNA,在 AMV反转录酶作用下合成 c DNA第一链 ,经 PCR扩增 ,获得一约 70 0 bp的 DNA片段 ,测序结果显示所克隆的 DNA片段包含一完整的香蕉花叶病毒株系 ( CMV-BHI)外壳蛋... 从海南大田感染香蕉花叶病的香蕉叶片 ,获得香蕉花叶病毒 ,提纯其 RNA,在 AMV反转录酶作用下合成 c DNA第一链 ,经 PCR扩增 ,获得一约 70 0 bp的 DNA片段 ,测序结果显示所克隆的 DNA片段包含一完整的香蕉花叶病毒株系 ( CMV-BHI)外壳蛋白基因 ,长度为 6 5 7bp,然后将此 DNA片段 ,分别克隆到p BI1 2 1和 p KHG4质粒 ,构成两个含 Ca MV35 s启动子 ( 5 '-端 )、NOS终止子 ( 3'-端 )和分别含 NPT 标记基因和 NPT 及 HPT标记基因的植物表达载体 ( p TBB和 p TBK)。然后用 p AHC1 8中的 UBI promoter换下p BI1 2 1的 Ca MV35 s promoter,构成 p BIAH;再用 CMV-BHI外壳蛋白基因换下 p BIAH中 GUS基因 ,构成一含单子叶植物启动子 UBI和 NPT 标记基因的植物表达载体 ( p TBBU)。从而为 展开更多

关键词 香蕉花叶病毒 外壳蛋白 基因克隆 测序 植物表达载体

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黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究 被引量：4

10

作者 胡开林 付群梅 +1 位作者 汪国平 胡志群 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期34-36,共3页

通过根癌农杆菌介导 ,采用叶盘转化法 ,探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白 (CMV CP)基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件 .结果表明 :适宜的卡那霉素 (Km)浓度、根癌农杆菌浓度、根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为 35mg/L、D60 0 ... 通过根癌农杆菌介导 ,采用叶盘转化法 ,探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白 (CMV CP)基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件 .结果表明 :适宜的卡那霉素 (Km)浓度、根癌农杆菌浓度、根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为 35mg/L、D60 0 约 0 .5、10～ 15min和 2～ 3d ;将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有 35mg/LKm的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根 ,获得了抗Km的番茄再生植株 .对再生植株进行再次离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测 ,初步证明CMV CP基因已导入番茄再生植株的基因组中 . 展开更多

关键词 黄瓜 花叶病毒 外壳蛋白 基因转化 根癌农杆菌 介导转化

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黄瓜花叶病毒番茄蕨叶分离物外壳蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：4

11

作者 田兆丰 裘季燕 +3 位作者 丁翠珍 刘伟成 魏蕾 刘德文 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期203-206,共4页

在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守... 在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术对其CP基因片段进行了扩增并克隆,获得了含该基因全长657 bp的cDNA片段。序列测定与比较分析结果表明,北京地区造成番茄蕨叶的CMV分离物CP基因片段核酸序列与GenBank上CMV亚组Ⅰ其他分离物同源性高达90%～99%,属于CMV亚组Ⅰ。该分离物与分离于我国芭蕉的另一亚组Ⅰ分离物GB同源性为94.37%,两分离物之间存在寄主适应性变异。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 番茄分离物 外壳蛋白基因 克隆 序列分析

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大豆花叶病毒Sc株系外壳蛋白基因的部分序列分析 被引量：5

12

作者 董宏平 程宁辉 濮祖芹 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第3期67-71,共5页

采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术，体外扩增ＳＭＶ－Ｓｃ株系的外壳蛋白基因并进行部分测序．结果表明：所测５′端１５０个核苷酸序列同已发表的ＳＭＶ－ＢＪ（北京分离物）、Ｓａ株系同源率分别为９５％和９３％，３′端非编码... 采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术，体外扩增ＳＭＶ－Ｓｃ株系的外壳蛋白基因并进行部分测序．结果表明：所测５′端１５０个核苷酸序列同已发表的ＳＭＶ－ＢＪ（北京分离物）、Ｓａ株系同源率分别为９５％和９３％，３′端非编码区同ＢＪ株系同源率为８４％． 展开更多

关键词 大豆 花叶病毒 外壳蛋白 基因序列分析 PCR

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西瓜花叶病毒2号外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：10

