猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达

1

作者 姜连连 董国雄 +2 位作者 徐建生 董辉 黄兵 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期80-84,共5页

扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F1... 扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F18ab菌毛单克隆抗体对联合表达的融合蛋白质进行检测鉴定。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 F18ab菌毛 志贺样毒素Ⅱ型变异体 联合表达 融合蛋白

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单克隆抗体S2C4对2型志贺毒素及其亚型毒性的中和作用(英文) 被引量：3

2

作者 焦永军 曾晓燕 +3 位作者 郭喜玲 史智扬 冯振卿 汪华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期736-742,共7页

纯化的2型志贺毒素(Shiga toxin2,Stx2)经福尔马林脱毒后免疫BALB/c小鼠制备Stx2单克隆抗体,用体外中和试验对具有中和活性的阳性抗体克隆进行初筛,对所获得的中和抗体的重、轻链同种型及结合特异性进行鉴定,其中和保护作用通过体内、... 纯化的2型志贺毒素(Shiga toxin2,Stx2)经福尔马林脱毒后免疫BALB/c小鼠制备Stx2单克隆抗体,用体外中和试验对具有中和活性的阳性抗体克隆进行初筛,对所获得的中和抗体的重、轻链同种型及结合特异性进行鉴定,其中和保护作用通过体内、体外中和试验加以验证,最后,中和抗体对Stx2亚型Stx2c和Stx2vha的中和谱用体内中和试验验证.结果显示,12株抗Stx2的阳性抗体克隆中,只有1株具有中和活性,命名为S2C4,其重、轻链同种型为G1/κ,其靶分子为Stx2的A亚单位,与Stx2的B亚单位或Stx1不结合.在体外中和试验中S2C4可有效中和Stx2对Vero细胞的杀伤作用,同样,S2C4可中和致死量的Stx2及其亚型Stx2c和Stx2vha对小鼠的毒性作用.该抗体有望成为治疗产志贺毒素大肠杆菌感染的候选分子. 展开更多

关键词 单克隆抗体S2C4 2型志贺毒素 中和作用 产志贺毒素大肠杆菌

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猪水肿病志贺样毒素大肠杆菌的分离与鉴定 被引量：6

3

作者 王红珍 艾虎 +2 位作者 吴拥军 冉雪琴 王嘉福 《西南农业学报》 CSCD 2004年第3期378-381,共4页

大肠杆菌产生的志贺样毒素Ⅱ型突变体(Shiga liketoxinvariant,SLTⅡv)是猪水肿病的主要致病因子。采用聚合酶链式反应,以特异的寡核苷酸片段为引物,从200份贵州省患水肿病猪粪样中检出19株菌株含有志贺样毒素Ⅱ型突变体基因,生化实验... 大肠杆菌产生的志贺样毒素Ⅱ型突变体(Shiga liketoxinvariant,SLTⅡv)是猪水肿病的主要致病因子。采用聚合酶链式反应,以特异的寡核苷酸片段为引物,从200份贵州省患水肿病猪粪样中检出19株菌株含有志贺样毒素Ⅱ型突变体基因,生化实验结果符合大肠埃希氏杆菌的特点。经鉴定,19株大肠杆菌分属于O8、O65、O82、O1394种血清型,其中O82占63%。研究结果证实,在贵州省猪水肿病中存在志贺样毒素基因。 展开更多

关键词 大肠杆菌 猪水肿病 志贺样毒素Ⅱ型突变体基因

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类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用 被引量：3

4

作者 严振龙 董国雄 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期103-105,共3页

将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4... 将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。 展开更多

关键词 Ⅱ型变异体 B亚单位 制备 应用 类志贺毒素 单克隆抗体 融合蛋白 水肿病 猪

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12个中药方剂对小鼠仔猪水肿病模型的保护率观察比较 被引量：5

5

作者 高立云 周宏超 +2 位作者 王中杰 穆祥 陈耀兴 《中兽医医药杂志》 2007年第5期42-43,共2页

关键词 仔猪水肿病 中药方剂 溶血性大肠杆菌病 保护率 志贺样毒素 模型 小鼠 Ⅱ型变异体

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猪源大肠杆菌志贺样毒素2型突变体B亚基与LTB基因的融合与表达

