青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究 被引量：3

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作者 杨生玺 张晓岩 +3 位作者 吕同德 哈小琴 王海燕 耿排力 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1002-1006,共5页

目的:研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA的表达,探讨宿主NKG2D在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对33例高原藏族胃癌患者及20例健康人,采用流... 目的:研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA的表达,探讨宿主NKG2D在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对33例高原藏族胃癌患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D的表达状况,RT-PCR和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA的表达。结果:高原藏族胃癌患者外周血NKG2D的表达为(13.47±5.26)%,明显低于正常组(32.62±10.08)%,2组之间差异显著(P<0.05);藏族胃癌组织MICAmRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%,26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示,MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关(r=0.903,P<0.01)。结论:高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关,高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。 展开更多

关键词 青海高原 胃肿瘤 自然杀伤细胞活化性受体d MHC—I链相关蛋白A 藏族

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主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A-自然杀伤细胞2族成员D通路及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

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作者 李超 蒋灿华 翦新春 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期59-62,共4页

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细... 主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A 自然杀伤细胞2族成员d 头颈部 鳞状细胞癌

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人类自然杀伤细胞活化性配体ULBPs的表达与调控

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作者 商平平 张彩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第5期493-496,共4页

人类自然杀伤细胞活化性配体UL16结合蛋白(UL16-binding proteins,ULBPs)家族至少由6个成员组成,其中ULBP1、ULBP2、ULBP3(ULl6-binding protein 1-3)分子含有α1和α2结构域,通过糖基磷脂酰肌醇(giycosylphosphatidylinositol,GPI)与... 人类自然杀伤细胞活化性配体UL16结合蛋白(UL16-binding proteins,ULBPs)家族至少由6个成员组成,其中ULBP1、ULBP2、ULBP3(ULl6-binding protein 1-3)分子含有α1和α2结构域,通过糖基磷脂酰肌醇(giycosylphosphatidylinositol,GPI)与细胞膜相连。ULBP4(UL16-binding protein 4)分子含有跨膜和胞质结构域。正常组织中广泛表达ULBPs。T淋巴细胞瘤、结肠癌、卵巢癌等肿瘤细胞表面也有ULBPs的高表达。化学药物、细胞因子、细菌和病毒感染等众多因素都可以调控ULBPs的表达,其中紫外线辐射、化疗药物等诱发的DNA损伤反应可以活化3-磷脂酰肌醇激酶家族类成员(ataxia-telangiecta- sia mutated,ATM)或(ataxia-telangiectasia and Rad3-related,ATR)激酶,进一步活化下游的Chk1、Chk2节点激酶和其他的凋亡相关分子,从而诱导ULBPs的表达,引起肿瘤细胞的生长周期停滞,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。另外,ULBP1启动子中CRE1位点活化也是上调ULBP1转录和表达的关键因素。对ULBPs表达与调控因素的深入探讨将为阐明肿瘤逃逸机制、寻求抗肿瘤有效药物提供新的作用靶点和思路。 展开更多

关键词 人类自然杀伤细胞 ULBPs 活化性受体 活化性配体 抗肿瘤

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苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性 被引量：10

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作者 黄宇贤 王杨 +3 位作者 孙明 周雪云 邓兰 郭坤元 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1329-1332,共4页

目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理... 目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。 展开更多

关键词 苦参碱 三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2 自然杀伤细胞 NKG2d 杀伤敏感性

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人鼻咽癌细胞株CNE2对NK细胞KIR/NKG2D受体的免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤功能的影响 被引量：8

5

作者 郭坤元 梅家转 姚开泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期247-249,共3页

目的探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪... 目的探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪检测对照组(新鲜分离的NK细胞)KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况。IL2组(IL2培养的NK细胞)、CNE2组(CNE2、IL2、NK细胞混合培养)培养后4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况,LDH释放法测定IL2组及CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结果CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7。3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1。CNE2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3表达较对照组、IL2组明显升高(P<0.01),NKG2D表达较对照组、IL2组明显降低(P<0.01),KIR3DL1表达与对照组、IL2组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组4、24、48h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1及NKG2D表达与对照组相比无明显变化(P>0.05)。IL2组、CNE2组培养24h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(2.74±1.64)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(4.57±2.41)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论NK细胞与NKG2D配体阳性的肿瘤细胞持续性接触,下调NK细胞表面NKG2D表达,上调NK细胞表面与HLAI类分子相结合的KIR表达,导致NK细胞对靶细胞杀伤活性减低。本研究阐明了编辑后的NK细胞杀伤活性减低的分子基础,同时提示阻断HLAI类分子与KIR的结合或者增强NK细胞表面NKG2D的表达将有利于提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 自然杀伤细胞 NKG2d 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 免疫编辑

