Hippo信号通路存在于果蝇和哺乳动物中,主要由上游调节分子、核心成分及下游调节分子组成,具有调控细胞增殖、分化及细胞周期等生理作用。近年来已有研究表明,Hippo信号通路单独或协同AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AM...Hippo信号通路存在于果蝇和哺乳动物中,主要由上游调节分子、核心成分及下游调节分子组成,具有调控细胞增殖、分化及细胞周期等生理作用。近年来已有研究表明,Hippo信号通路单独或协同AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路参与三大物质代谢,包括葡萄糖代谢、甲羟戊酸代谢和谷氨酰胺代谢。Hippo信号通路与卵巢物质代谢的关系是近几年兴起的研究热点。该文就Hippo信号通路通过单独或协同AMPK信号通路、m TOR信号通路调节卵巢的三大物质代谢过程,参与卵泡的生长、成熟及多囊卵巢综合征、卵巢癌的发生等的研究进展作一综述。展开更多
【目的】为阐明哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of Rapamycin,mTOR)信号通路在调控猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用,探索防控该病传染的新途径。【方法】P...【目的】为阐明哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of Rapamycin,mTOR)信号通路在调控猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用,探索防控该病传染的新途径。【方法】PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAMs)24 h后,用蛋白质印迹法检测mTOR信号通路下游信号分子的表达水平及磷酸化水平。【结果】在PRRSV感染PAMs后,mTOR、eIF4E结合蛋白1(eukaryotic initiation factor 4E binding protein 1,4EBP1)及PS6K的磷酸化水平显著增加,表明PRRSV感染激活了mTOR信号通路。用mTOR特异性抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)处理PAMs,发现Rapamycin能够显著抑制PRRSV感染引起的mTOR信号通路下游关键信号分子4EBP1磷酸化,且剂量依赖性和时间依赖性促进了PRRSV的复制。【结论】mTOR信号通路参与调控PRRSV的复制,Rapamycin对4EBP1磷酸化有抑制作用,对PRRSV的复制有促进作用。该研究为后续进一步探索PRRSV复制的翻译起始机制奠定基础。展开更多
目的:探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平...目的:探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后随机分为5组:正常对照(normal control,N)组、模型组(HH组)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(D组)、AMPK激动剂阿卡地新(acadesine;5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)组(AI组)和AMPK抑制剂dorsomorphin(compound C,CC)组(CC组)。N组置于常氧环境(21%O_(2)、5%CO_(2)和74%N2)下培养24 h,其余4组预先加入相对应的干预药物置于HH条件(5%O_(2)、6%CO_(2)和89%N2)下培养24 h进行造模。造模结束后用CCK-8法测各组细胞活力;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测细胞增殖;TUNEL检测细胞凋亡;qPCR法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62及caspase-3的mRNA表达;免疫印迹法检测AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、LC3、p62、caspase-3和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白水平;透射电镜观察自噬小体。结果:与N组相比,HH组PASMCs活力增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜下观察到细胞内有少量自噬小体。与HH组相比,AI组PASMCs活力进一步增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜形态表现为细胞自噬小体数量增加。而CC组较HH组PASMCs活力和EdU阳性率显著降低,凋亡率显著升高;LC3的mRNA表达下调,p62和caspase-3的mRNA表达上调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达下调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达上调;电镜下观察到细胞自噬小体数量减少。结论:在HH环境下,基于AMPK/mTOR信号通路的细胞自噬启动可能是大鼠PASMCs增殖增加、凋亡减少的机制之一。展开更多
目的:观察高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对急性髓系白血病细胞株(human leukemiacell line,K562)自噬及化学治疗(化疗)耐药的影响,并探讨其相关的分子机制。方法:体外培养K562细胞,分为化疗药物处理组、化疗药物处...目的:观察高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对急性髓系白血病细胞株(human leukemiacell line,K562)自噬及化学治疗(化疗)耐药的影响,并探讨其相关的分子机制。方法:体外培养K562细胞,分为化疗药物处理组、化疗药物处理对照组、HMGB1纯化蛋白预处理组、HMGB1纯化蛋白预处理对照组、HMGB1si RNA转染组和HMGB1 si RNA转染对照组,其中化疗药物处理组又分为长春新碱(v incristine,VCR)、足叶乙甙(etoposide,VP-16)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)、阿霉素(adriamycin,ADM)和三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)处理组。