6

作者 王红珍 冉雪琴 +1 位作者 吴拥军 王嘉福 《西南农业学报》 CSCD 2007年第6期1324-1328,共5页

猪水肿病的主要毒力因子是志贺样毒素的2型突变体(Stx2e),毒素的A亚基是有毒的酶活性单位,B亚基无毒,介导毒素与受体的结合。为了增加B亚基的免疫原性,采用重叠PCR将猪源志贺样毒素Ⅱ型突变体B亚单位(Stx2e B)连接至热敏肠毒素的B亚单位... 猪水肿病的主要毒力因子是志贺样毒素的2型突变体(Stx2e),毒素的A亚基是有毒的酶活性单位,B亚基无毒,介导毒素与受体的结合。为了增加B亚基的免疫原性,采用重叠PCR将猪源志贺样毒素Ⅱ型突变体B亚单位(Stx2e B)连接至热敏肠毒素的B亚单位(LTB)成熟肽N末端,获得Stx2e B与LTB相连的融合蛋白基因Stx2e B-LTB。融合基因克隆到表达载体pQE30中,在IPTG的诱导下,融合基因在大肠杆菌中获得表达,表达量占细菌总蛋白的8%。融合蛋白的获得为猪水肿病基因工程亚单位疫苗的制备、猪水肿病的预防奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 大肠杆菌 志贺样毒素2型突变体 热敏肠毒素 基因融合

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抗菌药物对流行性O104:H4型大肠埃希菌产2型志贺毒素和诱导噬菌体的作用

7

作者 胡佳丽 郭蓓宁 《中国感染与化疗杂志》 CAS 北大核心 2012年第6期471-471,共1页

抗菌药物在治疗肠出血性大肠埃希菌（Enterohemor—rhagj（Escherichia coli，EHEC）感染中的作用存在争议，原因在于其町能导致志贺毒素（Shigatoxin，Stx）产量增高而引起溶血尿毒综合征。但在近期EHEC0104：H4型菌株的暴发流行中，... 抗菌药物在治疗肠出血性大肠埃希菌（Enterohemor—rhagj（Escherichia coli，EHEC）感染中的作用存在争议，原因在于其町能导致志贺毒素（Shigatoxin，Stx）产量增高而引起溶血尿毒综合征。但在近期EHEC0104：H4型菌株的暴发流行中，某些患者需要使用抗菌药物治疗。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌 抗菌药物 志贺毒素 4型 噬菌体 流行性 溶血尿毒综合征 2型

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猪水肿病病理模型复制 被引量：7

8

作者 周宏超 高立云 +5 位作者 王中杰 索占伟 张涛 范光丽 刘钟杰 穆祥 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期16-19,共4页

以小鼠为试验动物,分别经腹腔注射产志贺样毒素大肠埃希菌菌液和志贺样毒素二型变异体粗制品,复制猪水肿病病理模型。结果表明,小鼠最佳感染细菌数为1.6×1010,志贺样毒素二型变异体最佳感染剂量为0.25 mg。大肠埃希菌菌菌液和志贺... 以小鼠为试验动物,分别经腹腔注射产志贺样毒素大肠埃希菌菌液和志贺样毒素二型变异体粗制品,复制猪水肿病病理模型。结果表明,小鼠最佳感染细菌数为1.6×1010,志贺样毒素二型变异体最佳感染剂量为0.25 mg。大肠埃希菌菌菌液和志贺样毒素二型变异体人工感染小鼠,其临床症状、病理变化没有明显差异。主要病理组织学变化为:肝变性、坏死,脾巨细胞增生、部分淋巴细胞坏死,肺充血,肾间质血管微血栓形成,小肠绒毛结构被破坏,固有层水肿,间质微血管充血,大脑噬神经现象和卫星化现象等。结果表明志贺样毒素二型变异体是引起猪水肿病主要致病因子,小鼠可作为研究猪水肿病的动物模型。 展开更多