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NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响 被引量：4

6

作者 梅家转 郭坤元 +1 位作者 魏红梅 宋朝阳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期887-889,共3页

目的探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-I类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2... 目的探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-I类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2DDP细胞活性的阻断作用。结果CNE2、CNE2DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配。CNE2、CNE2DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2DDP细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%。在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2DDP细胞相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P<0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2DDP细胞的杀伤活性。结论NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力。 展开更多

关键词 鼻咽癌 自然杀伤细胞 NKG2d 杀伤细胞免疫球蛋白样受体

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银屑病患者维生素D受体基因多态性与外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群分析 被引量：3

7

作者 朱慧琴 吴瑞勤 +2 位作者 陈玲娣 谢匡成 朱光斗 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期382-384,共3页

目的:探讨银屑病患者的维生素D受体(VDR)基因多态性与外周血自然杀伤(NK)细胞、T淋巴细胞亚群的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切技术(RFLP),以及流式细胞仪对112例无血缘关系的银屑病患者和108名无血缘关系的健康人... 目的:探讨银屑病患者的维生素D受体(VDR)基因多态性与外周血自然杀伤(NK)细胞、T淋巴细胞亚群的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切技术(RFLP),以及流式细胞仪对112例无血缘关系的银屑病患者和108名无血缘关系的健康人VDR基因型进行分析,并对其外周血NK、CD3、CD4、CD8细胞进行测定。结果:银屑病患者与健康人的VDR基因型的分布情况有明显不同,纯合子AA﹑杂合子Bb基因型在银屑病患者中出现的频率明显高于健康人。银屑病患者CD4、CD8细胞均显著高于健康人,而Bb基因型患者的NK细胞显著高于健康人,CD3细胞明显低于健康人。结论:纯合子AA基因型或杂合子Bb基因型的出现可能增加汉族人患银屑病的危险性。Bb基因型患者可能存在免疫缺陷。 展开更多

关键词 银屑病 维生素d受体 基因多态性 T淋巴细胞亚群 自然杀伤细胞

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吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性 被引量：3

8

作者 梅家转 刘桂举 +2 位作者 张晓娟 赵继智 冯睿婷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期358-361,365,共5页

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)... 目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:MTT法测定吉非替尼对A549细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测吉非替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3-K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)、Rottlerin(PKC抑制剂)作用A549细胞24小时后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,NK细胞对吉非替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:吉非替尼上调A549细胞MICB、ULBP1表达,增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,PKC抑制剂上调ULBP1表达。结论:吉非替尼上调NKG2D配体表达增强A549细胞对NK细胞杀伤的敏感性。 展开更多

关键词 肺癌 表皮生长因子受体 自然杀伤细胞 NKG2d

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自然杀伤细胞活化信号的转导和效应 被引量：5

9

作者 陈庆华 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第3期360-362,共3页

新近研究发现,NK细胞活化受体与靶细胞表面相应配体交联结合后,可通过以SLP-76和WASP为核心的信号传递复合体及PI3K途径发挥作用。SLP-76活化后,通过募集结合PLC-γ、Itk和Vav,形成SLP-76信号转导复合体;WASP活化后,通过募集结合Grb2、... 新近研究发现,NK细胞活化受体与靶细胞表面相应配体交联结合后,可通过以SLP-76和WASP为核心的信号传递复合体及PI3K途径发挥作用。SLP-76活化后,通过募集结合PLC-γ、Itk和Vav,形成SLP-76信号转导复合体;WASP活化后,通过募集结合Grb2、Vav、WIP、Arp2/3和Cdc42-GTP等,形成WASP信号转导复合体。上述2种信号转导复合体经Nck相连后,与浆膜上的LAT作用,进而活化其中的PLC-γ和Arp2/3复合体,最终导致转录因子NFAT活化、细胞因子(GM-CSF、IFN-γ等)分泌和肌动蛋白聚合。PI3K介导Rac/PAK/MEK/ERK途径,导致NK细胞脱颗粒,释放穿孔素和颗粒酶,诱导靶细胞凋亡。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 活化信号 效应 WASP 信号转导 肌动蛋白聚合 复合体 PLC-Γ IFN-γ ERK途径 细胞脱颗粒 研究发现 细胞表面 活化受体 NK细胞 发挥作用 信号传递 Grb2 转录因子 细胞因子 细胞凋亡 Itk LAT CSF MEK Rac 颗粒酶