13

作者 万莉 刘俊君 +1 位作者 彭学贤 黄学森 《果树科学》 CSCD 北大核心 1996年第1期5-10,共6页

以郑州地区西瓜花叶病病叶分离物──西瓜花叶病毒２号（２－ＷＭＶ－）为毒源，从繁殖寄主西葫芦病叶中分离、鉴定了病毒。以病毒基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ，通过多聚酶链式反应（ＰＣＲ），从ｃＤＮＡ中扩增和克隆了病... 以郑州地区西瓜花叶病病叶分离物──西瓜花叶病毒２号（２－ＷＭＶ－）为毒源，从繁殖寄主西葫芦病叶中分离、鉴定了病毒。以病毒基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ，通过多聚酶链式反应（ＰＣＲ），从ｃＤＮＡ中扩增和克隆了病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因，其中包括３’端非编码区，完成了全部核苷酸序列分析。ＣＰ基因全长１０９９个苷耷酸，其中编码区长９０３个核苷酸，编码３０１个氨基酸，３’端非编码区长１９６个核苷酸。Ｚ－ＷＭＶ－２ＣＰ基因的编码区比Ａ－ＷＭＶ－２，Ｕ－ＷＭＶ－２两株系的ＣＰ基因编码区分别长出６０个核耷酸，多编码２０个氨基酸。与两个株系相比，编码区的核昔酸序列同源性分别为８８．５％和８７．０％，氨基酸序列同源性分别为９０．０％和８８．７％，３，端非编码区的同源性分别为６８．３％和７１．８％。若不考虑Ｚ－ＷＭＶ－２多出的６０个核苷酸及２０个氨基酸，则上述同源性依次为９５．４％、９３．７％、９６．４％、９５．０％、８８．８％和９３．４％。构建了含ＷＭＶ－２ＣＰ基因的大肠杆菌表达载体，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，表达出了与天然病毒外壳蛋白分子量相同的蛋白。 展开更多

关键词 西瓜 花叶病毒2号 外壳蛋白基因 基因表达

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黄瓜绿斑驳花叶病毒山西西瓜分离物外壳蛋白基因序列分析 被引量：5

14

作者 杜江 成媛媛 +1 位作者 牛二波 牛颜冰 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期142-145,148,共5页

通过病毒dsRNA分离技术、非序列依赖性PCR扩增(sequence-independent amplification,SIA)技术和RTPCR等手段对采自山西太谷的西瓜病样进行了检测与鉴定,确定其为黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)所侵染。... 通过病毒dsRNA分离技术、非序列依赖性PCR扩增(sequence-independent amplification,SIA)技术和RTPCR等手段对采自山西太谷的西瓜病样进行了检测与鉴定,确定其为黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)所侵染。为明确CGMMV西瓜分离物(CGMMV-SXTG)的分类地位,本研究进一步克隆了CGMMV-SXTG的外壳蛋白基因(coat protein,CP)全序列并进行序列分析,系统进化树分析显示该分离物与亚洲分离物亲缘关系较近,而与欧洲分离物亲缘关系较远,表明该病毒的不同分离物在分组上可能与地域有一定的关系;接着对不同分离物的CP基因核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性比对分析,结果表明该分离物与中国山东分离物(TANG)同源性最高,分别达到99.8%和99.6%。 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 序列分析 外壳蛋白基因

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黄瓜花叶病毒山东分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：12

15

作者 崔连民 张福进 +1 位作者 朱常香 刘学春 《山东农业科学》 2005年第4期3-6,共4页

对侵染烟草的黄瓜花叶病毒(CMV)山东分离物(SD1)的外壳蛋白(CP)基因进行克隆和序列分析.根据已报道的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列合成两条寡聚核苷酸引物,用免疫捕捉PCR的方法对黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因进行了扩增.将所得的PCR产... 对侵染烟草的黄瓜花叶病毒(CMV)山东分离物(SD1)的外壳蛋白(CP)基因进行克隆和序列分析.根据已报道的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列合成两条寡聚核苷酸引物,用免疫捕捉PCR的方法对黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因进行了扩增.将所得的PCR产物通过T4DNA连接酶连接到pET-22b(+)载体上,并转化大肠杆菌DH5a.序列分析表明:CMV-SD1的CP基因全长657bp,编码218个氨基酸;其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ的分离物有极高的同源性,达92.7%～94.9%;与亚组Ⅱ的同源性仅为59.3%～59.5%;由此将CMV-SD1分离物归属于CMV亚组Ⅰ. 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 序列分析 CMV亚组Ⅰ