关键词 猪水肿病 志贺样毒素二型变异体 病理模型 小鼠

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志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备 被引量：4

9

作者 丁琳 师东方 +3 位作者 付海兵 于迪 杨旭东 单安山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期222-225,240,共5页

为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,... 为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,其抗体亚类包括IgM、IgA、IgG2b和IgG2a,而且轻链均为κ链。阻断ELISA结果显示,6株McAb均能特异性识别天然SLT-Ⅱe毒素。相加ELISA结果显示,3G7和4F3两株是针对不同抗原表位的McAb。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基(SLT-ⅡeB) 单克隆抗体

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pH敏感型聚合物胶束对I型志贺毒素A亚基的递送及细胞毒性 被引量：2

10

作者 孙敏佳 刘晔宏 +4 位作者 薛依桐 徐俊 王彤 徐首红 张俊琪 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期213-220,共8页

探究了pH敏感型聚合物胶束递送和释放I型志贺毒素A亚基至肿瘤细胞Hela的效率和功能。首先将在大肠杆菌中分别重组表达I型志贺毒素A亚基Stx1A和减毒突变A亚基Mu-Stx1A,然后将对pH敏感的聚合物胶束PEG_(8)-PDPA_(100)-PEG_(8)(其中PEG为... 探究了pH敏感型聚合物胶束递送和释放I型志贺毒素A亚基至肿瘤细胞Hela的效率和功能。首先将在大肠杆菌中分别重组表达I型志贺毒素A亚基Stx1A和减毒突变A亚基Mu-Stx1A,然后将对pH敏感的聚合物胶束PEG_(8)-PDPA_(100)-PEG_(8)(其中PEG为聚乙二醇,PDPA为聚异丙基甲基烯酸酯)分别运载至宫颈癌细胞Hela中。体外活性实验证明重组蛋白Stx1A具有明显的抑制蛋白合成作用,而减毒变异型Mu-Stx1A不具备这种作用。用聚合物胶束将Stx1A及Mu-Stx1A转运至Hela细胞中,发现随着蛋白浓度的增加细胞转染效率增大。包载了Stx1A的胶束进入细胞后,释放活性Stx1A导致细胞病变和凋亡,该现象随着Stx1A浓度的增加表现更显著。实验证明聚合物胶束可以成功包载、运输和稳定释放具有活性的Stx1A分子至肿瘤细胞内,发挥毒性功能诱导细胞程序性死亡。该聚合物胶束可以在蛋白类药物运输中发挥有效作用,为后续I型志贺毒素A亚基在肿瘤治疗中的应用性研究提供重要的理论基础。 展开更多

关键词 I型志贺毒素 pH敏感型聚合物胶束 蛋白类药物 胞内递送 肿瘤治疗

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海安县猪水肿病的流行病学与病原特性研究

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作者 朱润芝 洪小花 +4 位作者 庞全海 李宏全 高崧 杨宏伟 丁永龙 《广东畜牧兽医科技》 2005年第2期34-38,共5页

对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发... 对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生,一般以气温比较高的季节多发。同时从疑似猪水肿病的病料中分离到12株大肠杆菌,经O血清型鉴定,5株为O139,2株为O45,O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,共6个分离株带有SLT-2e基因,其中O139分离株5株,O55分离株1株,其余6株均带STb基因。12个分离株中,单独表达F18菌毛的4株(O1392株,O45、O119各1株),F5+F411株(O93),F41+F181株(O139),F5+F41+F182株(均为O139)。经药敏试验,多数分离菌株对壮观霉素和新霉素高度敏感。 展开更多

关键词 猪 水肿病 大肠杆菌 O血清型 F38菌毛 致水肿病2型类志贺毒素 流行病学 海安县

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猪水肿病发病机理研究进展 被引量：18

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作者 林艺远 刘国平 +1 位作者 杨明柳 吴斌 《动物医学进展》 CSCD 2006年第7期10-15,共6页