细胞计数试剂盒-8检测细胞活性;Western印迹检测HMGB1,微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associate protein1light chain3,LC3),腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of rapamycin,m-TOR)磷酸化蛋白表达水平;ELISA法检测细胞上清液HMGB1蛋白含量;单丹磺酰尸胺染色和透射电镜观察细胞自噬状态。结果:与相应对照组比较,各化疗药物处理组(VCR,VP-16,Ara-C,ADM和As2O3)的细胞活性均显著降低,HMGB1蛋白表达均显著上调(均P<0.05)。与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白预处理组的细胞活性显著增加(P<0.05),HMGB1蛋白表达显著上调(P<0.05)。与HMGB si RNA转染对照组比较,HMGB1si RNA转染组的细胞活性显著降低(P<0.05),HMGB1蛋白表达显著下调(P<0.05);与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白处理组中LC3-II表达明显增强(P<0.05),光镜下观察到自噬小体和自噬泡数量明显增加。同时,与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白处理组p-AMPKa的蛋白表达明显增强,而p-m TOR表达明显减弱(均P<0.05)。结论:HMGB1可能通过AMPK/m-TOR信号通路增强K562细胞自噬发挥化疗耐药性。展开更多
文摘Hippo信号通路存在于果蝇和哺乳动物中,主要由上游调节分子、核心成分及下游调节分子组成,具有调控细胞增殖、分化及细胞周期等生理作用。近年来已有研究表明,Hippo信号通路单独或协同AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路参与三大物质代谢,包括葡萄糖代谢、甲羟戊酸代谢和谷氨酰胺代谢。Hippo信号通路与卵巢物质代谢的关系是近几年兴起的研究热点。该文就Hippo信号通路通过单独或协同AMPK信号通路、m TOR信号通路调节卵巢的三大物质代谢过程,参与卵泡的生长、成熟及多囊卵巢综合征、卵巢癌的发生等的研究进展作一综述。
文摘【目的】为阐明哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of Rapamycin,mTOR)信号通路在调控猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用,探索防控该病传染的新途径。【方法】PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAMs)24 h后,用蛋白质印迹法检测mTOR信号通路下游信号分子的表达水平及磷酸化水平。【结果】在PRRSV感染PAMs后,mTOR、eIF4E结合蛋白1(eukaryotic initiation factor 4E binding protein 1,4EBP1)及PS6K的磷酸化水平显著增加,表明PRRSV感染激活了mTOR信号通路。用mTOR特异性抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)处理PAMs,发现Rapamycin能够显著抑制PRRSV感染引起的mTOR信号通路下游关键信号分子4EBP1磷酸化,且剂量依赖性和时间依赖性促进了PRRSV的复制。【结论】mTOR信号通路参与调控PRRSV的复制,Rapamycin对4EBP1磷酸化有抑制作用,对PRRSV的复制有促进作用。该研究为后续进一步探索PRRSV复制的翻译起始机制奠定基础。
文摘目的:观察高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对急性髓系白血病细胞株(human leukemiacell line,K562)自噬及化学治疗(化疗)耐药的影响,并探讨其相关的分子机制。方法:体外培养K562细胞,分为化疗药物处理组、化疗药物处理对照组、HMGB1纯化蛋白预处理组、HMGB1纯化蛋白预处理对照组、HMGB1si RNA转染组和HMGB1 si RNA转染对照组,其中化疗药物处理组又分为长春新碱(v incristine,VCR)、足叶乙甙(etoposide,VP-16)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)、阿霉素(adriamycin,ADM)和三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)处理组。细胞计数试剂盒-8检测细胞活性;Western印迹检测HMGB1,微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associate protein1light chain3,LC3),腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of rapamycin,m-TOR)磷酸化蛋白表达水平;ELISA法检测细胞上清液HMGB1蛋白含量;单丹磺酰尸胺染色和透射电镜观察细胞自噬状态。结果:与相应对照组比较,各化疗药物处理组(VCR,VP-16,Ara-C,ADM和As2O3)的细胞活性均显著降低,HMGB1蛋白表达均显著上调(均P<0.05)。与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白预处理组的细胞活性显著增加(P<0.05),HMGB1蛋白表达显著上调(P<0.05)。与HMGB si RNA转染对照组比较,HMGB1si RNA转染组的细胞活性显著降低(P<0.05),HMGB1蛋白表达显著下调(P<0.05);与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白处理组中LC3-II表达明显增强(P<0.05),光镜下观察到自噬小体和自噬泡数量明显增加。同时,与相应对照组比较,HMGB1纯化蛋白处理组p-AMPKa的蛋白表达明显增强,而p-m TOR表达明显减弱(均P<0.05)。结论:HMGB1可能通过AMPK/m-TOR信号通路增强K562细胞自噬发挥化疗耐药性。