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香蕉花叶病毒外壳蛋白基因的分离测序和比较 被引量：3

16

作者 张锡炎 伍世平 +2 位作者 刘志昕 邵寒霜 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期13-18,共6页

从海南大田感染花叶病毒的香蕉叶片中分离病毒及其ＲＮＡ，在ＡＭＶ逆转录酶作用下以ＲＮＡ为模板反转录合成ｃＤＮＡ第一链，并在此基础上进行ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｃＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增，得一１ｋｂ左右片段。补... 从海南大田感染花叶病毒的香蕉叶片中分离病毒及其ＲＮＡ，在ＡＭＶ逆转录酶作用下以ＲＮＡ为模板反转录合成ｃＤＮＡ第一链，并在此基础上进行ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｃＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增，得一１ｋｂ左右片段。补平后克隆到ｐＢＳ质粒的ＥｃｏＲＶ位点，测得该片段长９８６ｂｎ。分析表明它包含有完整的香蕉花叶病毒外壳蛋白基因，其编码区的核苷酸序列与ＣＭＶ－Ｃ株系的同源率为８８；６％，ＣＭＶ－Ｑ株系为７５．０％；氨基酸残基序列与ＣＭＴ－Ｃ株系同源率为８５．８％，ＣＭＶ－Ｑ株系为６４．４％。 展开更多

关键词 香蕉花叶病毒 外壳蛋白基因 CDNA克隆 序列分析

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黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备 被引量：3

17

作者 刘锦 李亦晴 +3 位作者 黄显德 房乐 李向东 田延平 《山东农业科学》 2017年第5期10-13,共4页

将黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,表达出分子量为19.5 kD的CGMMV CP融合蛋白。... 将黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,表达出分子量为19.5 kD的CGMMV CP融合蛋白。切胶回收诱导表达的CGMMV CP免疫家兔,制备抗血清。Western Blotting检测发现,制备的抗血清能与CGMMV CP发生特异性免疫反应,与同属的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)无反应。琼脂双扩散试验测定,制备抗血清的效价为1∶16,ELISA测定效价为1∶1024。该血清特异性强、效价高,可用于CGMMV的检测。 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清

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从豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒两株系外壳蛋白基因的序列比较 被引量：1

18

作者 周雪平 刘勇 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第5期556-556,共1页

关键词 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 序列

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黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：3

19

作者 吴志明 温春秀 +3 位作者 彭卫欣 吴智红 王云逸 谢晓亮 《河北农业科学》 2004年第2期21-27,共7页

从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,... 从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%～ 99 4%和95 9%～ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%～ 79 0 %和81 2 %～ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。 展开更多

关键词 黄瓜花叶病毒 丹参 外壳蛋白基因 基因克隆 序列分析

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甘蔗花叶病毒南城分离物外壳蛋白基因序列测定及分析

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作者 蒋军喜 钱亚娟 +3 位作者 谢艳 阙海勇 罗有强 向妙莲 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期464-467,共4页

从江西南城甘蔗病株中获得1个甘蔗花叶病毒（Sugarcane mosaic virus,SCMV）分离物,命名为SCMV-NCH。根据SCMV外壳蛋白（CP）基因N-端和C-端保守序列设计引物,对SCMV-NCH的CP基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,获得924个核苷酸（nt）,推... 从江西南城甘蔗病株中获得1个甘蔗花叶病毒（Sugarcane mosaic virus,SCMV）分离物,命名为SCMV-NCH。根据SCMV外壳蛋白（CP）基因N-端和C-端保守序列设计引物,对SCMV-NCH的CP基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,获得924个核苷酸（nt）,推断编码308个氨基酸（aa）的近全长CP基因序列。与SCMV亚组SCMV、高粱花叶病毒（SrMV）、玉米矮花叶病毒（MDMV）、约翰逊草花叶病毒（JGMV）、玉米花叶病毒（ZeMV）、白草花叶病毒（PenMV）等6种病毒代表性株系外壳蛋白氨基酸序列同源性比较结果显示,SCMV-NCH与SCMV的同源性最高（86.2%）,与其他5种病毒同源性相对较低（56.4%～72.2%）。与SCMV13个分离物外壳蛋白氨基酸序列进行同源性比较并构建关系树,结果显示SCMV-NCH与我国浙江2个分离物（Yuhang和Xiaosh）具有最近的亲缘发生关系。 展开更多

关键词 甘蔗花叶病毒 外壳蛋白基因 序列测定 亲缘关系分析

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