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自然杀伤细胞受体的研究进展

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作者 应红宇 沈翔 丁仁瑞 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期25-29,共5页

自然杀伤细胞(NK细胞)可表达两类功能相悖的识别受体,即活化受体(KAR)和抑制受体(KIR)。KIR能识别自身细胞上的MHCⅠ类分子与自身或外来肽形成的复合物,所产生的抑制信号可阻断KAR的活化,以此抑制NK细胞的细胞毒作用。如果靶细胞失去KI... 自然杀伤细胞(NK细胞)可表达两类功能相悖的识别受体,即活化受体(KAR)和抑制受体(KIR)。KIR能识别自身细胞上的MHCⅠ类分子与自身或外来肽形成的复合物,所产生的抑制信号可阻断KAR的活化,以此抑制NK细胞的细胞毒作用。如果靶细胞失去KIR所识别的配体,NK细胞即可通过KAR对靶细胞进行攻击。本文将介绍此类受体的结构及其识别与信号转导机制的研究进展。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 活化受体 抑制受体 识别 信号转导

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NKG2D CAR-NK92细胞构建及其对多发性骨髓瘤细胞的杀伤作用

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作者 龙婧 郑榕 +4 位作者 叶思诗 柯善文 段德明 魏成 高基民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期577-585,共9页

目的 构建并鉴定靶向自然杀伤细胞2组成员D配体(NKG2DL)的嵌合抗原受体NK92(CAR-NK92)细胞[分泌白细胞介素15受体a与白细胞介素15的复合物(IL-15Ra-IL-15)],并验证NKG2D CAR-NK92细胞对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性。方法 通过筛选NKG2D... 目的 构建并鉴定靶向自然杀伤细胞2组成员D配体(NKG2DL)的嵌合抗原受体NK92(CAR-NK92)细胞[分泌白细胞介素15受体a与白细胞介素15的复合物(IL-15Ra-IL-15)],并验证NKG2D CAR-NK92细胞对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性。方法 通过筛选NKG2D的胞外段连接4-1BB、 CD3ζ、 IL-15Ra-IL-15序列构建CAR载体,包装慢病毒并转导NK92细胞,获得NKG2D CAR-NK92细胞;CCK-8法检测NKG2D CAR-NK92细胞的增殖能力,ELISA检测其IL-15Ra的分泌,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其杀伤效率;流式细胞术检测细胞活化性受体NK细胞受体p30(NKp30)、 NKp44、 NKp46的表达,凋亡细胞群的比例以及CD107α表达、胞内颗粒酶B(granzyme B)和穿孔素(perforin)的释放,以进一步验证NKG2D CAR-NK92细胞对肿瘤的细胞毒性作用机制;通过NKG2D抗体抑制效应细胞、组胺抑制肿瘤细胞后,LDH法检测对细胞杀伤效率的影响;构建NCG(NOD-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Nju)小鼠多发性骨髓瘤异体移植模型,验证其体内抗肿瘤活性。结果 慢病毒转导后,NK92细胞的NKG2D表达显著增加;与NK92细胞相比,NKG2D CAR-NK92细胞的增殖能力稍弱,早期凋亡细胞群少于其亲本NK92细胞;NKG2D CAR-NK92对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒性更强,在其培养上清液中可检测到IL-15Ra的分泌;NKp44蛋白在NKG2D CAR-NK92细胞上的表达量显著增加,活化效应增强;抑制试验显示,CAR-NK92细胞对MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)和MICB阳性的肿瘤细胞的细胞毒性作用更依赖于NKG2D CAR和NKG2DL的相互作用;NKG2D CAR-NK92细胞经肿瘤细胞刺激后,granzyme B和perforin表达增加,且NK细胞显著上调CD107α的表达;在高度免疫缺陷NCG小鼠多发性骨髓瘤异体移植模型中,经NKG2D CAR-NK92细胞治疗的小鼠肿瘤明显缩小,且体质量无明显下降。结论 成功构建一种靶向NKG2DL的CAR-NK92细胞(分泌IL-15Ra-IL-15),其对多发性骨髓细胞的杀伤作用明显。 展开更多