猪水肿病主要发生于断奶后2周内的仔猪,是常见的一种急性致死性传染病。该病是由利用其菌毛(F18ab)黏附于小肠上皮细胞,并产生类志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)的产类志贺毒素大肠埃希菌引起的一种肠毒血症。仔猪断奶后的免疫能力,营养... 猪水肿病主要发生于断奶后2周内的仔猪,是常见的一种急性致死性传染病。该病是由利用其菌毛(F18ab)黏附于小肠上皮细胞,并产生类志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)的产类志贺毒素大肠埃希菌引起的一种肠毒血症。仔猪断奶后的免疫能力,营养水平和遗传抗性是导致猪水肿病的主要影响因素。文章着重阐述了猪水肿病的致病机理,为该病的预防和治疗提供重要的理论依据。 展开更多

关键词 猪水肿病 产类志贺毒素大肠埃希菌 致病机理

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致猪水肿病大肠杆菌鄂E株SLT-IIeB基因的克隆、序列分析及原核表达 被引量：4

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作者 林艺远 刘国平 +2 位作者 吴斌 赵战勤 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期474-478,共5页

以湖北本地分离的致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,PCR扩增去掉信号肽和跨膜区的SLT-IIeB基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG。同时对筛选出的阳性质粒pGEX-SLT-IIeB进行测序,测序结果与Genbank上发表的12个SLT-IIeB基因序列的同源性达1... 以湖北本地分离的致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,PCR扩增去掉信号肽和跨膜区的SLT-IIeB基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG。同时对筛选出的阳性质粒pGEX-SLT-IIeB进行测序,测序结果与Genbank上发表的12个SLT-IIeB基因序列的同源性达100%,表明该基因保守性很好。重组质粒pGEX-SLT-IIeB经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,SDS-PAGE分析表明表达产物GST-SLT-IIeB有特异性表达带,Western-blot检测证实表达产物具有免疫反应性。 展开更多

关键词 产类志贺毒素大肠杆菌 猪水肿病 SLT-IIeB 克隆 序列分析 原核表达

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致猪水肿病大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

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作者 李伟杰 赵耘 +3 位作者 魏财文 岂晓鑫 田野 蒋桃珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期537-543,共7页

本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性... 本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313bp。特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875CFU。利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e。结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 猪水肿病 大肠埃希菌 志贺毒素Stx2e 菌毛F18ab

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仔猪水肿病病原菌的分离鉴定 被引量：1

15

作者 曹永国 刘育华 +3 位作者 蔺涛 李文良 黄秦 曹瑞兵 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第11期111-114,共4页

从江苏淮安某猪场具有典型水肿病临床症状和剖检变化的发病猪组织分离的菌株中挑选5株大肠杆菌,分别命名为JS0001、JS0002、JS0003、JS0004和JS0005。通过培养特性、菌体形态、染色特性、生化鉴定及血清学试验等一系列方法对其进行系统... 从江苏淮安某猪场具有典型水肿病临床症状和剖检变化的发病猪组织分离的菌株中挑选5株大肠杆菌,分别命名为JS0001、JS0002、JS0003、JS0004和JS0005。通过培养特性、菌体形态、染色特性、生化鉴定及血清学试验等一系列方法对其进行系统鉴定,并对这5株细菌进行抗药性、溶血性、Vero细胞毒性和小白鼠致病性等试验。试验结果表明,JS0001、JS0002、JS0004和JS0005表现β型溶血,腹腔接种小白鼠,JS0001、JS0002、JS0003、JS0004对其具有较高致病性;5株细菌药敏特性基本一致:对痢特灵(FR)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)敏感,对头孢曲松(CRO)敏感性最高,而对阿莫西林(AMX)、多西环素(DO)等药物具有耐药性。JS0002J、S0004能够分泌Vero细胞毒素,确定为产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)。血清学试验结果表明,JS0002J、S0004的血清型为O139,JS0001J、S0003为O141。 展开更多

关键词 仔猪 水肿病 产类志贺毒素大肠杆菌 生化鉴定 药敏特性 血清型

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猪水肿病的研究进展 被引量：10

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作者 高崧 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第3期62-63,共2页