关键词 嵌合抗原受体(CAR) NK92细胞 自然杀伤细胞2组成员d配体(NKG2dL) 多发性骨髓瘤

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嵌合抗原受体T细胞免疫疗法在晚期胃癌中的应用进展 被引量：1

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作者 王皓 黎正行 罗天航 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1336-1342,共7页

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,当前我国胃癌就诊患者仍以进展期为主,晚期患者就诊时多已失去手术治疗的机会,而传统的放疗、化疗和靶向治疗效果并不理想。嵌合抗原受体(CAR)-T细胞(CAR-T)免疫疗法作为一种新的治疗手段,在血液系统恶性肿... 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,当前我国胃癌就诊患者仍以进展期为主,晚期患者就诊时多已失去手术治疗的机会,而传统的放疗、化疗和靶向治疗效果并不理想。嵌合抗原受体(CAR)-T细胞(CAR-T)免疫疗法作为一种新的治疗手段,在血液系统恶性肿瘤中疗效显著,也为胃癌的免疫治疗开辟了新途径。然而,由于胃癌的异质性、肿瘤微环境免疫抑制、肿瘤靶抗原逃逸及脱靶毒性等问题,使得CAR-T免疫疗法在胃癌治疗中的应用存在挑战。本文综述了CAR的结构及CAR-T治疗原理、CAR-T治疗晚期胃癌的主要靶点及治疗现状,并探讨了CAR-T治疗胃癌面临的挑战,旨在为晚期胃癌的临床免疫治疗提供新思路。 展开更多

关键词 胃肿瘤 免疫疗法 嵌合抗原受体T细胞 密封蛋白18.2 自然杀伤细胞活化型受体 上皮细胞黏附分子

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阻断KIR2DL4(CD158d)增强NK细胞的杀伤功能 被引量：4

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作者 郑国旭 李维妙 +4 位作者 郭张燕 席文锦 左百乐 温伟红 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1069-1072,共4页

目的利用抗体阻断人原代培养的自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4),抑制其与配体人白细胞抗原G(HLA-G)的结合,观察对NK细胞杀伤功能的影响。方法用免疫磁珠法分离人NK细胞并培养,流式细胞术检测所得NK细胞的... 目的利用抗体阻断人原代培养的自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4),抑制其与配体人白细胞抗原G(HLA-G)的结合,观察对NK细胞杀伤功能的影响。方法用免疫磁珠法分离人NK细胞并培养,流式细胞术检测所得NK细胞的纯度;流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL4的表达水平和人乳腺癌SK-BR-3细胞表面HLA-G的表达水平;将NK细胞与SK-BR-3细胞共培养,并加入KIR2DL4的阻断抗体,ELISA检测NK细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的水平,利用流式细胞术检测NK细胞表面CD107a的表达水平,以检测其脱颗粒情况。结果分离得到的人原代NK细胞纯度可达90%以上;共培养实验发现,KIR2DL4的阻断抗体可促进NK细胞分泌IFN-γ,且NK细胞表面CD107a的表达水平也明显提高,提示其脱颗粒能力增强。结论阻断KIR2DL4信号可明显促进NK细胞的杀伤功能,KIR2DL4在NK细胞杀伤靶细胞的过程中发挥抑制性作用。 展开更多

关键词 自然杀伤(NK)细胞 杀伤细胞免疫球蛋白样受体2dL4(KIR2dL4 Cd158d) HLA—G 乳腺癌细胞

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NK细胞杀伤人骨髓瘤RPMI8226细胞的活性及其可能的机制 被引量：3

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作者 韩露 宋永平 +3 位作者 周健 高全立 朱兴虎 房伯俊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期149-154,共6页

目的:研究同种异体NK细胞对人骨髓瘤RPMI 8226细胞的杀伤活性及其可能的机制。方法:LDH释放法检测NK细胞对RPMI 8226细胞和人白血病K562细胞的杀伤活性,流式细胞术和RT-PCR法分别检测K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表... 目的:研究同种异体NK细胞对人骨髓瘤RPMI 8226细胞的杀伤活性及其可能的机制。方法:LDH释放法检测NK细胞对RPMI 8226细胞和人白血病K562细胞的杀伤活性,流式细胞术和RT-PCR法分别检测K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达;阻断K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体的表达后,检测NK细胞的杀伤活性。结果:NK细胞对RPMI 8226靶细胞的杀伤活性明显低于对K562靶细胞的杀伤(P<0.01)。K562细胞高表达NKG2D配体,不表达HLA-Ⅰ类分子;RPMI 8226细胞低表达NKG2D配体,高表达HLA-Ⅰ类分子,其HLA基因型为A 01,66;B 58,58;Cw 03,06。阻断NKG2D配体后NK细胞杀伤K562细胞的活性明显降低(P<0.01),而杀伤RPMI 8226细胞的活性无明显改变;阻断HLA-Ⅰ类分子,NK细胞杀伤K562细胞的活性无变化,而杀伤RPMI 8226细胞的活性明显提高(P<0.01)。结论:NK细胞杀伤RPMI 8226细胞的活性较低,其机制与RPMI 8226细胞高表达HLA-Ⅰ类分子、低表达NKG2D配体有关。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 自然杀伤细胞受体 骨髓瘤 HLA—I类分子 NKG2d配体

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人类自然杀伤细胞免疫突触的研究进展

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作者 商平平 张彩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第6期475-477,480,共4页

NK细胞识别靶细胞时在接触表面形成大量的超分子集落,结构上与神经突触相似,称为NK细胞免疫突触。NK细胞抑制性受体和活化性受体分别与相应的配体结合形成抑制性免疫突触与活化性免疫突触。免疫突触的成熟是一个伴随着大量分子重新组合... NK细胞识别靶细胞时在接触表面形成大量的超分子集落,结构上与神经突触相似,称为NK细胞免疫突触。NK细胞抑制性受体和活化性受体分别与相应的配体结合形成抑制性免疫突触与活化性免疫突触。免疫突触的成熟是一个伴随着大量分子重新组合和隔离分布的动态过程。很多因素可以影响它的形成,其中肌动蛋白聚合抑制剂细胞松弛素C等可以明显抑制早期抑制性突触的形成,活化性突触中脂筏向细胞间接触位点极化能够为大量活化性信号提供一个锚定平台。免疫突触可以促进细胞间的接触、提供细胞间信号传递的平台、参与活化检查节点的形成。进一步对其结构、形成过程、信号整合等进行探讨将为提高NK细胞抗肿瘤和抗病毒治疗效果提供新的策略。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 活化性免疫突触 抑制性免疫突触 主要组织相容性复合体 抗肿瘤

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KIR不相合的NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用 被引量：6

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作者 叶韵斌 周智锋 +3 位作者 郑蕊蕊 陈强 林建银 李洁羽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期26-30,共5页

目的:研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like recep-tor,KIR)和HLA-Cw配体不相合的异基因NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用;分析杀伤活化受体NKG2D及其MICA配体表达水平与NK细... 目的:研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like recep-tor,KIR)和HLA-Cw配体不相合的异基因NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用;分析杀伤活化受体NKG2D及其MICA配体表达水平与NK细胞对乳腺癌细胞杀伤敏感性之间的关系。方法:取10例健康人及5例乳腺癌患者外周血10ml,采用MACS系统NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。取乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-435s和SK-Br3)和NK细胞各1×105个,碱裂解法抽提DNA,PCR-SSP方法分别检测HLA-Cw位点、KIR位点表达。MTT法检测KIR相合与不相合组的NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤率。流式细胞术检测NK细胞NKG2D表达水平以及RT-PCR方法检测乳腺癌细胞MICA表达。结果:MACS系统分选出的NK细胞,经流式细胞术检测,其纯度在90%以上;KIR与HLA-Cw相合组的NK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于不相合组,G1组和G2组NK细胞对MDA-MB-435s(G1组)杀伤率分别为(73.2±14.5)%和(34.2±7.6)%,对SK-Br3(G1组)杀伤率为(67.3±12.5)%和(36.5±7.7)%,而对MCF-7(G2组)杀伤率分别为(36.7±8.5)%和(76.5±11.7)%。结果还显示,3株乳腺癌细胞均表达MICA分子;NK细胞与MCF-7细胞共培养,可上调NK细胞表面NKG2D的表达。结论:NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤并非由KIR的不相合机制介导;乳腺癌细胞表面表达的MICA分子可上调NK细胞表面NKG2D的表达,激发NK细胞对乳腺癌细胞的细胞毒效应。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 乳腺癌 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 激活性受体 主要组织相容性复合物Ⅰ类相关抗原A