猪水肿病的研究进展高崧综述张如宽审校（杨州大学农学院畜牧兽医系）近年来，人们对猪水肿病的研究，取得了很大进展，从而大大深化了对该病的认识。至少有志贺样毒素、Ｆ１０７菌毛抗原和宿主受体基因型等因素与水肿的发生紧密相关。... 猪水肿病的研究进展高崧综述张如宽审校（杨州大学农学院畜牧兽医系）近年来，人们对猪水肿病的研究，取得了很大进展，从而大大深化了对该病的认识。至少有志贺样毒素、Ｆ１０７菌毛抗原和宿主受体基因型等因素与水肿的发生紧密相关。现分三方面综述如下。一、志贺样毒素... 展开更多

关键词 猪病 水肿病 志贺样毒素 菌毛抗原 基因型

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仔猪水肿病的诊断及综合防治 被引量：2

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作者 谢满仓 蔡德友 +1 位作者 陈永旭 李广运 《养殖技术顾问》 2012年第10期81-81,共1页

猪水肿病是由产类志贺毒素大肠杆菌引起断乳仔猪的肠毒血症,其特征为脸部、眼脸、胃壁及肠系膜部位发生水肿。是目前危害仔猪极为严重的疾病之一,主要侵害断乳前后到出售的仔猪,本病会给母猪饲养户带来严重的经济损失,对患过严重水泻的... 猪水肿病是由产类志贺毒素大肠杆菌引起断乳仔猪的肠毒血症,其特征为脸部、眼脸、胃壁及肠系膜部位发生水肿。是目前危害仔猪极为严重的疾病之一,主要侵害断乳前后到出售的仔猪,本病会给母猪饲养户带来严重的经济损失,对患过严重水泻的仔猪,愈后5～15天更易多见此病的发生。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 综合防治 诊断 类志贺毒素 肠毒血症 断乳仔猪 大肠杆菌 经济损失

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SLT-2e对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2和PAF的影响

18

作者 周宏超 范光丽 +2 位作者 穆祥 胡格 索占伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第4期25-26,共2页

关键词 微血管内皮细胞 肠黏膜 细胞分泌 PAF 仔猪水肿病 志贺样毒素 大鼠 Ⅱ型变异体

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四种靶向因子与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗免疫效果的比较 被引量：2

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作者 刘贵霞 蓝佳明 +6 位作者 揣侠 高志云 金玉怀 张永红 谢立新 殷长甫 王永祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期103-106,共4页

目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于... 目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于股四头肌注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3、pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1,接种剂量为每次100μg/只,3周免疫1次,共3次。每次免疫后第14天内眦静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体滴度。第3次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LDLD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度;其余小鼠以5LDLD50的CVB3攻击,观察各组的生存情况。结果:除了pcDNA3对照组,其他各组的中和抗体滴度均随免疫次数的增加而提高(P<0.01),第3次免疫后,pcD-NA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组的抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组(P<0.01);pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1组CTL杀伤活性显著高于其他各组(P<0.01)。致死量病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组小鼠血中病毒滴度显著低于其他组(P<0.01);pcDNA3/MDC-VP1和pcD-NA3/VP1-C3d3组小鼠生存率显著高于其他各组(P<0.05)。结论:pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3能诱导出较强的体液免疫和细胞免疫,能有效降低血中病毒滴度,获得较高的小鼠生存率;整体效果优于其他组。 展开更多

关键词 巨噬细胞源趋化因子 补体片段C3d 志贺毒素B亚单位 小鼠β-防御素2 柯萨奇病毒B3型 基因疫苗

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SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定 被引量：1

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作者 严振龙 陈雷 +4 位作者 姜连连 成大荣 徐建生 董国雄 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2002年第5期73-75,88,共4页

PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2... PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。 展开更多

关键词 SLT-ⅡeA基因 原核系统 克隆 表达 鉴定 类志贺样毒素Ⅱ型变异体 仔猪 水肿瘤

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