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NK细胞表面免疫球蛋白受体KIR基因的分析 被引量：6

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作者 付绍杰 于立新 +5 位作者 罗敏 肖露露 王亦斌 徐健 杜传福 邓文锋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期109-113,共5页

目的为了探讨人类自然杀伤(NK)细胞的自然杀伤作用机制。方法采用PCR-SSP技术,调查和分析67例国人的KIR基因型和组合型频率。结果在表达出16个KIR基因中,87.5%的KIR基因的频率>0.35;由14个KIR功能基因组成的KIR基因组合型25个,其中仅... 目的为了探讨人类自然杀伤(NK)细胞的自然杀伤作用机制。方法采用PCR-SSP技术,调查和分析67例国人的KIR基因型和组合型频率。结果在表达出16个KIR基因中,87.5%的KIR基因的频率>0.35;由14个KIR功能基因组成的KIR基因组合型25个,其中仅KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373,而其余频率均≤0.09。比较本文、日本人群、韩国人群和高加索人群中已报道的56个KIR基因组合型,4个民族和地区间基因组合型共享率为8.93%;本文、韩国人群和高加索人群间为5.36%;本文和高加索人群间为1.79%;28.58%为本文首先报道的基因组合型。结论本文证实单个KIR基因多态性有较高的分布频率;在25个KIR基因组合型中,仅有以传导抑制信号为主的组合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373(4%),远低于87.5%的单个KIR基因的频率。但是,KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率在四个民族和地区人群中均列第一,提示KIR基因组合型以抑制性信号通路为主是一种常态,使自身细胞不会遭受自然杀伤。研究为可能探讨改变肾移植术通过KIR基因调节NK自然杀伤作用活性的增强或抑制功能,改变终生使用免疫抑制药物的相关研究提供可利用的数据。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 免疫球蛋白家族受体 KIR基因 抑制型 活化型

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桑黄多糖调控MICB/NKG2D信号通路增强机体对脑胶质瘤细胞的免疫监视作用 被引量：2

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作者 张正平 李坤正 +1 位作者 巨虎 刘熹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期578-585,共8页

目的:探讨桑黄多糖对脑胶质瘤细胞免疫监视的增强作用及其对主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因B(MICB)/自然杀伤细胞活化性受体2D(NKG2D)信号通路的调控机制。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠60只和GL261细胞株培养传代,随机取其中的50只小... 目的:探讨桑黄多糖对脑胶质瘤细胞免疫监视的增强作用及其对主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因B(MICB)/自然杀伤细胞活化性受体2D(NKG2D)信号通路的调控机制。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠60只和GL261细胞株培养传代,随机取其中的50只小鼠建立脑胶质瘤模型,其余10只小鼠记为对照组,另将建模成功小鼠采用随机数字表分组,榄香烯组予以100 mg/kg榄香烯与1 ml/100 g生理盐水混匀灌胃,桑黄多糖各剂量组分别予以50、100、200 mg/kg桑黄多糖溶于1 ml/100 g生理盐水中灌胃,对照组和模型组均予以等量生理盐水灌胃,均1次/d,共4周。干预后处死小鼠,比较各组瘤重和抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察瘤组织病理变化;以CD57抗体标记检测瘤组织中NK细胞浸润;实时-逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测瘤组织主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、MICB、UL16结合蛋白1(ULBP1)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)mRNA表达,Western blot检测瘤组织MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3蛋白表达;采用磁珠亲和细胞分选法分离各组组织中NK细胞,采用流式细胞仪检测其表面NKG2D活性。结果:与模型组比较,榄香烯组和桑黄多糖各剂量组瘤重下降,抑瘤率升高,瘤组织细胞变性、坏死增多,NK细胞浸润增多,MICA、ULBP2、ULBP3 mRNA和蛋白表达下降,MICB、ULBP1 mRNA和蛋白表达升高,且NK细胞表面NKG2D活性增强,上述差异均有统计学意义(P<0.05);桑黄多糖的作用呈剂量依赖性,桑黄多糖低剂量组和榄香烯组所有指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:桑黄多糖可抑制脑胶质瘤增长,促进瘤细胞变性、坏死,增加NK细胞浸润,推测d与调控MICB/NKG2D信号通路,增加MICB、ULBP1表达和NK细胞表面NKG2D活性,下调MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强对脑胶质瘤细胞的免疫监视有关。 展开更多

关键词 桑黄多糖 主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因B 自然杀伤细胞活化性受体2d 脑胶质瘤

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K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果

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作者 叶琳洁 黄庆生 +4 位作者 李琦 张明杰 马旭东 杨慧 师俊玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期537-542,共6页

目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合I... 目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合IL-2培养方案对NK细胞进行扩增和活化,以流式细胞术检测NK细胞的扩增效果和NK细胞表面受体表达水平,CCK-8法检测扩增后NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和ADCC活性,CCK-8法检测在培养方案扩增末期加入TKD多肽对NK细胞的活化效果。结果:对于健康志愿者的NK细胞,新建立扩增培养方案可使NK细胞在PBMC中的比例提高至(93±3)%;使NK细胞中活化性受体NKG2D、CD94、NKp30、NKp44和NKp46的比例分别提高60%、40%、20%、40%和63%,而抑制性受体的表达变化不大;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、肺癌细胞A549、肝癌细胞SMMU-7721和乳腺癌细胞MCF-7的杀伤活性分别提高了19%、29%、26%和28%,其ADCC活性从(33±5.6)%上升至(65±12)%;方案中增加TKD可使NK细胞的杀伤活性从(86±4)%提高至(96±2)%。对于肿瘤患者的NK细胞,新扩增方案使其在PBMC的比例提高至(90.0±8.0)%,其对K562细胞的杀伤活性提高了17%左右。结论:K562工程细胞联合IL-2扩增方案可高效扩增NK细胞,明显激活其杀伤活性,扩增和活化的NK细胞可满足临床治疗的需要。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 细胞毒活性 抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性 体外扩增 活化性受体 抑制性受体

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NKT细胞通过下调PDGFRβ抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠血管平滑肌细胞表型转换 被引量：9

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作者 肖雪 侯翠柳 +4 位作者 王筱筱 陈立瑞 杨慧 田翠 王红霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1345-1350,共6页

目的:探讨自然杀伤T细胞(NKT细胞)在高血压引起的小鼠血管平滑肌细胞表型转换中的作用及机制。方法:在野生型小鼠及CD1d基因敲除小鼠中,通过缓释泵持续灌注剂量为490 ng·kg-1·min-1的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)14 d建立小鼠高血压模... 目的:探讨自然杀伤T细胞(NKT细胞)在高血压引起的小鼠血管平滑肌细胞表型转换中的作用及机制。方法:在野生型小鼠及CD1d基因敲除小鼠中,通过缓释泵持续灌注剂量为490 ng·kg-1·min-1的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)14 d建立小鼠高血压模型,并在野生型小鼠中给予剂量为100μg/kg的NKT细胞特异性激动剂α-半乳糖神经酰胺(α-GC)。无创尾套法监测小鼠血压;HE染色观察小鼠主动脉壁厚度变化;Masson染色观察小鼠主动脉纤维化的程度;Western blot检测主动脉组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)及血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)的表达。结果:与对照组相比,灌注AngⅡ14 d后,小鼠血压、主动脉壁厚度、主动脉纤维化程度、分泌型标志蛋白OPN表达及PDGFRβ蛋白表达均显著升高(P<0.05),收缩型标志蛋白α-SMA的表达降低(P<0.05)。CD1d基因敲除加重以上变化(P<0.05),而α-GC则减轻上述改变(P<0.05)。结论:NKT细胞通过降低PDGFRβ的表达,增加收缩性蛋白、降低分泌性蛋白的表达,从而抑制了AngⅡ引起的血管平滑肌细胞的表型转换。 展开更多

关键词 自然杀伤T细胞 高血压 血管平滑肌细胞 表型转换 血小板源性生长因子受体β

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